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沉默GPC3对肝癌Huh-7细胞增生、迁移和侵袭能力的影响
目的：探讨Hippo通路靶向GPC3后对肝癌Huh-7细胞增生、迁移、侵袭能力的影响。方法采用Western blot检测法及RT-PCR分别测量肝癌Huh-7不同对数生长期的肝癌细胞株GPC3蛋白表达水平及GPC3 mRNA水平，并筛选出可有效沉默GPC3基因的siRNA。将肝癌Huh-7细胞株分为实验组、未转染组及对照组，实验组导入GPC3-siRNA-1633转染Huh-7，其余两组不作处理。EdU实验检查三组细胞增殖率，划痕实验测定各组细胞迁移率，Transwell实验测定各组细胞侵袭能力。结果实验组GPC3 mRNA表达量及GPC3蛋白水平显著低于未转染组及对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。实验组Hippo通路中YAP mRNA表达量显著低于未转染组及对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。转染48 h后，实验组细胞增生率、迁移率及侵袭率显著低于未转染组及对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 GPC3可促进肝癌Huh-7细胞增殖、侵袭及转移，从而促进肝癌细胞生长。CPG3可通过上调Hippo通路中YAP表达水平从而促进肝癌细胞增生。通过沉默GPC3 mRNA后可有效抑制肝癌Huh-7细胞生长。
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肝再生终止阶段的研究进展
肝脏作为体内重要的解毒器官,具有极强的再生能力.肝再生研究一直是再生医学研究领域的热点,其再生过程可分为起始阶段、增殖阶段以及终止阶段.目前研究大都集中在肝再生的起始以及增殖阶段,对于使肝再生恰当终止的机制研究仍知之甚少.肝再生终止阶段涉及多种细胞因子与生长因子,其功能主要体现在2方面:(1)抑制有丝分裂原对于肝细胞增长的促进作用；(2)通过某种途径促进过多增殖的肝细胞凋亡.本文针对目前肝再生的终止阶段研究所涉及的主要的因子综述如下.
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Hippo通路与恶性肿瘤侵袭转移的相关性研究进展
侵袭转移是恶性肿瘤的重要特征,是肿瘤进展过程中的重要事件.Hippo通路是一类抑癌通路,其表达水平与肿瘤细胞的侵袭转移能力呈负相关,而Hippo通路的异常在肿瘤发生发展中发挥重要作用.因此,研究Hippo通路与肿瘤侵袭转移的相关性可为恶性肿瘤的治疗、预后评估等提供参考,有助于在肿瘤防治中发现新的途径与思考.
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B细胞非霍奇金淋巴瘤组织中YAP1和P53的表达及意义
目的 探讨YAP1和P53蛋白在B细胞非霍奇金淋巴瘤(B cell non-Hodgkin's lymphoma,B-NHL)组织中的表达意义及相互关系.方法 应用组织芯片和免疫组织化学染色法检测广州医科大学附属第一医院2012年1月-2017年12月经病理科确诊的60例B-NHL(病例组)与25例反应性淋巴组织增生(对照组)中YAP1和P53蛋白的表达,60例B-NHL包括弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma,DLBCL) 49例,小淋巴细胞淋巴瘤7例,套细胞淋巴瘤4例,后两者归为惰性组B-NHL.结果 YAP1在B-NHL中的总体表达阳性率为68.3％,其中在DLBCL中的表达率为61.2％,惰性组B-NHL和对照组的阳性率均为100％,YAP1蛋白在DLBCL表达阳性率低于惰性组B-NHL和对照组(P均＜0.05).P53在B-NHL中的总体表达阳性率为16.7％,其中在DLBCL和惰性组B-NHL的表达阳性率分别为18.4％和9.1％,在对照组中未见表达.P53在B-NHL和对照组中表达差异有统计学意义(P＜0.05).YAP1和P53在B-NHL中的表达无明显相关性(P＞0.05).结论 YAP1可能作为肿瘤抑制因子参与了部分B-NHL的发生发展,但与P53蛋白表达无关.
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Hippo-YAP信号通路为靶点的肿瘤治疗研究进展
Hippo通路是一个可调控细胞增殖和凋亡的信号转导通路，YAP（Yes-associated protein）为其主要效应分子。YAP为一个候选致癌因子，Hippo-YAP通路的异常与多种肿瘤的发生、发展密切相关。因此，以Hippo-YAP通路为靶点的治疗策略可能为肿瘤治疗提供新思路。一些可调控Hippo-YAP通路活性的药物/化合物如维替泊芬，可抑制肿瘤的发生或生长。本文主要对Hippo-YAP信号通路为靶点的肿瘤治疗研究进展进行综述。
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YAP生物学功能的研究进展
YAP（Yes－associated protein，YAP）是 Hippo 信号通路下游的主要效应分子。1995年，Sudol等鉴定并克隆了一个与非受体酪氨酸激酶 YES 的 Src homolog domain3（SH3）区结合的新蛋白。该蛋白分子量为65 kD，富含脯氨酸，因该蛋白通过与原癌基因Yes结合，因而被命名为Yes-associated protein （YAP65）。人类YAP基因位于染色体11q22区， YAP存在2种变位剪切形式，即YAP1和YAP2， YAP1具有一个WW结构域，而YAP2具有2个WW结构域。YAP蛋白广泛表达于除外周血白细胞外的各种组织中。YAP存在多个结构域或特异氨基酸序列，包括N端富含脯氨酸的结构域，转录因子TEADs结合区，2个WW结构域，1个SH3结合基序，C端的转录激活域以及PDZ结合基序。通过这些结构域或氨基酸序列，YAP与多种蛋白相互作用，参与细胞内多条信号通路的调控，行使多种生物学功能。 YAP主要定位于细胞核中，由于缺乏明显的DNA结合结构域，YAP被认为是转录共激活因子，需与转录因子结合，起始下游基因的转录。
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YAP和Caspase在恶性肿瘤中的作用机制及其关联的研究进展
正常情况下细胞增殖与凋亡之间保持着动态平衡,维持着机体的生理状态,细胞异常增殖或凋亡抑制时细胞过度增殖组织异常生长导致肿瘤的发生.Hippo通路是近发现的一条细胞信号传导通路,主要功能有调控器官体积、保持细胞增殖凋亡平衡、细胞接触性抑制的调节等.YAP是Hippo通路上的重要因子,YAP表达异常可导致Hippo通路不能正常发挥作用而细胞异常增殖导致肿瘤的发生.Caspase是与细胞凋亡密切相关的蛋白水解酶家族,一般以酶原形式存在,在凋亡信号的作用下激活启动型Caspase引发Caspase级联反应导致细胞凋亡,其功能异常导致各种相关疾病的发生.本文将介绍Hippo通路的主要组成及其作用机制,YAP和Caspase基因的作用机制及其与肿瘤发生发展的相关性.
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Yes相关蛋白在妇科肿瘤中的研究进展
Yes相关蛋白(YAP)又名YAP65,是近年发现的Hippo信号通路下游一个关键的转录共激活因子,在促进组织再生和维持干细胞自我更新等方面发挥着重要作用.随着对YAP研究的深入,人们发现YAP参与细胞增殖/凋亡失衡和肿瘤形成,在多种肿瘤组织中呈高表达状态,并可促进肿瘤的增殖、侵袭和转移.目前关于YAP在妇科肿瘤的研究报道较少,研究结果也不尽相同.现有资料显示,YAP与卵巢癌、宫颈癌、子宫内膜癌等妇科肿瘤的发生、发展、疗效及预后相关,现将其与妇科肿瘤的关系作一综述.
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Hippo 信号通路核心分子 Yap／Taz 在脑胶质瘤组织中表达水平的研究
目的：研究脑胶质瘤组织中Hippo通路核心分子Yap／Taz在蛋白水平的表达情况及其亚细胞定位，以及与脑胶质瘤的相关性。方法采用免疫印迹（ WB）及免疫组化（ IHC）技术检测Hippo通路相关蛋白Yap／Taz在非肿瘤脑组织及脑胶质瘤组织中的表达水平。结果 WB检测发现Yap和Taz在胶质瘤组织中表达水平较非肿瘤脑组织高，其表达水平随肿瘤级别增高而增高，差异有统计学意义（P＜0．05～0．01）；免疫组化检测发现Yap和Taz均主要定位于细胞核中，在胶质瘤组织中表达水平较非肿瘤脑组织高，其表达水平随肿瘤级别增高而增高，差别有统计学意义（**P＜0．01）。结论 Yap和Taz在人脑胶质瘤组织中表达水平升高，提示其与脑胶质瘤的发生发展密切相关。
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Hippo信号通路在肿瘤与免疫中的作用
Hippo信号通路,也称为Salvador/Warts/Hippo (SWH)通路,命名主要源于果蝇中的蛋白激酶Hippo (Hpo).Hippo信号通路是一条抑制细胞生长的通路.哺乳动物中,Hippo信号通路上游膜蛋白受体作为胞外生长抑制信号的感受器,一旦感受到胞外生长抑制信号,就会激活一系列激酶级联磷酸化反应,终磷酸化下游效应因子YAP和TAZ,在肿瘤的发生发展及免疫功能的调节方面起到重要作用.因此对该通路的深入研究将有助于寻找治疗相关疾病新的靶点.
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Hippo 通路、Yes 相关蛋白及其与肿瘤关系的研究进展
Hippo通路是近年来新发现的一条细胞信号传导通路，可通过调节细胞增殖和凋亡平衡调控器官体积、调节细胞间的接触性抑制［1］，该通路调控异常可导致人体多种疾病的发生。 Yes 相关蛋白（YAP）由Sudol等［2］于1994年首先报道，其因相对分子质量约65 kDa 又被称为YAP65。研究证实， YAP是Hippo通路的核心效应因子，是一种多功能的细胞内连接蛋白和转录共激活因子，在正常机体细胞内发挥信号转导和基因转录调节的作用。现将Hippo 通路、YAP及与肿瘤关系的研究进展综述如下。
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FAT4、CUL4、YAP在胃癌组织中的表达及其临床意义
目的 探讨胃癌细胞侵袭过程中FAT4、CUL4、YAP在调控Hippo通路的作用及机制.方法 免疫组织化学法检测胃癌组织及正常胃组织中FAT4、CUL4及YAP的表达情况,分析其表达水平与胃癌患者临床病理特征的关系;Western blot法测定胃癌组织及正常胃组织中FAT4、CUL4及YAP蛋白表达情况.结果 胃癌细胞中FAT4、CUL4和YAP在性别、病理类型阳性表达率比较,差异无统计学意义(P>0.05),在胃癌的分化程度及淋巴结转移之间比较,差异有统计学意义(P<0.05),且淋巴结无转移、分化程度较高的FAT4、CUL4和YAP阳性表达率高;免疫组织化学发现胃癌组织中CUL4和YAP表达量较正常胃组织增多,胃癌组织中FAT4表达量较正常胃组织减少;胃癌组织中CUL4及YAP蛋白表达量高于正常胃组织,差异有统计学意义(P<0.05);胃癌组织中FAT4蛋白表达量低于正常胃组织,差异有统计学意义(P<0.05).结论 FAT4通过调控Hippo-YAP信号通路抑制胃癌细胞侵袭过程,CUL4通过调控Hippo-YAP信号通路促进胃癌细胞侵袭过程.
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Galectin-3诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为肝样细胞
目的 探索应用Galectin-3诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为肝样细胞的效果,筛选出所涉及的信号通路,并验证Hippo信号通路.方法 对大鼠股骨骨髓间充质干细胞进行提取、分离、传代培养及鉴定.取第3代细胞进行诱导培养,分为SD大鼠BMSCs(A组)、SD大鼠BMSCs+0.5μg/mL Gal-3(B组)、SD大鼠BMSCs+20 ng/mL HGF(C组)、SD大鼠BMSCs+0.5μg/mL Gal-3+20 ng/mL HGF(D组)和大鼠肝细胞(E组).分别在诱导后7、14、21、28 d进行细胞形态学观察、糖原染色观察,并行实时定量PCR以及Western blot检测,鉴定其分化情况.取B组细胞行基因芯片检测.将BMSCs与Gal-3、Gal-3+XMU-MP-1(Hippo信号通路抑制剂)分组进行诱导,Western Blot检测YAP、P-YAP、ALB、AFP、CK-18.结果 大鼠股骨骨髓分离出的细胞符合骨髓间充质干细胞特性.诱导后,B、C、D组BMSCs形态逐渐向肝样细胞转化,D组28 d时细胞形态与肝细胞相对比相似度高.糖原染色28 d时A组无染色,B、C、D组染色较前增多,B、C组间无明显差异(P>0.05),D组染色率高(P<0.05).Q-PCR检测AFP、ALB、CK-18表达逐渐升高,28 d时B组与C组各指标较接近(P<0.05).Gal-3与HGF对AFP、ALB的mRNA表达不存在交互效应(AFP:F=0.236,P=0.640;ALB:F=50.639,P=0.000),对CK-18的mRNA表达有协同效应(F=50.639,P=0.000).Western blot检测A组几乎不表达AFP、ALB及CK18,B、C、D组AFP、ALB及CK18蛋白表达随时间延长,逐渐增加.基因芯片检测发现上调基因27个,下调基因62个.涉及TGF-β、PI3K-Akt及Hippo等信号通路.Gal-3及Gal-3+XMU-MP-1诱导组的YAP表达较空白对照组增加,Gal-3+XMU-MP-1较单独应用Gal-3诱导BMSCs分化的效率高.结论 Galectin-3能够单独诱导骨髓间充质干细胞向肝样细胞分化,而且联合HGF诱导BMSCs分化的效率更高.诱导过程与TGF-β、PI3K-Akt及Hippo等信号通路相关.抑制Hippo信号通路可提高诱导效率.
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基于生物信息学探讨Yes-相关蛋白在大鼠心肌缺血再灌注损伤中的表达
目的 验证通过生物信息学技术筛选出Yes-相关蛋白(YAP)在大鼠心肌缺血再灌注损伤中的表达情况,为后期进一步研究奠定基础.方法 利用生物信息学技术分析大鼠心肌缺血再灌注损伤的差异基因,应用KOBAS2.0以及KEGG数据库筛选出相关的信号通路和关键基因.将18只Sprague Dawley大鼠随机分配为正常组(n=6)、假手术组(n=6)、缺血再灌注损伤组(模型组,n=6),采用免疫组织化学、逆转录荧光定量聚合酶链反应、蛋白质印迹法检测筛选出的靶基因的表达情况.结果 通过生物信息学技术筛选出差异表达基因共345条,上调181条,下调164条;筛选出的差异基因主要富集于Wnt、HIPPO、MAKP、Jak-STAT等信号通路;该课题组关注HIPPO信号通路,发现与正常组和假手术组比较,模型组中其关键蛋白YAP在基因以及蛋白表达水平增加,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 经生物信息学筛选出来的HIPPO信号通路关键蛋白YAP在大鼠心肌缺血再灌注损伤中表达增加.
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Yes相关蛋白、p63和Bcl-2在弥漫大B细胞淋巴瘤的表达及意义
目的 探讨Yes相关蛋白、p63和Bcl-2蛋白在弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)组织中表达的意义及相互关系.方法 应用免疫组化GTVision二步法检测45例DLBCL和25例反应性淋巴组织增生(RHL)中Yes相关蛋白、p63和Bcl-2蛋白的表达.结果 Yes相关蛋白在DLBCL中的表达阳性率为60.0％,在RHL中的表达阳性率为100％,差异具有统计学意义(P＜0.05).在DLBCL中,p63、Bcl-2蛋白的表达阳性率分别为44.4％和82.2％;在RHL中,p63的表达阳性率为0,而Bcl-2蛋白阳性细胞主要分布于套区和副皮质区,滤泡生发中心为阴性,均为正常表达模式,未见异常表达,p63、Bcl-2蛋白在DLBCL和RHL两组间表达差异具有统计学意义(P＜0.05).在DLBCL中,Yes相关蛋白、p63和Bcl-2蛋白表达之间两两比较均无相关性(P＞0.05),且与年龄、性别、发病部位和免疫分型等临床病理特征无关(P＞0.05).结论 Yes相关蛋白、p63和Bcl-2蛋白与DLBCL的发生发展有关,其中Yes相关蛋白可能扮演抑癌基因的角色.
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Hippo通路和相关长链非编码RNA(LncRNA)与肿瘤关系的研究进展
目前肿瘤是威胁人们身体健康的头号疾病杀手,罹患肿瘤患者通常会选择使用保守、手术、放化疗等方法进行治疗,以此有效抑制肿瘤继续生长,杀灭、切除肿瘤,延长患者中位生存时间.为了提高各类肿瘤预后方案的应用价值,科研人员从人体激酶、分子出发,对其与肿瘤之间的相关性进行了临床研究,以此把握两者与肿瘤关系,科学合理的调节分子基因表达,实现对肿瘤细胞快速分裂与癌变的有效抑制.基于此本文以Hippo通路、相关长链非编码RNA(LncRNA)为研究对象,分析其与肿瘤的关系,为肿瘤的诊断、预后、药物研发提供参考经验.
