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miR-29a在胎盘滋养细胞中的功能
目的 研究miR-29a对胎盘滋养细胞增殖和凋亡的影响及潜在机制.方法 采用Real-time PCR技术检测miR-29a和MCL1 mRNA的表达情况,CKK-8法检测miR-29a对人绒毛外滋养细胞增殖的影响;流式细胞术检测miR-29a对滋养细胞凋亡的影响.结果 过表达miR-29a后人绒毛外滋养细胞的增殖能力降低、凋亡水平增加.Real-time PCR和Western blot结果显示,过表达miR-29a抑制MCL1的mRNA表达,下调MCL1蛋白水平.干扰miR-29a后,人绒毛外滋养细胞的增殖能力升高,凋亡水平降低,并且MCL1的mRNA和蛋白水平升高.结论 miR-29a通过下调MCL1蛋白水平抑制人绒毛外滋养细胞增殖,促进滋养细胞凋亡.
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miR-29a和miR-142-3p促进髓系分化的基因调控网络
目的 深入了解miR-29a/miR-142-3p参与促进髓系分化的调控网络.方法 首先实现miR-29a和miR-142-3p在HL-60细胞中的过表达,同时使用PMA以及ATRA分别诱导HL-60细胞向单核及粒系分化.May-Grünwald-Giemsa染色方法观察核形态变化,Real-time PCR检测细胞内CD11和CD14的表达.mRNA表达谱芯片分析获得表达模式相似的基因,利用DAVID和GeneMANIA进行GO categories和信号通路归类分析.PicTar和TargetScan进行靶基因预测,双荧光报告基因实验确定靶基因的真实性.结果 miR-29a/miR-142-3p过表达细胞与PMA/ATRA诱导分化细胞在整体基因表达模式上有较高的相似度,而表达模式相似的基因大多与细胞分化相关,且在GO分析中显著富集.同时,ZBTB5、CaMKK2、SUV420H2、TRIB2和CANX被确定为miR-29a新的靶基因.结论 miR-29a/miR-142-3p通过调节其靶基因活性,引发整个基因表达调控网络的改变,使之趋向于髓系分化过程中的基因表达变化,从而促进髓系分化进程.
关键词： miR-29a miR-142-3p 髓系分化 基因表达 GO分析 -
活性维生素D3在大鼠肺纤维化发生发展中的作用及对miR-29a表达的影响
目的 探讨活性维生素D3[1,25 (OH)2D3]在大鼠肺纤维化发生发展中的作用及对miR-29a的影响.方法 150只SD雄性大鼠随机分为纤维化发生干预组(90只)和纤维化后干预组(60只),纤维化发生干预组分为模型组Ⅰ、给药组Ⅰ和对照组Ⅰ(n =30),纤维化后干预组分为模型组Ⅱ、给药组Ⅱ和对照组Ⅱ(n=20).模型组Ⅰ/Ⅱ和给药组Ⅰ/Ⅱ经气管注入博来霉素(5mg/kg)建立肺纤维化模型,对照组Ⅰ/Ⅱ经气管注入等体积生理盐水.给药组Ⅰ/Ⅱ分别于手术后第2天和第14天腹腔注射活性维生素D3,模型组Ⅰ/Ⅱ分别于手术后第2天和第14天腹腔注射等量的活性维生素D3溶剂(0.1％乙醇和99.9％的丙二醇),对照组Ⅰ/Ⅱ分别在术后第2天和第14天腹腔注射等量的生理盐水.各种处理均为两天1次.纤维化发生干预组分别于手术后第14天、第21天和第28天处死大鼠取材,纤维化后干预组分别于手术后第21天和第28天处死大鼠取材,各小组每个时间点10只大鼠.用Masson染色法观察各组实验大鼠肺中胶原纤维的差异,用碱水解法检测羟脯氨酸含量的变化,用实时定量PCR检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(Col)Ⅰ mRNA及miR-29a的相对表达量,用免疫组织化学方法检测α-SMA和ColⅠ蛋白质表达水平,并经图像分析进行量化.结果 博来霉素处理后,第14天大鼠肺部已经出现纤维化,随着时间推移,纤维化进一步加重.模型组Ⅰ/Ⅱ和给药组Ⅰ/Ⅱ中的羟脯氨酸含量、α-SMA和Col Ⅰ的mRNA和蛋白质表达都明显高于对照组Ⅰ/Ⅱ,而其miR-29a表达与对照组Ⅰ/Ⅱ相比则明显减少.给药组Ⅰ/Ⅱ中miR-29a的表达与模型组Ⅰ/Ⅱ相比有所增加(P＜0.05).在纤维化发生干预组中,与模型组Ⅰ相比,给药组Ⅰ在3个时间点羟脯氨酸含量、α-SMA 、Col Ⅰ的mRNA和蛋白质表达都显著降低(P＜0.05),但在纤维化后干预组中的给药组Ⅱ中羟脯氨酸含量、α-SMA、Col Ⅰ的mRNA和蛋白质表达比模型组Ⅱ虽有所降低,但差异无显著性(P＞0.05).结论 活性维生素D3对大鼠肺纤维化的发生发展具有一定的抑制作用,其预防效果更好一些,并且能促进miR-29a的表达,活性维生素D3可能是通过促进miR-29a的表达来抑制肺纤维化的发生发展.
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结外NK/T细胞淋巴瘤组织中MCL-1和microRNA-29a的表达
本研究旨在探讨结外NK/T细胞淋巴瘤(ENKTCL)组织中MCL-1和microRNA-29a(miR-29a)的表达水平及其相关性.采用免疫组织化学Maxvision法和实时荧光定量PCR法分别检测20例ENKTCL扣10例增生性淋巴结炎组织中MCL-1蛋白和miR-29a表达水平并进行分析与比较.结果表明:ENKTCL组MCL-1表达显著高于增生性淋巴结炎组,但MCL-1过表达与患者的年龄、性别、Ann Arbor分期、国际预后指数评分无关.相关性分析显示:ENKTCL组织中miR-29a表达与MCL-1表达呈显著负相关(r=-0.59,P=0.016).结论:miR-29a可能通过靶向调控MCL-1基因表达参与了ENKTCL的发生发展.
关键词： 结外NK/T细胞淋巴瘤 Mcl-1 miR-29a -
miR-29对腹膜间皮细胞EMT的作用
目的 观察miR-29a对高糖刺激人腹膜细胞(human peritoneal mesothelial cells,HPMCs)导致上皮细胞-间充质细胞转分化(epithelial to mesenchymal transition,EMT)的影响.方法 应用高糖刺激HPMCs,建立HPMCs EMT模型,运用Real time PCR检测高糖刺激HPMCs不同浓度及不同时间后上皮细胞标志物E-cadherin及间充质细胞标志物α-SMA和FN信号分子的表达水平及miR-29a表达水平变化.然后用miR-29a inhibitor转染HPMCs下调miR-29a表达,运用Real time PCR检测miR-29a表达水平及EMT相关标志物E-cadherin、α-SMA、FN等信号分子的变化水平.结果 Realtime PCR结果显示,不同浓度及不同时间葡萄糖刺激均可使HPMCs的间充质细胞标志物α-SMA(不同浓度:1.5％ 1.970±0.153比1,F=7.692,P=0.008;2.5％3.291±0.265比1,P=4.479,P＜0.001;4.25％4.301±0.346比1,F=-5.496,P＜0.001;不同时间:6h 2.161±0.202比1,F=6.563,P=0.001;12h 2.820±0.285比1,F=5.111,P＜0.001;24h 3.291±0.265比1,P=4.479,P＜0.001;48h 3.980±0.407比1,F=9.377,P=0.006) 、FN(不同浓度:1.5％ 1.630±0.157比1,F=7.092,P=0.002;2.5％2.910±0.199比1,F=4.000,P＜0.001;4.25％3.601±0.301比1,F=5.575,P＜0.001;不同时间:6h 1.761±0.172比1,F=7.144,P=0.002;12h 2.390±0.170比1,F=4.499,P＜0.001;24h 2.910±0.199比1,F=4.000,P＜0.001;48h 3.601±0.300比1,F=4.570,P＜0.001)表达逐渐增加,上皮细胞标志物E-cadherin(不同浓度:1.5％ 0.693±0.065比1,F=4.665,P=0.001;2.5％0.452±0.045比1,F=4.994,P＜0.001;4.25％0.302±0.030比1,F=-4.000,P＜0.001;不同时间:6h 0.802±0.084比1,F=4.000,P=0.012;12h 0.630±0.070比1,F=7.030,P=0.001;24h 0.452±0.045比1,F=4.994,P＜0.001;48h 0.290±0.030比1,F=4.000,P＜0.001)表达逐渐减少,提示HPMCs发生EMT改变.并且随着葡萄糖浓度升高及作用时间延长,miR-29a(不同浓度:1.5％1.452±0.147比1,F=13.411,P =0.001;2.5％ 3.120±0.320比1,F=10.372,P＜0.001;4.25％ 4.130±0.368比1,F=12.497,P＜0.001;不同时间:6h 1.330±0.114比1,F=5.788,P=0.001;12h2.310±0.173比1,F=5.546,P＜0.001;24h 3.100±0.236比1,F=10.372,P＜0.001;48h 3.310±0.211比1,F=4.929,P＜0.001)表达逐渐升高.Real time PCR结果表明,与高糖组相比,应用miR-29a inhib-itor转染HPMCs后,α-SMA(1.871±0.206比3.291±0.265,F=0.104,P=0.002)、FN(1.782±0.156比2.910±0.199,F=0.091,P=0.002)表达减少,E-cadherin(0.873±0.085比0.452±0.045,F=0.760,P=0.002)表达升高. 结论 高糖以浓度依赖及时间依赖的方式诱导EMT,并且EMT与miR-29a表达正相关.应用miR-29a inhibitor下调miR-29a表达能够部分逆转HPMCs EMT的发生.
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关于YES相关蛋白调控PTEN表达量的研究
目的 探明YES相关蛋白(Yes-associated protein,YAP)如何通过调控miR-29a的表达来调节PTEN表达量.方法①以N2a细胞为研究对象,高表达及抑制YAP,测量其miR-29家族的表达量,并筛选出改变明显的一个miR-NA,并检测PTEN蛋白的表达;②通过改变miR-29a及YAP的蛋白水平,来检测YAP是通过何途径来调控PTEN蛋白的表达.结果 ①通过转染了过表达YAP质粒后,RT-PCR的结果显示miR-29家族中的3个成员miR-29a,miR-29b,miR-29c都明显上调了.其中miR-29a上调了明显.而同时抑制了YAP的细胞中,miR-29的表达量都明显下降.说明YAP与miR-29的表达量之间是一种正相关的联系.另外一方面,PTEN的表达量则正好与miR-29及YAP相反,在抑制了YAP后,PTEN的表达量呈现的上升趋势,而过表达了YAP后,PTEN则明显下降.这说明YAP与PTEN之间是一种负相关的联系.②无论YAP的量改变如何,起到决定性作用的仍然还是miR-29a.下游的PTEN受YAP及miR-29a调控,而其中miR-29a作为作用中枢又受到上游YAP的调控.这些证据都揭示了YAP对PTEN的调节作用是通过对miR-29a的调节来实现的.结论该研究初步证实YAP能够通过对miR-29a的调控来实现对PTEN的表达,从而为治疗神经脊髓损伤提供研究基础.
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miR-29a在宫颈癌组织中的表达及其意义
目的 探讨miR-29a在宫颈癌组织中的表达及与宫颈癌临床病理因素之间的关系.方法 用茎-环实时荧光定量PCR分析56例宫颈癌组织和20例正常宫颈组织中miR-29a的表达情况,分析miR-29a的表达与宫颈癌常用临床病理指标的关系.结果 茎-环实时荧光定量PCR能特异扩增miR-29a.miR-29a在宫颈癌组织中的表达量明显低于正常宫颈组织(P＜0.01).miR-29a在Ⅱa期宫颈癌组织中的表达量明显低于Ⅰa期和Ⅰb期(P＜0.01).miR-29a的表达和年龄、肿瘤大小、肿瘤类型和病理分级无关(P＞0.05).结论 miR-29a是宫颈癌的重要标记和靶向治疗的潜在靶点.
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血清miR-29a、COX-2及MMP2水平在结直肠癌肝转移中的表达意义
目的 探讨血清miR-29a、COX-2及MMP2水平在结直肠癌肝转移中的表达意义.方法 收集73例结直肠癌患者的外周血标本,根据患者是否发生肝转移将患者分为肝转移组(38例)、非转移组(35例),并将良性病变的30例志愿者纳入对照组.采用RT-qPCR或ELISA法检测各实验组血清中miR-29a、环加氧酶2(COX-2)及金属基质蛋白酶2(MMP-2)水平.结果 肝转移组患者血清中miR-29a、COX-2、MMP-2明显高于非转移组(t=4.122,P＜0.001;t=3.008,P=0.004;t=2.376,P=0.011)及对照组(t=2.174,P=0.021;t=3.135,P=0.001;t=2.228,P=0.013),差异具有统计学意义.非转移组三指标水平均明显高于对照组(t=3.339,P＜0.001;t=1.873,P=0.035;t =2.432,P=0.009),3组指标比较,差异具有统计学意义.Logistic回归分析表明三项指标表达水平与结直肠癌肝转移呈正相关关系(P＜0.05).ROC曲线分析显示miR-29a、COX-2、MMP-2、Y变量的AUC值分别为0.852 0.04、0.715 0.03、0.738 0.03、0.903 0.05(P ＜0.05).联用三种检查指标的敏感性、特异性及准确性高,分别为72.1％、94.6％、96.8％,与单用三指标之间差异均具有统计学意义(P =0.002).结论 血清miR-29a、COX-2及MMP2水平与结直肠癌病情状态相关,对于诊断其是否发生肝转移具有较高的诊断价值,三者表达之间可能存在联系,共同推动了结直肠癌的病情进展.
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检测支气管肺泡灌洗液中的肿瘤标志物和miR-29a、miR-34a对肺癌诊断和分型的作用
目的 探讨检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中的CEA、CA125、NSE、CyFRA21-1肿瘤标志物和miR-29a、miR-34a对肺癌诊断和分型的作用.方法 收集105例疑似肺癌患者BALF,分为肺部良性疾病组(C组)25例、小细胞肺癌组(SCLC组)22例、鳞癌组(SQ组)34例、腺癌组(AC组)24例,分别检测各组CEA、CA125、NSE、Cy-FRA21-1和miR-29a、miR-34a的水平,并对各组的数据进行统计学处理和比较.结果 SCLC组、SQ组、AC组3组的BALF中的CEA、CA125、NSE、CyFRA21-1水平均显著高于肺部良性疾病组(P＜0.05),而SCLC组、SQ组、AC组3组之间差异无统计学意义(P＞0.05);SCLC组BALF中的miR-29a表达较SQ和AC两组显著下调(P＜0.05),而SQ和AC两组之间差异无统计学意义(P ＞0.05);AC组BALF中的miR-34a表达较SCLC和SQ两组显著下调(P＜0.05),而SCLC和SQ两组之间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 检测BALF中的肿瘤标志物和miR-29a、miR-34a对肺癌的诊断和分型具有重要的临床意义.
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乏氧条件下miR-29a通过AMPK调控胰岛β细胞功能的研究
目的：观察乏氧条件下miRNA调节AMPK对胰腺β细胞发挥的作用。方法：经细胞培养及Real-time PCR，观察在乏氧条件下miR-29a通过AMPK调控胰岛β细胞功能的发挥。结果：INS-1细胞，主要表达AMPKα2，其磷酸化AMPK活性在乏氧条件下增加。用Real time PCR检测AMPK的表达，发现乏氧说明在胰腺β细胞，主要表达AMPKα2亚基。乏氧能促进HIF-1α表达，促进AMPK的活化。同时AMPK可能受miR-29a的调节。结论：乏氧条件下胰岛β细胞主要表达为AMPKa2，说明AMPK能促进胰岛β细胞细胞增殖。
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miR-29a调控心肌肥大的分子机制研究
目的 探讨miR-29a调控心肌肥大的分子机制.方法 利用荧光素酶报告基因实验验证miR-29a与其潜在靶基因PPARδ/β的靶向关系.体外分离培养新生SD大鼠心肌细胞,分别以5 mmol/L葡萄糖(正常组)、25 mmol/L葡萄糖(高糖诱导组)和转染miR-29a抑制剂+25 mmol/L葡萄糖(实验组)培养48 h,应用Image J软件测量单细胞表面积,用qRT-PCR法检测各组miR-29a以及心肌肥大标志基因β-MHC和BNP mRNA的表达,采用Western blot法检测各组心肌细胞PPARδ/β蛋白表达情况.结果 荧光素酶报告基因实验显示调控能量代谢的基因PPARδ/β是miR-29a的潜在靶点.高糖诱导组单细胞表面积,β-MHC、BNP mRNA表达水平和miR-29a表达水平均明显高于正常组(P均＜0.05),而PPARδ/β蛋白表达水平显著低于正常组(P＜0.05);实验组单细胞表面积,β-MHC、BNP mRNA表达水平和miR-29a表达水平均明显低于高糖诱导组(P均＜0.05),PPARδ/β3蛋白表达水平显著高于高糖诱导组(P＜0.05),各指标与正常组比较差异均无统计学意义(P均＞0.05).结论 miR-29a通过影响心肌细胞的能量代谢而调控心肌肥大.
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威草胶囊对尿酸性肾病大鼠肾组织miR-29a和miR-30c的影响和机制
目的 观察威苹胶囊对尿酸性肾病大鼠肾组织miR-29a和miR-30c表达的影响,探讨威草胶囊降血尿酸和肾保护作用的具体机制.方法 将50只SPF级SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组、别嘌呤醇组、威草胶囊小剂量组、威草胶囊大剂量组,每组10只.正常组给予普通饲料喂养,其余4组均给予高嘌呤饲料喂养,在给予高嘌呤饲料后的第20天停用高嘌呤饲料,均改用普通饲料喂养.正常组和模型组每日给予蒸馏水2 mL灌胃,别嘌呤醇组给予别嘌呤醇0.05 g/(kg·d)灌胃,威草胶囊小剂量组、大剂量组分别给予威草胶囊0.9g/(kg·d)、1.8 g/(kg·d)灌胃,共4周.4周后处死大鼠,检测血清UA、BUN、SCr水平;摘取双侧肾脏,做HE染色、Masson染色,免疫组织化学方法检测CTGF、TGF-β1、Col Ⅰ、ColⅢ表达情况,实时荧光定量PCR法测定大鼠肾组织中miR-29a和miR-30c表达情况.结果 模型组大鼠血清UA、BUN、SCr水平均明显高于正常组(P均＜0.05);别嘌呤醇组血清UA水平明显低于模型组(P＜0.05),威草胶囊小剂量组、大剂量组血清UA、BUN、SCr水平均明显低于模型组(P均＜0.05);威草胶囊大剂量组血清UA、BUN水平均明显低于别嘌呤醇组(P均＜0.05),威草胶囊小剂量组血清UA、BUN、SCr水平与威草胶囊大剂量组比较差异均无统计学意义(P均＞0.05).HE染色、Masson染色:正常组少量肾组织纤维化,纤维化程度轻;模型组纤维化区域增多,纤维化程度重;别嘌呤醇组肾组织纤维化改变不明显;威草胶囊小剂量组和大剂量组肾组织间质纤维化程度明显减轻,威草胶囊大剂量组接近正常.模型组大鼠肾组织中CTGF、TGF-β1、Col Ⅰ、ColⅢ表达量均明显高于正常组(P均＜0.05);威草胶囊小剂量组和大剂量组CTGF、Col Ⅰ、ColⅢ表达量和威草胶囊大剂量组TGF-β1表达量均明显低于模型组和别嘌呤醇组(P均＜0.05);威草胶囊小剂量组CTGF、TGF-β1、Col Ⅰ、ColⅢ表达量与威草胶囊大剂量组比较差异均无统计学意义(P均＞0.05).模型组大鼠肾组织中miR-29a、miR-30c表达水平均明显低于正常组(P均＜0.05);威草胶囊小剂量组和大剂量组miR-29a、miR-30c表达水平均明显高于模型组(P均＜0.05),别嘌呤醇组与模型组比较差异无统计学意义(P均＞0.05);威草胶囊大剂量组miR-29a、miR-30c表达水平均明显高于别嘌呤醇组(P均＜0.05);威草胶囊小剂量组miR-29a、miR-30c表达水平与威草胶囊大剂量组比较差异均无统计学意义(P均＞0.05).结论 威草胶囊可改善尿酸性肾病大鼠的肾功能,减轻肾组织纤维化程度,与其升高肾组织miR-29a、miR-30c的表达水平,降低TGF-β1、CTGF的表达,减少Col Ⅰ、ColⅢ的生成有关,别嘌呤醇不具有此作用.
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活动期肺结核患者外周血miR-29a的表达及其临床意义
目的 分析活动期肺结核患者外周血miR-29a的表达情况及其临床意义.方法 收集2015年1月至2016年12月绍兴市立医院诊断的45例未经抗结核治疗的活动性肺结核患者(活动组),45例其他肺部疾患者(其他肺疾病组)和45例健康体检者(健康对照组)的外周血,通过实时定量PCR技术检测各组研究对象血清中miR-29a的表达水平并进行ROC曲线分析.采用ELISA法检测各组研究对象血清IFN-γ表达水平;采用流式细胞术测定各组研究对象外周血T细胞亚群水平.分析活动性结核患者血清miR-29a表达水平与IFN-γ以及T细胞亚群水平之间的相关性.结果 活动组患者血清miR-29a表达水平均显著高于其他肺疾病组以及健康对照组(t=7.005、4.307,P＜0.01).ROC曲线分析表明miR-29a的曲线下面积为0.874,诊断活动性肺结核的敏感度为66.7％,特异度为93.3％.活动组患者血清中IFN-γ的表达水平显著高于其他肺疾病组和健康对照组(t=16.001、14.771,P＜0.01).活动组患者外周血CD3+、CD4+细胞水平以及CD4+/CD8+比值显著低于其他肺疾病组和健康对照组(t=7.109、5.601,P＜0.01;t=3.133、4.455,P＜0.01;t=2.949、2.500,P＜0.01),而CD8+细胞水平显著高于其他肺疾病组和健康对照组(t=2.375、2.908,P＜0.01).活动组患者血浆miR-29a水平与IFN-γ水平呈负相关(r=-0.8542,P＜0.01).活动组患者血浆miR-29a水平与外周血CD3+、CD4+细胞水平以及CD4+/CD8+比值呈负相关(r=-0.8412、-0.8856、-0.7746,P＜0.01),同时与CD8+细胞水平呈正相关(r=0.8336,P＜0.01).结论 活动期肺结核患者外周血miR-29a表达水平显著升高,影响患者免疫应答功能,可作为诊断活动期肺结核的临床标志物.
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上调miR-29a对婴幼儿血管瘤内皮细胞生物活性的影响
目的 探讨上调miR-29a对增殖期婴幼儿血管瘤内皮细胞增殖、凋亡和侵袭能力的影响.方法 自2016-2017年采用组织块贴壁法行体外细胞培养,以CD31磁珠分离培养婴幼儿血管瘤来源的内皮细胞;通过CCK-8试剂检测细胞增殖能力的变化;通过Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡的变化;以Transwell侵袭实验检测侵袭能力的变化.结果 miR-29a过表达慢病毒转染细胞72 h后,慢病毒转染组的细胞凋亡率达到(12.54±0.02)％,对照组细胞的凋亡率为(0.29±0.01)％,其较对照组差异有统计学意义(P＜0.05).而上调了细胞内的miR-29a表达水平后,对细胞增殖及侵袭能力没有显著性影响.结论 上调细胞内miR-29a表达水平对细胞凋亡具有显著性影响,提示miR-29a可能通过改变内皮细胞凋亡比例来调节瘤体生物活性,并在血管瘤增殖期向消退期转变中起到一定的作用.
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初诊2型糖尿病患者血清中miR-29a和miR-375表达变化及其与糖、脂标志物相关性研究
目的 探讨miR-375和miR-29a在初诊2型糖尿病(DM)患者血清中的表达水平,及其表达变化与糖、脂标志物的相关性.方法 排除既往已诊断DM的健康体检者,所有研究对象均行75克葡萄糖耐量(OGTT)实验,根据1999年WHO的DM诊断标准,将研究对象分为糖代谢正常组(38例)和DM组(48例).以RNU6B 作为内参基因,采用实时荧光定量PCR的方法检测血清中miR-29a和miR-375的相对表达水平.结果 DM患者血清中的miR-29a 和miR-375表达量皆显著高于对照组.血清中miR-29a和miR-375的表达量与FPG、2hPG和糖化血红蛋白皆呈显著正相关(P<0.05),与血脂各指标无显著相关性(P>0.05).血清miR-29a和miR-375表达量间呈显著正相关性.结论 miR-29a和miR-375在血清中表达变化有可能作为诊断2型糖尿病的分子标志物.miR-29a和miR-375两者在2型糖尿病的发生、发展中可能具有协同调控作用.
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MiR-29a和PTEN在肾缺血再灌注损伤中的临床意义
目的 探讨miR-29a和PTEN在肾缺血再灌注损伤中的表达以及临床意义.方法 饲养SD大鼠50只,构建肾缺血再灌注损伤模型,全自动生化分析仪检测大鼠血清血肌酐、尿素氮水平,qRT-PCR检测miR-29a的表达,western blot检测PTEN的表达,分析miR-29a、PTEN和肾功能的相关性.结果 肾缺血再灌注损伤模型中大鼠血清血肌酐、尿素氮水平以及PTEN表达水平显著升高,miR-29a的表达水平显著降低.相关性分析表明miR-29a和PTEN、Scr和BUN均有显著负相关性;而PTEN和Scr、BUN水平均有显著正相关性.结论 在RIRI中,miR-29a和PTEN的表达和肾缺血再灌注损伤导致的肾功能损伤有显著的联系,为针对miR-29a及PTEN基因靶向治疗RI-RI提供一定的实验基础.
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利用基于CRISPR-Cas9的基因编辑技术对miR-29a在GT1-7细胞中进行基因敲除
目的:本文利用CRISPR-Cas9技术在GT1-7细胞中对miR-29a基因进行基因编辑,用于构建miR-29a基因敲除GT1-7细胞模型.方法:通过构建Cas9稳转的GT1-7细胞株并转染sgRNA质粒用于在靶向miR-29a基因区域引发突变.然后构建EGFP与sgRNA共表达质粒并转染Cas9稳转GT1-7细胞,利用流式细胞仪富集表达绿色荧光蛋白的阳性细胞和分选阳性单克隆细胞.后利用实时荧光定量PCR(realtime fluorescence quantitative PCR)对富集细胞和单克隆细胞进行miR-29a表达量检测.结果:T7E1检测结果显示CRISPR-Cas9系统有效地在miR-29a基因区域引发了突变.荧光定量PCR结果显示,与对照组相比,富集后阳性细胞miR-29a的表达量整体下降了50％左右(P＜0.05).此外,通过流式筛选获得了一个纯合miR-29a基因敲除细胞克隆,与对照组相比,其miR-29a的表达量下降了75％左右(P＜0.05).结论:本文建立了一种有效编辑GT1-7细胞基因的方法,并采用该方法构建了miR-29a稳定敲除细胞模型.
关键词： CRISPR-Cas9 GT1-7 miR-29a 单克隆细胞 -
miR-29a靶基因预测及其相关生物信息学分析
目的:通过对miR-29a进行靶基因预测及相关生物信息学分析,为miR-29a靶基因的实验验证提供数据支持,以期为深入研究miR-29a的生物学功能和调控机制提供理论指导.方法:利用PubMed检索miR-29a相关文章,通过miRBase在线工具分析miR-29a序列.应用TargetScan及miRNAda两种计算方法预测miR-29a靶基因并取其交集作为分析的基因集合,分别进行基因本体(gene ontology,GO)中的分子功能和生物学过程以及KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)生物通路富集分析.结果:(1)miR-29a序列在多物种间具有高度保守性.(2)两种方法预测miR-29a靶基因交集共191个.(3)miR-29a靶基因GO分子功能集中于转录因子活性、DNA结合和钙离子结合等(P＜0.05);miR-29a靶基因GO生物学过程集中于调控转录、细胞粘附、细胞增殖与凋亡等(P＜0.05);KEGG生物通路主要富集于PI3K-AKT信号通路、JAK-STAT信号通路、T细胞受体信号通路和胰岛素信号通路等信号转导通路,以及肺小细胞癌和子宫内膜癌等疾病通路(P＜0.05).结论:miR-29a可能通过参与多个靶基因信号通路的调控,在机体的多种生理病理过程中发挥重要作用,是一个颇有研究价值的生物学靶标.
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血清miR-192和miR-29a在肝硬化无创诊断中的应用价值
背景：早期诊断肝硬化并予早期干预可阻止病情进展，避免或延缓肝硬化失代偿发生。筛选血清学无创标记物是肝硬化临床诊断和评估研究的重要内容。目的：评价血清 miR-192和 miR-29a 在肝硬化无创诊断中的应用价值。方法：通过文献检索和 real-time PCR 筛选验证发现在肝硬化患者血清中差异表达明显的 miRNAs———miR-192和 miR-29a，以 real-time PCR 检测两者在120例肝硬化患者和76名健康对照者血清中的表达水平；二元 logistic 回归建立两者联合检测诊断肝硬化的数学模型，ROC 曲线评估诊断效能。结果：肝硬化组血清 miR-192表达水平显著高于对照组，血清 miR-29a 表达水平则显著低于对照组（P ﹤0.001）。由两者联合检测数学模型计算得到的风险评分诊断肝硬化的价值明显优于单一指标检测[ROC 曲线下面积（AUC）：0.968对0.887和0.933]，且优于临床常用肝硬化血清学无创诊断指标 APRI、FIB-4和 ARR（AUC：0.796、0.793和0.571）。血清 miR-192、miR-29a 表达水平以及两者联合检测的风险评分与肝硬化 Child-Pugh 分级显著相关（P ﹤0.05）。结论：miR-192、miR-29a 以及两者联合检测的风险评分可作为肝硬化无创诊断和评估新的血清分子标记物。
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MiR-29a下调共刺激分子B7-H3的表达及其对脑胶质瘤细胞侵袭的影响
目的:探讨miR-29a调控共刺激分子B7-H3在脑胶质瘤中的表达及其对脑胶质瘤细胞侵袭能力的影响.方法:通过Real-time PCR检测miR-29a和B7-H3在正常脑组织、脑胶质瘤组织及人胶质瘤细胞株U87中的表达,并利用脂质体将miR-29a的模拟物(mimics)和抑制剂(inhibitors)转入U87细胞,流式术验证miR-29a对B7-H3表达的调节效果;采用CCK-8和Transwell实验观察miR-29a对U87细胞的增殖和侵袭能力的影响,并通过流式术分析miR-29a干预前后U87细胞上与细胞侵袭相关的化学趋化因子的表达变化,以miRtarbase等软件预测miR-29a与CXCR4的结合能力.结果:胶质瘤组织及细胞株中miR-29a低表达而B7-H3 mRNA高表达,且均与瘤组织病理分级相关.转染miR-29a mimics可以有效下调U87细胞中B7-H3 mRNA的表达.转染miR-29a mimics可以显著抑制U87细胞的侵袭能力(P＜0.05),但对细胞增殖并无显著影响.miR-29a过表达可同时下调U87细胞中CXCR4的表达,但软件分析CXCR4基因上并不存在miR-29a的结合位点.结论:miR-29a可有效下调B7-H3分子的表达,进而抑制脑胶质瘤细胞的侵袭能力,其作用机制可能与CXCR4途径相关.
