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胃癌患者血清 microRNA-192和 microRNA-215的表达及临床意义
目的探讨血清miR-192、miR-215作为胃癌诊断标记物的可能性。方法收集2011年9月至2012年1月四川省人民医院29例术前胃癌患者和10名健康对照者血清并提取总RNA，反转录后采用实时荧光定量PCR的方法检测miR-192、miR-215相对表达量，收集胃癌患者的详细临床病理资料，比较miR-192、miR-215在胃癌患者与健康人之间的差异，并与临床病理特征之间的关系进行分析，构建受试者工作特征曲线（ ROC曲线），通过曲线下面积（ AUC）计算miR-192、miR-215检测及其联合应用诊断胃癌的敏感性和特异性。结果胃癌患者血清中miR-192、miR-215表达水平分别较正常对照组升高8.87倍（ P＝0.002）和4.14倍（ P＝0.037）。在不同肿瘤分期、淋巴结转移、肿瘤大小的胃癌患者之间比较，血清中miR-192、miR-215表达无统计学差异。 ROC曲线分析显示，miR-192、miR-215检测及其二者联合应用于胃癌诊断的AUC值分别为0.833（95％CI：0.793～0.993，P＜0.001）、0.724（95％ CI：0.555～0.894，P＝0.002）、0.893（95％CI：0.699～0.966，P＝0.037），敏感性分别为75.9％、62.1％、75.9％，特异性分别为90.0％、88.3％、92.1％。结论胃癌患者血清中miR-192和miR-215表达可能与胃癌的形成或发展有关。 miR-192、miR-215检测及其联合应用，对胃癌的诊断有较高的敏感性和特异性，提示这两种血清miRNA有望作为胃癌的诊断标记物。
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下调miR-192对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的干预作用及机制
目的 探讨下调miR-192对单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)大鼠肾损伤后肾间质纤维化的干预作用及机制.方法 将45只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、antagomir-192组.除假手术组外,其他两组大鼠均通过左侧输尿管结扎建立肾间质纤维化大鼠模型.术后第1、7、14天antagomir-192组大鼠给予antagomir-192尾静脉注射,而假手术组和模型组大鼠给予等量生理盐水尾静脉注射.第21天后处死大鼠,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测梗阻侧肾组织miR-192的表达变化,心脏取血测定大鼠血清中尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)含量,HE染色观察梗阻侧肾组织形态学病理改变,Masson染色计算梗阻侧肾间质胶原纤维沉积率,Western blotting检测梗阻侧肾组织上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关标志物钙黏蛋白(E-cadherin)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(vimentin)及I型胶原蛋白(collagen I)的表达变化.结果 与假手术组比较,模型组大鼠肾组织miR-192表达水平、血清中BUN、Cr含量、肾间质损伤评分、肾间质胶原纤维沉积率均显著升高(P<0.01),肾组织E-cadherin蛋白表达明显降低(P<0.01),α-SMA、vimentin及collagen I蛋白的表达均明显升高(P<0.01).与模型组比较,antagomir-192组大鼠肾组织miR-192的表达水平、血清中BUN、Cr含量、肾间质损伤评分、肾间质胶原纤维沉积率均显著降低(P<0.01),肾组织E-cadherin蛋白表达明显增高(P<0.01),α-SMA、vimentin及collagen I蛋白表达均明显降低(P<0.01).结论 miR-192在肾间质纤维化大鼠肾组织中表达升高,下调miR-192能够抑制UUO大鼠肾间质纤维化从而起到保护作用.
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消渴平合剂对链脲佐菌素诱导的糖尿病肾病大鼠肾功能及miR-192的影响研究
目的:观察消渴平合剂对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病肾病(DN)大鼠肾功能及肾组织miR-192的影响,探讨其对DN的防治作用及机制.方法:采用高脂高糖饮食联合STZ腹腔注射构建DN大鼠模型,随机分为正常组,模型组、厄贝沙坦组和消渴平合剂组.16周时处死大鼠,检测各组大鼠糖化血红蛋白、24 h尿蛋白、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、肾重(KW)、相对肾重的变化,RT-PCR检测大鼠肾组织miR-192的变化.结果:消渴平合剂可以改善DN大鼠的一般状况,与模型组比较,消渴平合剂组糖化血红蛋白、24h尿蛋白定量、Scr、BUN含量显著降低(P＜0.05),肾重及相对肾重明显减降低(P＜0.05).与厄贝沙坦组相比,消渴平合剂组糖化血红蛋白、24 h尿蛋白显著降低(P＜0.05).消渴平合剂组及厄贝沙坦组大鼠肾组织miR-192含量均较模型组下调(P＜0.05),消渴平合剂组与厄贝沙坦组比较无显著性差异(P＞0.05).结论:消渴平合剂可用于治疗糖尿病肾病,其机制可能与抑制DN大鼠肾组织miR-192的激活有关.
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血清miR-192和miR-29a在肝硬化无创诊断中的应用价值
背景：早期诊断肝硬化并予早期干预可阻止病情进展，避免或延缓肝硬化失代偿发生。筛选血清学无创标记物是肝硬化临床诊断和评估研究的重要内容。目的：评价血清 miR-192和 miR-29a 在肝硬化无创诊断中的应用价值。方法：通过文献检索和 real-time PCR 筛选验证发现在肝硬化患者血清中差异表达明显的 miRNAs———miR-192和 miR-29a，以 real-time PCR 检测两者在120例肝硬化患者和76名健康对照者血清中的表达水平；二元 logistic 回归建立两者联合检测诊断肝硬化的数学模型，ROC 曲线评估诊断效能。结果：肝硬化组血清 miR-192表达水平显著高于对照组，血清 miR-29a 表达水平则显著低于对照组（P ﹤0.001）。由两者联合检测数学模型计算得到的风险评分诊断肝硬化的价值明显优于单一指标检测[ROC 曲线下面积（AUC）：0.968对0.887和0.933]，且优于临床常用肝硬化血清学无创诊断指标 APRI、FIB-4和 ARR（AUC：0.796、0.793和0.571）。血清 miR-192、miR-29a 表达水平以及两者联合检测的风险评分与肝硬化 Child-Pugh 分级显著相关（P ﹤0.05）。结论：miR-192、miR-29a 以及两者联合检测的风险评分可作为肝硬化无创诊断和评估新的血清分子标记物。
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循环miR-192对心脏手术后急性肾损伤的早期诊断作用
目的 探讨循环miR-192在成人心脏手术后急性肾损伤(AKI)早期诊断中的价值.方法 前瞻性收集心脏手术患者手术前后不同时相的血标本,选取心脏手术后AKI患者35例以及临床资料相匹配的非AKI患者35例检测,分别测定血清肌酐(Scr)和血浆miR-192水平.观察两组患者围手术期miR-192与Scr的动态变化.用受试者工作特征曲线及曲线下面积(AUC)评价miR-192诊断AKI的精确性.AKI定义为48 h内Scr水平增加≥0.3 mg/dL或增至基线值的1.5倍以上.结果 70例患者平均年龄(64.31±8.17)岁,基础Scr(74.97±16.25) μmol/L.AKI组中应用Scr诊断AKI的中位时间为入ICU后24 h.术前两组患者的血浆miR-192水平无显著差异,而术后入ICU即刻两组患者的miR-192水平均较术前显著升高[分别为1.12(0.47,2.42)与1.93 (0.93,3.24),0.79 (0.41,1.16)与1.65 (0.97,2.36),P均＜0.05],其中AKI组患者的miR-192水平更高,但两组相比,差异无统计学意义;术后2 h AKI组患者的血浆miR-192水平持续升高,而非AKI组患者开始下降,两组差异存在统计学意义[1.80 (0.94,5.10)与1.21 (0.88,1.77),P＜0.05],此时血浆miR-192诊断AKI的AUC =0.67(95％ CI0.54 ～0.81,P=0.01).结论 血浆miR-192水平在心脏手术后AKI患者术后早期即显著升高,术后2h患者循环中的miR-192水平可能可以作为成人心脏手术后AKI的早期诊断标志物.
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血浆miR-192表达与丙泊酚全麻下肝脏肿瘤切除术肝损伤相关性研究
目的 评估外周血miR-192表达与丙泊酚全麻下肝脏肿瘤切除术肝损伤的相关性,探讨循环血中miR-192可否作为肝脏肿瘤术后肝损伤的生物标志物.方法 选取行肝脏肿瘤择期手术的患者101例,记录患者一般状况、麻醉药物及麻醉方法,肿瘤大小、手术类型、是否肝门阻断、术中出血量,术后12～24h内患者的肝肾功能.术后第1天取外周血测定循环血中miR-192浓度.应用统计学方法分析循环血中miR-192水平与手术肝损伤的相关性.结果 术中出血量≥500ml的患者,术后ALT、AST、miR-192升高幅度显著高于出血量＜500ml的患者,差异有统计学意义(P=0.046、0.020、0.000).有肝门阻断的患者,术后miR-192升高幅度显著高于无肝门阻断患者,差异有统计学意义(P=0.001).miR-192与ALT、AST均呈正相关(r=0.930、0.744,P=-0.000、0.000).术中丙泊酚用量与术后ALT、AST、miR-192均呈正相关(r=0.231、0.248、0.232,P=0.020、0.012、0.020).手术持续时间与术后ALT、AST、miR-192均呈正相关(r=0.184、0.241、0.185,P=0.011、0.001、0.011).结论 血浆miR-192表达与丙泊酚全麻下肝脏肿瘤切除术肝损伤具有良好的相关性,miR-192可能对缺血性肝损伤和创伤性肝损伤较为敏感,可以作为肝脏肿瘤切除术肝损伤的标志物.
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miR-192、miR-215及ERCC3在NSCLC细胞系A549放疗后的表达变化及意义
目的 探讨非小细胞肺癌细胞系A549放疗后,miR-192、miR-215及ERCC3的表达变化及意义.方法 体外常规培养的A549细胞分为对照组、20 Gy剂量放疗组及40Gy剂量放疗组,采用RT-qPCR检测miR-192和miR-215变化,Western blot检测ERCC3蛋白表达情况.结果 A549细胞受不同剂量(20 Gy和40Gy)的射线照射后,miR-192、miR-215表达上调.在20Gy剂量组中,miR-192上调(4.27±0.56)倍,miR-215上调(6.58±0.56)倍.在40Gy剂量组中,miR-192上调(4.94±0.39)倍,miR-215上调(7.48±0.47)倍.而ERCC3蛋白水平下调,相较于对照组(1.35±0.23),40Gy剂量组中ERCC3表达量(0.28±0.08)呈5倍下降,与20Gy组(0.63±0.14)相比,其值约呈2倍下降.结论 在非小细胞肺癌中,放疗可上调miR-192和miR-215的表达,下调其下游靶基因ERCC3的表达,从而对放疗后DNA损伤及修复发挥调控作用.
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miR-192负性调控人肝癌细胞株HepG2中RB1基因的表达
目的 探讨miR-192对人肝癌细胞株HepG2中RB1基因表达的调节作用.方法 运用生物信息学方法对miR-192进行靶基因预测并分析其潜在靶基因RB1;将含有miR-192结合位点的RB1 mRNA 3′端非编码区(3′UTR)片段和在miR-192结合位点进行突变的RB1 3′UTR突变片段克隆至报告基因载体pMIR-Report luciferase vector,重组质粒分别命名为pMIR-RB1和pMIR-RB1-mut;将重组质粒、Beta-gal内参质粒和microRNA共转染HepG2细胞,双荧光素酶报告基因系统检测各实验组中细胞荧光素酶的表达;SYBR Green荧光定量PCR和Western blot分别在mRNA和蛋白水平检测miR-192对内源性RB1表达的调节作用.结果 生物信息学分析筛选出89个miR-192的潜在靶基因,RB1基因是其中之一;测序验证重组质粒pMIR-RB1和pMIR-RB1-mut构建成功;过表达miR-192时,共转染pMIR-RB1质粒的细胞相对荧光素酶活性(4.80±0.36)较相应过表达miR-NC组(7.90±0.91)明显降低(P＜0.05),而共转染pMIR-Luc或pMIR-RB1-mut质粒的细胞相对荧光素酶活性[pMIR-Luc:(7.68±1.04);pMIR-RB1-mut:(7.56±0.99)]较相应过表达miR-NC组[pMIR-Luc:(7.86±0.73);pMIR-RB1-mut:(7.82±1.05)]无显著差异;上调miR-192水平显著降低HepG2细胞中内源性RB1 mRNA[(0.56±0.10)vs (1.05±0.13)]和蛋白(47% vs 100%)的表达.结论 RB1基因是miR-192的一个靶基因,在HepG2细胞中,miR-192通过直接结合RB1 mRNA 3′UTR而负性调控RB1基因表达.
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HBx基因下调miR-192对人肝癌细胞株HepG2周期的影响
目的 探讨HBx基因通过调节miR-192的表达影响人肝癌细胞株HepG2周期进展的机制.方法 流式细胞仪分析以下3组细胞的周期变化:HepG2/HBx细胞(HepG2细胞稳定转染HBx基因)、HepG2/pcDNA3.1细胞(HepG2细胞稳定转染空载体pcDNA3.1)以及HepG2细胞.3组细胞中miR-192的表达采用Taqman探针荧光定量PCR法检测.流式细胞术观察转染miR-192后HepG2细胞的周期分布变化,SYBR Green荧光定量PCR和Western blot分别检测miR-192对HepG2细胞p53、CDKN1A mRNA和蛋白表达的影响.结果 3组细胞中,HepG2/HBx细胞G0/G1期细胞比例明显降低[(52.78±4.08)% vs(67.37±4.87)%,(65.08±5.15)%],S期和G2/M期比例明显升高[S期:(25.22±1.84)% vs(19.78±1.26)%,(18.84±1.68)%;G2/M期:(22.00±2.07)% vs(12.85±1.29)%,(16.08±1.44)%].HepG2/HBx细胞miR-192表达显著下调[(49.1±5.9)% vs(98.0±8.9)%,(100.0±9.1)%].转染miR-192引起HepG2细胞G0/G1期和G2/M期阻滞,同时p53、CDKN1A mRNA(p53:1.68±0.12 vs 0.90±0.06;CDKN1A:2.36±0.12 vs 1.05±0.06)和蛋白(p53:3.07倍;CDKN1A:2.82倍)的表达水平亦显著上升.结论 miR-192通过促进p53和CDKN1A表达引起HepG2细胞周期阻滞,而HBx通过下调miR-192加速HepG2细胞周期进程.
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糖尿病肾病患者血清miR-192的表达及其对转化生长因子β信号通路的影响
目的 检测糖尿病肾病(DN)患者血清中microRNA( miR)-192的表达,并探讨其在DN的作用机制.方法 应用实时荧光定量PCR检测肾活检确诊的DN组、糖尿病无肾损害组和健康人群血清中miR-192的表达,以U6小RNA为内参,计算其相对表达量.同时检测肾组织miR-210表达.探讨miR-192作为DN特异性血清学指标的可能性.用生物信息分析方法分析可受miR- 192调节的靶基因,并在体外过表达或下调miR - 192表达以进一步研究.用不同浓度转化生长因子β1( TGF-β1)刺激肾小球系膜细胞,检测细胞和培养上清中miR - 192 含量.结果 DN患者血清miR- 192表达量显著低于健康对照(0.41±0.09比1.00±0.00,P＜0.01).各组间miR-210表达差异无统计学意义.TGF-β信号通路下游基因抗锌指E盒结合蛋白1(ZEB-1)、胰岛素样生长因子1(IGF-1)和Ⅰ型胶原(ColⅠ)可被miR- 192调节.不同浓度TGF-β1刺激均导致系膜细胞及培养上清miR-192含量显著下降.结论 血清中miR-192可能通过调节TGF-β通路参与DN的发病.miR-192具有的特异性可能会成为DN潜在的诊断标志物.
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糖尿病肾病患者尿液miR-192的表达及临床意义
目的 探讨miR-192在糖尿病肾病(DN)患者尿液中的表达及其临床意义.方法 选择140例2型糖尿病患者(T2DM)作为研究对象,按照24 h尿清蛋白定量(24 h-UAE)将其分为正常蛋白尿组(n=55)、微量蛋白尿组(n=48)、大量蛋白尿组(n=37).另选择30例健康体检者作为对照组.采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测尿液miR-192的表达水平.分析其与患者各临床指标的相关性.结果 正常蛋白尿组、微量蛋白尿组、大量蛋白尿组患者尿液miR-192表达相对值分别为(0.63±0.12,0.97±0.20和1.12±0.18),明显高于对照组(0.47±0.08);且表现为随DN的发展而逐渐增加的趋势(P＜0.05).相关性分析结果显示尿液miR-192水平与血肌酐、血尿素氮、24 h尿蛋白和胱抑素C呈正相关(P＜0.05);而与糖尿病病程、空腹血糖和糖化血红蛋白无明显相关性(P＞0.05).线性回归分析结果显示尿液miR-192水平与DN有相关性(OR=1.037、1.094,P＜0.05),是T2DM患者发生DN的独立预测因子.结论 miR-192水平在DN患者尿液中表达显著升高,其水平反映DN患者肾功能损伤,并与肾功能损伤的程度相关.
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糖克煎剂对糖尿病肾病大鼠肾脏miR-192信号通路的影响
目的:探讨糖克煎剂对糖尿病肾病大鼠肾脏miR-192信号通路的影响.方法:大鼠一次性尾静脉注射链脲佐菌素30mg/kg建立糖尿病模型,随机分为模型组、糖克煎剂4.5g/kg预防组、糖克煎剂4.5g/kg、18g/kg剂量组、福辛普利钠片组(0.9mg/kg),选取同龄大鼠作为正常对照组.测定血糖、24h尿蛋白、左肾重、肾重/体重比、BUN、Scr、TC、TG水平,HE染色观察肾脏组织病理变化,QRT-PCR法检测肾组织TGF-β1、miR-192、SIP1、Col1a2 mRNA的表达,Western-blot法检测肾脏中TGF-β1、SIP1、Collagen Ⅰ蛋白的表达.结果:与模型组相比,糖克煎剂4.5g/kg预防组、糖克煎剂4.5g/kg、18g/kg剂量组和福辛普利钠片组24h尿蛋白量、左肾重、肾重/体重比、BUN、Scr、TC、TG显著降低,肾小球基底膜增厚、系膜增生等病理损害得到改善,肾脏TGF-β1、miR-192、Col1a2mRNA表达减少,SIP1mRNA及蛋白表达增高,肾脏TGF-β1、Collagen Ⅰ蛋白表达降低,糖克煎剂18g/kg剂量组效果更好.结论:糖克煎剂能够治疗糖尿病肾病,其保护肾脏的机制可能与抑制miR-192信号通路相关.
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MiR-192靶向负调控Bim表达诱导肺癌顺铂耐药
背景与目的顺铂是非小细胞肺癌化疗的一线药物，但获得性耐药限制了其疗效的发挥。本研究的目的是筛选鉴定与肺癌顺铂耐药相关的microRNAs，探讨其与肺癌顺铂耐药的影响及分子机制。方法应用miRNA芯片及RT-PCR筛选鉴定A549与A549/DDP肺癌细胞间的差异表达miRNAs，将差异表达miR-192转染A549和A549/DDP细胞株，CCK-8检测miR-192对半数抑制浓度（half inhibition concentration, IC50）的影响，流式细胞术检测细胞凋亡，生物软件预测及双荧光素酶报告基因法寻找miR-192的靶基因，RT-PCR及Western blot检测靶基因表达水平在转染前后的变化。结果 MiR-192在A549/DDP中显著高表达，表达量是A549细胞表达量的37.59±0.35倍。在低表达miR-192的A549细胞中过表达miR-192，细胞对顺铂的IC50显著增高，顺铂引起的细胞凋亡率显著降低；反之，在高表达miR-192的A549/DDP中抑制miR-192的表达，顺铂的IC50显著降低，顺铂引起的细胞凋亡率显著增加。miR-192可靶向作用促凋亡基因Bim的3’-UTR，并在转录后水平负向调控Bim的表达。结论 MiR-192通过靶向负调控促凋亡基因Bim表达，诱导肺腺癌细胞株A549产生顺铂耐药，并减少顺铂引起的细胞凋亡。
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microRNA-192在转化生长因子茁介导的糖尿病肾病中的作用
microRNA( miR)鄄192在肾脏高表达，参与糖尿病肾病的发生、发展，在体外培养的肾小球系膜细胞和糖尿病小鼠的肾小球中，转化生长因子β( TGF鄄β)可上调miR鄄192的表达，糖尿病肾病患者血清中TGF鄄β及miR鄄192的表达显著增加。
