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趋化因子CXCL12及受体CXCR4在胃癌中的研究进展
趋化因子CXCL12及其受体CXCR4在胃癌生长、侵袭、转移和胃癌新生血管的形成等方面发挥着重要作用.统计学分析表明CXCR4阳性表达率与胃癌腹膜转移有关(P<0.001);CXCL12/CXCR4可以调节多种肿瘤细胞的增殖,包括乳腺癌、前列腺癌、黑色素瘤以及消化道癌等;它们的过度表达可以增加肿瘤血管和淋巴管生成,促进肿瘤的生长与侵袭转移;还可以趋化血管内皮细胞的聚集,诱导微血管的形成和毛细血管的发生.这些发现都提示着CXCL12及受体CXCR4与胃癌发生、发展和迁徙转移过程中有密切关系.因此,对CXCL12/CXCR4的深入研究将有望使其成为胃癌靶向治疗的新靶点.
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补气活血药对急性心肌梗死模型大鼠梗死心肌边缘区域SDF-1、CXCR4蛋白及mRNA表达的影响
目的：观察补气活血药对急性心肌梗死模型大鼠梗死心肌边缘区新生微血管数目以及基质细胞衍生因子-1（SDF-1）、趋化因子受体（CXCR4）蛋白及mRNA表达的影响。方法：建立大鼠急性心肌梗死动物模型，采用免疫组化SP法检测心肌组织中VIII因子相关抗原（vWF）蛋白的表达，计数微血管数目（MVC）；用Western Blot和Real-Time PCR技术检测各组大鼠梗死心肌边缘区域的SDF-1因子和其特异性受体CXCR4蛋白和基因表达情况。结果：假手术组、模型组、各给药组大鼠梗死心肌边缘区域均可见vWF因子标记染色的新生微血管，假手术组大鼠心肌中新生微血管不明显，模型组大鼠梗死心肌边缘区域可见到少量新生成的微血管，各给药组大鼠梗死心肌边缘区域可见较多新生微血管。模型组与假手术组比较差异有统计学意义（P约0.05）；各给药组与模型组相比较差异有统计学意义（P约0.05或P约0.01）。与假手术组比较，模型组大鼠心肌中SDF-1、CXCR4蛋白和mRNA表达明显增多（P约0.05或P约0.01）；与模型组比较，各给药组SDF-1、CXCR4蛋白和mRNA表达均明显增多（P约0.05或P约0.01）。结论：丹参、丹参黄芪药对等药物可以促进血管的生成，推测这些药物促进血管生成的机制可能是通过促进SDF-1、CXCR4蛋白及mR原NA表达水平，从而增加SDF-1、CXCR4的含量以促进新生血管的生成。
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基质细胞衍化因子-1对人内皮祖细胞迁移的影响
目的 探讨基质细胞衍化因子-1对内皮祖细胞迁移的影响.方法 用流式细胞仪、RT-PCR、内皮功能实验鉴定内皮祖细胞,检测其CXCR4受体表达和迁移功能.结果 培养单个核细胞7 d,CD34阳性率为36.3%±23.8%,CD133为19.7%±10.3%,双阳性率为18.6%±10.7%,表达KDR基因,>90%的细胞吸收DiI-ac LDL和FITC-UEA-1.CXCR4表达率为74.8%,对照组、基质细胞衍化因子-1浓度为10、20和50μg/L时,细胞迁移数分别为3.5、7.4、24.9和28.0个.各组浓度的细胞迁移数均显著高于对照组(P<0.01),20μg/L组显著高于10μg/L组、50μg/L组显著高于10μg/L组(P<0.01),50μg/L组显著高于20μg/L组(P<0.05).结论 (1)从外周血途径分离、培养和扩增获得内皮祖细胞,表达CXCR4受体;(2)内皮祖细胞可在基质细胞衍化因子-1的趋化作用下迁移,且与其浓度呈正相关.
关键词： 内皮祖细胞 细胞培养 基质细胞衍化因子-1 CXCR4 -
SDF-1/CXCR4增强骨髓间质干细胞的造血支持作用
目的 探讨基质细胞衍生因子-1(SDF-1)/CXCR4在骨髓间质干细胞(MSCs)支持CD34+造血干/祖细胞(HSPCs)扩增中的作用.方法 在长期培养基(LTG)中,以大鼠骨髓MSCs作为饲养层体外扩增骨髓CD34+细胞,每周分别加入SDF-1、SDF-1抗体或CXCR4抗体至5周.计算CD34+细胞数和集落形成细胞(CFC)数,以评价造血支持功能.为评估SDF-1/CXCR4对CD34+细胞增殖周期的影响,进行了杀伤试验以计算增殖指数.流式细胞术检测MSCs和CD34+细胞中SDF-1与CXCR4的表达;ELISA检测MSCs和CD34+细胞培养基中SDF-1的含量.结果 CD34+细胞数、CFC数和增殖指数在加入SDF-1后明显增加(P＜0.01),加入SDF-1抗体或CXCR4抗体后明显减少(分别为P＜0.05,P＜0.01).CD34+细胞表面表达CXCR4,MSCs则不表达;MSCs细胞内表达SDF-1,而CD34+细胞不表达.在MSCs培养基中检测到SDF-1,在CD34+细胞培养基中未发现.结论 SDF-1/CXCR4在骨髓MSCs支持HSPCs扩增中起重要作用.
关键词： 间质干细胞 造血干/祖细胞 基质细胞衍生因子-1 CXCR4 -
CXCR4-siRNA表达载体的构建及其对体外乳腺癌细胞侵袭能力的影响
目的 构建趋化因子受体(CXCR4)小分子干扰RNA(siRNA)表达载体,研究其对体外乳腺癌细胞侵袭能力的影响.方法 选择CXCR4高表达的乳腺癌MDA-MB-231细胞系,设计合成人CXCR4基因不同靶点的能编码siRNA的2条双链DNA序列,克隆到真核表达载体pGE-1-U6/kna中构建siRNA表达载体,体外脂质体介导转染MDA-MB-231细胞,用Western blot分析CXCR4蛋白表达,Transwell小室检测细胞的侵袭能力.结果 成功构建了CXCR4-siRNA表达载体,瞬时转染乳腺癌细胞后能显著降低CXCR4的蛋白表达,可有效抑制人类乳腺癌MDA-MB-231细胞的侵袭能力.结论 CXCR4-siRNA表达载体通过降低CXCR4基因的蛋白表达能显著抑制人类乳腺癌细胞的侵袭能力,有望为乳腺癌转移的基因治疗开辟新途径.
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miR-150对糖尿病肾病小鼠MSCs中迁移相关蛋白表达的影响
目的 探讨miR-150对糖尿病肾病小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)中趋化因子受体4(CXCR4)蛋白表达的影响.方法 提取糖尿病肾病(DN)小鼠与正常小鼠MSCs,通过成骨、成脂诱导及表面分子的特征鉴定MSCs;通过RT-PCR检测DN小鼠与正常小鼠MSCs中miR-150的表达情况;Western blot检测CXCR4和基质细胞衍生因子-l(SDF-1)蛋白的表达;Transwell实验检测细胞迁移能力.结果 MSCs诱导分化为脂肪细胞和骨细胞,并且其CD29(97.6％±2.2％)和CD90(99.1％±0.6％)表达阳性,CD45呈阴性表达(17.3％±4.5％),符合干细胞特性.miR-150在DN组MSCs中呈低表达(P＜0.05),在正常小鼠MSCs中,抑制miR-150表达后,CXCR4蛋白表达明显增加;过表达miR-150后,CXCR4及SDF-1的表达显著降低(P＜0.05).结论 DN组MSCs中miR-150表达异常可能是其表达迁移相关蛋白异常的重要原因.
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SDF-1-CXCR4轴与缺血性心脏病的干细胞治疗
干细胞治疗为缺血性心脏病患者提供了一种简单、经济、有效的全新治疗方法 ,其早期临床实验也取得了令人振奋的结果 ,然而更广泛的临床应用亟需更深入的基础研究的支持.SDF-1-CXCR4轴在干细胞的动员和归巢中起着关键作用,将SDF-1与干细胞治疗结合将为缺血性心脏病的细胞治疗提供一个新的途径.本文就缺血性心脏病的干细胞治疗,SDF-1-CXCR4轴在干细胞动员和心脏损伤、修复中的作用作一综述.
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SDF-1/CXCR4对缺血性卒中后神经发生的调节作用研究进展
脑缺血损伤后表达增高的基质细胞来源因子-1(SDF-1)和C-X-C趋化因子受体4(CXCR4)可以调控内源性神经干细胞增殖、分化和迁移.
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CXCL12-CXCR4/CXCR7轴信号传导通路与肿瘤细胞生物学特性的关系
越来越多的研究表明CXCR4与CXCR7在肿瘤的发生发展过程中发挥着重要作用,CXCR4与CXCR7作为G蛋白藕联受体介导的信号传导通路及其在胞内激化级联信号通路与肿瘤发生发展的分子机制有密切关系.本文将对它们各自介导的信号通路及其在胞内的级联信号通路与肿瘤细胞的生长、增殖、黏附和迁移等生物学特性的关系进行综述.
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基质细胞衍生因子-1α／CXCR4／CXCR7轴对骨髓间充质干细胞迁移的影响
目的：探讨基质细胞衍生因子-1α（ SDF-1α）受体CXCR4、CXCR7在骨髓间充质干细胞（ BMSCs ）中蛋白和 mRNA 的表达；及 SDF-1α／CXCR4／CXCR7轴对 BMSCs 迁移作用的可能机制。方法体外培养大鼠BMSCs，流式细胞术鉴定细胞表面抗原CD29、CD44和CD34。应用CXCR4特异性拮抗剂AMD3100及CXCR7中和抗体分别阻断CXCR4及CXCR7，通过 Western blotting 和RT-PCR分别检测BMSCs 蛋白和mRNA的表达变化；Transwell法检测细胞迁移能力。本次实验分为单纯BMSCs组（ A）、AMD3100预处理BMSCs组（ B）、CXCR7中和抗体预处理BMSCs组（ C）及AMD3100＋CXCR7中和抗体预处理BMSCs组（ D）。结果经鉴定第3代大鼠BMSCs中CD29和CD44均呈阳性表达，而CD34表达阴性。 BMSCs中CXCR4、CXCR7蛋白和mRNA均有表达。与A组相比，B组及D组CXCR4及CXCR7蛋白表达明显受到抑制（P＜0．05），C组只有CXCR7蛋白表达降低（P＜0．05）；各组CXCR4 mRNA和CXCR7 mRNA的表达差异均无显著性。 SDF-1α可以诱导BMSCs迁移，与0μg／L组相比，10μg／L组和100μg／L组穿膜细胞数均显著增多（P＜0．01），与10μg／L组相比，100μg／L组穿膜细胞数亦明显增多（P＜0．01）；AMD3100和CXCR7中和抗体均能抑制BMSCs的迁移作用（P＜0．05），当两者同时作用时，抑制效应更为显著（ P＜0．05）。结论 BMSCs共表达CXCR4、CXCR7蛋白及mRNA；BMSCs的迁移具有SDF-1α浓度依赖性；SDF-1α／CXCR4／CXCR7轴介导BMSCs的迁移作用，CXCR4受体和CXCR7受体对BMSCs的迁移可能具有协同促进作用。
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利用CRISPR/Cas9系统构建4T1细胞CXCR4基因敲除稳定细胞株
目的 利用CRISPR/Cas9系统敲除4T1细胞中的CXCR4基因,构建稳定敲除CXCR4基因的4T1细胞株.方法 根据CRISPR/Cas9靶点设计原则,在美国国立生物技术信息中心(NCBI) 上找到CXCR4基因序列的外显子区域,设计两条sgRNA,用LentiCRISPRv2作为载体构建LentiCRISPRv2-sgRNA重组质粒并转化至感受态的Stbl3菌体中,挑取单克隆测序验证并扩大培养提质粒后转染至293T细胞中包装成慢病毒.收集病毒并感染4T1细胞,通过嘌呤霉素筛选并用有限稀释法分离培养出单克隆细胞.提取筛选出的单克隆细胞基因组DNA并对敲除位点附近的DNA片段进行PCR扩增并测序;用Real-time PCR检测细胞株CXCR4基因mRNA表达情况;用免疫印迹法检测CXCR4蛋白质的表达情况.结果 LentiCRISPRv2-sgRNA重组质粒构建成功;经过基因组DNA片段PCR扩增测序得1株缺失27 bp的稳定敲除CXCR4基因的细胞株;细胞株CXCR4mRNA的表达量低且几乎无CXCR4蛋白质的表达.结论 通过CRISPR/Cas9系统获得靶向敲除CXCR4基因的重组质粒,并筛选出稳定敲除CXCR4基因的细胞株.
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HIV-1与趋化因子受体的研究进展
近年来,HIV-1在借助趋化因子受体(CCR5, CXCR4)感染免疫细胞方面的研究引起了广泛关注.对趋化因子受体在HIV-1感染中结构与功能的研究对于促进人们了解艾滋病的发病机制及其预防具有重要意义.另外,对CCR5与CXCR4相关抑制剂的作用分析更为艾滋病疫苗的研制与应用提供了新的方向.本文就HIV-1与趋化因子受体的研究进展情况作一综述.
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SDF-1/CXCR4与多发性骨髓瘤溶骨性病变的关系
多发性骨髓瘤(MM)患者的溶骨性破坏是主要的临床问题,其机制与骨髓瘤细胞或骨髓微环境的细胞产生破骨细胞激活因子刺激破骨细胞生成有关,SDF-1a是骨髓瘤骨病发病中的一个重要因子,也是治疗多发性骨髓瘤骨病潜在的靶目标.本文就SDF-1/CXCR4的结构,SDF-1/CXCR4在MM患者骨微环境中的表达及对破骨细胞的作用、血浆SDF-1和骨髓瘤细胞CXCR4的表达与MM溶骨病变及预后的关系、SDF-1/CXCR4是治疗骨髓瘤骨病的潜在靶标进行了综述.
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基质细胞衍生因子SDF及其受体CXCR4在造血干/祖细胞动员及归巢过程中的作用
基质细胞衍生因子(SDF)属CXC型趋化因子,主要在骨髓基质细胞和骨髓内皮等细胞表达,特异性地引起表达CXCR4的造血干细胞的趋化反应,因此在造血干细胞的迁移和归巢中起着重要作用.本文对SDF及其受体CXCR4在造血干细胞动员以及归巢过程中的机理进行简要综述.
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SDF-1/CXCR4与血液系统恶性肿瘤的关系研究进展
基质细胞衍生因子(SDF-1)及其受体CXCR4相互作用转导特定信号,在许多生理和病理过程中都发挥了重要的效应.CXCR4在多种血液系统肿瘤中高表达,与疾病的预后、耐药、复发密切相关.用SDF-1抗体或CXCR4抗体能有效的抑制肿瘤细胞的生长,为治疗血液系统肿瘤开辟了新途径.本文就SDF-1/CXCR4在血液系统肿瘤中的表达,及其与预后、耐药、复发和治疗关系的研究进展作一综述.
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Ibrutinib逆转SDF-1α/CXCR4介导的急性淋巴细胞白血病耐药机制
目的:探讨在急性淋巴细胞白血病细胞株SUP-B15中Ibrutinib对SDF-1α/CXCR4轴介导的耐药影响.方法:流式细胞术检测细胞凋亡及细胞表面CXCR4表达情况,Western blot检测CXCR4、ERK、Bcl-xL表达水平,qPCR检测CXCR4的mRNA表达水平.结果:Ibrutinib增强化疗药物阿霉素诱导SUP-B15的凋亡(17.100％±4.3％vs28.133％ ±3.16％);Ibrutinib抑制SDF-1α诱导的CXCR4磷酸化,呈浓度和时间依赖性(r24h=-0.99659,r4sh=-0.99764,r=-0.99980);Ibrutinib抑制CXCR4下游信号分子ERK、BCL-xL的表达与活性.结论:Ibrutinib增强SUP-B5细胞株对化疗药物阿霉素的敏感性,逆转SDF-1 α/CXCR4轴介导的耐药,其可能的作用机制是通过抑制CXCR4/ERK/BCL-xL信号通路而实现的.
关键词： 急性淋巴细胞白血病 Ibrutinib 基质细胞衍生因子-1 CXCR4 耐药 -
不同细胞因子组合对人脐血单个核细胞体外扩增及CD49d和CXCR4表达的影响
为了探讨不同的细胞因子组合对脐血单个核细胞体外的扩增作用及扩增后CD49d和CXCR4的变化,将新鲜脐血标本分离的单个核细胞接种于含有不同细胞因子组合的无血清无基质培养体系中培养7天,在0天,7天检测有核细胞数,CD34+细胞数及CD34+CXCR4+,CD34+CD49d+的细胞数和集落形成单位(CFU)数.根据不同细胞因子组合实验分组为:对照组;SF组(SCF+FL);SFT组(SCF+FL+TPO)和SFT6组(SCF+FL+TPO+IL6).结果表明,和对照组相比,SF组合仅能低水平支持脐血造血细胞扩增,加入TPO后即SCF/FL/TPO组合能有效的扩增脐血细胞,但SFT和SFT6两组之间差异却无明显发生(P＞0.05);SF,SFT和SFT6 3组的细胞因子组合均可提高脐血CD34+细胞CD49d,CXCR4的表达,但3组之间差异无显著性(P＞O.05).结论:SF组合可协同扩增人造血细胞,但协同作用较弱;TPO在脐血造血干/祖细胞体外扩增中起重要调节作用,而IL-6作用不显著;SCF/FL/TPO 3种因子组合不仅可促进脐血造血祖细胞的扩增,而且可上调脐血造血细胞CD49d,CXCR4表达.
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VEGF和CXCR4在弥漫大B细胞淋巴瘤中的表达及其临床意义
本研究旨在探索VEGF和CXCR4在弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)患者血清中的表达水平,两者之间的相关性及对预后的影响.用ELISA法检测44例初治DLBCL患者和20例健康人血清中VEGF和CXCR4的表达水平,并收集临床资料进行相关性分析和生存分析.结果表明,DLBCL患者血清中VEGF和CXCR4的表达水平明显高于正常对照组(P＜0.05)；VEGF和CXCR4的表达水平存在显著正相关(r=0.743,P＜0.05)；且VEGF的表达水平与LDH、免疫分型、结外受累数、Ann Arbor分期和ECOG评分相关(P＜0.05)；CXCR4在DLBCL患者血清中的表达水平与LDH、免疫分型、结外受累数和Ann Arbor分期相关(P＜0.05)；单因素分析显示,LDH、免疫分型、结外受累数、Ann Arbor分期、VEGF和CXCR4是患者总生存(OS)的预后影响因素(P＜0.05)；多因素分析显示,免疫分型和血清中CXCR4的表达水平是影响患者OS的独立不良预后因素(P＜0.05).结论:VEGF和CXCR4在DLBCL患者血清中显著高表达,且二者的表达水平存在正相关,CXCR4是影响患者OS独立不良预后因素,联合阻断VEGF和CXCR4可能成为淋巴瘤的治疗新思路.
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SDF-1/CXCR4在小儿急性白血病中的表达及其意义
本研究探讨儿童急性白血病(AL)血浆基质细胞衍生因子-1(SDF-1)的水平和骨髓细胞SDF-1受体CXCR4的表达与髓外浸润的关系.分别收集48例AL患儿、20例非恶性血液病患儿(对照组)外周血浆及骨髓细胞,采用ELISA法分别检测AL患儿和对照组儿童外周血浆SDF-1水平;用流式细胞术检测AL患儿和对照组儿童骨髓细胞CXCR4的表达.结果表明:血浆SDF-1水平及骨髓细胞CXCR4表达,在AL组明显高于对照组(P<0.001),在急性淋巴细胞白血病(ALL)组明显高于急性髓细胞白血病(AML)组(p<0.01),在髓外浸润组也高于非髓外浸润组(p<0.05).结论:SDF-1和CXCR4在AL儿童呈高水平表达,与白血病的类型、骨髓白血病细胞的迁移、浸润密切相关.
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基质细胞衍生因子-1α及其受体CXCR4在急性白血病的表达及与髓外浸润的关系
为了探讨基质细胞衍生因子-1d(stromal cell derived factor-1α,SDF-1α)及其受体CXCR4在急性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞三系白血病的表达及与髓外浸润的关系,对66例急性白血病中的急性淋巴细胞白血病(ALL)患者组(31例)、急性粒细胞白血病(M2)患者组(20例)、急性单核系细胞白血病(M4+M5)患者组(15例)、髓外浸润患者组(41例)、非髓外浸润患者组(25例),应用酶联免疫吸附实验(ELISA)及流式细胞术分别检测SDF-1α及其受体CXCR4在三组白血病外周血及骨髓白血病细胞上的表达.结果表明:ALL患者组、M4+M5患者组、M2患者组及正常对照组血浆的SDF-1α水平分别为1317.87±220.76,1339.79±187.06,1063.70±190.74,1908.34±135.55(pg/m1),其中ALL患者和M4+M5患者组高于M2患者组,但均明显低于正常对照组(P＜0.01).髓外浸润患者组及非髓外浸润患者组SDF-1α血浆水平分别为1252.49±263.12、1234.91±185.50,(pg/ml),组间无显著差别.CXCR4在ALL患者组、M4+M5患者组、M2患者组白血病细胞上表达的平均荧光强度(MFI)为78.47±33.96、67.21±24.29、41.66±17.18,ALL患者组及M4+M5患者组明显高于M2患者组(P＜0.05).ALL患者组、M4+M5患者组间无显著性差别.髓外浸润患者组CXCR4表达的MFI(81.72±27.63)明显高于非髓外浸润患者组(36.94±11.86)(P＜0.05).结论:急性淋巴细胞、单核细胞系白血病细胞趋化因子受体CXCR4高表达可能是其易发生髓外浸润的分子机制,3组白血病患者外周血SDF-1α表达水平均降低且与髓外浸润无明显相关,髓外浸润可能更取决于受浸润脏器局部SDF-1α表达水平.
