二氯乙腈对HepG2细胞凋亡的影响

目的 探讨饮水消毒副产物二氯乙腈(dichloroacetonitrile,DCAN)对HepG2细胞凋亡的影响及相关调控机制.方法 二甲基亚砜(DMSO)溶解DCAN,以DMSO处理人肝癌细胞(HepG2细胞)为对照组,分别以50 μmol/L、100 μmol/L、200μmol/L、400μmol/L DCAN染毒HepG2细胞为处理组,培养24 h后通过AnnexinV/PI流式细胞分析法检测细胞凋亡情况,用荧光测定法观察Caspase 3酶活性,蛋白质印迹法(West-ern blotting)技术检测HepG2细胞pro-caspase 3和P53蛋白的表达情况.结果 与对照组相比,400 μmol/LDCAN处理组可诱导HepG2细胞凋亡(P＜0.05),各处理组细胞内Caspase 3酶活性随着染毒剂量的增加而显著升高(P＜0.05).DCAN作用于HepG2细胞后pro-Caspase 3和P53蛋白含量呈下降趋势,当染毒浓度达到200 μmol/L以上时,pro-Caspase 3和P53蛋白表达明显低于对照组(P＜0.05).结论 高浓度的DCAN可通过激活Caspase 3诱导HepG2细胞凋亡.

苦参碱体外诱导人结肠腺癌SW480细胞凋亡的实验研究

目的:观察苦参碱(MT)诱导人结肠腺癌细胞株SW480凋亡的作用并探讨其可能机制.方法:以不同浓度MT处理人结肠腺癌细胞株SW480,分别通过MTT法检测MT对SW480细胞的增殖抑制作用,光镜观察、Hochest 33258荧光染色观察MT对SW480细胞变化的影响,Annexin V -FITC法检测MT对SW480细胞凋亡的影响,荧光定量PCR法检测MT对SW480细胞中Caspase3、Bcl-2 mRNA表达的影响.结果:MT对体外培养的SW480细胞增殖具有明显的抑制作用,并可诱导其发生凋亡,其作用呈剂量和时间依赖性,48 h IC50=0.70mg· mL -1；光镜观察显示,凋亡细胞变圆,体积缩小,Hochest 33258荧光强染；经MT作用的SW480细胞,其Bcl-2表达低于正常组,Caspase3表达则显著高于正常组.结论:MT在体外能抑制SW480细胞的增殖并诱导细胞凋亡,其机制可能与诱导凋亡有关.

锌指蛋白A20在内毒素所致人脐静脉内皮细胞损伤中的作用

目的探讨外源性锌指蛋白A20对内毒素(LPS)诱导的内皮细胞同型半胱氨酸蛋白酶caspase-3表达和凋亡的影响. 方法 RT-PCR检测A20基因在内毒素诱导内皮细胞中的表达.DOTAP脂质体转染pCDNA3.1EHA20于脐静脉内皮细胞,经G418筛选,A20表达经免疫荧光鉴定.Tunnel原位末端标记法、原位杂交检测转染前后内毒素诱导内皮细胞凋亡情况及caspase-3的表达情况. 结果 A20基因在内毒素诱导的内皮细胞中能表达.正常对照组及转染A20基因组人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡为(5±1)%、(6±1)%,LPS作用后对照组与转染A20基因组凋亡分别为(36±3)%、(10±1)%,两者相差显著(P<0.05).A20基因能显著抑制内毒素诱导的内皮细胞caspase-3的表达. 结论 A20基因在创伤的治疗中可能有一定作用.

EV71病毒2B基因siRNA通过Caspase 3信号通路抑制细胞凋亡

目的 探讨EV71病毒2B基因对EV71病毒诱导细胞凋亡的影响.方法 设计、合成靶向EV71病毒2B基因的siRNA,PCR验证干扰效果,筛选优siRNA浓度;易感非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)转染后接种EV71病毒,通过普通显微镜下细胞形态观察、细胞存活率测定、培养上清病毒滴度测定验证2B基因siRNA对病毒感染的抑制作用;通过流式细胞术检测细胞周期变化;通过Western blotting检测Caspase 3等凋亡蛋白,探讨凋亡通路上关键蛋白的改变.结果 靶向EV71病毒2B基因的siRNA在100 nM浓度下具有优的基因沉默效果,EV71病毒感染前经转染处理的细胞存活率增高、上清病毒滴度降低、细胞周期阻滞减轻、凋亡蛋白Caspase 3激活减少(均P<0.05).结论 EV71病毒2B基因siRNA通过Caspase 3信号通路抑制病毒诱导的细胞凋亡.

脐带间充质干细胞降低HL-60对阿糖胞苷的敏感性

本研究探讨脐带间充质干细胞(hUC-MSC)对HL-60白血病细胞药物治疗敏感性的影响,为研究hUC-MSC对白血病细胞的调节作用提供资料.体外建立HL-60细胞与hUC-MSC的transwell及直接接触共培养体系；使用流式细胞仪检测阿糖胞苷对HL-60细胞凋亡的影响,并检测与hUC-MSC共培养对HL-60细胞细胞周期的影响；应用RT-PCR和Western blot检测Caspase3 mRNA和蛋白表达变化；通过transwell共培养体系观察hUC-MSC对HL-60细胞凋亡影响的作用机制.结果表明,与hUC-MSC共培养可以显著减少阿糖胞苷诱导的HL-60细胞凋亡(P＜0.05)；hUC-MSC可以将HL-60细胞阻滞于Go/G1期,阻止其进入S期(P＜0.05)；与hUC-MSC共培养可以降低HL-60细胞中Caspase3 mRNA和蛋白水平的表达(P＜0.05)；transwell体系中hUC-MSC同样可以减少阿糖胞苷诱导的HL-60细胞的凋亡(P＜0.05).结论:hUC-MSC通过分泌可溶性细胞因子减少阿糖胞苷诱导的HL-60细胞凋亡,其机制可能与通过调节HL-60细胞周期及下调Caspase 3表达有关.

尖吻蝮蛇毒抑瘤组分Ⅰ通过促进半胱天冬酶3表达诱导K562/A02细胞凋亡

本研究探讨尖吻蝮蛇毒抑瘤组分Ⅰ(component I from Agkistrodon acutus venom,AAVC-Ⅰ),对人慢性髓系白血病(CML)细胞生物学特性的影响.选择K562/A02细胞株为对象,培养体系中加入不同浓度的AAVC-Ⅰ(6.25 - 100 μg/ml),用CCK-8法检测K562/A02细胞增殖活性,Giemsa和Hochest 33258染色法观察细胞形态学的变化,流式细胞术检测K562/A02细胞凋亡情况,酶显色活性分析法检测caspase 3酶活性的变化.结果表明,AAVC-Ⅰ能够抑制K562/A02细胞的体外增殖,呈时间和剂量依赖性,48h时半数抑制浓度为30.988 μg/ml.AAVC-Ⅰ作用K562/A02细胞48 h后,镜下可见胞核固缩及凋亡小体的形成.流式细胞术分析显示,随着作用药物的浓度由0增高到50μg/ml,细胞凋亡率也由0.88％升高到53.66％.相比对照组,各实验组caspase 3凋亡蛋白的表达呈浓度依赖性增加(P＜0.05).结论:AAVC-Ⅰ能够有效地抑制人红白血病K562/A02细胞增殖并促进其凋亡,其机制可能与caspase 3蛋白的高表达促进K562/A02细胞凋亡有关.

HPM辐射后大鼠海马组织中细胞凋亡及Caspase 3的表达研究

目的探讨HPM辐射后大鼠海马组织中细胞凋亡及Caspase 3的表达及其意义.方法采用12 mW/cm2HPM模拟源辐照50只Wistar雄性大鼠,于照后6 h,1、3、7、14和28 d活杀取海马组织,经光镜、电镜、免疫组化和图像分析等技术,研究HPM辐射后大鼠海马组织中细胞凋亡的特点、Caspase 3的表达及其意义.结果12 mW/cm2HPM辐射后6 h～3 d,凋亡的细胞进行性增多,3 d达高峰,7 d后逐渐减少,14 d后恢复至正常水平.凋亡的细胞核染色质浓缩、边集.照射后1～3 d,Caspase-3于神经元胞浆中表达进行性增加,3 d达高峰,7 d后逐渐恢复,28 d基本恢复至正常水平.结论细胞凋亡是HPM辐射引起海马神经元死亡的主要方式,Caspase-3表达增加,参与HPM辐射后海马神经元凋亡的过程.

低氧预适应对大鼠肝切除后残肝组织凋亡相关蛋白表达的影响及意义

目的 观察低氧预适应对大鼠肝切除术后残肝组织凋亡相关蛋白细胞色素C和caspase 3表达的影响及其意义.方法 采用SD大鼠肝切除模型研究低氧预适应对残肝组织凋亡相关蛋白表达的影响及意义.将SD大鼠随机分为对照组(NC组)、单纯肝切除组(HR组)和低氧预适应组+肝切除组(HP组),每组24只.HP组术前用10％氮氧混合气体处理90 min,分别于术后1h、6h、12 h、24 h处死大鼠取肝脏标本,取门静脉血检测肝功能,Western-Blot法测定肝切除大鼠残肝组织细胞色素C和caspase 3蛋白的表达,并在电镜下观察各组肝细胞形态学改变、线粒体损伤程度等.结果 HP组血清ALT和AST水平显著低于HR组,差异有统计学意义(P＜0.05);HP组各时段的肝功能明显优于HR组;HP组各时段细胞色素C和caspase 3蛋白表达明显低于HR组,透射电镜下HR组肝细胞出现典型的凋亡征象,而HP组肝细胞无明显凋亡形态.结论 HP对肝切除后残肝组织的肝细胞凋亡有明显的抑制作用;可能是通过下调细胞色素C和caspase 3蛋白的表达、减轻线粒体损伤途径而发挥其保护作用.

Ginsenoside Rd has a clear neuroprotective effect against ischemic stroke. We aimed to verify the neuroprotective effect of ginsenoside Rd in spinal cord ischemia/reperfusion injury and explore its anti-apoptotic mechanisms. We established a spinal cord ischemia/reperfusion injury model in rats through the occlusion of the abdominal aorta below the level of the renal artery for 1 hour. Successfully established models were injected intraperitoneally with 6.25, 12.5, 25 or 50 mg/kg per day ginsenoside Rd. Spinal cord morphology was observed at 1, 3, 5 and 7 days after spinal cord ischemia/reperfusion injury. Intraperitoneal injection of ginsenoside Rd in ischemia/reperfusion injury rats not only improved hindlimb motor function and the morphology of motor neurons in the anterior horn of the spinal cord, but it also reduced neuronal apoptosis. The optimal dose of ginsenoside Rd was 25 mg/kg per day and the optimal time point was 5 days after ischemia/reperfusion. Immunohistochemistry and western blot analysis showed ginsenoside Rd dose-de-pendently inhibited expression of pro-apoptotic Caspase 3 and down-regulated the expression of the apoptotic proteins ASK1 and JNK in the spinal cord of rats with spinal cord ischemia/reper-fusion injury. These ifndings indicate that ginsenoside Rd exerts neuroprotective effects against spinal cord ischemia/reperfusion injury and the underlying mechanisms are achieved through the inhibition of ASK1-JNK pathway and the down-regulation of Caspase 3 expression.

黄芩苷元选择性诱导人白血病K562细胞凋亡

目的研究黄芩苷元诱导人白血病细胞凋亡的作用及机理.方法 MTT法测细胞毒活性,Hoechst 33258荧光染色法观察凋亡小体形成,流式细胞仪Annexin V FITC-PI法检测细胞凋亡发生率,PI染色法检测凋亡峰及细胞周期,同时流式细胞仪检测细胞Bcl-2,Fas和Caspase 3蛋白表达情况.结果黄芩苷元能选择性抑制人白血病K562细胞生长且呈浓度依赖关系,并能诱导细胞凋亡,细胞增殖被阻滞于S期;同时细胞Fas和Caspase 3蛋白表达增高,而Bcl-2蛋白表达不变.结论黄芩苷元能激活Caspase 3蛋白表达,诱导人白血病K562细胞凋亡且呈时效量效关系,此作用与Fas蛋白表达上调有关,与Bcl-2蛋白表达无关.

人参皂苷Rg1对缺糖缺氧所致C6胶质细胞凋亡的影响

目的:观察人参皂苷Rg1(Rg1)对缺糖缺氧所致C6胶质细胞损伤的保护作用及其机制.方法:采用MTT法检测了Rg1对缺糖缺氧所致胶质细胞C6的存活;采用流式细胞术检测了Rg1对胶质C6细胞凋亡的影响;采用Western blot方法检测了Rg1对凋亡相关蛋白p38 MAPK磷酸化激活、P53、Caspase 3表达的影响,以及BDNF表达的影响.结果:Rg1通过抑制了缺糖缺氧所致C6细胞的凋亡而增加细胞的存活率,且抑制了p38 MAPK的磷酸化激活,抑制凋亡促进蛋白P53、Caspase 3的表达,并促进BDNF的表达.结论:Rg1可能通过抑制胶质细胞损伤而促进脑缺血中神经元的修复.

越桔原花青素通过线粒体通路诱导胶质瘤细胞凋亡的机制研究

目的 研究越桔原花青素诱导脑胶质瘤细胞凋亡的作用,探讨越枯原花青素诱导胶质瘤细胞凋亡的机制.方法 培养人脑胶质瘤SHG-44细胞,四甲基偶氮唑蓝法检测越桔原花青素作用后SHG-44细胞的生长抑制率,倒置显微镜观察药物作用后细胞生长的变化;Annexin V/PI分析细胞凋亡率;细胞免疫组化法检测bax蛋白的表达;蛋白质印迹法检测bax、bcl-2和caspase 3蛋白的表达.结果 8、40和200 μg·L-1越桔原花青素均明显抑制SHG-44细胞的生长,倒置显微镜下观察到细胞密度明显降低;各用药组的细胞凋亡率随着药物浓度升高而增高;各用药组细胞表达bax蛋白和caspase3蛋白明显增加,表达bcl-2蛋白减少.结论 越桔原花青素通过上调bax蛋白和下调bcl-2蛋白的表达,激活线粒体通路后促进肿瘤细胞凋亡并抑制肿瘤细胞生长.

桂皮醛影响K562细胞生长的机理研究

目的:探讨桂皮醛对慢性髓细胞白血病细胞株K562生长的影响及其机制.方法:以不同浓度的桂皮醛作用于体外培养的K562细胞,CCK-8法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞周期、凋亡率和Caspase 3表达.结果:桂皮醛呈时间和剂量依赖性影响K562细胞增殖,使细胞周期受阻于G2/M期,并诱导K562细胞凋亡.K562细胞凋亡过程中,活化的Caspase 3表达明显增加.结论:桂皮醛使K562细胞周期受阻,并使Caspase-3活化诱导细胞凋亡,从而实现对K562细胞的生长抑制.

海带多糖对慢性局部电离辐射致大鼠睾丸细胞损伤的干预效应研究

目的 探究海带多糖(Laminaria japonica polysaccharides,LJP)对慢性局部电离辐射致雄性大鼠睾丸细胞损伤的影响.方法 将适应饲养7 d的56只Wistar雄性大鼠随机分为正常对照1组、辐射模型3组和LJP干预3组,每组8只;UP干预3个组给予LJP的生理盐水溶液,其余各组以等量生理盐水灌胃;经灌胃处理7d后,除对照组外的其它6组,以60Coy射线进行局部照射,除周末两天不照射外,每天1次,每周连续5次,共20次,总刑量每只2.3Gy;分别在停止照射后1、7和14 d处死大鼠,分离睾丸;采用免疫组化、单细胞凝胶电泳、流式细胞术的方法研究海带多糖对电离辐射致大鼠睾丸组织caspase3蛋白表达量和睾丸细胞DNA损伤及其含量的影响.结果 停止辐射1d、7d、14d后LJP各组与对应模型组相比,睾丸组织形态好于对应模型组,睾丸组织caspase3蛋白表达量降低,其彗星拖尾率、尾长减少;HC峰内细胞占睾丸细胞百分比明显低于对应模型组,且UP 14d组1C、2C、4C峰内细胞占睾丸细胞百分比均显著高于模型14d组.结论 LJP可明显降低辐射所致大鼠睾丸组织caspase 3蛋白的异常表达和各睾丸细胞的DNA损伤,促进损伤细胞的修复.

苦参碱对体外人髓母细胞瘤D341细胞凋亡、增殖及凋亡相关蛋白的影响

目的:探讨苦参碱在体外对人髓母细胞瘤D341细胞的凋亡、增殖作用及相关蛋白Caspase 3、Caspase 9表达的影响.方法:D341细胞体外成功培养后,按所加苦参碱的浓度进行分组(0.5 mg/ml、1.0 mg/ml、1.5 mg/ml、2.0mg/ml,0mg/nl为对照组),各实验重复3次.光学显微镜、透射电镜观察细胞形态、结构的改变,CCK-8法检测D341细胞增殖的影响,Annexin-V FITC/PI双染法检测细胞凋亡.Western blot检测苦参碱作用D341细胞后Caspase3、Caspase9蛋白表达水平的改变.结果:在苦参碱作用下,细胞增殖的抑制率随药物浓度的增加而逐渐升高,抑制率有统计学差别(P＜0.01);药物作用时间不同对细胞增殖的抑制程度不同,24h与72 h组的抑制率有统计学差别(P＜0.01).瘤细胞的凋亡率随着药物浓度的增加而逐渐升高,0.5 mg/ml、1.0m∥ml与1.5 mg/ml、2.0 mg/ml组间的差别均有统计学意义(P＜0.05);瘤细胞的凋亡率随着作用时间延长而升高,24h与72h、48h与72h组间的凋亡率的差别有统计学意义(P＜0.05).随着苦参碱浓度的增加,细胞Caspase 3和Caspase 9的表达均逐渐增强(P＜0.01).结论:苦参碱在体外对D341细胞是通过上调Caspase 3和Caspase9蛋白来发挥其促凋亡、抑制增殖作用.

青蒿琥酯抑制肝纤维化的作用及其机制

目的:探讨青蒿琥酯(Art)对人源肝星状细胞(LX-2)的作用.方法:样本为体外培养人源肝星状细胞,实验分为对照组及3个不同剂量的Art(250、350、450 μmol/L)组.四甲基偶氮唑盐法(MTT)检测LX-2的增殖情况,HPLC-FLD法检测LX-2上清中神经酰胺的含量,酶消化法测定羟脯氨(Hyp)的含量,Western blot法检测PPAR-γ、p53、Caspase 3蛋白在各组中的表达.结果:与对照组比较,不同浓度青蒿琥酯组对肝星状细胞增殖均有明显抑制作用,且呈剂量-效应关系(P＜0.01);青蒿琥酯可提高神经酰胺的含量(P＜0.01),同时各给药组羟脯氨酸的含量明显下降(P＜0.05,P＜0.01);与对照组比较,青蒿琥酯组PPAR-γ、p53、Caspase 3蛋白的表达上调(P＜0.01).结论:青蒿琥酯可能是通过上调神经酰胺,发挥抑制肝星状细胞增殖、促进其凋亡的作用.

蒽贝素体外抑制人胰腺癌细胞Mia PaCa-2细胞增殖和诱导凋亡的作用及其机制研究

目的：探讨X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）抑制剂蒽贝素抑制人胰腺癌细胞Mia PaCa-2凋亡的作用及其可能机制。方法 MTT法和流式细胞术检测不同剂量蒽贝素对Mia PaCa-2细胞增殖和凋亡的影响；RT-PCR法对蒽贝素处理前后Mia PaCa-2细胞中XIAP基因的表达进行检测。Western blotting方法检测蒽贝素作用后细胞XIAP、Caspase 3、促凋亡蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bcl-2表达的变化。结果蒽贝素对人胰腺癌细胞增殖具有显著抑制作用（P＜0.05），经不同剂量蒽贝素处理后Mia PaCa-2细胞凋亡率明显增高，与未处理组比较差异具有显著性（P＜0.01）；RT-PCR显示对照组细胞中XIAP的-△△CT值是实验组的11.31倍；经蒽贝素作用24 h后，Mia PaCa-2细胞出现Caspase 3裂解片段，且Bax/Bcl-2比值增大。结论蒽贝素在体外可显著抑制Mia PaCa-2细胞增殖，诱导细胞凋亡，其机制可能是通过拮抗XIAP的作用，激活Caspase相关性的细胞凋亡内源性途径而诱导人胰腺癌细胞发生凋亡。

瓜子金皂苷己对鱼藤酮损伤PC-12细胞的保护作用及其对CREB的影响

目的：观察瓜子金皂苷己（polygalasaponin F，PS-F）对鱼藤酮损伤的PC-12细胞的保护作用及其对cAMP反应元件结合蛋白（cAMP response element binding protein，CREB）表达的影响。方法：以鱼藤酮损伤的PC-12细胞为模型，通过倒置显微镜观察细胞形态，caspase 3活性检测试剂盒测定caspase 3活性，荧光素酶报告基因技术检测CREB表达的变化。结果：PC-12细胞在4μmol·L-1鱼藤酮损伤后，细胞出现萎缩变圆，折光率降低，caspase 3活性显著升高，呈现凋亡的现象。不同浓度（0.1，1.0，10.0μmol·L-1）瓜子金皂苷己能够剂量依赖性的减轻对细胞形态的影响，降低caspase 3活性。荧光素酶报告基因标记显示，瓜子金皂苷己能够增加报告基因CREB的表达。结论：瓜子金皂苷己能够抑制鱼藤酮诱导的PC-12细胞凋亡，其机制可能与增加CREB的表达有关。

异丙酚对大鼠脑损伤后神经细胞凋亡及脑组织 Caspase-3表达的影响

目的：探讨异丙酚对大鼠脑损伤后神经细胞凋亡及脑组织Caspase 3蛋白表达的影响，为异丙酚的临床应用提供更为重要的科学依据。方法24只雄性Wistar 大鼠随机分为假手术组、冷冻伤后0．9％氯化钠溶液组和异丙酚组。异丙酚给药量为临床麻醉相关剂量（100 mg／kg）：冷冻伤后15 min腹腔注射异丙酚50 mg／kg，0．5 h后再次追加相同剂量。采用颅骨外脑冷冻伤法，运用液氮冷冻器局部冷冻大鼠左侧顶部脑组织60 s制作冷冻伤即脑损伤模型。3组伤后24 h采用TUNEL法检测神经细胞凋亡，采用免疫组化法测定Caspase 3蛋白表达，并进行神经创伤评分。结果异丙酚组神经细胞凋亡与0．9％氯化钠溶液组比较降低（ P ＜0．05），但仍显著高于假手术组（ P ＜0．01）。脑冷冻伤后24 h，0．9％氯化钠溶液组Caspase 3蛋白阳性表达水平较假手术组明显升高（ P ＜0．01），异丙酚组脑组织Caspase 3蛋白表达水平与0．9％氯化钠溶液组比较显著降低（ P ＜0．05）。脑冷冻伤后大鼠出现神经功能障碍，伤后24 h异丙酚治疗组神经创伤评分（NSS）明显低于0．9％氯化钠溶液治疗（ P ＜0．05）。结论临床麻醉相关剂量的异丙酚可以减轻脑损伤后延迟性神经细胞凋亡、促进神经功能的恢复。

二甲双胍对缺氧/复氧导致的乳鼠心肌细胞凋亡的影响

目的：通过建立乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤模型，观察二甲双胍对乳鼠心肌细胞凋亡的影响。方法选用原代培养72 h的乳鼠心肌细胞，随机分为4组：空白对照组、二甲双胍组、缺氧/复氧组、二甲双胍+缺氧/复氧组。流式细胞术检测各组细胞的凋亡率，荧光定量 PCR检测各组细胞 caspase 3 mRNA表达，酶联免疫法检测各组细胞胞浆内细胞色素 C(CytC)的含量。结果与空白对照组相比，缺氧/复氧组细胞凋亡、caspase 3 mRNA表达、胞浆 CytC的含量均明显增高(P<0.05)。与缺氧/复氧组相比，二甲双胍+缺氧/复氧组细胞凋亡率、caspase 3 mRNA表达、CytC 含量均明显降低(P<0.05)。结论二甲双胍可以抑制caspase 3表达，进而减轻缺氧/复氧所致的心肌细胞凋亡，其机制可能与抑制 mPTP的开放，减少线粒体内 CytC的释放有关。