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瓜子金皂苷己在小鼠中抗淀粉样蛋白损伤的作用与机制
目的 研究瓜子金皂苷己(polygalasaponinF,PGSF)抗淀粉样蛋白(amyloidβ,Aβ)损伤的作用与机制.方法 利用Aβ损伤PC12细胞,噻唑蓝(3-(4,5-dimethyhhyhhiazol-2-y1)-2,5-diphenyhetrazolium bromide,MTT)检测细胞存活率,DCFH-DA探针检测细胞内活性氧自由基,海马注Aβ后,利用Morris水迷宫评价动物认知行为学的改变,Western blot方法检测学习记忆相关蛋白的变化.结果 体外实验结果显示,Aβ能够抑制PC12细胞存活率,并促进细胞内活性氧的堆积;海马注射Aβ后,模型动物的逃避潜伏期延长,穿越目标象限的次数减少,而PGSF高剂量(20 mg·kg-1)对上述学习记忆障碍的行为具有改善功能.蛋白检测发现PGSF能够增加脑源性神经营养因子(BDNF)的水平,促进受体酪氨酸激酶和GSK3β 216位点酪氨酸的磷酸化.结论 PGSF能够减轻Aβ对神经细胞的损伤,改善学习记忆,其作用机制可能与RTK-GSK3-BDNF信号传导通路有关,是具有治疗老年痴呆潜能的化合物.
关键词： 瓜子金皂苷己 淀粉样蛋白 老年痴呆 脑源性神经营养因子(BDNF) -
瓜子金皂苷己对鱼藤酮损伤PC-12细胞的保护作用及其对CREB的影响
目的：观察瓜子金皂苷己（polygalasaponin F，PS-F）对鱼藤酮损伤的PC-12细胞的保护作用及其对cAMP反应元件结合蛋白（cAMP response element binding protein，CREB）表达的影响。方法：以鱼藤酮损伤的PC-12细胞为模型，通过倒置显微镜观察细胞形态，caspase 3活性检测试剂盒测定caspase 3活性，荧光素酶报告基因技术检测CREB表达的变化。结果：PC-12细胞在4μmol·L-1鱼藤酮损伤后，细胞出现萎缩变圆，折光率降低，caspase 3活性显著升高，呈现凋亡的现象。不同浓度（0.1，1.0，10.0μmol·L-1）瓜子金皂苷己能够剂量依赖性的减轻对细胞形态的影响，降低caspase 3活性。荧光素酶报告基因标记显示，瓜子金皂苷己能够增加报告基因CREB的表达。结论：瓜子金皂苷己能够抑制鱼藤酮诱导的PC-12细胞凋亡，其机制可能与增加CREB的表达有关。
关键词： 瓜子金皂苷己 鱼藤酮 凋亡 Caspase 3 cAMP反应元件结合蛋白 -
HPLC-ELSD法测定瓜子金中瓜子金皂苷己的含量
目的 建立测定瓜子金皂苷己的含量的方法,为瓜子金药材质量控制提供依据.方法 采用HPLC-ELSD法;色谱柱:SHISEIDO Capcell Pak C18柱;流动相:乙腈-水(30:70),等度洗脱;流速:1.0 ml/min;柱温:25 ℃,检测器:蒸发光散射检测器.结果 瓜子金中瓜子金皂苷己获得良好分离,在0.346～3.460 μg范围内呈现良好线性关系;精密度试验RSD为1.64%;重现性试验RSD为2.12%;加样回收率为99.85%.结论 建立了HPLC-ELSD法测定瓜子金皂苷己的含量,方法简单可行.
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瓜子金皂苷己对连二亚硫酸钠致氧糖剥夺/复供诱导PC12细胞凋亡的抑制作用
目的 观察瓜子金皂苷己(polygalasaponin F,PGSF)对氧糖剥夺/复供(oxygen-glucose deprivation and reperfusion,OGD/R) 所诱导的PC12细胞凋亡的作用及其机制.方法 以连二亚硫酸钠合并无糖Earle's液造成氧糖剥夺,继而恢复为完全培养基以建立体外OGD/R模型,以Hoechst33342 / PI双染及流式细胞术观察细胞受损和凋亡情况;以JC-1荧光染色法测定细胞线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP);以Western blot法检测凋亡相关蛋白的表达.结果 PGSF可明显改善细胞形态并降低细胞受损和凋亡百分率,抑制MMP水平的降低,增加Bcl-2/Bax表达比值.结论 PGSF对OGD/R诱导的PC12细胞凋亡具有明显抑制作用,机制与其调节Bcl-2和Bax的表达及稳定MMP有关.
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瓜子金皂苷己对MPP+诱导PC12细胞凋亡的保护作用
目的 观察瓜子金皂苷己( polygalasaponin F,PS-F)对1-甲基-4-苯基-吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridinium,MPP+)诱导的PC12细胞损伤的影响,并且探讨其作用机制.方法 MTT法检测细胞存活率,Annexin V/PI染色流式细胞术检测PC12细胞凋亡,JC-1染色倒置显微镜检测细胞线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP),Western blot检测Caspase-3蛋白的水平.结果 500 μmol·L-1 MPP+作用PC12细胞48 h,能明显抑制细胞生长(P＜0.01),诱导细胞发生凋亡,同时降低MMP,增加活性Caspase-3的蛋白水平.同时给予不同浓度PS-F处理,PC12细胞存活率增加(P＜0.01)；凋亡细胞量减少；MMP增高；活性Caspase-3蛋白水平降低(P＜0.01).结论 PS-F能抑制MPP+诱导的PC12细胞的凋亡,其作用机制可能与维持线粒体正常膜电位,稳定线粒体功能,降低活性Caspase-3蛋白水平有关.
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舒凉含片喷雾干燥工艺研究
目的：对舒凉含片浸膏的喷雾干燥工艺进行优化。方法：以干粉得率和吸湿百分率为指标，优选了加入浸膏的辅料；采用正交设计法，以瓜子金皂苷己的转移率和干粉得率为指标，确定了工艺参数：浸膏相对密度、进风温度和浸膏进料速度。结果：佳工艺经过验证，其工艺参数为：浸膏中加入的辅料为5％的β-环糊精（β-CD），浸膏相对密度为1.05，浸膏进料速度为15 mL／min，进风温度为170℃。结论：该工艺合理可行，能有效提高产品的稳定性，为工业化生产提供了实验依据。
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瓜子金皂苷己抑制脂多糖诱导的小胶质细胞激活
目的 观察瓜子金皂苷己(polygalasaponin F,PGSF)对脂多糖(LPS)诱导的BV-2小胶质瘤细胞激活的作用及其作用机制.方法 以0.1μg·mL-1 LPS刺激BV-2细胞24 h构建神经炎症模型,以酶联免疫吸附分析法(ELISA)检测细胞培养基上清中的白介素1β(IL-1β)、 肿瘤坏死因子(TNF-α)浓度,以Griess法检测一氧化氮(NO)的浓度;以逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法或免疫印迹法(Western Blot)检测细胞炎性蛋白酶诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和环氧合酶-2(COX-2)的蛋白、mRNA表达,以及Toll样受体4(TLR4)mRNA表达.结果 PGSF(10,1μmol·L-1)可明显降低LPS诱导的BV-2细胞培养基中TNF-α(P<0.01)和IL-1β(P<0.05)浓度,同时下调细胞内iNOS蛋白(P<0.05)和mRNA(P<0.01,P<0.05)表达;PGSF(10μmol·L-1)可降低NO的浓度(P<0.05)、 下调COX-2的蛋白和mRNA(P<0.05)表达,并逆转TLR4 mRNA表达的上调(P<0.05).结论 PGSF能够负调控LPS诱导的BV-2小胶质细胞炎性介质的释放和炎性蛋白酶的表达,抑制小胶质细胞激活,发挥对抗神经炎症的作用,此抗炎作用可能由TLR4受体介导.
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瓜子金皂苷己神经保护作用的体外研究
目的 观察瓜子金皂苷己(PGSF)对大鼠原代皮层神经细胞和PC12细胞的保护作用及其机制.方法 建立体外氧糖剥夺/复灌(OGD/R)、氧化应激及去血清模型,以MTT法检测细胞存活率,光镜下观察细胞形态,Western blotting法检测蛋白表达.结果 PGSF(10,1,0.1μmol ·L-1)可明显增加OGD/R、氧化应激和去血清处理细胞的存活率(P＜0.01,P＜0.05)；在OGD/R模型中,PGSF(10、1、0.1 μmol·L-1)还可改善神经元形态,减少Caspase-3活性片段的表达(P＜0.01,P＜0.05),并与MAPK通路抑制剂协同降低神经元死亡率(P＜0.01,P＜0.05)；PGSF(10,1μmol· L-1)可增加神经元Bcl-2/Bax表达比值(P＜0.01,P＜0.05),并减少p53的表达(P＜0.05).结论 PGSF对OGD/R、氧化应激及去血清导致的神经元或PC12细胞损伤具有保护作用,在OGD/R模型中,该作用机制与其调节凋亡相关蛋白的表达相关,并可能与其抗氧化应激功能有关.
