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南阳市血清低水平HBSAg携带者在随机人群中的分布状况调查
乙型肝炎在本地区有较高感染率,有一部分为隐性感染[1],血清水平低,不易检测出来,临床采用ELISA法检测HBV血清标志物.在日常工作中发现当HBsAg水平低到一定程度时,不必稀释可以直接使用中和试验确认.设定吸光度(A)值0.05～2.01,且定量检测＜50010u/L为低水平HBsAg.本课题通过对南阳市随机体检人去血清HBsAg在人群中的分布情况.
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乏氧和去血清通过诱导自噬拮抗KAI1诱导凋亡
目的：观察乏氧和缺血是否通过诱导自噬拮抗肿瘤转移抑制基因KAI1/CD82（KAI1）的生长抑制作用。方法应用无KAI1表达的人胰腺癌细胞MiaPaCa2，通过感染带有KAI1目的基因的复制缺陷型腺病毒Ad5-KAI1使细胞表达KAI1蛋白，通过乏氧和去血清培养细胞模拟实体瘤内缺血、缺氧的微环境，根据培养条件不同，将人胰腺癌细胞株MiaPaCa-2分为4组：对照组（正常培养）、乏氧组、去血清组、乏氧去血清组。Western blot检测细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值的改变。3-MA预处理阻断自噬，共聚焦显微镜观察自噬标志颗粒GFP-LC3颗粒。采用Annexin V-FITC/PI实验检测细胞增殖和凋亡的变化。结果 MiaPaCa2细胞不表达KAI1蛋白，感染Ad5-KAI1后表达KAI1蛋白，乏氧和去血清均显著促进LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值的增加和GFP-LC3融合质粒的增加，且均可被3-MA有效阻断。3-MA 预处理后感染Ad5-KAI1，4组细胞（含氧含血清正常培养的细胞、单纯去血清培养的细胞、单纯乏氧培养的细胞、联合去血清和乏氧培养的细胞）的Annexin V表达均显著增长，分别由70%、34%、28%和19%增至86%～90%。提示3-MA预处理可以阻断去血清和乏氧对KAI1引起的Annexin V表达增加的抑制作用。提示乏氧和去血清通过诱导自噬拮抗KAI1诱导的凋亡。结论乏氧和缺血清培养细胞通过诱导自噬拮抗KAI1诱导的凋亡，促进细胞生存。
关键词： 肿瘤转移抑制基因KAI1/CD82(KAI1) 人胰腺癌 乏氧 去血清 自噬 -
乏氧、去血清抑制KAI1的生长抑制功能
目的：观察乏氧和缺血是否影响KAI1的生长抑制作用。方法应用无KAI1表达的人胰腺癌细胞MiaPaCa2，通过感染带有KAI1目的基因的复制缺陷型腺病毒Ad5-KAI1,使细胞表达KAI1蛋白,通过乏氧和去血清培养细胞模拟实体瘤内缺血、缺氧的微环境，根据培养条件不同，将人胰腺癌细胞株MiaPaCa-2分为4组：对照组（正常培养）、乏氧组、去血清组、乏氧去血清组。用CCK8和Annexin V-FITC/ PI实验检测细胞增殖和凋亡的变化。结果乏氧和去血清培养细胞明显拮抗KAI1的增殖抑制和诱导凋亡作用，进而促进细胞的生存。结论乏氧和去血清拮抗KAI1的生长抑制作用。
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蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2对293T细胞凋亡的抑制作用及蛋白Caspae-8的表达
目的 研究蛋白酪氨酸磷酸酶对去血清方法诱导人胚肾293T细胞的凋亡抑制作用及相关蛋白caspase-8的表达.方法 将pIRES-GFP空载体,pIRES-SHP-2通过脂质体方法转染293T细胞,去血清作用后,用噻唑蓝(MTT)法观察细胞存活率,用免疫组织化学方法检测caspase-8表达.结果 去血清培养的293T细胞,随着去血清时间的延长,细胞生存率逐渐降低,而转染SHP-2组的细胞生存率明显高于对照组及空载体组;Caspase-8免疫组化检测结果显示,SHP-2组的Caspase-8阳性表达率明显低于对照组及空载体组.结论 SHP-2可能通过抑制Caspase-8信号传导通路,对细胞的生存起到正向调节作用.
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瓜子金皂苷己神经保护作用的体外研究
目的 观察瓜子金皂苷己(PGSF)对大鼠原代皮层神经细胞和PC12细胞的保护作用及其机制.方法 建立体外氧糖剥夺/复灌(OGD/R)、氧化应激及去血清模型,以MTT法检测细胞存活率,光镜下观察细胞形态,Western blotting法检测蛋白表达.结果 PGSF(10,1,0.1μmol ·L-1)可明显增加OGD/R、氧化应激和去血清处理细胞的存活率(P＜0.01,P＜0.05)；在OGD/R模型中,PGSF(10、1、0.1 μmol·L-1)还可改善神经元形态,减少Caspase-3活性片段的表达(P＜0.01,P＜0.05),并与MAPK通路抑制剂协同降低神经元死亡率(P＜0.01,P＜0.05)；PGSF(10,1μmol· L-1)可增加神经元Bcl-2/Bax表达比值(P＜0.01,P＜0.05),并减少p53的表达(P＜0.05).结论 PGSF对OGD/R、氧化应激及去血清导致的神经元或PC12细胞损伤具有保护作用,在OGD/R模型中,该作用机制与其调节凋亡相关蛋白的表达相关,并可能与其抗氧化应激功能有关.
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左旋黄皮酰胺抑制去血清所致神经细胞凋亡及其相关机制的研究
目的 观察中药成分左旋黄皮酰胺对去血清所致PC12细胞损伤的保护作用及其机制.方法 采用形态学观察及MTT法检测左旋黄皮酰胺对去血清所致PC12细胞存活的影响;采用流式细胞术检测左旋黄皮酰胺对PC12细胞凋亡的影响;采用Western blotting及共聚焦显微镜检测左旋黄皮酰胺对GSK-3β、Bcl-2、Bax表达的影响.结果 左旋黄皮酰胺1,10 μmol/L剂量组可以通过抑制去血清所致PC12细胞的凋亡而增加细胞的存活率,其机制是抑制GSK-3β的表达并增加Bcl-2/Bax的比值.结论 左旋黄皮酰胺可能是通过抑制神经细胞损伤而改善学习记忆障碍.
