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饮水消毒副产物二氯乙腈对HepG2细胞周期的影响
目的 研究p53基因和chk1基因在饮水消毒副产物二氯乙腈(dichloroacetonitrile,DCAN)对HepG2细胞周期阻滞过程中的影响.方法 以二甲基亚砜(DMSO)溶解DCAN,以DMSO处理人肝癌细胞(HepG2细胞)为对照组,分别以低、高浓度(50、400 μmol/L)DCAN染毒HepG2细胞24 h.采用碘化丙啶(PI)标记的流式细胞技术检测细胞周期分布情况,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测p53基因和chkl基因mRNA表达的改变.结果 与对照组比较,400 μmol/L处理组G1期细胞比例明显减少,G2期细胞比例明显增加,差异均有统计学意义(P ＜0.05);400 μmol/L DCAN作用于HepG2细胞后下调了p53的表达,差异有统计学意义(P＜0.05),而对chk1的表达没有影响.结论 高浓度的DCAN能明显延长HepG2细胞的G2期,并可抑制p53的mRNA表达水平,但对chk1的mRNA表达水平无影响.
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二氯乙腈对HepG2细胞凋亡的影响
目的 探讨饮水消毒副产物二氯乙腈(dichloroacetonitrile,DCAN)对HepG2细胞凋亡的影响及相关调控机制.方法 二甲基亚砜(DMSO)溶解DCAN,以DMSO处理人肝癌细胞(HepG2细胞)为对照组,分别以50 μmol/L、100 μmol/L、200μmol/L、400μmol/L DCAN染毒HepG2细胞为处理组,培养24 h后通过AnnexinV/PI流式细胞分析法检测细胞凋亡情况,用荧光测定法观察Caspase 3酶活性,蛋白质印迹法(West-ern blotting)技术检测HepG2细胞pro-caspase 3和P53蛋白的表达情况.结果 与对照组相比,400 μmol/LDCAN处理组可诱导HepG2细胞凋亡(P＜0.05),各处理组细胞内Caspase 3酶活性随着染毒剂量的增加而显著升高(P＜0.05).DCAN作用于HepG2细胞后pro-Caspase 3和P53蛋白含量呈下降趋势,当染毒浓度达到200 μmol/L以上时,pro-Caspase 3和P53蛋白表达明显低于对照组(P＜0.05).结论 高浓度的DCAN可通过激活Caspase 3诱导HepG2细胞凋亡.
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二氯乙腈对LO2细胞周期的影响及其相关调控机制的研究
目的 探讨二氯乙腈(dichloroacetonitrile,DCAN)对细胞周期的影响及其相关的调控机制.方法 用二甲基亚砜(DMSO)溶解DCAN,以DMSO处理人胚肝细胞(LO2细胞)为对照组,采用Cell Counting Kit-8试剂盒检测0～5 000 μmol/LDCAN对细胞存活率的影响,分别用10、50、100、500.μmol/L DCAN处理LO2细胞为染毒组,以碘化丙啶(PI)标记的流式细胞技术检测细胞周期分布情况,以实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测chkl基因、chk2基因、p53基因和bcl-2基因mRNA表达的改变.结果 CCK-8结果显示:随DCAN浓度增加LO2细胞存活率降低,DCAN引起LO2细胞的IC50为583.25 μmol/L;与对照组比较,500μmoI/LDCAN处理组G1期细胞比例明显减少,G2期细胞比例明显增加,差异均有统计学意义(P＜0.05);500 μmoI/L DCAN作用于LO2细胞后上调了p53的表达,下调了bcl-2和chk2的表达,差异有统计学意义(P＜0.05),而对chkl的表达没有影响.结论 DCAN可能通过上调p53和下调bcl-2的表达使细胞阻滞于G2期.
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二氯乙腈诱导HepG2细胞凋亡及机制研究
目的 研究二氯乙腈(DCAN)对人肝肿瘤HepG2细胞凋亡的作用及其机制. 方法 用二甲基亚砜(DMSO)溶解DCAN,以DMSO处理的HepG2细胞作为对照组,50和800 μmol/L的DCAN处理的HepG2细胞作为处理组,采用CellCounting Kit-8(CCK-8)试剂盒检测细胞活力,流式细胞术(FCM)检测细胞周期分布情况,Annexin V-FITC/PI双标记法测定细胞凋亡率;荧光测定法检测HepG2细胞内天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)活性. 结果 DCAN处理浓度和处理时间存在交互效应(P＜0.001),与对照组比较,DCAN可明显抑制HepG2增殖,呈现时间和剂量效应(P＜0.05);与对照组比较,800 μmol/L DCAN处理组G0/G1期比例明显减少,G2/M期细胞比例明显增加;DCAN诱导的HepG2细胞凋亡随着浓度的增加而增加,呈剂量-效应关系,回归方程为(y)=0.031x+5[决定系数(R2)=0.915,F=64.782,P＜0.001];DCAN诱导的HepG2细胞内caspase-3酶活性随着处理浓度的增加而增加,呈剂量-效应关系,回归方程为(y)=0.001 6x+1(R2=1.000,F=21 266.064,P＜0.001). 结论 DCAN可抑制HepG2细胞增殖并诱导细胞凋亡,其机制可能与G2/M期细胞阻滞、抑制RNA和蛋白质的合成并激活细胞内caspase-3凋亡途径有关.
关键词： 二氯乙腈 人肝肿瘤HepG2细胞 Caspase-3 细胞凋亡 -
饮水消毒副产物DCN对HepG2细胞的脂质过氧化作用
目的 研究饮水含氮消毒副产物二氯乙腈对体外培养的人肝肿瘤HepG2细胞的脂质过氧化作用.方法 二甲基亚砜(DMSO)溶解DCN,以DMSO处理组为溶剂对照组,设0.8、4、20、100 μmol/L 4个暴露浓度,将HepG2细胞分别染毒4和24 h后,检测HepG2细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量.结果 在细胞染毒4h的条件下,与溶剂对照组相比,DCN浓度达到100 μmol/L时,HepG2细胞内SOD含量明显下降(P＜0.01),但GSH和MDA含量没有明显的变化;在染毒24 h条件下,与溶剂对照组相比,各染毒组的DCN使HepG2细胞内GSH含量明显下降(P＜0.05),100 μmol/L的DCN可引起HepG2细胞内MDA含量上升(P＜0.05)和SOD含量下降(P＜0.01).相关分析表明,当染毒时间延长至24 h,MDA含量的变化与SOD含量的变化呈负相关(r=-0.64,P＜0.05).结论 DCN可导致HepG2细胞氧化损伤,使其脂质过氧化反应增强、抗氧化作用降低.
关键词： 二氯乙腈 脂质过氧化 人肝肿瘤HepG2细胞 -
饮水消毒副产物二氯乙腈对HepG2细胞氧化损伤的影响
目的 研究饮水含氮消毒副产物二氯乙腈(DCN)对体外培养的人肝癌HepG2细胞的氧化损伤和细胞周期的影响.方法 二甲基亚砜(DMSO)溶解DCN,以DMSO处理为溶剂对照组,分别以0.8、4、20、100μmol/L DCN染毒HepG2细胞为处理组.应用Cell Counting Kit-8试剂盒检测细胞活力,相关试剂盒检测HepG2细胞内丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和还原型谷胱甘肽(GSH)的含量,并通过碘化丙啶(PI)标记的流式细胞技术检测细胞周期.结果 DCN引起HepG2细胞的IC50为230.53 μmol/L;在染毒24 h条件下,与溶剂对照相比,100 μmol/L的DCN可引起HepG2细胞内MDA含量上升(P＜0.05)和SOD含量下降(P＜0.01),各染毒组的DCN使HepG2细胞内GSH含量明显下降(P＜0.05);在细胞活力75％以上的染毒剂量下对细胞周期无影响.结论 低剂量的DCN可诱导HepG2细胞氧化损伤,使其脂质过氧化反应增强、抗氧化作用降低,但对细胞周期无影响.
关键词： 二氯乙腈 氧化损伤 人肝癌HepG2细胞 细胞周期
