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解毒化瘀药含药血清对白血病K562/A02细胞耐药逆转作用的研究
目的 研究解毒化瘀方对白血病K562/A02细胞的耐药逆转作用.方法 应用中药血清药理学方法制备解毒化瘀方的兔血清,以MTT法检测经含药血清处理后K562/A02细胞对化疗药物的敏感性:免疫组化法检测含药血清对K562/A02耐药细胞内柔红霉素(DNR)潴留的影响.结果 解毒化瘀方含药血清中、高剂量组可增加化疗药物对K562,A02细胞的细胞毒作用,明显提高K562/A02耐药细胞内DNR的浓度(P＜0.05).结论 解毒化瘀方含药血清能逆转K562/A02细胞的耐药性,并呈剂量依赖性.
关键词： 白血病 中医药疗法 多药耐药 K562/A02细胞 解毒化瘀 -
解毒化瘀方对白血病K562/A02细胞耐药逆转作用及NF-κB信号表达的影响
目的:探讨解毒化瘀方中药血清对白血病K562/A02耐药细胞耐药逆转作用及NF-κB信号表达的影响.方法:采用MTT法检测解毒化瘀方中药血清对K562/A02细胞毒作用,流式细胞仪检测解毒化瘀方中药血清对K562/A02细胞内化疗药物浓度的影响,用Western blot法检测解毒化瘀方中药血清对NF-κB/P65、NF-κB/P50、IκBα的表达的影响.结果:解毒化瘀方中药血清对K562/A02细胞生长抑制作用呈浓度依赖性,能够增加K562/A02细胞内化疗药物的浓度,下调K562/A02细胞NF-κB/P65、NF-κB/P50、IκBα表达,从而降低NF-κB信号.结论:解毒化瘀方中药血清能够逆转K562/A02细胞耐药,其耐药逆转机制可能与下调K562/A02细胞NF-κB信号表达有关.
关键词： 白血病 多药耐药 K562/A02细胞 NF-κB信号 解毒化瘀方 -
复方浙贝药物血清影响K562/A02细胞积聚外排功能和细胞凋亡研究
目的 观察复方浙贝药物血清对K562/A02细胞积聚外排功能和细胞凋亡的影响.方法 Wistar 雄性大鼠40只,分为空白对照组(血清组)、含阿霉素(ADR)血清组及含复方浙贝颗粒高[8 g/(kg·d)]、中[4 g/(kg·d)]、低[2 g/(kg·d)]剂量血清组.用流式细胞仪定量检测不同时间药物血清干预后的K562/A02细胞内ADR和罗丹明123(Rh123)浓度;Annexin-V/PI双染法检测K562/A02细胞早期凋亡率.结果 复方浙贝药物血清不同剂量组均能减缓K562/A02细胞内ADR和Rh123荧光下降速度,其中高剂量组作用明显,中剂量组次之,低剂量组较弱;K562/A02细胞早期凋亡率依次为:中剂量组24.60%、高剂量组11.21%、低剂量组5.71%、空白组1.40%.结论 复方浙贝颗粒体外能够抑制K562/A02细胞对药物的外排功能,并能够诱导细胞凋亡.
关键词： 复方浙贝颗粒 多药耐药 K562/A02细胞 凋亡 -
解毒化瘀方含药血清对K562/A02细胞凋亡抑制蛋白及核周因子κB表达的影响
目的 探讨解毒化瘀方含药血清对白血病K562/A02细胞凋亡抑制蛋白survivin基因和核周因子κB(NF-κB)信号基因表达的影响.方法 将K562/A02细胞分为6个组,分别加入等体积牛血清,兔血清,高、中、低剂量中药血清和干扰素,并设K562敏感细胞株为对照.采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测解毒化瘀方含药血清处理后K562/A02细胞survivin的表达;Westem blot法检测NF-κB/P65、NF-κB/P50、IκBα的表达.结果 survivin耐药基因在K562/A02细胞中高表达,加用解毒化瘀含药血清处理后,高、中剂量中药血清组和干扰素对照组能够survivin的表达明显降低.NF-κB在K562/A02耐药细胞亦呈高表达,加用解毒化瘀含药血清处理后,P65、P50和IκBa的表达均有不同程度下降,以高、中剂量组明显,且高剂量组P65、P50表达下降优于干扰素对照组(P<0.05),IκBa下降与干扰素对照组相当(P>0.05).结论 解毒化瘀方能够降低K562/A02细胞NF-κB信号基因的表达,影响NF-κB-survivin途径逆转耐药.
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环孢菌素A联合汉防己甲素逆转人白血病耐药细胞株K562/A02细胞多药耐药的分子生物学机制
目的 多药耐药(muhidrug resistance,MDR)是导致肿瘤化疗失败的主要原因,本研究探讨环孢菌素A(cyclosporine A,CsA)及汉防己甲素(tetrandrine,Tet)联合应用对人白血病耐药细胞株K562/A02细胞MDR的逆转作用及其分子生物学机制.方法 K562/A02细胞经CsA和Tet作用后,以流式细胞仪(FCM)检测细胞内柔红霉素(daunorubicin,DNR)浓度和P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gP)的表达,逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测多药耐药基因(muhidrug resistancegene,mdr1)mRNA表达水平.结果 K562/A02细胞内DNR浓度为K562的19%,CsA(1 ms/L)及Tet(0.1mg/L)单独及联合作用K562/A02细胞48 h后细胞内DNR的浓度分别为K562的60%、65%、98%.K562和K562/A02细胞P-gP荧光强度分别为0.18%和96.51%,K562/A02细胞经CsA(1 mg/L)和Tet(0.1 mg/L)单独及联合处理后细胞P-gp荧光强度分别为75.32%,76.86%和48.61%.K562/A02细胞经过两药单独作用后耐药株mdr1-mRNA下调微弱,联合用药下调效果明显.结论 环孢菌素A和汉防己甲素均可逆转白血病细胞的耐药,且两药联合作用逆转效果增强,具有协同作用.
关键词： 环孢菌素A 汉防己甲素 K562/A02细胞 多药耐药 P-糖蛋白 -
藤黄酸联合柔红霉素对白血病耐药细胞株K562/A02孕烷X受体表达的影响
目的:研究恶性血液病细胞株孕烷X受体(Pregnane X receptor)的表达水平;探讨藤黄酸(Gambogic acid,GA)对K562/A02耐药细胞株的耐药逆转作用及其机制.方法:应用Real-time PCR法检测多个恶性血液病细胞株中PXR的表达;采用MTT法检测K562/A02细胞株分别与GA,DNR,GA+ DNR孵育24、36、48 h后的细胞增殖抑制率;Real-time PCR法检测各实验组PXR表达;Western blot法检测各实验组细胞PXR蛋白的表达水平.结果:K562/A02细胞株的PXR基因表达水平高于本研究实验其他所检测的恶性血液病细胞;;藤黄酸作用后,K562/A02细胞对柔红霉素的耐药性明显降低,却细胞抑制率增加;藤黄酸作用后的K562/A02细胞的PXR基因和蛋白表达水平均较对照纽下调,而在柔红霉素组则无明显变化,提示柔红霉素并没有下调PXR的作用.PXR的下调亦不是细胞被药物杀伤后的假象,而藤黄酸可以下调PXR的基因和蛋白表达.结论:PXR可在多种血液系统恶性肿瘤细胞株中表达,并在K562/A02细胞明显较其他实验细胞株中表达高.低剂量GA可以提高细胞的生长抑制率,增强化疗的效果,其机制可能与下调PXR表达有关.
关键词： 孕烷X受体 藤黄酸 柔红霉素 多药耐药 K562/A02细胞 -
二氢杨梅素对K562/A02细胞阿霉素耐药性的逆转作用
目的:探讨二氢杨梅素(dihydromyricetin,DMY)对人慢性粒细胞白血病耐药细胞株K562/A02细胞对阿霉素(adriamycia,ADM)耐药的逆转作用及可能机制.方法:用DMY(5、10、20、40、60、80和100 mg/L)和ADM((0.05-100 mg/L)处理K562和K562/A02细胞48 h,采用MTT法检测细胞活力及DMY对K562/A02细胞ADM耐药的逆转效应,流式细胞术检测细胞内阿霉素的相对浓度,Western blot检测耐药相关基因的p-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、多药耐药相关蛋白(multidrug resistance related protein 1,MRP1)、谷胱甘肽转移酶π(glutathione transferaseπ,GSTπ)和BCL-2蛋白表达.结果:DMY能抑制K562和K562/A02细胞的增殖且呈剂量依赖效应(r1 =0.37,r2 =0.38),IC50分别为71.23±6.51和72.88±5.49 mg/L.5、10和20 mg/L为DMY的低细胞毒性剂量.DMY(5、10和20 mg/L)增敏K562细胞和K562/A02细胞对ADM耐药性且呈剂量依赖效应(r1=-0.62,r2=-0.71),耐药逆转倍数介于1.38-28.59之间.DMY(5,10和20 mg/L)增加K562/A02细胞内ADM的浓度也呈剂量依赖效应(r=0.34).与对照组比较,DMY(5,10和20 mg/L)均显著降低了K562/A02细胞中PgP、MRP1、GSTπ和BCL-2蛋白表达,呈剂量依赖性(r1=-0.41,r2=-0.37,r3=-0.58,r4=-0.46).与ADM组比较,DMY(5,10和20 mg/L)+ADM组P-gp、MRP1、GSTπ和BCL-2蛋白表达均显著降低(r1=-0.55,r2=-0.41,r3=-0.38,r4=-0.44).结论:DMY可以逆转K562/A02细胞对ADM的耐药性,其作用机制可能与下调耐药相关基因P-gp、MRPI、GSTπ和BCL-2的表达有关.
关键词： 二氢杨梅素 K562/A02细胞 阿霉素耐药 耐药相关基因 -
某些中药对K562/A02细胞Mdr1基因及其表达产物的影响
本研究探讨中药复方当归注射液、马钱子碱、麻黄碱、士的宁对人红白血病多药耐药细胞株K562/A02Mdrl基因及其表达产物P-gp的影响.采用噻唑蓝(MTT)法、台盼蓝拒染法检测上述药物的细胞毒作用;采用半定量RT-PCR和Western blot分别检测上述4种中药在非细胞毒浓度(IC10)作用下对K562/A02细胞Mdr1基因及P-gp表达的影响.结果表明:复方当归注射液、马钱子碱、麻黄碱作用后,K562/A02细胞中Mdr1基因及P-gp表达降低(p＜0.01),其中马钱子碱组的作用为显著;而士的宁作用后K562/A02细胞Mdr1基因及P-gp表达无明显变化.结论:复方当归注射液、马钱子碱、麻黄碱能部分逆转K562/A02细胞的耐药性,其作用机制主要与下调K562/A02细胞Mdr1 mRNA的表达而导致细胞膜上P-gp的表达量减少有关.
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复方浙贝颗粒联合阿霉素对K562/A02移植瘤细胞膜转运蛋白表达的影响
为了观察复方浙贝颗粒(CZBG)联合阿霉素对K562/A02移植瘤细胞膜耐药相关蛋白P-gp、MRP、LRP表达的影响,将K562/A02细胞接种于BALB/c-nu裸小鼠腋前皮下以构建MDR移植瘤动物模型,给予复方浙贝颗粒灌胃联合阿霉素腹腔注射,实验结束后处死小鼠,剥离肿瘤,将瘤块组织制成切片,通过免疫组织化学结合Image ProPlus 6.0免疫组织化学彩色图象分析,观察复方浙贝颗粒联合阿霉素对K562/A02移植瘤组织细胞膜P-gp、MRP、LRP表达的影响.结果表明:与阿霉素组相比,CZBG各剂量组移植瘤细胞膜所表达P-gP、MRP的积分光密度值(IOD)明显降低(p＜0.05),而未见明显LRP表达.结论:CZBG能协同阿霉素抑制K562/A02移植瘤组织细胞膜P-gp、MRP表达.
关键词： 复方浙贝颗粒 多药耐药 K562/A02细胞 移植瘤 -
汉防己甲素联合柔红霉素对K562/A02细胞株P21蛋白和P糖蛋白表达的影响
本研究旨在探讨汉防己甲素(TET)对人慢性髓系白血痛(CML)急性红白血病细胞株K562/A02多药耐药的逆转作用,及其逆转耐药与细胞周期依赖性激酶抑制因子(p21)、P糖蛋白(P-gP)及其基因的关系,为TET的临床应用提供新的理论基础.K562/A02细胞实验分组为:①单用柔红霉素(DNR)对照组;②DNR+TET0.5 mg/L组;③DNR+TET1.0 mg/L组;④DNR+TET 2.0 mg/L组.采用Western blot法检测实验各组K562/A02细胞P21的表达.采用流式细胞仪(FCM)检测实验各组细胞P-gP的表达,采用半定量PCR(RT-PCR)测定细胞MDRI基因mRNA表达水平.结果表明:K562/A02细胞中P21蛋白的表达随着TET浓度的增加而增强,P-gP蛋白的表达随着TET浓度的增加而减低.K562细胞中mdr1基因几乎无表达,K562/A02细胞中mdr1基因高表达,随着TET浓度的增加K562/A02细胞mdr1基因表达不断降低.结论:TET强对K562/A02耐药具有逆转作用且呈浓度依赖性,其逆转耐药可能与其上调P21蛋白的表达、下调mdr1及P-gP的表达有关.
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Stathmin和CrkL蛋白在耐阿霉素的K562白血病细胞中表达上调
本研究应用蛋白质组学方法比较白血病K562细胞及其耐阿霉素的K562/A02细胞中蛋白质表达谱的差异,筛选新的耐药相关蛋白.利用荧光差异双向电泳(2D-DIGE)技术分离K562细胞及K562/A02细胞的总蛋白,用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱( MALDI-TOF/MS)对差异表达蛋白质点进行鉴定,搜索蛋白质数据库,获得差异蛋白质的信息,并用蛋白免疫印迹法和实时荧光定量PCR法在蛋白质水平和mRNA水平对差异蛋白质进行验证.结果显示,经过DIGE技术和质谱分析,鉴定出8个蛋白质在耐阿霉素的K562细胞中表达有差异,其中2个表达下调,6个表达上调,它们分别参与细胞能量代谢、细胞增殖、细胞凋亡、细胞信号转导和基因转录等.在表达上调的蛋白中挑选Stathmin和CrkL蛋白,在K562及其耐药细胞株中进行了蛋白免疫印迹实验,结果与双向电泳结果一致;实时荧光定量PCR显示,CrkL在mRNA水平变化与在蛋白质水平变化一致,而Stathmin在mRNA水平变化与蛋白质水平变化不完全一致.结论:白血病K562细胞及其耐阿霉素K562/A02细胞蛋白质表达谱有差异,Stathmin和CrkL蛋白可能与耐药有关,值得进一步探讨.
关键词： Stathmin蛋白 CrkL蛋白 阿霉素 多药耐药 K562细胞 K562/A02细胞 -
去铁胺对白血病细胞K562/A02的影响及机制研究
本研究旨在探讨铁螯合剂去铁胺对人白血病耐阿霉素细胞K562/A02的影响及其作用机制.采用四甲基偶氮唑蓝法(NM)检测不同浓度去铁胺作用48小时对K562/A02细胞增殖的抑制效应;流式细胞术检测去铁胺25、50、100和200μmol/L作用K562/A02细胞48小时后细胞的凋亡率;半定量RT-PCR检测各组细胞凋亡基因BAX、BCL-2以及多药耐药基因1(MDR1)mRNA表达变化;Western blot检测各组细胞P-糖蛋白(P-gp)表达变化.结果显示,随着去铁胺药物浓度的增加,细胞活力逐渐下降,凋亡率明显增加,呈剂量依赖性;随着去铁胺浓度增加,BAX表达水平逐渐升高,但MDR1 mRNA与P-gp的表达受到显著抑制.结论:去铁胺可以通过蟹合细胞内铁,影响细胞DNA的合成;同时去铁胺可抑制阿霉素诱导的MDR1、P-gp表达,增加白血病细胞对化疗药物的敏感性,进而诱导凋亡.
关键词： 去铁胺 白血病 K562/A02细胞 细胞凋亡 多药耐药 -
5溴汉防己甲素逆转多药耐药的体内体外研究
本研究旨在探讨5-溴汉防己甲素(BrTet)和汉防已甲素(Tet)对K562/A02细胞多药耐药性的逆转作用.采用MTT法检测阿霉素(ADM)联合应用BrTet、Tet,对K562/A02细胞和K562细胞增殖的影响;采用流式细胞术(FCM)检测细胞内ADM浓度和P糖蛋白(P-gp)的表达;采用RT-PCR测定细胞mdr1基因mRNA表达水平.建立裸鼠皮下移植瘤模型,比较BrTet、Tet在体内的逆转耐药作用.结果发现,BrTet在0.25、0.5以及1μmoL/L浓度条件下时K562/A02细胞多药耐药性的逆转作用呈剂量依赖性.流式细胞术检测提示,BrTet显著增加K562/A02细胞内ADM浓度,并呈剂量依赖性,同时抑制P-gp的表达,下调mdr1 mRNA的表达.在荷瘤鼠模型中,BrTet明显增加ADM时K562/A02移植瘤的抗肿瘤作用,从单用ADM的5.8%上升至26.1%,而在K562移植瘤中没有显著差异.结论:BrTet在体内体外试验中均显示出显著的逆转MDR作用,其活性可能与抑制P-gp的过度表达和增加抗肿瘤药物的积聚有关.
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靶向mdr-1基因shRNA真核表达载体的构建与鉴定
本研究构建并鉴定靶向mdr-1基因的短发夹RNA(shRNA)真核表达载体.根据Genbank数据库提供的mRNA序列,选择设计3个能转录短发夹RNA(shRNA)的DNA序列,体外分别合成3对互补并编码mRNA基因的特异性shRNA序列的寡核苷酸,克隆到经BamHI和HindⅢ双酶切线性化的pGCsilencer人U6启动子质粒载体中;为了确定利用酶切和测序鉴定所构建的重组载体是否正确,采用脂质体转染的方法将构建好的3个重组载体(pGY1-1,pGY1-2,pGY1-3)导入慢性髓系白血病耐药细胞株K562/A02,采用实时PCR方法检测转染细胞的mdr-1基因表达,Western-blot检测P-gp表达量的变化.结果表明:应用PCR电泳图谱和测序证实了克隆RNAi打靶序列完全正确,而且该载体又同时表达GFP标记基因,用于测定转染效率.分别转染pGY1-1,pGY1-2,pGY1-3后K562/A02细胞的mdr-1基因表达和P-gp表达水平下降,证明shRNA可以特异性沉默mdr-1基因.结论:靶向mdr-1基因shRNA真核表达载体构建成功,为进一步研究mdr-1基因在K562/A02细胞中的作用奠定了实验基础.
关键词： mdr-1基因 短发夹RNA K562/A02细胞 载体构建 -
高压氧联合阿霉素对白血病K562/A02细胞凋亡的影响
本研究探讨0.2 MPa高压氧(HBO)联合阿霉素对白血病多药耐药细胞K562/A02细胞凋亡的影响.利用流式细胞术法和透射电子显微镜检测细胞凋亡和caspase-3表达,用定量qReal-time PCR法检测HIF-1α、BCL-2和BAX mRNA表达水平,运用caspase-8试剂盒检测caspase-8的活性,Western blot法检测P-gP活性.结果表明:0.2MPa HBO联合阿霉素组细胞凋亡率高于ADM组[(47.36±3.87)%vs(28.51±1.09)%],差异有统计学意义(p＜0.05).0.2 MPa HBO联合阿霉素组细胞HIF-1α mRNA、P-gP及BCL-2的蛋白水平低于ADM组,差异有统计学意义(p＜0.05).0.2 MPa HBO联合阿霉素组细胞的BAX、caspase-3及caspase-8蛋白活性均高于ADM 组,差异有统计学意义(p＜0.05).结论:0.2 MPa HBO联合阿霉素可逆转耐药细胞株K562/A02对阿霉素的耐药,提高细胞凋亡率,其机制可能与HIF-1α下调P-gP和BCL-2的表达以及提高caspase活性有关.
关键词： 高压氧 阿霉素 K562/A02细胞 多药耐药 细胞凋亡相关蛋白 -
小檗胺逆转K562/A02细胞耐药性及其机制
为了探讨钙调素拮抗剂小檗胺(berbamine,BBM)逆转多药耐药的可能性及其机制,采用人红白血病细胞K562及其阿霉素(ADR)诱导的耐药细胞K562/A02与不同浓度ADR和BBM共培养后,经MTT比色法计算半数抑制浓度(IC50)、耐药倍数和增敏倍数;用流式细胞术检测细胞内ADR相对含量和P-gp表达水平;用半定量RT-PCR检测mdrl mRNA和抗凋亡基因survivin mRNA表达.结果显示,ADR对K562和K562/A02的IC50分别为1.16±0.09μmol/L和37.47±1.76μmol/L,K562/A02对ADR的耐药倍数是K562的32.30倍.5 μmol/L,10μmol/L和20 μmol/LBBM增加K562/A02细胞对ADR的敏感性,并呈剂量依赖性,增敏倍数分别达2.01,9.68和41.18倍(P值均＜0.01).5μmol/L或10μmol/L BBM作用2小时,使K562/A02细胞内ADR相对含量增加到1.41和1.52倍(P＜0.01);作用72小时使K562/A02细胞P-gp表达分别下降4.12%(P＜0 05)和27.09%(P＜0.01),且下调mdr1 mRNA和survivin mRNA表达.结论:BBM提高耐药细胞K562/A02胞内的ADR浓度,下调mdr1 mRNA、P-gp及survivin mRNA的表达,使其对ADR的敏感性显著增高,从而逆转耐药性.
关键词： 小檗胺 K562/A02细胞 多药耐药 阿霉素 -
环孢菌素A、雷洛昔芬及其联合应用逆转K562/A02细胞多药耐药的研究
本研究探讨环孢菌素A(CsA)、雌激素受体抑制剂雷洛昔芬及其联合应用对K562/A02细胞多药耐药的逆转作用.采用甲基四唑蓝法(MTT)测定柔红霉素(DNR)的半数抑制量,RT-PCR法检测mdr1基因mRNA表达水平,FCM检测P-gp的表达和细胞内DNR浓度.结果表明:DNR对K562/A02和K562细胞的IC50分别为23.51和0.29mg/L,雷洛昔芬(2.5 mg/L)及CsA(1 mg/L)单用和两药联合处理K562/A02细胞时,DNR的IC50值分别为5.98、8.15和3.68 mg/L,两药对DNR作用K562细胞的IC50没有影响.CsA及雷洛昔芬单独作用后耐药株mdr1mRNA下调微弱,联合用药下调效果明显.CsA及雷洛昔芬均可降低P-gp蛋白的表达,且具有协同作用.同时还观察到逆转剂雷洛昔芬和CsA作用后细胞内柔红霉素浓度增加,两药联合作用时效果增强.结论:CsA及雷洛昔芬均可逆转耐药,且联合作用效果增强.
关键词： 环孢菌素A 雌激素受体抑制剂 雷洛昔芬 K562/A02细胞 多药耐药 -
活化Chk1引起的G2/M期阻滞在调节K562/A02细胞耐药中的机制探讨
本研究探讨活化的Chk1对白血病细胞周期及凋亡的影响,探究Chk1调控肿瘤细胞耐药的机制.以慢性粒细胞白血病细胞系K562及其耐药细胞系K562/A02(耐阿霉素)为研究对象,与阿霉素共孵育后,用流式细胞术检测细胞周期分布,RT-PCR检测Chk1mRNA表达水平,Western blot检测转染前后Chk1磷酸化水平;靶向Chk1shRNA抑制细胞内Chk1的表达后,用流式细胞术检测阿霉素作用后细胞的凋亡情况.结果表明:阿霉素致K562/A02细胞阻滞在G2/M期的细胞百分率为(54.12±0.57)%,显著高于K562细胞(36.99±1.28)%; Chk1mRNA表达水平在K562与K562/A02细胞间无显著差异; Chk1磷酸化水平在K562/A02细胞为0.79 ± 0.56,在K562细胞为0.27 ± 1.47,其差异有统计学意义.转染Chk1shRNA后,两株细胞的Chk1磷酸化水平显著下降.转染组K562、K562/A02细胞凋亡率分别是空载体转染组的1.30倍和3.84倍.结论: Chk1的活化水平调控着K562/A02细胞对阿霉素的敏感性.
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多药耐药K562/A02和敏感K562细胞来源的树突状细胞介导抗白血病效应对比研究
本研究探讨多药耐药(MDR)白血病K562/A02细胞和敏感K562细胞诱导树突状细胞(DC)分化及介导的抗白血病效应.采用慢性粒细胞白血病(CML)P-170糖蛋白(P-gp)高表达的MDR K562/A02细胞、敏感K562细胞在含细胞因子GM-CSF(1 000 U/ml)、IL-4(500U/ml)和TNF-α(100ng/ml)的RPMI1640完全培养液中诱导分化成DC,以光镜观察细胞形态、流式细胞术检测细胞表型,异基因混合淋巴细胞反应(allo-MLR)检测T细胞增殖活性,MTT法测定细胞毒作用.结果表明:培养14天的K562/A02细胞和K562细胞均出现典型的DC形态特征,表达DC的相关分化抗原及共刺激分子CD1a、CD83、HLA-DR、CD80、CD86.allo-MLR检测中,K562/A02-DC较K562-DC具有更强的刺激异基因T细胞增殖能力(P＜0.05).两种DC激活的CTL分别对K562/A02和K562细胞较HL-60细胞具有显著的杀伤活性(P＜0.01);更重要的是,K562/A02-DC较K562-DC激活的CTL对P-gp高表达的MDR K562/A02细胞、HL-60/VCR细胞具有更强的细胞毒作用,杀伤活性分别为(40.7±1.3)%、(28.4±0.9)%(P＜0.01)和(24.9±1.1)%、(8.2±0.7)%(P＜0.01).结论:P-gp高表达的MDR白血病细胞K562/A02和敏感K562细胞都可在GM-CSF、IL-4和TNF-α作用下诱导分化为成熟DC,均可活化CTL产生特异的抗白血病效应;尤其K562/A02细胞来源的DC可介导针对P-gp高表达的多药耐药白血病的特异细胞毒作用.
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大蒜素联合红霉素逆转K562/A02细胞多药耐药机理的研究
本研究比较大蒜素、红霉素单用及两药联用逆转K562/A02细胞多药耐药的效果并探讨相关机制,为临床采用低剂量药物联合逆转多药耐药提供实验依据.采用MTT法比较非细胞毒剂量大蒜素、红霉素单用及两药联用对K562/A02细胞多药耐药的逆转效果差异及毒性叠加情况,RT-PCR检测K562/A02细胞mdr1基因表达情况,免疫组织化学法检测P-gp表达情况,流式细胞仪检测细胞内阿霉素平均荧光强度.结果表明:大蒜素1、4、8 mg/L对K562/A02细胞的逆转倍数分别为1.80、2.26、2.82,呈浓度依赖性.红霉素60 mg/L的逆转倍数为2.20,大蒜素与红霉素联用的逆转倍数为4.94,无毒性叠加作用.大蒜紊与红霉素单独作用均可下调耐药株mdr1、P-gp的表达,增加胞内阿霉素浓度,而两药联合作用时上述作用明显增强.结论非细胞毒剂量的大蒜素和红霉素联合应用逆转K562/A02细胞多药耐药效果明显强于单用,且无毒性叠加作用.联合用药在下调mdr1/P-gp表达、增加细胞内化疗药物浓度方面具有协同作用.
关键词： 大蒜素 红霉素 K562/A02细胞 P-gp MDR
