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  • 显齿蛇葡萄叶有效成分的提取工艺研究

    作者:汲军;王丹丹;赵昱伟

    显齿蛇葡萄为葡萄科蛇葡萄属的一种野生木质落叶藤本植物,又名白茶、藤茶、龙须茶、甘露茶等。2013年12月24日国家卫生计生委发布了《关于批准显齿蛇葡萄叶等3种新食品原料的公告》,确定了显齿蛇葡萄叶可以作为新资源食品来使用。显齿蛇葡萄叶中黄酮化合物含量高达43.4~45.5%,富含二氢杨梅素、槲皮素、显齿蛇葡萄素、山奈酚等成分。由于人体不能直接合成黄酮化合物,只能从食品中间接获得,因此研究植物中黄酮化合物的提取方法有重大意义。本试验采取超声波提取法,对显齿蛇葡萄黄酮化合物的提取工艺条件进行筛选,以期获得显齿蛇葡萄黄酮化合物超声提取的优化工艺条件,为显齿蛇葡萄食用及药用资源的合理开发提供一定的依据。

  • 高效液相色谱法同时测定市售醒酒护肝产品中8种化合物

    作者:邹海民;周琛;孙成均;杨晓松;文君;李永新;曾红燕

    目的 建立同时分析醒酒护肝产品中儿茶素、表儿茶素、表没食子儿茶素、表儿茶素没食子酸酯、表没食子儿荼素没食子酸酯、二氢杨梅素、甘草酸和甘草次酸等8种化合物的高效液相色谱法,并与实验室已建立的毛细管电泳法进行方法学比较.方法 样品经甲醇-水(4∶1,V/V)超声提取30 min,10 000 r/min离心10 min,取上清液过滤膜后液相色谱进样,采用C18柱(5 μm×250 mm×4.6 mm)进行梯度洗脱,流速为0.8 mL/min,色谱柱温度为30℃,采用可变波长检测器在210 nm处对儿茶素类及二氢杨梅素进行检测,250 nm处对甘草酸及甘草次酸进行检测.结果 在优化的条件下,8种组分在各自的线性范围内相关系数(r)≥0.9996,检出限和定量限分别为0.07 ~ 1.25 μg/g(S/N=3)和0.22~4.18 μg/g(S/N=10),日内精密度和日间精密度分别为0.26%~ 1.95%和1.17% ~3.89%,加标回收率为86.15%~ 98.61%.结论 该高效液相色谱法灵敏度高、重复性好,可用于醒酒护肝产品的质量控制.

  • 二氢杨梅素脂质体的处方优化及性质考察

    作者:齐娜;黄凤香;廖迎;何华娟;顾生玖;刘广

    目的:优化二氢杨梅素脂质体的处方及工艺,并考察其性质。方法:采用薄膜-超声法制备的二氢杨梅素脂质体,以包封率为指标,采用单因素法考察处方及工艺,在此基础上采用正交试验对二氢杨梅素脂质体的处方工艺进行筛选与优化;采用透射电镜观察其形态,采用动态透析法考察其体外释放的特性,并进行初步稳定性研究。结果:二氢杨梅素脂质体佳处方和工艺条件为:磷脂与胆固醇的摩尔比为1:1,二氢杨梅素加入量4.0 mg,PBS缓冲液pH为5.0,超声时间3 min。优化后脂质体的包封率为58.1%,电镜下呈球形或近球形小囊泡状,48 h体外累计释放率达到76.29%,4℃下避光放置30天药物含量为加入量的96.57%。结论:二氢杨梅素脂质体处方及制备工艺简单且重复性好,制剂稳定性良好。

  • 栽培藤茶中功能性成分动态变化

    作者:玉秋萍;何磊磊;王家胜;张妮;孔琪;余正文

    目的:考察不同采摘时期的两年生栽培藤茶中几种功能性成分多糖、总黄酮、二氢杨梅素和杨梅素的含量动态变化.方法:以蒸馏水为溶剂恒温(90℃)回流提取栽培藤茶中的功能性成分;以苯酚-硫酸比色法、三氯化铝比色法分别在紫外-可见分光光度仪490,318 nm下测定不同采摘时期的两年生栽培藤茶中多糖、总黄酮的含量;采用Dikma ODS C18色谱柱,以甲醇/乙腈(5∶11)-0.1%磷酸水溶液(80∶20)为流动相,流速1 mL· min-1,在HPLC色谱仪紫外检测波长为292,370 nm处分别对二氢杨梅素和杨梅素进行含量测定,柱温为40℃.结果:不同采摘时期的两年生栽培藤茶中多糖、总黄酮、二氢杨梅素和杨梅素的含量差别比较明显,其中多糖以8,9月份含量高,分别为2.46%和2.41%;总黄酮、二氢杨梅素和杨梅素的含量均是4月份达到高,分别为8.74%,4.69%,0.18%.结论:本实验所建立的测定不同采摘时期栽培藤茶中4种功能性成分含量变化的分析方法可行,结果可靠,能明确栽培藤茶中这4种功能性成分含量达到高的佳采收时期.

  • 羟丙基-β-环糊精对二氢杨梅素的增溶作用

    作者:白秀秀;夏广萍;赵娜夏;董虹玲;邵泽艳;韩英梅

    目的:研究羟丙基-β-环糊精对二氢杨梅素(DMY)的增溶作用.方法:采用相溶解度法研究不同温度下羟丙基-β-环糊精对二氢杨梅素的包合作用,HPLC测定二氢杨梅素含量.结果:溶液中DMY与HP-β-CD质量浓度呈线性相关,相溶解度曲线呈AL型,包合物中DMY与HP-β-CD物质的量比1∶1,于25,35,45℃下表观稳定常数分别为500.0,944.8,2 449.8mol·L-1.结论:HP-β-CD对DMY有较好的增溶作用.

  • 二氢杨梅素对兔复发性口腔黏膜溃疡的作用

    作者:陈立峰;董倩倩;张琼

    目的:研究二氢杨梅素(DMY)对兔复发性口腔黏膜溃疡的作用.方法:取新西兰兔,背部脱毛,采用同种异体口腔黏膜匀浆与弗氏完全佐剂作成免疫抗原,脊柱两侧多点皮内免疫注射,2周1次,共5次;第5次免疫注射后7d,口腔黏膜表面给DMY 4 d;给药前和给药期间观察口腔溃疡发生次数,末次给药后次日,比浊法测血清抗口腔黏膜抗体滴度,ELISA法测血清IgG含量,取口腔黏膜做组织病理学检查并根据病变程度进行分级评分.结果:于第3次免疫注射后,兔口腔黏膜均出现溃疡,给药前溃疡发生次数为11.8±1.4(n=40);对照兔血清抗体滴度、IgG升高,溃疡部位黏膜角化层脱落、上皮细胞层和固有层大量炎性细胞浸润,病变程度计分为2.06±0.85.给DMY37.5,75,150 mg·Kg-1后,口腔黏膜溃疡发生次数明显减少,溃疡部位病变减轻,病变程度计分降低(1.81±0.91,1.37±0.80,1.12±0.61);血清抗体滴度、IgG降低.结论:DMY有抗兔复发性口腔黏膜溃疡的作用.

  • 二氢杨梅素抗脂质过氧化作用的研究

    作者:何桂霞;杨伟丽;裴刚;朱咏华;杜方麓

    目的:研究二氢杨梅素(DMY)抗脂质过氧化作用.方法:采用分光光度法测定DMY对由Fe2+维生素C(Fe2+-Vit C)体系、Fe2+-过氧化氢(Fe2+-H2O2)体系、Fe-半胱氨酸(Fe2+-Cys)体系诱导的脂质过氧化的抑制作用.结果:DMY能抑制离体大鼠脑、心、肝匀浆及线粒体脂质过氧化并表现出剂量依赖关系.结论:DMY具有较好的抗脂质过氧化作用,具有进一步研究与开发价值.

  • 二氢杨梅素对复发性口腔溃疡大鼠TNF-α及NF-κB p65的影响

    作者:杨学敏;王晓洪;陈立峰;王小青

    目的:研究二氢杨梅素(DMY)对复发性口腔溃疡(RAU)大鼠肿瘤坏死因子(TNF-α)及NF-κB p65的影响.方法:将60只SD大鼠随机分为6组,采用同种异体口腔黏膜匀浆作为抗原皮内注射5次,制备RAU大鼠模型.末次免疫注射的同时开始给药,正常对照组和模型组给予蒸馏水,其他组分别给DMY 50,100,200 mg·kg-1和甘草锌67.5 mg·kg-1,按10mL· kg-1ig 给药7d.取血分离血清;取口腔黏膜制备匀浆.ELISA测定口腔黏膜和血清中TNF-α的含量;免疫组化法和天青-伊红-瑞氏染色法分别检测口腔黏膜中NF-κB p65,巨噬细胞(MΦ)的表达;逆转录聚合酶链式反应法(RT-PCR)检测口腔黏膜和血清中TNF-α mRNA的表达.结果:RAU模型大鼠血清和口腔黏膜中TNF-α含量显著升高,TNF-α mRNA表达明显增强,口腔黏膜组织中NF-κB p65,MΦ表达增加;DMY能降低口腔黏膜组织和血清中TNF-α含量和TNF-α mRNA的表达,降低口腔黏膜中NF-κB p65,MΦ表达.结论:DMY可能通过抑制RAU口腔黏膜组织中NF-κB p65对MΦ中TNF-α mRNA的转录和释放的调节作用,使口腔黏膜中TNF-α下降而起抗口腔溃疡的作用.

  • 二氢杨梅素预干预对人肺癌A549细胞放射治疗的敏感性作用

    作者:孙大永;毕红东;梁鸿鹄;左彦珍;王爱民;焦海涛

    目的 探索二氢杨梅素(DMY)对人肺腺癌A549细胞放射治疗敏感性的调节作用,及新的肺癌放疗增敏剂.方法 采用MTT法和集落形成实验分别寻找二氢杨梅素对A549细胞的短期和长期20%抑制浓度(IC20)作为放疗增敏浓度;流式细胞术周期实验检测二氢杨梅素(IC20)作用不同时间对A549细胞周期时相的改变;集落形成实验检测二氢杨梅素(IC20)预干预24h后再照射对肺癌A549细胞放疗敏感性的影响.结果 MTT和集落形成实验均显示,DMY对A549细胞以浓度依赖形式存在短期和长期的抑制作用,MTT实验时IC20为40mg/L,集落形成实验时IC20为7mg/L;流式细胞术周期实验结果显示,二氢杨梅素作用24h时G2/M期比率增高明显(P<0.05);集落增敏实验结果显示,DMY预处理24h后对A549细胞的放射治疗并未见到显著增敏作用(P>0.05).结论 二氢杨梅素体外存在抑制A549细胞增殖的作用,其效应与药物浓度和细胞初始接种密度有关;二氢杨梅素作用24h可以使A549细胞G2/M期比率明显增加,但是单纯通过调整放疗前细胞周期时相并未见到明显的放疗增敏作用.

  • 二氢杨梅素对肺癌A549细胞凋亡的作用

    作者:孙大永;左彦珍;梁鸿鹄;宋冀;马春虎;孙昊阳

    目的 探讨二氢杨梅素(DMY)对肺癌A549细胞的诱导凋亡作用.方法 以肺癌A549细胞为研究对象,采用MTT法研究DMY对A549细胞的抗肿瘤作用,并进一步通过流式细胞术检测DMY对A549细胞的凋亡作用,免疫印迹法(Western blotting)检测促凋亡因子Bax和抗凋亡因子Bcl-2表达水平,进一步探讨其机制.结果 DMY浓度越大,对A549细胞的抑制作用越明显,48h的IC50为64.45g/L;流式细胞术显示,随着DMY浓度的增加A549细胞凋亡也逐渐增加;Western blotting结果显示,DMY可诱导A549细胞中凋亡因子Bax蛋白表达增加,同时抗凋亡因子Bcl-2蛋白表达减少,尤其高浓度组改变明显.结论 DMY可以在体外诱导A549细胞凋亡.

  • 二氢杨梅素联合依托泊苷对绒毛膜癌细胞JAR的抑制作用

    作者:王康;许倩;左彦珍;刘镭;鲁艳杰;雷赟涛;崔莹;李玉红

    目的 探讨二氢杨梅素(DMY) 联合依托泊苷(VP16) 对绒毛膜癌细胞JAR的抑制作用及其相关机制.方法 体外培养JAR细胞,设空白对照组、DMY组、VP16组以及DMY与VP16联合(DMY + VP16) 组.MTT法检测各组细胞增殖情况;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术分析各组细胞的凋亡率;克隆形成实验检测细胞生存能力;Western blotting法检测凋亡抑制蛋白Bcl-2、细胞凋亡抑制蛋白2(c-IAP2) 表达水平.结果 MTT检测结果显示,与空白对照组比较,DMY组、VP16组及DMY + VP16组在24 h和48 h时间点的细胞存活率均下降,且DMY+ VP16组细胞存活率下降为明显;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术结果显示,与对照组相比各实验组凋亡率均有增高,DMY + VP16组凋亡率明显高于各单独用药组;克隆形成实验结果显示,对于JAR细胞,实验组的克隆球数目均少于对照组,且DMY + VP16组克隆球数目少;对于正常肝脏HL7702细胞,DMY组与对照组相比无明显差异,VP16组与DMY + VP16相比亦无明显差异;Western blotting实验结果显示,与对照组相比,无论DMY和VP16单独还是联合使用均可下调Bcl-2、c-IAP2蛋白表达,同时DMY + VP16组下调作用明显.结论 二氢杨梅素联合依托泊苷明显增强对绒毛膜癌细胞JAR的生长抑制作用,联合使用可以减少化疗药物VP16的用量,其抑制肿瘤细胞作用可能与下调Bcl-2、c-IAP2蛋白的表达有关.

  • 二氢杨梅素对K562/A02细胞阿霉素耐药性的逆转作用

    作者:李碧蓉;王乐;韩维娜;夏琳钦;唐姝

    目的:探讨二氢杨梅素(dihydromyricetin,DMY)对人慢性粒细胞白血病耐药细胞株K562/A02细胞对阿霉素(adriamycia,ADM)耐药的逆转作用及可能机制.方法:用DMY(5、10、20、40、60、80和100 mg/L)和ADM((0.05-100 mg/L)处理K562和K562/A02细胞48 h,采用MTT法检测细胞活力及DMY对K562/A02细胞ADM耐药的逆转效应,流式细胞术检测细胞内阿霉素的相对浓度,Western blot检测耐药相关基因的p-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、多药耐药相关蛋白(multidrug resistance related protein 1,MRP1)、谷胱甘肽转移酶π(glutathione transferaseπ,GSTπ)和BCL-2蛋白表达.结果:DMY能抑制K562和K562/A02细胞的增殖且呈剂量依赖效应(r1 =0.37,r2 =0.38),IC50分别为71.23±6.51和72.88±5.49 mg/L.5、10和20 mg/L为DMY的低细胞毒性剂量.DMY(5、10和20 mg/L)增敏K562细胞和K562/A02细胞对ADM耐药性且呈剂量依赖效应(r1=-0.62,r2=-0.71),耐药逆转倍数介于1.38-28.59之间.DMY(5,10和20 mg/L)增加K562/A02细胞内ADM的浓度也呈剂量依赖效应(r=0.34).与对照组比较,DMY(5,10和20 mg/L)均显著降低了K562/A02细胞中PgP、MRP1、GSTπ和BCL-2蛋白表达,呈剂量依赖性(r1=-0.41,r2=-0.37,r3=-0.58,r4=-0.46).与ADM组比较,DMY(5,10和20 mg/L)+ADM组P-gp、MRP1、GSTπ和BCL-2蛋白表达均显著降低(r1=-0.55,r2=-0.41,r3=-0.38,r4=-0.44).结论:DMY可以逆转K562/A02细胞对ADM的耐药性,其作用机制可能与下调耐药相关基因P-gp、MRPI、GSTπ和BCL-2的表达有关.

  • 二氢杨梅素对4T1小鼠乳腺癌肺转移的抑制作用

    作者:周防震;张新芳

    目的:为了探讨二氢杨梅素的抗转移作用,在Balb/c雌性小鼠右后腿皮下建立了4T1乳腺癌移植模型,然后给予二氢杨梅素灌胃给药。方法 MTT法检测二氢杨梅素对4T1小鼠乳腺癌细胞的抗增殖作用;Transwell侵袭小室法检测二氢杨梅素对4T1细胞的抗转移作用。检测肿瘤的体积、远端肺转移灶数、荷瘤鼠血清及条件培养基中的基质金属蛋白酶MMP-9和MMP-2。结果二氢杨梅素处理4T1细胞48 h后,半数抑制浓度(IC50)为102.1μg/ml。二氢杨梅素能不依赖细胞毒作用减少细胞培养液中MMP-2和MMP-9水平,并且抑制4T1细胞的侵袭。与盐水对照组比较,100 mg·kg-1·d-1二氢杨梅素灌胃给药能显著减少瘤重、肺转移灶数以及荷瘤鼠血清 MMP-9和MMP-2水平;而50 mg·kg-1·d-1二氢杨梅素灌胃给药组除了血清MMP-2水平外,没有显著差异。结论二氢杨梅素给药能抑制4T1小鼠乳腺癌远端肺转移,其机制可能与二氢杨梅素下调荷瘤小鼠血清MMP-9和MMP-2水平相关。

  • 显齿蛇葡萄片中二氢杨梅素含量测定方法

    作者:张木子荷;张诗龙;范娜;宋杨;徐平华;韩晋

    目的 建立显齿蛇葡萄片中二氢杨梅素含量的HPLC测定方法.方法 采用HPLC法对显齿蛇葡萄片中二氢杨梅素进行含量测定.选用Zorbax-SB C18色谱柱(4.6 mm× 250 mm,5μm);以甲醇0.05%磷酸水溶液(35:65)为流动相;检测波长:289 nm;流速:1.0 ml·min1;柱温:30℃.结果 二氢杨梅素在10.2~102.1 μg ·ml-1的范围内有良好的线性关系(r=0.9998),平均回收率97.6%,RSD为0.87%.结论 该方法简便、准确,重复性好,精密度高,可用于显齿蛇葡萄片中二氢杨梅素的含量测定.

  • 二氢杨梅素对辐射引起神经元凋亡的保护作用

    作者:张捷;张恩艳;郭宏举;冯桂检;常李荣

    目的 探讨二氢杨梅素对γ射线辐射引起皮层神经元凋亡的保护作用和可能作用机制.方法 原代培养的大鼠皮层神经元提前给予二氢杨梅素, 1h后以8Gy辐射强度的γ射线照射10min.24h后MTT检测细胞存活率, 试剂盒测试丙二醛和超氧阴离子的含量以及Caspase-9和Caspase-3的活性, Western blot检测细胞色素C、Bcl-2和Bax的表达.结果二氢杨梅素可剂量依赖性地提高γ射线辐射的细胞存活率, 显著降低丙二醛和超氧阴离子的含量, 抑制Caspase-9和Caspase-3的活性, 抑制细胞色素C的释放以及Bcl2和Bax的比值, 从而保护神经元.结论 二氢杨梅素对γ射线引起的皮层神经元损伤有保护作用, 这可能与其抑制氧化应激和细胞凋亡有密切关系.

  • 二氢杨梅素对60Co-γ辐射小鼠氧化应激损伤的保护作用

    作者:史宁;郭宏举;王欢;常李荣

    目的 探讨二氢杨梅素对60Co-γ射线所致小鼠氧化损伤的保护作用.方法 健康雄性昆明小鼠按体质量随机分为正常对照组、辐射对照组和二氢杨梅素(低、中、高)剂量组,各组均采用灌胃给药方式.辐射对照组和二氢杨梅素组小鼠全身一次性进行60Co-γ照射,总辐射剂量为3.25 Gy,各组继续给药7d后检测小鼠外周全血血清中过氧化氢酶、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性改变和丙二醛含量的变化.结果 与辐射对照组比较二氢杨梅素高剂量组小鼠血清中超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性显著升高(P<0.05),丙二醛含量显著降低(P<0.05);二氢杨梅素中、高剂量组小鼠血清中过氧化氢酶活性显著升高(P<0.05),与正常对照组比较各项指标无统计学差异.结论 二氢杨梅素对60Co-γ辐射小鼠引起的氧化应激损伤具有保护作用,其机制可能和抗氧化作用有关.

  • 显齿蛇葡萄中二氢杨梅树皮素的抗氧化作用及其机制

    作者:张友胜;宁正祥;杨书珍;吴晖

    目的研究从显齿蛇葡萄植物中提取和纯化的二氢杨梅素(DMY)的抗氧化作用及其抗氧化机制.方法用DPPH作稳定自由基测量DMY对其清除效果;用FeSO4-依他酸引发亚酸油过氧化,用硫代巴比妥酸法测量DMY对过氧化产物的抑制率;用紫外法测DMY对Fe2+的络合作用.结果 DMY对稳定自由基DPPH的清除率高达73.3%~91.5%;DMY(0.01%~0.04%)可抑制亚油酸过氧化,其作用效果等同或优于TBHQ.DMY在FeSO4-依他酸引发的亚油酸过氧化体系中的抗氧化机制为络合Fe2+,阻止由Fe2+引发的亚油酸过氧化.结论 DMY有较好的抗氧化效果,有可能成为一个很好的天然抗氧化剂.

  • 二氢杨梅素通过调控鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2对结肠癌生长的抑制作用

    作者:马林伟;戴小丽;吴红雁;徐红涛

    目的 研究二氢杨梅素(DHM)对结肠癌生长的抑制作用及其可能机制.方法 (1)细胞实验:实验分4组:对照组(以2%胎牛血清处理SW480结肠癌细胞)、低、中、高3个剂量实验组(分别以10,20,40 μmol·L-1 DHM处理SW480结肠癌细胞);以3-(4,5-二甲基吡啶-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑(MTS)法检测SW480结肠癌细胞的增殖;以免疫印迹法检测SW480结肠癌细胞中鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2(RhoGDI2)蛋白的表达.(2)动物实验:在Balb/c裸小鼠右下肢皮下接种SW480结肠癌细胞悬液0.2 mL构建移植瘤模型;按照体重将模型小鼠随机分4组:模型组、对照组(顺铂3 mg·kg-1)和低、高2个剂量实验组(20,60 mg·kg-1 DHM),每组5只;以免疫组化法检测结肠癌组织中RhoGDI2蛋白的表达.结果 (1)细胞实验:处理SW480结肠癌细胞1d后,对照组和低、中、高3个剂量实验组对结肠癌细胞的抑制率分别为(2.17±0.53)%,(5.83±1.91)%,(16.2±2.82)%和(34.51±1.74)%;这4组的RhoGDI2灰度值分别为72.16±2.73,61.39±3.81,48.76±3.92和32.39±3.17.3个剂量实验组与对照组比较,上述指标差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01,P<0.001).(2)动物实验:模型组、对照组和低、高2个剂量实验组的RhoGDI2表达强度分别为8053.60±236.21,2791.39±189.72,6521.28±172.89和4381.86±226.33,低、高2个剂量实验组和对照组与模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01,P<0.001).结论 DHM能够抑制SW480结肠癌细胞的增殖和体内生长,其作用机制可能为抑制RhoGDI2蛋白的表达有关.

  • 二氢杨梅素的稳定性研究

    作者:何桂霞;裴刚;李斌;欧阳文

    目的:研究二氢杨梅素在不同条件下的稳定性.方法:考察二氢杨梅素在不同pH值、温度、光线、金属离子影响下的稳定性,用反相高效液相色谱法测定其含量.结果:在pH值≤4的弱酸性条件下二氢杨梅素能稳定存在,随着pH值的增加,会加速氧化,特别是在pH值≥9的碱性条件下会立即反应而氧化变黄.温度的升高,Fe3+,Al3+,Cu2+等金属离子的存在以及光线均可以加速二氢杨梅素的氧化.结论:为使二氢杨梅素能较长时间稳定存在,需保证其生理活性的条件是弱酸性、避免接触Fe3+,Al3+,Cu2+等金属离子、避光低温保存.

  • 二氢杨梅素通过上调自噬活性抑制MPP+诱导的PC12细胞损伤

    作者:周湘华;赵其辉;周寿红

    目的 观察二氢杨梅素(DMY)对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导的PC12细胞损伤的影响并探讨其可能的机制.方法 含DMY 5,10,20,40和80μmol·L-1的培养液预处理PC12细胞0.5 h,培养液中加入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)10 mmol·L-1,再加入MPP+500μmol·L-1培养48 h.噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活,丙酮酸二硝基苯腙比色法检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)水平,透射电镜观察细胞的超微结构,Western蛋白质印迹法检测细胞中自噬相关蛋白Beclin-1和微管相关蛋白1轻链3(LC3)和P62的表达.结果 与细胞对照组比较,MPP+组细胞存活率显著降低(P<0.05),细胞培养液中LDH水平显著增加(P<0.05),细胞中自噬体的数量明显减少,自噬泡占胞质总面积的百分率显著降低(P<0.05),LC3-Ⅱ和Beclin-1的蛋白表达及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值均显著降低(均P<0.05),P62的表达显著升高(P<0.05).与MPP+组比较,MPP++DMY 10~80μmol·L-1组细胞存活率显著升高(P<0.05),细胞培养液中LDH水平显著降低(P<0.05).与MPP+组比较,MPP++DMY 20μmol·L-1组细胞中自噬体数量明显增加,自噬泡占胞质总面积的百分率显著增加(P<0.05),LC3-Ⅱ和Beclin-1的蛋白表达和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值均显著增加(P<0.05),P62的表达显著降低(P<0.05).与MPP++DMY 20μmol·L-1组比较,MPP++DMY+3-MA组细胞存活率显著降低(P<0.05),细胞上清液中LDH水平显著增加(P<0.05).结论 DMY抑制MPP+诱导的PC12细胞损伤,其机制与上调细胞自噬活性有关.

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