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藤黄酸对结肠癌LoVo细胞增殖和侵袭能力的影响
目的 探讨不同浓度藤黄酸(gambogic acid,GA)对结肠癌LoVo细胞株增殖、侵袭能力及基质金属蛋白酶-2 (MMP-2)蛋白表达的影响.方法 CCK-8法检测藤黄酸对LoVo细胞增殖的影响;Transwell小室检验LoVo细胞体外侵袭能力的改变;Western Blot检测LoVo细胞中MMP-2蛋白的改变.结果 CCK-8检测显示,GA剂量1、2、4、6、8mol/L作用于细胞24h、48h后,对结肠癌Lovo细胞增殖的抑制率分别为(o.16±0.11)％、(0.24±0.08)％、(0.58±0.01)％、(0.67±0.03)％、(0.79±0.01)％和(0.27±0.05)％、(0.69±0.09)％、(0.85±0.01)％、(0.87±0.01)％、(0.89±0.01)％,与对照组(0μmo/L)比较差异具有统计学意义(P＜0.05).Transwell侵袭实验显示,低剂量藤黄酸可抑制LoVo细胞侵袭,其中对照组(0 μmo/L)穿膜细胞数为(120.50±8.69)个,实验组的(1μmol/L)穿膜细胞数为(69.83±4.75)个,两组比较差异有条件下意义(P＜0.05).Western Blot结果显示,GA剂量1、2、4μmol/L作用LoVo细胞后MMP-2蛋白表达水平分别下降48.67％、74.72％、82.70％,与对照组(0μmo/L)比较差异有统计学意义.结论 藤黄酸可抑制LoVo细胞增殖及其侵袭能力,其作用机制可能与降低LoVo细胞中MMP-2蛋白表达有关.
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藤黄酸对人膀胱癌细胞BIU-87增殖及侵袭的影响
目的 观察藤黄酸对人膀胱癌细胞株BIU-87增殖、侵袭的影响,探讨其作用机制.方法 体外培养BIU-87细胞,将细胞按随机数字表法分为空白对照组及藤黄酸低、中、高剂量组,藤黄酸低、中、高剂量组加入含20、40、80μmol/L藤黄酸的新鲜培养基培养,空白对照组以普通培养基培养.干预24、48、72 h后,采用CCK8试剂盒检测各组细胞增殖抑制率;采用底部涂Matrigel胶的Transwell小室模型对BIU-87细胞进行体外侵袭研究;采用Western blot法检测BIU-87细胞内VEGF表达.结果 与空白对照组比较,干预24、48、72 h后,藤黄酸低、中、高剂量组细胞增殖抑制率升高(P<0.05),且各组细胞增殖抑制率随时间延长而升高(P<0.05);藤黄酸低、中、高剂量组穿过滤膜的细胞数[(26±4)个、(41±4)个、(53±5)个比(119±7)个]降低(P<0.05),VEGF[(41.2±6.2)、(23.8±5.2)、(17.9±4.7)比(14.8±4.2)]表达水平降低.结论 藤黄酸对人膀胱癌细胞的增殖和侵袭能力有明显抑制作用,其机制可能与下调VEGF表达有关.
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藤黄酸对人结肠癌SW480细胞增殖及VEGFR2表达的影响
目的:观察藤黄酸对人结肠癌SW480细胞增殖和血管内皮细胞受体2(VEGFR2)表达的影响,探讨其可能抗肿瘤的作用机制.方法:以不同浓度的藤黄酸干预体外培养的人结肠癌细胞株SW480,分别于24、36、48h后,应用MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期分布和细胞凋亡率,Western-blot分析VEGFR2蛋白的变化.结果:藤黄酸对结肠癌细胞株SW480生长增殖具有明显抑制作用,其效应呈浓度和时间依赖性.流式细胞仪分析显示SW480细胞呈G2/M期阻滞；SW480细胞的凋亡率随藤黄酸浓度增加逐步上升.用不同浓度的藤黄酸处理SW480细胞株24h,VEGFR2蛋白的表达随药物浓度的增加而减少(P＜0.01).结论:藤黄酸能够明显抑制人结肠癌细胞株SW480的增殖,诱导SW480细胞发生G2/M期阻滞,其作用机制可能与抑制VEGFR2表达有关.
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HPLC法测定藤黄中藤黄酸和新藤黄酸的含量
目的 建立藤黄中藤黄酸和新藤黄酸的含量测定方法.方法 采用反相高效液相色谱法,色谱柱为Hypersil ODS C18(4.6mm×250mm,5μm);流动相:甲醇-0.1%冰醋酸水溶液(93:7),流速1.0 mL/min;检测波长为360nm,外标法定量.结果 藤黄酸线性范围为2.45～49 μg,回归方程Y-11 334.8+232 781X(r=0.999 9,n=5),平均回收率99.3%,RSD=1.02%(n=6);新藤黄酸线性范围为2.55～51μg,回归方程Y=75 197.5+226 301X(r=0.999 7,n=5),平均回收率100.5%,RSD=1.48%(n=6).结论 本法精密度高,重复性好,简便、可靠,可作为藤黄的质量控制方法.
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藤黄化学生物学研究进展
该综述通过对藤黄抗肿瘤药用历史的回顾、研究现状的总结,以及笔者课题组近年来的若干发现,探讨了藤黄化学生物学研究中3个关键科学问题,包括藤黄中有哪些化学成分,藤黄中的化学成分通过什么方式作用于肿瘤细胞,生物机体通过什么途径处置藤黄中的化学成分.此外,笔者还将在该综述中对以藤黄中主要化学成分为先导化合物的抗肿瘤新药开发前景提出一些思考和建议.
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藤黄酸大鼠在体肠吸收动力学的研究
目的:研究藤黄酸(gambogic acid,GA)肠吸收动力学.方法:采用大鼠在体单向肠灌流实验,以高效液相色谱法测定灌流液中药物含量,研究GA在大鼠不同肠段吸收特性,并考察不同药物浓度对大鼠肠吸收的影响.结果:GA在十二指肠的吸收速率明显高于其他肠段(P＜0.05),增加药物浓度,GA在十二指肠的吸收速率常数基本保持不变.结论:GA在整个肠段都有不同程度的吸收,且在十二指肠的吸收速率快,其吸收机制为被动扩散.
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藤黄酸减轻脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤
目的 探讨藤黄酸(GA)对脂多糖(LPS)所致小鼠急性肺损伤的保护作用及其机制.方法 采用尾静脉注射LPS(4 mg/kg)建立小鼠急性肺损伤模型.实验将小鼠随机分为对照组(control组)、模型组(model组)、藤黄酸组(GA组)和藤黄酸预处理组(GA+LPS组),6 h后测定肺湿/干重比值(W/D);检测髓过氧化物酶(MPO)活性;检测肺泡灌洗液(BALF)中蛋白含量和白细胞计数;ELISA检测肺匀浆中白介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量.结果 模型组小鼠肺W/D、MPO活性、BALF中蛋白含量和白细胞数量均增加,肺组织IL-1β和TNF-α水平升高(均P<0.01);藤黄酸预处理可减轻LPS引起的以上指标变化(均P<0.05).结论 GA可减轻LPS诱导的急性肺损伤,其机制可能与降低肺组织IL-1β和TNF-α的含量、抑制中性粒细胞在肺部的聚集和减轻肺部水肿相关.
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藤黄酸增强人胃癌SGC7901/DDP细胞对顺铂的敏感性
目的 探讨藤黄酸(GA) 对人胃癌SGC7901 /DDP细胞顺铂敏感性的影响及其分子机制.方法 采用顺铂(DDP) 浓度梯度递增法构建人胃癌顺铂耐药株SGC7901 /DDP细胞,采用细胞计数盒-8(CCK-8) 法检测藤黄酸和顺铂对SGC7901 /DDP细胞的毒性作用,采用Chou-Talalay中效分析法定量评价藤黄酸和顺铂的联合作用效果,采用流式细胞术检测细胞凋亡,采用Western blotting方法检测Bcl-2、Bax、Survivin、多药耐药相关蛋白2(MRP2) 、磷酸化氨基末端蛋白激酶(p-JNK) (Thr183 /Tyr185) 和JNK的蛋白水平.结果 藤黄酸与顺铂各自单独作用48 h的IC50分别为2. 94 μmmol /L和39. 76 μmmol /L;当抑制率超过20％ 时,两者联合应用呈协同效应;藤黄酸可协同增强顺铂诱导的细胞凋亡(P＜0.05) ,下调Survivin和MRP2蛋白水平(P＜0.05) ,上调Bax蛋白水平(P＜0.05) ,抑制JNK磷酸化(P＜0.05);JNK特异性抑制剂SP600125可下调MRP2蛋白水平(P＜0.05).结论 藤黄酸可增强人胃癌SGC7901 /DDP细胞对顺铂的敏感性,这可能与藤黄酸通过抑制JNK信号通路下调MRP2蛋白表达,以及上调Bax蛋白表达和下调Survivin蛋白表达有关.
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藤黄酸联合柔红霉素对白血病耐药细胞株K562/A02孕烷X受体表达的影响
目的:研究恶性血液病细胞株孕烷X受体(Pregnane X receptor)的表达水平;探讨藤黄酸(Gambogic acid,GA)对K562/A02耐药细胞株的耐药逆转作用及其机制.方法:应用Real-time PCR法检测多个恶性血液病细胞株中PXR的表达;采用MTT法检测K562/A02细胞株分别与GA,DNR,GA+ DNR孵育24、36、48 h后的细胞增殖抑制率;Real-time PCR法检测各实验组PXR表达;Western blot法检测各实验组细胞PXR蛋白的表达水平.结果:K562/A02细胞株的PXR基因表达水平高于本研究实验其他所检测的恶性血液病细胞;;藤黄酸作用后,K562/A02细胞对柔红霉素的耐药性明显降低,却细胞抑制率增加;藤黄酸作用后的K562/A02细胞的PXR基因和蛋白表达水平均较对照纽下调,而在柔红霉素组则无明显变化,提示柔红霉素并没有下调PXR的作用.PXR的下调亦不是细胞被药物杀伤后的假象,而藤黄酸可以下调PXR的基因和蛋白表达.结论:PXR可在多种血液系统恶性肿瘤细胞株中表达,并在K562/A02细胞明显较其他实验细胞株中表达高.低剂量GA可以提高细胞的生长抑制率,增强化疗的效果,其机制可能与下调PXR表达有关.
关键词： 孕烷X受体 藤黄酸 柔红霉素 多药耐药 K562/A02细胞 -
藤黄酸通过MAPK通路诱导Jurkat细胞凋亡的机理
本研究探讨藤黄酸对Jurkat细胞的抑制作用及可能机理.以不同浓度藤黄酸与抑制剂处理Jurkat细胞,Annexin V/PI双染法检测细胞的凋亡；流式细胞仪检测荧光素激活的caspase3、caspase 8、caspase 9阳性细胞水平；免疫印迹检测pro-caspase 3、pro-caspase 9、磷酸化JNK及P38蛋白水平.结果表明,藤黄酸呈浓度依赖性诱导Jurkat细胞凋亡；藤黄酸作用Jurkat细胞后caspase3、caspase8、caspase9阳性细胞水平升高,caspase3、caspase9活化蛋白及磷酸化JNK及P38蛋白水平升高；ROS、CaMKⅡ、caspase 3、caspase 9、MAPKK、JNK1/2及P38抑制剂减弱藤黄酸诱导Jurkat细胞凋亡的作用；ROS、CaMKⅡ、MAPKK、JNK1/2及P38抑制剂降低藤黄酸作用Jurkat细胞后caspase 3、cmaspase9活化蛋白水平；ROS、CaMKⅡ、MAPKK、JNK1/2抑制剂降低藤黄酸作用Jurkat细胞后磷酸化JNK蛋白水平；ROS、CaMKⅡ、MAPKK、P38抑制剂减弱藤黄酸作用Jurkat细胞后磷酸化P38蛋白水平.结论:藤黄酸通过激活caspase途径诱导Jurkat细胞凋亡,该过程可能与ROS- CaMKⅡ-MAPKK-JNK/P38通路有关.
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藤黄酸对MUTZ-1细胞生长抑制作用及其机理研究
本研究旨在探讨藤黄酸时高危组骨髓增生异常综合征(MDS)细胞的生长抑制作用及其机制.以人MDS-RAEB细胞株MUTZ-1细胞为研究对象,采用MTT法测定增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期变化,用RT-PCR检测bax/bcl-2基因表达.结果表明,藤黄酸对MUTZ-1细胞有生长抑制作用,在0.2-0.8μg/ml浓度范围内随着药物浓度的增加MUTZ-1细胞的增殖抑制率增高;流式细胞学检测发现,藤黄酸浓度0、0.4、0.6、0.8μg/na引起的MUTZ-1凋亡率分别为(5±0.5)%、(13±0.5)%、(37±0.7)%和(56±0.6)%,而且凋亡率随着药物浓度增加而增加(P<0.05).bcl-2基因表达程度随藤黄酸剂量增加而减弱,而bax mRNA表达无明显变化.结论:藤黄酸通过诱导MUTZ-1细胞凋亡、下调bcl-2基因表达而抑制该细胞生长,这可能是藤黄酸抗肿瘤的主要机制之一.
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藤黄酸对SKM-1细胞生长抑制作用及其机制
本研究探讨藤黄酸(GA)对骨髓增生异常综合征细胞SKM-1生长抑制和诱导细胞凋亡及其机制.采用MTT比色法检测GA对SKM-1细胞的增殖抑制作用,在光学显微镜下观察细胞形态学变化,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期分布,RT-PCR检测SKM-1细胞bax mRNA和bcl-2 mRNA表达情况.结果表明:GA能明显抑制SKM-1细胞增殖,具有时间和剂量依赖性,其48 h的IC50值为0.37 μg/ml；GA诱导SKM-1细胞凋亡,具有浓度依赖性,诱导SKM-1阻滞在G0/G1期；显微镜下可见典型的凋亡细胞形态特征；GA可明显下调SKM-1细胞bcl-2mRNA表达和上调bax mRNA表达.结论:GA能诱导SKM-1细胞凋亡,其机制可能与细胞G0/G1期阻滞及bcl-2/bax比率下调有关.
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藤黄酸对K562细胞的凋亡诱导及其作用机制研究
本研究探讨蘑黄酸(gambogic acid,GA)对K562细胞的抑制作用及机制.以不同浓度的藤黄酸处理K562和K562/A02细胞;用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测GA对细胞增殖的影响;碘化丙啶(PI)染色分析细胞周期;AnnexinV/PI双染法检测细胞的凋亡;JC-1染色法检测线粒体跨膜电位水平;流式细胞仪检测荧光素激活的caspase-3、caspase-8、caspase-9阳性细胞水平.结果显示:藤黄酸呈时间和浓度依赖性抑制K562细胞增殖.K562/A02细胞(GA＞2 μg/ml)比K562细胞(CA＞0.5 μg/nd)需要更高的蘼黄酸浓度才显示增殖抑制作用.蘑黄酸呈浓度依赖性诱导K562细胞凋亡.藤黄酸0、0.5、1.0、2.0 μg/ml浓度对K562细胞周期未显示明显影响.藤黄酸作用后的K562细胞的线粒体跨膜电位明显降低.藤黄酸2μg/ml作用24小时激活的caspase 3、caspase 8、caspase 9阳性细胞比例与对照相比分别上升2.19%、-1.95%、34.01%;作用48小时分别上升60.4%、71.3%、77.7%.结论:藤黄酸对K562细胞株有显著的抑制作用,该作用是通过诱导细胞凋亡实现的.藤黄酸不影响K562细胞的细胞周期.藤黄酸通过线粒体跨膜电位途径和胞浆激活途径诱导K526细胞的凋亡.
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藤黄酸诱导Raji细胞凋亡的机理研究
本研究观察藤黄酸对Raji细胞的诱导凋亡作用,探讨死亡诱导清理子-1(death indIAeer-obliterator 1.DIO-1)在该过程中的作用.采用Annexin V-FITC/碘化丙锭(PI)染色流式细胞术检测细胞凋亡率.免疫印迹法检测Bcl-xL,DIO-1和pro-Caspase 3及其活化片段P17、P20的表达.免疫荧光化学和Hoechst 33258双标染色法检测DIO-1核转位.结果表明,藤黄酸呈剂量依赖性诱导Raji细胞凋亡,下调Bcl-xL表达并上调DIO-1与pro-Caspase 3片段表达,诱导Caspase活化片段的产生及DIO-1的核转位.结论:藤黄酸能诱导R aji细胞凋亡,其机制与DIO-1表达上调及核转位有关,可能通过Caspase 3活化而实现,DIO-1表达上调可能与Bcl-xL表达下调有关.
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磁性纳米Fe3O4颗粒对藤黄酸诱导的U937细胞凋亡效应的影响
本研究探讨联合应用藤黄酸(GA)和磁性纳米Fe3O4颗粒(MNP-Fe3O4)治疗白血病的潜在可能性.采用MTT法检测GA对U937的细胞毒作用及GA联合MNP-Fe3O4对U937细胞生长抑制的影响;流式细胞术检测细胞凋亡率;应用Wright及DAPI染色观察凋亡细胞的形态学变化;采用实时定量RT-PCR及Western blot法分别检测细胞的caspase-3、bcl-2、bax、NF-κB和survivin基因及相应蛋白的表达.结果表明:GA对U937细胞的生长抑制作用呈现时间及剂量依赖性;MNP-Fe3O4本身无细胞毒作用,但能使GA对U937细胞的生长抑制作用增强;联合应用GA和MNP-Fe3O4诱导的细胞凋亡率较单用GA明显增加,细胞呈现典型的凋亡形态改变,同时可见caspase-3及bax表达上调,而凋亡抑制基因如bcl-2、NF-κB和survivin表达下调.结论:MNP-Fe3O4能增强GA对U937细胞的凋亡诱导作用,两者联合应用可能是一种新型而安全有效的白血病治疗方法.
关键词： 藤黄酸 磁性纳米Fe3O4颗粒 细胞凋亡 U937细胞 -
藤黄酸对白血病K562/A02细胞的耐药逆转作用
本研究旨在探讨藤黄酸(gambogic acid,GA)对K562/A02细胞株的耐药逆转作用及其逆转机制.采用MTT法检测GA对K562和K562/A02细胞的增殖抑制作用及对K562/A02细胞阿霉素(ADM)耐药逆转效应；用流式细胞术检测GA联合ADM对K562及K562/A02细胞凋亡率的影响；DAPI荧光染色观察ADM联合GA作用后细胞的形态学改变；Western blot法检测K562及K562/A02细胞P-糖蛋白(P-gp)、存活蛋白(Survivin)基因的表达.结果表明:ADM作用48 h抑制K562和K562/A02细胞增殖的IC50值分别为(1.42±0.07)μg/ml和(28.42±1.40)μg/ml.GA≤0.0625 μmol/L时,对K562及K562/A02细胞株无明显增殖抑制作用；0.0625 μmol/L GA联合ADM作用于K562/A02细胞能增加其对ADM的敏感性,耐药逆转倍数为1.53.0.0625 μmol/L GA联合ADM作用于K562/A02细胞48 h能提高细胞的凋亡率(P＜0.05),下调Survivin及P-gp蛋白的表达(P＜0.05).结论:GA可以逆转K562/A02细胞的耐药性,增强耐药细胞对ADM的敏感性,其机制可能与提高K562/A02细胞凋亡、下调Survivin和P-gp蛋白的表达有关.
关键词： 藤黄酸 阿霉素 K562细胞 K562/A02细胞 多药耐药 -
藤黄酸及其纳米载体研究进展
藤黄酸作为中药藤黄主要的有效成分,是一种很有前途的抗肿瘤药物,但因其水溶性差、代谢快、生物利用度低而限制了其在临床治疗中的应用.新型的纳米制剂的兴起有效的改进了藤黄酸的给药策略,提高了藤黄酸的稳定性、溶解度和药物吸收,一些独特的纳米载体可以达到药物缓释、特定靶向等多种效果,多项研究表明纳米制剂安全有效.
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藤黄酸逆转人结肠癌细胞株SW480奥沙利铂耐药性的作用及机制研究
目的探讨藤黄酸对多药耐药人结肠癌细胞株SW480/L-OHP的耐药逆转及其对多药耐药基因（MDR1）和P-糖蛋白（P-gp）表达的影响。方法采用逐步增加药物浓度的方法建立奥沙利铂耐药结肠癌细胞株SW480/L-OHP。噻唑蓝（MTT）法测定SW480/L-OHP细胞株的耐药指数和藤黄酸在无细胞毒浓度下对结肠癌细胞耐受奥沙利铂的逆转作用，流式细胞术检测细胞凋亡、周期变化，RT-PCR检测各组细胞MDR1 mRNA表达水平，Western blot检测各组细胞P-gp蛋白的表达水平。结果藤黄酸对结肠癌SW480及SW480/L-OHP细胞增殖均具有抑制作用，且呈量效关系。奥沙利铂与低毒剂量藤黄酸共同作用SW480/L-OHP细胞，其IC50显著降低（P<0.05），耐药逆转倍数为3.72。与奥沙利铂单药组相比，加入低毒剂量藤黄酸后，细胞凋亡率明显增加，差异有统计学意义（P<0.05）。藤黄酸作用后MDR1 mRNA转录水平降低，同时下调了P-gp蛋白表达。结论藤黄酸部分逆转SW480/L-OHP细胞对奥沙利铂的耐药性，其机制与增加细胞内奥沙利铂的蓄积，抑制MDR1基因的表达及降低P-gp的表达有关。
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藤黄酸与5-FU相互作用的中效原理评价
及肿瘤细胞凋亡抑制基因Survivin mRNA的表达.结果:GA联合5-FU作用于BGC-823肿瘤细胞株可产生较好的协同效应,GA作用后TS及Survivin mRNA表达明显下调.结论:GA与5-FU联合应用作用于BGC-823细胞可产生较好协同效应,下调肿瘤细胞药物疗效相关基因的表达及凋亡抑制基因的表达可能是GA与5-FU两者间产生协同效应的机制之一.
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藤黄酸调节急性白血病细胞HL-60核孔蛋白Nup88的意义
目的 观察藤黄酸对白血病细胞株HL-60增殖和凋亡的影响及其对核孔蛋白Nup88的调控作用,探讨二者间的相互关系.方法 采用二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖活性;Annexin-V FITC/PI双标法和Hoechst33258染色法分析细胞凋亡的改变;流式细胞术分析细胞周期和细胞内核孔蛋白Nup88的改变;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测藤黄酸对白血病细胞内Nup88基因表达的影响;共聚焦显微镜下观察Nup88蛋白的分布情况.结果 藤黄酸能明显抑制HL-60细胞的增殖,其抑制作用呈时间、剂量依赖性,其12 h的IC50Molecule targetecl therapy; Response evaluation criteria为1.797 μmol/L.藤黄酸具有较强的诱导白血病细胞凋亡的效应,0.4 μmol/L藤黄酸即能诱导15.1%的HL-60细胞发生凋亡.当藤黄酸浓度达到1.6 μmol/L时,总凋亡率为79.0%,且该效应并不依赖于细胞周期阻滞作用.核孔蛋白Nup88弥漫分布于白血病细胞的核浆之间,以细胞浆和核膜为主,经藤黄酸干预后,Nup88蛋白和mRNA的表达水平明显下降,主要集中于核膜的胞浆面,偶见胞浆中表达.结论 藤黄酸能明显抑制HL-60白血病细胞的增殖,并诱导其凋亡;藤黄酸诱导的核孔蛋白Nup88的重新分布和表达量的下调可能参与了其诱导凋亡作用.
