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香兰素衍生物对细胞增殖和辐射敏感性的影响
目的香兰素是天然的食品添加剂,是已知对DNA修复蛋白DNA-PKcs具有一定抑制.香兰素0.5 mmol/L时有显著的抑制细胞增值的作用.本研究旨在从香兰素衍生物中筛选抗癌与辐射增敏药,且研究药物增强辐射敏感性的机制.
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重楼皂苷Ⅰ诱导G2/M期阻滞及干扰微管结构抗结肠癌HCT116细胞作用机制
目的:探讨重楼皂苷Ⅰ (PPI)对人结肠癌HCT116细胞周期的影响,并研究其作用机制.方法:采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测PPI对HCT116细胞的体外抑制活性;采用Hoechst33258染色法观察PPI对HCT116细胞核数量的影响;采用流式细胞仪检测PPI对HCT116细胞周期的影响;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中细胞周期蛋白依赖性激酶(CDC2)和细胞分裂周期蛋白25同源蛋白C(CDC25C)蛋白的表达和活性,利用细胞免疫荧光和激光扫描共聚焦显微镜检测PPI对HCT116细胞微管的影响.结果:PPI以剂量～时间依赖的方式抑制HCT116的体外增殖,Hoechst 33258染色发现PPI处理组双核细胞数量明显增加(P ＜0.05,P＜0.01);将其细胞周期阻滞于G2/M期;PPI未能抑制G2/M期相关蛋白CDC2,CDC25C的表达和活性,却有促进作用;PPI可导致细胞微管结构紊乱.结论:PPI会导致HCT116细胞阻滞在G2/M期,其作用机制与干扰细胞内微管结构有关.
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双氢青蒿素对人胰腺癌细胞系增殖和凋亡的影响
目的 探讨双氢青蒿素对人胰腺癌细胞(PANC-1)增殖活性及凋亡的影响,及其作用机制.方法 30、60、120、240和480 μmol/L双氢青蒿素作用PANC-1 48 h后,采用MTT法检测双氢青蒿素对PANC-1增殖活性的影响,流式细胞术检测其细胞周期和凋亡的变化,Western blotting检测细胞内周期相关蛋白cyclin B1、Cdk1、p21及凋亡相关蛋白Bcl-2,Bax,Caspase-3,Caspase-9和细胞色素C(Cyto C)蛋白表达变化.结果 MTT实验结果表明,30～480 μmol/L双氢青蒿素对PANC-1增殖活性具有明显的抑制作用(P＜0.05).流式细胞仪检测结果显示,双氢青蒿素可以使PANC-1细胞周期阻滞于G2/M期,并诱发PANC-1细胞发生凋亡,且随药物浓度呈现升高趋势(P＜0.05).Western blotting结果显示,双氢青蒿素作用后周期相关蛋白Cdk1和Cyclin B1蛋白表达降低,而P21蛋白表达升高.凋亡相关蛋白Bcl-2蛋白表达下调,Bax蛋白表达上调,Bax/Bcl-2蛋白表达比例升高,cleaved Caspase-3,cleaved Caspase-9和Cyto C蛋白表达升高.结论 双氢青蒿素能抑制PANC-1增殖并诱发细胞凋亡,其凋亡机制可能与线粒体途径相关.
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二烯丙基二硫下调MCL-1诱导K562细胞G2/M阻滞及其机制
目的:研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)下调MCL-1诱导人白血病K562细胞周期阻滞及其机制.方法:采用CCK-8检测DADS对K562细胞增殖的作用;流式细胞术观察DADS与沉默MCL-1对K562细胞周期的影响;Western blot检测MCL-1、PCNA和CDK1表达;免疫共沉淀方法分析MCL-1与PCNA及CDK1结合作用.结果:15、30、60、120、240 μmol/L DADS对K562细胞增殖抑制率分别为32.48％、59.34％、66.42％、77.06％和81.05％ (P ＜0.05).60和120 μmol/L DADS分别作用K562细胞24和48 h后,GJM期细胞分别增加到18.6％与34.4％和17.5％与28.5％(P＜0.05).沉默MCL-1可阻滞K562细胞于G2/M,沉默MCL-1加DADS(60 μmol/L)较单独DADS和沉默MCL-1明显增强(P＜0.05).DADS可明显下调MCL-1、PCNA与CDK1表达(P＜0.05).DADS处理K562细胞8h,MCL-1与结合的PCNA和CDK1较对照组显著下调(P＜0.05).结论:DADS可通过下调MCL1继而降低PCNA与CDK1表达,抑制K562细胞增殖,细胞阻滞于G2/M期,沉默MCL-1可增强DADS的作用.
关键词： 二烯丙基二硫 人白血病K562细胞 Mcl-1 G2/M期阻滞 siRNA -
活化Chk1引起的G2/M期阻滞在调节K562/A02细胞耐药中的机制探讨
本研究探讨活化的Chk1对白血病细胞周期及凋亡的影响,探究Chk1调控肿瘤细胞耐药的机制.以慢性粒细胞白血病细胞系K562及其耐药细胞系K562/A02(耐阿霉素)为研究对象,与阿霉素共孵育后,用流式细胞术检测细胞周期分布,RT-PCR检测Chk1mRNA表达水平,Western blot检测转染前后Chk1磷酸化水平;靶向Chk1shRNA抑制细胞内Chk1的表达后,用流式细胞术检测阿霉素作用后细胞的凋亡情况.结果表明:阿霉素致K562/A02细胞阻滞在G2/M期的细胞百分率为(54.12±0.57)%,显著高于K562细胞(36.99±1.28)%; Chk1mRNA表达水平在K562与K562/A02细胞间无显著差异; Chk1磷酸化水平在K562/A02细胞为0.79 ± 0.56,在K562细胞为0.27 ± 1.47,其差异有统计学意义.转染Chk1shRNA后,两株细胞的Chk1磷酸化水平显著下降.转染组K562、K562/A02细胞凋亡率分别是空载体转染组的1.30倍和3.84倍.结论: Chk1的活化水平调控着K562/A02细胞对阿霉素的敏感性.
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大蒜素对人胃癌细胞SGC-7901及BGC-823 G2/M期的阻滞调节机制
目的:研究大蒜素对人胃癌细胞SGC-7901及BGC-823 G2/M期阻滞作用及其调节机制.方法:应用MTT法测定大蒜素对人胃癌细胞株SGC-7901和BGC-823细胞增殖抑制率及72 h的IC50.通过流式细胞仪检测IC50浓度的大蒜素对SGC-7901和BGC-823细胞周期的影响.应用免疫组化染色检测大蒜素作用前后SGC-7901和BGC-823细胞CDC2和CyclinB蛋白表达.结果:不同浓度的大蒜素可以抑制人胃癌细胞株SGC-7901和BGC-823的增殖,且随着大蒜素浓度的增大,抑制率逐渐增高.大蒜素抑制SGC-7901细胞增殖50%的药物浓度(IC50):72 h为23 mg/L;大蒜素抑制BGC-823细胞增殖50%的药物浓度(IC50):72 h为35 mg/L大蒜素作用于两种细胞,其细胞周期均发生了明显的变化,主要表现为G0/G1期细胞减少,G2/M期细胞增多(SGC-7901细胞24,48 h vs对照:26.47±2.54%,28.88±2.75% vs 24.30±2.74%,P＜0.01;BGC-823细胞24,48 h vs对照:22.78±1.45%,24.87±1.61% vs 20.32±1.34%,P＜0.01),S期细胞无明显变化.未经大蒜素处理的两种细胞,CDC2和CyclinB蛋白表达均为阳性,大蒜素处理后,CDC2和CyclinB蛋白表达下降.SGC-7901细胞经23 mg/L大蒜素处理后,CDC2蛋白相对阳性表达率为87.2%;CyclinB蛋白相对阳性表达率为59.3%.BGC-823细胞CDC2蛋白在35 mg/L大蒜素作用后,相对阳性表达率为84.4%;CyclinB蛋白相对阳性表达率为62.8%,与对照组相比均有显著性差异(P＜0.01).结论:大蒜素使人胃癌细胞株SGC-7901和BGC-823停滞于G2/M期,其机制是通过CDC2和CyclinB蛋白表达下降实现的.
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重离子束和X射线对NCI-H520细胞周期和凋亡影响比较
目的 探讨重离子束(12C6+)和X射线对人肺癌细胞NCI-H520细胞周期分布和凋亡的影响,以及放射敏感性差异和可能机制.方法 体外培养NCI-H520细胞,采用克隆形成实验检测NCI-H520重离子束(12 C6+)和X射线照射后细胞存活分数;采用流式细胞仪和Hoechst染色分别检测照射后细胞周期和凋亡率;采用实时荧光定量PCR检测DNA-PKcs、ATM和ATR的mRNA表达水平.结果 重离子束和X射线在2、4、6 Gy照射后细胞存活分数分别为0.39±0.09和0.67±0.20(t=7.09,P=0.002)、0.10±0.01和0.33±0.08(t=5.75,P=0.035)、0.01±0.01和0.08±0.02(t=1.64,P=0.041);G2/M期细胞分别为37.15±6.40和20.49±1.56(t=3.51,P=0.032)、52.72±1.51和29.78±4.74(t=4.83,P=0.012)、61.61±1.30和38.37±6.55(t=4.89,P=0.005);凋亡率分别为(38.68±0.71)％和(27.29±2.83)％(t=4.67,P=0.044)、(67.95±3.54)％和(53.00±4.95)％(t=5.22,P=0.028)、(88.41±3.54)％和(77.60±3.39)％(t=4.12,P=0.047).重离子束照射剂量为2、4 Gy时,DNA-PKcs表达显著高于X射线照射,重离子束照射后DNA-PKcs表达随剂量增加逐渐下降.结论 NCI H520对重离子束的放射敏感性高于X射线,其机制可能与重离子束照射后G2/M期阻滞和DSB损伤更显著,而DNA-PKcs表达随剂量增加逐渐降低影响DSB修复,进而放射敏感性高有关.
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宫颈癌细胞株和正常间质细胞株受X线照射后的辐射效应
目的 用宫颈癌、正常血管内皮和正常成纤维细胞株体外模拟宫颈癌实质和间质组织,研究其受到不同剂量放射线照射后的辐射效应.方法 采用宫颈腺癌细胞株HeLa,宫颈鳞癌细胞株SiHa、C33A、Caski,人脐静脉内皮细胞株ECV304,及小鼠成纤维细胞株NIH/3T3细胞,分别用6MV的X线(300 cGy/min)照射6和10 Gy,24和48 h后收集细胞,行PI染色,流式细胞术检测凋亡率和细胞周期变化.结果 细胞株受到照射后,C33A凋亡率高,而SiHa凋亡率低,其余细胞株(包括ECV304与NIH/3T3细胞)均介于两者之间;各宫颈癌细胞株及NIH/3T3照射10 Gy后48 h的凋亡率较6 Gy稍高(P＞0.05),而ECV304照射10 Gy后48 h的凋亡率(13.04%±1.08%)比照射6 Gy(6.51%±0.61%)明显升高(P=0.001);各细胞株受到不同剂量照射后,均表现出明显的G2/M期阻滞,且阻滞细胞百分比随照射剂量增加而增加;受到照射后一般在24～48 h G2/M期阻滞细胞百分比高.结论 高剂量照射可以提高血管内皮细胞的凋亡率,并导致剂量依赖性的G2/M期阻滞,为预测宫颈癌的高剂量放疗提供理论依据.
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125Ⅰ粒子持续低剂量率照射对人喉癌细胞系Hep-2的抑制作用
目的 探讨125Ⅰ粒子持续低剂量率照射对人喉癌细胞Hep-2的抑制作用及其机制.方法 实验分为空白对照组、X射线单次高剂量率照射组(SDR组)、125Ⅰ粒子持续低剂量率照射组(125Ⅰ-CLDR组).克隆形成实验检测Hep-2细胞在两种照射方式下的放射敏感性,并计算125Ⅰ-CLDR的相对生物学效应.锥虫蓝染色计数两种照射方式下Hep-2细胞的增殖情况.流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期阻滞情况.Western blot检测细胞内总γ-H2AX的表达水平.结果 Hep-2细胞对125Ⅰ-CLDR的放射敏感性高于SDR,125Ⅰ-CLDR相对生物学效应约为1.61,且α/β比值高于SDR.SDR和125Ⅰ-CLDR均能抑制Hep-2细胞增殖(=30.9、40.7,P＜0.05),且后者的抑制作用更为明显(t=9.8,P＜0.05).125Ⅰ-CLDR诱导细胞凋亡和G2/M期细胞阻滞的效应强于SDR(t =5.8、19.8,P＜0.05).结论 125Ⅰ-CLDR对Hep-2细胞的抑制作用高于SDR,主要机制是降低Hep-2细胞的DNA损伤修复能力,促进细胞死亡;诱导细胞凋亡和G2/M期阻滞,抑制细胞再增殖.
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125I粒子持续低剂量率照射对人食管癌细胞系KYSE150抑制作用及其机制研究
目的 研究125I粒子持续低剂量率照射对人食管癌细胞系KYSE150的抑制作用及其机制.方法 根据不同照射方式,将KYSE150细胞分成空白对照组、高剂量率单次外照射组(SDR,1.052 Gy/min)、持续低剂量率照射组(125 I-CLDR,2.77 cGy/h).克隆形成实验衡量KYSEI50细胞对两种照射方式的敏感性,计算125I-CLDR的相对生物学效应(RBE).流式细胞仪分析不同照射方式对细胞凋亡和周期的影响.蛋白免疫印迹法检测不同照射方式下KYSE150细胞内γ-H2AX和Bax的蛋白表达量变化.结果 KYSE150细胞对125I-CLDR的放射敏感性高于SDR,125I-CLDR的相对生物学效应约为1.56;与SDR相比,125I-CLDR能更显著地诱导KYSE150细胞的早期和晚期凋亡(=4.07,11.08,P＜0.05),提高G2/M期细胞比例(t=11.25,P＜0.05);125I-CLDR组DNA损伤信号蛋白γ-H2AX和促凋亡蛋白Bax的表达水平显著升高.结论 与SDR相比,125I-CLDR对人食管癌细胞KYSE150的抑制作用更为显著,其主要机制可能是电离辐射后肿瘤细胞克隆形成能力受损,DNA损伤严重,细胞凋亡增多,而G2/M期细胞比例升高,细胞放射敏感性增强.
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60Coγ射线对盐诱导激酶2的诱导表达作用
目的 探讨电离辐射对盐诱导激酶2(SIK2)蛋白和mRNA的诱导表达作用及细胞周期相关性.方法 HepG2细胞用60Coγ射线照射,蛋白质印迹法和实时定量PCR法分别检测细胞的SIK2蛋白和mRNA的表达,胸腺嘧啶双阻滞法同步化细胞,流式细胞术测定细胞周期的变化.结果 HepG2细胞2 Gy照射后4、6、10h,SIK2蛋白表达显著增加(t=3.00、3.98、4.17,P＜0.05);10 Gy大剂量照射后,SIK2蛋白表达增加的趋势与2 Gy一致,但增加的幅度较前者低.2和10 Gy照射后SIK2基因mRNA均在10 h出现了增加(t=4.54、2.74,P＜0.05).照后10 h出现了细胞G2/M阻滞高峰.利用同步化细胞分析表明,细胞周期不同时相中SIK2 mRNA的表达无明显差别.结论 2和10 Gy照射均能诱导SIK2蛋白表达增加,2 Gy的作用更加明显.细胞照射后10 h,SIK2mRNA的表达水平增加,但与辐射诱发细胞G2/M期阻滞引起不同时相细胞的分布变化无关.
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凋亡素2配体对食管癌细胞株Eca-109放射敏感性的影响
目的 研究凋亡素2配体(Apo-2 ligand,Apo2L),又称肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis inducing ligand,TRAIL)对体外培养食管癌细胞株Eca-109放射敏感性的影响.方法 MTT法检测TRAIL对Eca-109细胞的毒性；克隆形成实验检测TRAIL对Eca-109细胞的放射增敏作用；流式细胞仪(FCM)技术分析TRAIL对凋亡率及细胞周期的影响.结果 100～800 μg/ml TRAIL随浓度升高对Eca-109细胞的增殖抑制率增大,药物浓度与细胞抑制率正相关(r=0.981,P＜0.01),50％抑制浓度(IC50)为637 μg/ml;200 μg/ml TRAIL能增加Eca-109细胞的放射敏感性,放射增敏比为1.219；不同剂量(0～8 Gy)照射后,给药组的凋亡率均高于单照射组(F=16.97、76.65、92.86、209.66,P＜0.05),给药组G2/M期细胞比例较单照射组增加(F=9.40、84.99、87.61、2025.85,P＜0.05).结论 TRAIL可以抑制Eca-109细胞的生长,诱导细胞凋亡和G2/M期阻滞,后者可能与TRAIL的放射增敏机制有关.
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双氢青蒿素诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡及其分子机制研究
目的 探讨双氢青蒿素在体外诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡作用,并初步研究其可能分子机制.方法 25,50,100,200和400μmol·L-1双氢青蒿素作用SMMC-7721细胞24 h后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测双氢青蒿素对SMMC-7721细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,激光共聚焦显微镜检测凋亡形态的变化,Rho123染色法检测细胞线粒体膜电位变化;Western blot法检测细胞内Bel-2,Bax,Cleaved Caspase-3,Cleaved Caspase-9和Cyto C蛋白表达变化.结果 MTT实验结果表明,25 ～400 μmol·L-1双氢青蒿素对SMMC-7721细胞增殖具有明显的抑制作用.流式细胞仪检测周期结果显示,双氢青蒿素可以使SMMC-7721细胞周期阻滞于G2/M期.Hochest 333258染色结果显示,给药组细胞核出现染色质不均匀,核浓缩聚集、碎裂的凋亡形态.流式细胞仪检测凋亡结果显示,双氢青蒿素给药组细胞凋亡随药物浓度呈现升高趋势(P＜0.01).Rho 123染色结果显示,双氢青蒿素给药组细胞线粒体膜电位呈现明显的下降趋势(P＜0.01).Western blot结果显示,双氢青蒿素给药组细胞内Bel-2蛋白表达下调,Bax蛋白表达上调,Bax/Bcl-2蛋白表达比例升高,Cleaved Caspase-3,Cleaved Caspase-9和Cyto C蛋白表达升高.结论 双氢青蒿素能诱导SMMC-7721细胞凋亡,其凋亡机制可能与线粒体途径相关.
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葫芦素B诱导G2/M期阻滞抑制人前列腺癌DU145细胞增殖并诱导细胞凋亡研究
目的：探讨葫芦素B对人前列腺癌DU145细胞增殖及凋亡的影响。方法体外培养DU145细胞，MTT法检测不同浓度葫芦素B对DU145细胞的增殖抑制作用；流式细胞仪检测细胞周期；Hoechst 33258核染色观察细胞核的形态变化；采用流式细胞术检测细胞凋亡率；Western blot检测葫芦素B对DU145细胞周期调节蛋白Cyclin B1表达的影响。结果葫芦素B对DU145细胞的增殖有抑制作用，且呈剂量、时间依赖性；葫芦素B使DU145细胞发生G2/M期阻滞；可见细胞核染色质浓缩、核固缩、核碎裂等典型的凋亡改变；流式细胞仪检测结果显示，葫芦素B诱导DU145细胞凋亡，呈剂量依赖性；葫芦素B使DU145细胞Cyclin B1蛋白表达降低。结论葫芦素B通过诱导G2/M期阻滞抑制人前列腺癌DU145细胞增殖并诱导细胞凋亡。
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二烯丙基二硫化物诱导G2/M期阻滞对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响
目的 探讨二烯丙基二硫化物(DADS)诱导G2/M期阻滞对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响及其可能的分子机制.方法 将不同浓度的DADS分别处理卵巢癌SK-OV-3和OVCAR-3细胞,采用MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡率,裸鼠移植模型观察体内抑瘤效果.进而应用流式细胞术检测细胞周期分布的变化,Western blot检测细胞中G2/M检验点相关信号通路、增殖和凋亡相关蛋白的表达.结果 MTT法检测显示,不同浓度的DADS作用SKOV-3 (F=247.86,P=0.000)和OVCAR-3细胞(F=302.54,P=0.000)后,随着DADS浓度增高,细胞增殖抑制率明显升高,呈浓度依赖性.DADS处理24h时SK-OV-3 (F =335.12,P=0.000)和OVCAR-3细胞(F=347.43,P=0.000)的增殖抑制率明显高于处理12 h和48 h时的细胞抑制率,呈明显的时间依赖性.流式细胞术检测结果显示,不同浓度的DADS作用SK-OV-3、OVCAR-3细胞后,随着DADS浓度的增高,细胞凋亡率明显升高,呈明显的浓度依赖性(P＜0.05).DADS处理24h时SK-OV-3和OVCAR-3细胞的凋亡率明显高于处理12和48h时,呈明显的时间依赖性(P＜0.05).与空白处理组相比,腹腔注射DADS溶液可明显抑制卵巢癌细胞的裸鼠移植瘤体积(F=548.23,P=0.000;F=311.84,P=0.000).将30 mg/L的DADS作用于SK-OV-3和OVCAR-3细胞24h后,与空白处理细胞相比,DADS处理后的SK-OV-3和OVCAR-3细胞中处于G2期的细胞百分率明显增加(F=375.11,P=0.000;F=256.48,P=0.000).将30 mg/L DADS分别作用于SK-OV-3和OVCAR-3细胞24h后,p-Chk1 (ser345) (F=108.89,P=0.013;F=97.58,P=0.018)、p-CDC25C(ser216) (F=87.25,P=0.025;F=114.25,P=0.009)、p-P53 (ser15) (F=112.41,P=0.011;F=255.87,P=0.000)、P21WAF1(F=246.38,P=0.001;F=141.36,P=0.005)和p-CDK1(Thr14/Tyr15)蛋白(F=298.12,P=0.000;F=233.15,P=0.000)的表达明显增加,CDK1 (F=308.24,P=0.000;F=257.55,P=0.000)和CyclinB1蛋白(F =223.15,P=0.001;F=241.28,P=0.000)的表达明显减少,增殖和凋亡相关蛋白PCNA(F=77.36,P=0.031;F=157.28,P=0.001)、Ki-67(F=205.64,P=0.007;F=315.22,P=0.000)和Survivin蛋白(F=122.13,P=0.013;F=188.24,P=0.000)表达明显减少,Cleaved-caspase3蛋白表达明显增加(F=86.46,P=0.023;F=99.11,P=0.009).结论 DADS可抑制卵巢癌细胞增殖,诱导其凋亡;其分子机制可能与G2/M检验点Chk1-CDC25C和P53-P21WAF1通路激活、CDK1活性降低、CDK1和CyclinB1蛋白表达减少,终导致卵巢癌细胞G2/M期阻滞有关.
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金雀异黄素抑制人胃癌细胞增殖与G2/M期阻滞作用的体外研究
目的: 研究金雀异黄素(genistein, Gen)对人胃癌SGC-7901细胞增殖抑制作用及对细胞周期的影响.方法: 采用3H-TdR掺入液闪计数法观察Gen对人胃癌细胞增殖影响,流式细胞仪分析细胞周期分布,免疫组化和Western Blotting分别检测cyclin B、P21waf1/cip1蛋白表达情况.结果: Gen对胃癌细胞生长有显著抑制作用,使细胞生长停滞于G2/M期,并使细胞cyclinB、P21waf1/cip1蛋白表达增加,且呈剂量-效应关系.结论: Gen在此剂量下抑制胃癌细胞增殖、诱导G2/M期阻滞与其稳定cyclinB蛋白和上调P21waf1/cip1蛋白表达有关.
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三氧化二砷诱导T315I突变细胞KBM5R凋亡机制研究
伊马替尼( Imatinib,IM)是以bcr-abl融合蛋白为作用靶点的治疗慢性髓系白血病(CML)有效的酪氨酸激酶抑制剂(TKI),但长期应用可使部分CML患者产生IM耐药性[1],特别是bcr-abl基因T315I点突变的CML患者对第一代和第二代TKI均具有较强的耐药性[2].我们前期临床试验已经证明,三氧化二砷( ATO)对T315I突变的KBM5细胞(KBM5R)增殖具有明显的抑制作用,可导致细胞G2/M期阻滞、诱导细胞凋亡,并且ATO对KB M5R细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用明显强于野生型KBM5细胞[3-4].我们通过检测ATO对KBM5、KBM5R细胞bcr-abl mRNA和蛋白水平的变化及其对下游相关信号传导途径PI3K-AKT、JAK-STAT5的影响,探讨ATO对T315I突变KBM5R细胞诱导凋亡的作用机制.
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Gadd45a基因对细胞调控作用的研究进展
细胞周期及生长的调控是细胞存活必不可少的,在细胞增殖及细胞周期控制有许多复杂的机制.Gadd45a基因为生长阻滞和DNA损伤修复基因,是重要的抑癌基因,是p53、BRCI基因调控的下游基因,调控细胞周期阻滞,细胞纺锤体检查点调控,DNA修复和诱导细胞凋亡.在细胞对外界损伤反应调控网络中扮有重要角色,在维持基因组稳定性和抑制肿瘤发生发展的过程中发挥重要的作用.Gadd45a作为控制癌细胞增殖代谢途径的重要组成部分,成为一个值得新兴的药物进一步研究靶点.
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抑制脂肪酸合成酶对大肠癌细胞生长的影响及其机制
背景:流行病学研究显示,大肠癌的发生、发展与饮食中脂肪酸的含量和种类有关,而目前有关脂肪酸代谢与大肠癌关系的研究较少.目的:探讨抑制脂肪酸合成酶(FAS)对人大肠癌细胞生长的影响及其作用机制.方法:在体外实验中应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察FAS抑制剂Cerulenin对大肠癌细胞LoVo生长的抑制作用,并通过流式细胞仪(FCM)对细胞周期变化和细胞凋亡进行检测.结果:Cerulenin可抑制LoVo细胞生长,其抑制作用具有剂量依赖性.2.5、5、10和20mg/L Cerulenin作用48h的抑制率分别为3.6%±3.3%、7.8%±4.0%、38.5%士1.6%和58.7%士5.6%,与对照组比较有显著差异(P＜0.05).FCM测定显示,Cerulenin可引起LoVo细胞发生G2/M期阻滞.10mg/L Cerulenin作用48 h可使68.2%士3.2%的LoVo细胞阻滞于G2/M期,与对照组比较有显著差异(P＜0.05).Cerulenin可诱导LoVo细胞发生细胞凋亡,10mg/L Cerulenin作用12、24和48h后,LoVo细胞的凋亡率分别为1.3%士0.9%、4.7%士1.4%和39.0%士5.8%,后两组与对照组比较有显著差异(P＜0.05).结论:抑制FAS可抑制大肠癌细胞生长,其机制可能是诱导细胞发生G2/M期阻滞和细胞凋亡.
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乳腺癌中脂肪酸代谢的异常变化及其意义
目的:探讨乳腺癌细胞中脂肪酸代谢的变化及抑制脂肪酸合成酶对乳腺癌细胞生长的影响及其作用机制.方法:通过RT-PCR方法对乳腺癌等四种肿瘤细胞株中FAS mRNA的表达进行观察比较;应用MTT法观察脂肪酸合成酶抑制剂浅蓝霉素(Cerulenin)对乳腺癌细胞MCF-7生长的影响;通过流式细胞仪检测细胞周期变化. 结果:FAS mRNA在乳腺癌细胞MCF-7中呈高表达.浅蓝霉素可抑制乳腺癌细胞MCF-7生长,2.5、5、10和20 mg/L的浅蓝霉素作用48 h的抑制率分别为(43.47±4.58)%、(62.92±2.68)%、(81.93±0.91)%和(67.7±12.27)%(与对照组比P<0.05).软脂酸可以部分逆转浅蓝霉素对MCF-7细胞生长的抑制作用.流式细胞仪测定显示,浅蓝霉素引起MCF-7细胞发生G2/M期阻滞.48 h组,浅蓝霉素10 mg/L使(63.33±18.31)%的MCF-7细胞阻滞于G2/M期(与对照组比P<0.01). 结论:乳腺癌细胞中脂肪酸合成代谢增强,抑制脂肪酸合成酶可诱导乳腺癌细胞发生G2/M期阻滞,进而抑制乳腺癌细胞的增殖.
