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葫芦素B纳米脂质载体对结肠癌和乳腺癌细胞抑制及凋亡作用的研究
目的：研究葫芦素B纳米脂质载体（CuB-NLC）对结肠癌Lovo细胞，乳腺癌MCF-7细胞的体外细胞毒性。方法：结肠癌Lovo细胞，乳腺癌MCF-7细胞常规复苏、培养及传代，取处于对数生长期的细胞用于实验。采用CCK-8法检测质量浓度为0、0.0625、0.25、1.00、4.00、16.0 mg/L的CuB-NLC对结肠癌Lovo细胞，乳腺癌MCF-7细胞的毒性，流式细胞仪检测结肠癌Lovo细胞，乳腺癌MCF-7细胞的细胞周期进程及Annexin V/PI双染法检测细胞的凋亡率。结果：与葫芦素B （CuB）相比CuB-NLC对结肠癌Lovo细胞，乳腺癌MCF-7细胞生长抑制作用明显增强(P＜0.05)，且这种抑制作用随药物浓度增加而增强。CuB组及CuB-NLC组作用于结肠癌Lovo细胞、乳腺癌MCF-7细胞48 h后，与NLC空白组及DMSO对照组相比较，CuB及CuB-NLC均能够引起结肠癌Lovo细胞、乳腺癌MCF-7细胞G2/M期阻滞，同时伴有G0/G1期细胞减少， CuB-NLC组的作用更加明显，有统计学差异(P＜0.05)。Annexin V/PI双染法检测结果表明，CuB-NLC能显著诱导结肠癌Lovo细胞，乳腺癌MCF-7细胞凋亡。结论：葫芦素B纳米脂质载体能够抑制结肠癌Lovo细胞，乳腺癌MCF-7细胞的增殖，诱导细胞凋亡。
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葫芦素B联合呋喃唑酮对酒精依赖型犬的呕吐反应的影响
研究酒精依赖性犬在服用葫芦素B和呋喃唑酮片的呕吐反应.方法:犬分为4组,n=4,即呋喃唑酮组,葫芦素B联合呋喃唑酮低剂量组、中剂量组以及高剂量组.连续3个月饮用52％(v/v)白酒后,戒断饮酒1d,犬选择饮用酒精水,证明酒精依赖模型建立,给予不同药物观察30,60,90min呕吐次数.结果:发现中剂量组中的呕吐反应明显(P＜0.05或P＜0.01).结论:葫芦素B联合呋喃唑酮治疗酒精依赖疗效好,呕吐反应次数多.
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甜瓜蒂中主要四环三萜结构鉴定及葫芦素B,葫芦素D含量测定
目的:阐明甜瓜蒂中主要四环三萜类成分化学模式,建立HPLC测定甜瓜蒂药材中葫芦素B和葫芦素D含量的方法.方法:采用UPLC-ESI-Orbitrap-MS/MS技术分析甜瓜蒂中主要的四环三萜类成分,Eclipse XDB-C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),以0.1％甲酸-乙腈溶液为流动相梯度洗脱;采用RP-HPLC法测定7批甜瓜蒂药材中葫芦素B和葫芦素D含量,Inert Sustain C18色谱柱(4.6 mm×250mm,5μm),以0.1％冰乙酸溶液(含庚烷磺酸钠1 g·L-1)-乙腈为流动相,检测波长228 nm.结果:在化学模式定性分析中,共发现并初步鉴定出甜瓜蒂中主要的8种四环三萜类成分,包括雪胆素甲,异雪胆素甲,葫芦素I,葫芦素D,葫芦素B及25-脱乙酰基葫芦素B的3个同分异构体;在定量分析中,葫芦素B,葫芦素D与有关物质分离度均符合要求,其质量浓度分别在49.5～297.0 mg·L-1(r =0.999 99),10.3 ～61.8mg·L-1 (r=0.9999)与峰面积呈现良好的线性关系,平均回收率分别为99.18％,RSD 1.0％;99.13％,RSD 1.1％.结论:该研究基本阐明了甜瓜蒂中主要的四环三萜类成分,并建立了用于定量的HPLC方法,准确度高,重复性好,可用于甜瓜瓜蒂药材中葫芦素B,葫芦素D的含量测定.
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高效液相色谱法测定大方油栝楼药材中葫芦素B的含量
目的:建立大方油栝楼药材中葫芦素B的高效液相色谱测定方法.方法:色谱柱为Hypersil C18柱(4.60 mm×250mm,5μm),流动相为甲醇-水(70:30),检测波长为227 nm.结果:葫芦素B的线性范围为(0.15～1.81)μg,加样回收率为98.69%.结论:所建立的方法准确、可靠、重复性好,可用于大方油栝楼药材中葫芦素B的含量测定.
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葫芦素B磷脂胆酸盐混合胶束口腔速溶膜的制备、表征和抗肿瘤活性研究
该研究制备了葫芦素B磷脂胆酸盐混合胶束的口腔溶吸膜,考察了葫芦素B磷脂胆酸盐混合胶束利用口腔速吸膜固化前后的包封率、粒径、Zeta电位、多分散性系数、膜剂的外观形态、崩解时限以及葫芦素B在小鼠的体内药效学性质.该研究中制备的速溶膜外观呈均匀的淡黄色,可以在30 s内完全崩解,固化后的葫芦素B磷脂胆酸盐混合胶束在室温下储存120 d后,包封率、粒径、Zeta电位和多分散性系数分别是(43.36±2.12)％,(108.82±5.28) nm,(-34.18 ±1.07)mV,0.088 ±0.012;未固化的葫芦素B磷脂胆酸盐混合胶束则分别是(41.26±2.22)％,(181.82 ±4.48) nm,(-30.67 ±0.81)mV,0.092 ±0.012.包封在磷脂胆酸盐混合胶束后,葫芦素B溶解度明显提升.相较于葫芦素B混悬液,包封在磷脂胆酸盐混合胶束中葫芦素B对肿瘤细胞的生长抑制率明显提升.利用口腔速溶膜固化前后葫芦素B磷脂胆酸盐混合胶束对小鼠肿瘤的抑制率没有明显改变,分别是(93.17±0.43)％,(93.24±0.21)％.实验结果说明说磷脂胆酸盐混合胶束可以有效提高葫芦素B在小鼠体内的抗肿瘤活性,利用口腔速吸膜固化后胶束稳定性明显提高且葫芦素B的药效学性质没有明显改变.
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外翻肠囊法研究葫芦素B胆盐磷脂混合胶束大鼠肠吸收动力学
研究葫芦素B胆盐磷脂混合胶束(Cu B-SDC/PLC-MMs)在大鼠不同肠段的吸收动力学特征,并与葫芦素B混悬液进行对比.该研究采用外翻肠囊法制备离体肠吸收模型,高效液相色谱法测定葫芦素B的含量,研究Cu B-SDC/PLC-MMs在大鼠十二指肠、空肠、回肠、结肠的吸收状况,并考察不同质量浓度对肠吸收的影响.结果显示Cu B-SDC/PLC-MMs在不同肠段不同浓度下的吸收均为线性吸收(R2均大于0.9),符合零级吸收,且各肠段的吸收速率常数Ka随着药液中葫芦素B质量浓度的增加而增加,提示其吸收机制可能为被动吸收.Cu B-SDC/PLC-MMs在回肠段吸收好,且各肠段的吸收均高于葫芦素B混悬液.磷脂胆盐混合胶束能显著增强葫芦素B的肠吸收,该肠吸收的研究为其进一步合理固化提供依据.
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葫芦素B纳米混悬凝胶剂的制备及其体外透皮研究
目的 制备葫芦素B纳米混悬凝胶剂,并考察其体外透皮效应.方法 采用高压均质法制备葫芦素B纳米混悬剂,通过单因素法优化处方和制备工艺,再以卡波姆940为基质制成凝胶剂;采用Franz扩散池法进行体外透皮试验,比较葫芦素B纳米混悬凝胶剂及葫芦素B凝胶剂的体外经皮渗透量和渗透速率.结果 24h葫芦素B纳米混悬凝胶剂较葫芦素B凝胶剂累积渗透量提高214％,渗透速率提高2.17倍.结论 葫芦素B纳米混悬凝胶剂能提高葫芦素B的透皮吸收效果.
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葫芦素B标准品的制备工艺研究
目的 由于现在使用的葫芦素B标准品制备工艺限制,导致市场上葫芦素B标准品价格昂贵,而且标准品纯度不能完全达到要求,作者希望通过研究新的制备工艺,来改善目前的市场状况.方法 在实验室采用正反相色谱柱分离提纯制备.结果 制备出纯度>98.5%的标准品,并且产量也得到提高.结论 新的制备工艺在得到完善后,将解决产品生产、质量控制等多方面问题.
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葫芦素B抗肿瘤作用及其机制研究进展
葫芦素是从葫芦科等植物中分离的三萜类天然产物,具有多种药理作用.葫芦素B是葫芦素家族的重要成员,对多种肿瘤具有抑制作用,是潜在的抗肿瘤药物.葫芦素B能够抑制肿瘤细胞STAT3转录因子的活化,干扰丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路,诱导细胞周期阻滞于G2/M期,诱导肿瘤细胞凋亡,引起细胞骨架变化.越来越多的研究表明,葫芦素B的抗肿瘤作用可能与其破坏肌动蛋白细胞骨架的活性密切相关.本文综述了葫芦素B的抗肿瘤作用及其可能的机制.
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血浆中葫芦素B的高效液相色谱测定方法研究
目的建立高效液相色谱法测定血浆中葫芦素B浓度的方法,研究葫芦素注射剂在小鼠体内的药动学.方法采用高效液相色谱法,色谱柱:Hypersil ODS C18,流动相:甲醇-水(72:28),筛选雌酚酮作内标.样品经萃取纯化后进样,检测波长228nm,按内标法定量测定.结果标准曲线在0.5～15μg@mL-1内有良好线性关系(r=0.9962),方法回收率在94.11%～99.77%,检测限4 ng,小鼠血浆中低检测浓度为50 ng@mL-.日内RSD小于12.12%,日间RSD小于15.63%.葫芦素水针剂小鼠静脉给药后体内的药-时过程符合二室模型.结论首次建立的高效液相色谱法测定葫芦素B血药浓度的方法简便,快速准确,灵敏度高,适用于测定血浆中葫芦素B浓度及体内的药动学研究.
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甜瓜蒂提取工艺研究
目的 优选甜瓜蒂提取工艺条件.方法 以乙醇浓度、乙醇用量、提取时间和提取次数为考察因素,以葫芦素B含量为评价指标,采用正交试验优选佳提取工艺.结果 佳工艺条件为采用超声波提取法,乙醇浓度为55％,50倍量乙醇,提取2次,每次45分钟.结论 该提取工艺稳定可行,评价指标可控,对于规范甜瓜蒂的提取工艺和甜瓜蒂药材的质量控制具有一定的意义.
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葫芦素B对人肺鳞癌NCI-H520细胞增殖及凋亡的影响
目的：探讨葫芦素B对人肺鳞癌NCI-H520细胞增殖及凋亡的影响。方法体外培养NCI-H520细胞，MTT法观察葫芦素B对细胞增殖的影响；倒置相差显微镜、Hoechst 33258荧光染色法观察葫芦素B作用前后细胞形态的变化；采用流式细胞术检测细胞凋亡率；采用Westen blot方法检测葫芦素B对T-STAT3、p-STAT3表达的影响。结果葫芦素B对NCI-H520细胞的增殖有抑制作用，且呈剂量、时间依赖性；葫芦素B处理组细胞形态发生显著性改变，细胞皱缩、变圆，可见胞核染色质浓缩、核固缩、核碎裂等典型的凋亡改变；流式细胞仪检测结果显示NCI-H520细胞凋亡率随葫芦素B作用浓度增加而增加，呈剂量依赖性；葫芦素B呈剂量依赖性抑制p-STAT3蛋白的表达，对T-STAT3的表达无影响。结论葫芦素B可能通过抑制STAT3信号通路的活化抑制NCI-H520细胞的增殖并诱导细胞凋亡。
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葫芦素B诱导G2/M期阻滞抑制人前列腺癌DU145细胞增殖并诱导细胞凋亡研究
目的：探讨葫芦素B对人前列腺癌DU145细胞增殖及凋亡的影响。方法体外培养DU145细胞，MTT法检测不同浓度葫芦素B对DU145细胞的增殖抑制作用；流式细胞仪检测细胞周期；Hoechst 33258核染色观察细胞核的形态变化；采用流式细胞术检测细胞凋亡率；Western blot检测葫芦素B对DU145细胞周期调节蛋白Cyclin B1表达的影响。结果葫芦素B对DU145细胞的增殖有抑制作用，且呈剂量、时间依赖性；葫芦素B使DU145细胞发生G2/M期阻滞；可见细胞核染色质浓缩、核固缩、核碎裂等典型的凋亡改变；流式细胞仪检测结果显示，葫芦素B诱导DU145细胞凋亡，呈剂量依赖性；葫芦素B使DU145细胞Cyclin B1蛋白表达降低。结论葫芦素B通过诱导G2/M期阻滞抑制人前列腺癌DU145细胞增殖并诱导细胞凋亡。
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60Co-γ射线辐照对小儿清肺丸中5种有效成分的影响
目的 建立同时测定小儿清肺丸中葫芦素B、葫芦素E、白花前胡甲素、白花前胡乙素和白花前胡素E5种活性成分含量的方法,考察60Co-γ射线辐照前后有效成分含量的变化.方法 采用Agilent-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相A为甲醇-乙腈(1∶1),B为0.5％冰醋酸水溶液,梯度洗脱,检测波长分别为230、321 nm,体积流量为1.0 mL/min,柱温25℃.分别选择辐照剂量为2、4、6、8 kGy对小儿清肺丸进行辐照,比较辐照前后小儿清肺丸中5种活性成分含量的变化,并进行成组t检验考察其显著情况.结果 葫芦素B、葫芦素E、白花前胡甲素、白花前胡乙素和白花前胡素E分别在0.049～1.247、0.079～1.973、0.056～1.406、0.028～0.705、0.028～0.693μg有良好线性关系,平均加样回收率分别为101.2％、99.7％、99.9％、98.9％、100.5％,RSD分别为0.6％、0.5％、1.2％、1.1％、1.2％;经过2、4、6、8 kGy辐照后,小儿清肺丸所含有效成分葫芦素B、葫芦素E、白花前胡甲素、白花前胡乙素和白花前胡素E均有变化,经成组t检验,在超过6 kGy后,葫芦素B辐照前后含量变化显著(P＜0.05).结论 所建立的小儿清肺丸活性成分测定方法回收率高,重复性好,简单实用,可作为小儿清肺丸质控方法.在辐照剂量不超过6 kGy时,各成分变化不显著,可为小儿清肺丸辐照灭菌手段提供参考.
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葫芦素B磷脂复合物制备、表征及体外抗肿瘤活性研究
目的 制备葫芦素B磷脂复合物(CuB-PLC),对其进行理化性质评价和体外抗肿瘤活性测定.方法 采用溶剂挥发法制备CuB-PLC,用Box-Behnken设计-效应面法优化其制备工艺,考察其表观油水分配系数、粒径及形态;用X射线衍射光谱(XRD)、红外光谱(IR)综合分析CuB-PLC的形成机制,利用MTT法测定其体外抗肿瘤活性.结果 优化的CuB-PLC制备工艺为以四氢呋喃作为反应溶剂,磷脂与葫芦素B的投药物质的量比为1∶1,反应质量浓度为1.5 mg/mL,反应温度和反应时间分别为60℃和3h,复合率可达97.15％.XRD和IR分析表明葫芦素B与磷脂未形成新的化合物或混合物,而是磷脂复合物;CuB-PLC在水中的溶解度提高到原料药的3.9倍;在水中复合物粒径为(521.30±10.50) nm,多分散指数(PDI)为0.1332±0.024 0;MTT实验表明,葫芦素B与CuB-PLC对HepG2细胞增殖的半数抑制浓度(IC50)值分别为42.55、27.61 μmol/L.结论 成功制备了CuB-PLC,工艺简单可行,复合率高,水溶性有所改善,且对HepG2细胞增殖的抑制作用显著增强,为葫芦素B的制剂学研究提供了参考.
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葫芦素B抗肿瘤作用的研究进展
葫芦素B是从中草药中提取的一种化合物,它具有明显的抗肿瘤活性,包括抑制肿瘤细胞的增殖和侵袭和诱导肿瘤细胞的凋亡.葫芦素B有望成为新一代的抗肿瘤药物就葫芦素B的抗肿瘤作用做一综述.
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葫芦素B对人胃癌BGC-823细胞增殖及凋亡的影响
目的：探讨葫芦素B对人胃癌BGC-823细胞增殖及凋亡的影响及其作用的分子机制。方法体外培养BGC-823细胞，MTT法观察葫芦素B对细胞增殖的影响，采用流式细胞术检测细胞凋亡率，采用分光光度法检测Caspase-3、Caspase-9的活性，采用Western blot方法检测葫芦素B对Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。结果葫芦素B对BGC-823细胞的增殖有抑制作用，且此作用呈剂量和时间依赖性；流式细胞仪检测结果显示，葫芦素B诱导BGC-823细胞凋亡，呈剂量依赖性。葫芦素B处理后Caspase-3、Caspase-9活性升高，细胞抗凋亡蛋白Bcl-2表达减少，促凋亡蛋白Bak的表达增加。结论葫芦素B可以抑制人胃癌BGC-823细胞的增殖并诱导细胞凋亡。
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葫芦素B体外对乳腺癌细胞的生长抑制作用研究
目的 观察葫芦素B(Cucurbitacin B)对非磷酸化STAT3人乳腺癌细胞系MCF-7和磷酸化STAT3人乳腺癌细胞系MDA-MB-435S的增殖抑制和诱导凋亡作用,为临床应用提供依据.方法 用不同浓度的葫芦素B分别处理MCF-7和MDA-MB-435S细胞,48 h后用MTT法检测细胞增殖;用荧光显微镜观察细胞凋亡.结果 MTT结果显示,葫芦素B对MCF-7和MDA-MB-435S细胞的增殖抑制作用具有明显的剂量依赖性,统计学分析提示,各实验组与对照组之间差异有统计学意义(P＜0.05);荧光显微镜显示典型的细胞凋亡.结论 葫芦素B对人乳腺癌细胞的增殖具有抑制作用(与STAT3的活化状态无关),诱导乳腺癌细胞凋亡,从而发挥抗肿瘤效应.
关键词： 葫芦素B 乳腺癌 MCF-7 MDA-MB-435S 凋亡 -
葫芦素B和阿霉素联合应用在体内外对肝癌细胞H22的生长抑制作用
目的 研究葫芦素B和阿霉素联合应用在体内外对肝癌细胞H22的生长抑制作用.方法 将40只雌性昆明小鼠随机分为4组,每组10只,包括阴性对照组(生理盐水组)、阿霉素组、葫芦素B组、联合组.分别以阿霉素、葫芦素B、葫芦素B联合阿霉素处理H22细胞,培养48 h后MTT法检测细胞增殖情况.计算抑瘤率、白细胞数、胸腺指数、脾脏指数和血药浓度.结果 MTT结果显示,与阿霉素组相比,联合组对H22细胞的增殖抑制作用明显增强,联合组与阿霉素组之间、高剂量组与低剂量组之间的差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01).联合组与阿霉素组相比,抑瘤率明显增强,并且联合组阿霉素在心脏中的浓度明显降低(P<0.05).结论 葫芦素B和阿霉素联合应用具有增强抗H22肝癌作用.
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葫芦素B 通过激活线粒体途径诱导人肺癌NCI-H460细胞凋亡
目的：探讨葫芦素B 对人肺癌NCI-H460细胞增殖及凋亡的影响,并探讨其机制。方法体外培养NCI-H460细胞,MTT 法观察葫芦素B 对细胞增殖的影响,倒置相差显微镜观察细胞形态的变化,采用流式细胞术检测细胞凋亡率。采用罗丹明123(Rhodamine 123)染色,通过流式细胞仪检测线粒体膜电位(△ψm),采用Western blot 方法检测线粒体内和胞浆内的细胞色素C。结果葫芦素B 对NCI-H460细胞的增殖有抑制作用,且呈剂量、时间依赖性；葫芦素B 处理组细胞形态发生显著改变,细胞皱缩、变圆,可见胞核染色质浓缩；流式细胞仪检测结果显示葫芦素B 诱导NCI-H460细胞凋亡,呈剂量依赖性。葫芦素B 处理后线粒体膜电位显著下降,细胞色素C 由线粒体释放到胞浆中。结论葫芦素B 可以抑制人肺癌NCI-H460细胞的增殖并诱导细胞凋亡,线粒体途径参与葫芦素B 诱导的NCI-H460细胞凋亡。
