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甜瓜蒂中主要四环三萜结构鉴定及葫芦素B,葫芦素D含量测定
目的:阐明甜瓜蒂中主要四环三萜类成分化学模式,建立HPLC测定甜瓜蒂药材中葫芦素B和葫芦素D含量的方法.方法:采用UPLC-ESI-Orbitrap-MS/MS技术分析甜瓜蒂中主要的四环三萜类成分,Eclipse XDB-C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),以0.1％甲酸-乙腈溶液为流动相梯度洗脱;采用RP-HPLC法测定7批甜瓜蒂药材中葫芦素B和葫芦素D含量,Inert Sustain C18色谱柱(4.6 mm×250mm,5μm),以0.1％冰乙酸溶液(含庚烷磺酸钠1 g·L-1)-乙腈为流动相,检测波长228 nm.结果:在化学模式定性分析中,共发现并初步鉴定出甜瓜蒂中主要的8种四环三萜类成分,包括雪胆素甲,异雪胆素甲,葫芦素I,葫芦素D,葫芦素B及25-脱乙酰基葫芦素B的3个同分异构体;在定量分析中,葫芦素B,葫芦素D与有关物质分离度均符合要求,其质量浓度分别在49.5～297.0 mg·L-1(r =0.999 99),10.3 ～61.8mg·L-1 (r=0.9999)与峰面积呈现良好的线性关系,平均回收率分别为99.18％,RSD 1.0％;99.13％,RSD 1.1％.结论:该研究基本阐明了甜瓜蒂中主要的四环三萜类成分,并建立了用于定量的HPLC方法,准确度高,重复性好,可用于甜瓜瓜蒂药材中葫芦素B,葫芦素D的含量测定.
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葫芦素D对血管新生及bFGF诱导PLCγ/Erk1/2通路激活影响
目的:评价葫芦素D对血管内皮细胞增殖、迁移、成管作用的影响及其作用机制.方法:采用人脐静脉血管内皮细胞株(EA.hy926),通过CCK8细胞增殖检测、划痕实验、管腔形成实验检测葫芦素D对血管新生各环节的作用,并通过Western Blot法检测葫芦素D对bFGF介导的细胞信号通路激活的抑制作用.结果:葫芦素D对血管内皮细胞活性影响较低,同时能够明显抑制血管内皮细胞的迁移、成管能力;能够抑制bFGF刺激下FGFR2及其下游信号通路关键蛋白PLCγ、Erk1/2的磷酸化.结论:葫芦素D具有抑制血管新生的作用,其机制可能与抑制bFGF介导的信号通路激活有关.
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王瓜葫芦素D的提取及其对大鼠乳腺癌细胞增殖、凋亡和体内成瘤作用的影响
目的 从王瓜中提取葫芦素D,并观察其对大鼠乳腺癌细胞增殖、凋亡和体内成瘤作用的影响.方法 采用硅胶柱层析、葡聚糖凝胶柱层析,结合硅胶柱色谱、高效液相色谱法(HPLC)对王瓜果实进行分离纯化,运用现代光谱技术(1 H-NMR)对提取化合物(葫芦素D)的结构进行鉴定.培养大鼠乳腺癌细胞株Walker256,将细胞分为实验1、2、3组和对照组,分别加入2、4、8 μmol/L的葫芦素D和等量培养液.采用EdU法观察细胞增殖情况,TUNEL法观察凋亡情况.将80只雌性SPF大鼠随机分为Con组、Sham组、IP-L组和IP-H组,各20只.Sham组、IP-L组和IP-H组取Walker256细胞制作大鼠乳腺癌骨转移瘤模型,Con组不制作模型;IP-L组经腹腔注射0.75mg/(kg·d)的葫芦素D,IP-H组经腹腔注射1.5 mg/(kg·d)的葫芦素D,Sham组腹腔注射等量生理盐水,每天1次,连续21 d.观察各组大鼠左侧胫骨组织病理变化,测量胫骨肿瘤瘤体大小,观察毒性反应发生情况.结果 从王瓜提取物中分离出1个化合物,鉴定为葫芦素D.对照组及实验1、2、3组细胞增殖抑制率分别为5.32％±4.54％、46.17％ ±4.87％、57.37％±5.15％、64.61％ ±5.33％,细胞凋亡率分别为6.24％±4.31％、35.43％±5.09％、44.79％ ±4.92％、73.19％ ±4.86％,组间两两相比,P均＜0.05.Con组、Sham组、IP-L组、IP-H组大鼠转移瘤代谢体积平均值分别为0、2.1、1.7、1.2 cm3;IP-L组、IP-H组与Sham组相比,P均＜0.05;IP-L组与IP-H组相比,P＜0.05.Sham组大鼠胫骨骨组织结构紊乱,多处骨皮质缺损,骨髓腔内可见大量肿瘤细胞,骨小梁破坏明显;IP-L组与IP-H组骨质破坏较Sham组轻,IP-H组可见部分正常骨髓组织.Con组、Sham组、IP-L组、IP-H组分别有0、0、6、13只大鼠死亡;IP-L组、IP-H组死亡率与Con组、Sham组相比,P均＜0.05;IP-L组死亡率与IP-H组相比,P＜0.05.结论 在王瓜中分离得到葫芦素D,其可抑制大鼠乳腺癌细胞株Walker256增殖,诱导其凋亡;葫芦素D对大鼠乳腺癌骨转移瘤有生长抑制作用,但可导致大鼠死亡率增加.
