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葫芦素E对人乳腺癌细胞抑制作用及其机制的探讨
目的:研究葫芦素E(CuE)体外对人乳腺癌Bcap-37和MDA-MB-231细胞增殖的影响及其相关分子机制.方法:采用MTT法观察不同浓度CuE(0、0.1、1.0、10.0和100.0 μmol/L)作用不同时间(24、48和72 h)后对乳腺癌Bcap-37和MDA-MB-231细胞的影响；流式细胞仪检测CuE对乳腺癌细胞周期分布和细胞凋亡的影响；用蛋白质印迹法测定CuE处理后乳腺癌细胞内Pro-Caspase-3、cleaved Caspase-3及cleaved PARP蛋白水平的变化.结果:MTT结果显示CuE可显著抑制乳腺癌细胞的增殖,并呈时间和浓度依赖性,P＜0.05.在CuE(0.1、1.0、10.0和100.0 μmol/L)作用24 h后,Bcap-37和MDA-MB-231细胞增殖抑制范围分别为17％～44％和12％～56％；而在作用48和72 h后Bcap-37和MDA-MB-231细胞抑制率分别为24％～87％、36％～89％和33％～89％、61％～94％.流式细胞仪检测显示,CuE诱导乳腺癌细胞G2/M期阻滞和细胞凋亡.荧光显微镜显示,CuE处理组乳腺癌细胞出现典型的细胞核固缩现象.蛋白质印迹法结果显示,经CuE处理后乳腺癌细胞内cleaved Caspase-3及cleaved PARP蛋白水平上调,而Pro-Caspase-3水平则下降.结论:CuE可抑制乳腺癌细胞Bcap-37和MDA-MB-231细胞的增殖,并呈CuE浓度和时间依赖性,其抑制作用可能与诱导细胞凋亡和G2/M周期阻滞有关.
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葫芦素E抗肿瘤作用的研究进展
以葫芦素E、肿瘤、cucurbitacin E、cancer、tumor等作为关键词，在 PubMed、中国知网、万方等数据库中检索有关葫芦素E抗肿瘤方面的研究文献，对关于葫芦素E抗肿瘤方面的研究资料进行综述。葫芦素E对多个器官的肿瘤细胞具有明显的抑制作用，随着抗肿瘤方面研究的深入，葫芦素 E有望被开发成新一代的抗肿瘤药物。
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60Co-γ射线辐照对小儿清肺丸中5种有效成分的影响
目的 建立同时测定小儿清肺丸中葫芦素B、葫芦素E、白花前胡甲素、白花前胡乙素和白花前胡素E5种活性成分含量的方法,考察60Co-γ射线辐照前后有效成分含量的变化.方法 采用Agilent-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相A为甲醇-乙腈(1∶1),B为0.5％冰醋酸水溶液,梯度洗脱,检测波长分别为230、321 nm,体积流量为1.0 mL/min,柱温25℃.分别选择辐照剂量为2、4、6、8 kGy对小儿清肺丸进行辐照,比较辐照前后小儿清肺丸中5种活性成分含量的变化,并进行成组t检验考察其显著情况.结果 葫芦素B、葫芦素E、白花前胡甲素、白花前胡乙素和白花前胡素E分别在0.049～1.247、0.079～1.973、0.056～1.406、0.028～0.705、0.028～0.693μg有良好线性关系,平均加样回收率分别为101.2％、99.7％、99.9％、98.9％、100.5％,RSD分别为0.6％、0.5％、1.2％、1.1％、1.2％;经过2、4、6、8 kGy辐照后,小儿清肺丸所含有效成分葫芦素B、葫芦素E、白花前胡甲素、白花前胡乙素和白花前胡素E均有变化,经成组t检验,在超过6 kGy后,葫芦素B辐照前后含量变化显著(P＜0.05).结论 所建立的小儿清肺丸活性成分测定方法回收率高,重复性好,简单实用,可作为小儿清肺丸质控方法.在辐照剂量不超过6 kGy时,各成分变化不显著,可为小儿清肺丸辐照灭菌手段提供参考.
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葫芦素E联合顺铂或紫杉醇治疗非小细胞肺癌的体外研究
目的:体外观察葫芦素E(CuE)联合顺铂(DDP)或紫杉醇(PTX)对非小细胞肺癌A549和H460细胞增殖的抑制作用.方法:采用MTT法检测CuE、DDP、PTX单独应用及CuE联合DDP或PTX对A549和H460细胞增殖的抑制作用.并采用CHOU-TALALAY联合指数法对药物联合应用的效果进行判定.结果:药物单用及CuE分别与DDP、PTX应用对A549和H460细胞的增殖均有抑制作用,药物合用时的中效浓度与单用时比较有不同程度的降低.CuE与DDP合用,对于A549细胞,表现为协同作用(CI
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HPLC法同时测定葫芦素原料中葫芦素B和葫芦素E的含量
目的 建立同时测定葫芦素原料中葫芦素B和葫芦素E含量的方法.方法 采用HPLC法.色谱柱为Diamonsil C_(18)柱(200 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-水-冰醋酸(体积比50:50:0.1),流速为1.0 mL·min~(-1),柱温为室温,检测波长为234 nm,进样量为20 μL.结果 葫芦素B和葫芦素E质量浓度分别在28.2～253.8 mg·L~(-1)和2.02～18.18 mg·L~(-1)内与峰面积呈良好的线性关系,平均回收率分别为100.1%(RSD=1.0%,n=9)和99.5%(RSD=0.83%,n=9).结论 该方法快速、准确、重复性好,能更好的控制葫芦素原料的质量.
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戒酒灵口服液中葫芦素B、葫芦素E的TLC鉴别和HPLC含量测定
目的：建立戒酒灵口服液中葫芦素B和葫芦素E的TLC鉴别和HPLC含量测定的方法，为建立戒酒灵口服液质量标准提供参考。方法采用TLC法对戒酒灵口服液中葫芦素B和葫芦素E进行定性鉴别，并采用HPLC法对二者进行含量测定。色谱条件：COSMOSIL C18色谱柱（250 mm ×4.6 mm，5μm）；乙腈（A）和0.2％醋酸-水溶液（B）梯度洗脱（0.0～15.0 min：30％～40％ A；15.0～40.0 min：40％～45％A）；检测波长为234 nm；柱温为室温；流速为1 mL／min；进样量为10μL。结果在TLC图中，戒酒灵口服液的供试品溶液分别与葫芦素B、E的对照品溶液在相同位置上显现暗斑。含量测定实验中，葫芦素B和葫芦素E质量浓度分别在0.01574～0.3148 mg／mL和0.003744～0.07488 mg／mL范围内与峰面积呈良好的线性关系，平均回收率分别为97.7％（RSD＝1.29％，n＝6）和98.4％（RSD＝1.68％，n＝6）。戒酒灵口服液中葫芦素B和葫芦素E的平均含量分别为0.36 mg／mL（ RSD＝0.85％，n＝6）和0.033 mg／mL（ RSD＝0.78％，n＝6）。结论此鉴别和含量测定方法简便、快捷、准确、可靠，能有效地对戒酒灵口服液的质量进行控制。
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葫芦素E对脂多糖诱导RAW264.7巨噬细胞炎症反应的影响及作用机制
分析葫芦素E(CuE)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞炎症反应的影响,研究其抗炎作用的分子机制.采用改良MTT法检测RAW264.7细胞的增殖；以碘化丙锭染色检测CuE对细胞周期的影响；采用细胞内细胞因子染色法分析肿瘤坏死因子(TNF-α)的表达；免疫荧光染色分析胞内Actin的结构；应用免疫印迹法检测CuE对G-肌动蛋白(G-ac-tin)及核转录因子NF-κB核转位的影响.实验结果显示CuE对RAW264.7细胞的增殖具有剂量依赖性抑制作用,并降低细胞内G-actin的水平；CuE明显阻止LPS诱导的细胞伸展和伪足形成,使细胞周期阻滞于G2/M期.同时,CuE还明显抑制LPS活化的RAW264.7细胞表达促炎因子TNF-α,并显著降低LPS诱导的转录因子NF-κB的核转位作用.这些结果表明,CuE通过破坏RAW264.7巨噬细胞的肌动蛋白细胞骨架,引起细胞周期阻滞,并抑制LPS诱导的NF-κB核转位以及TNF-α的表达,从而发挥抗炎作用.
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葫芦素 E诱导刚地弓形虫从宿主细胞逸出的观测
目的：检测葫芦素E诱导刚地弓形虫从感染的宿主细胞逸出的效力。方法用不同浓度（20、50和100μmol／L）的葫芦素E孵育刚地弓形虫感染的HFF细胞1 h，统计纳虫空泡破损比例；用细胞松弛素D、1，2-二（2-氨基苯氧基）乙烷-N，N，N＇，N＇-四乙酸四乙酰氧甲基酯（ BAPTA-AM）预处理感染刚地弓形虫的HFF细胞，用50μmol／L葫芦素E孵育1 h，统计纳虫空泡破损比例；将逸出虫体重新感染细胞或腹腔注射昆明小鼠，检测虫体毒力变化。结果葫芦素E可以诱导刚地弓形虫从HFF细胞释放逸出，葫芦素E浓度越高，逸出率越高。葫芦素E诱导的虫体逸出与虫体的运动能力和虫体内钙离子有关，逸出虫体的毒力没有发生明显变化。结论葫芦素E可以诱导刚地弓形虫的逸出，为探索弓形虫和宿主细胞相互作用提供了新的研究方向。
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葫芦素E诱导肝癌细胞凋亡及其机制
目的 探讨葫芦素E对肝癌细胞形态学方面的影响及其机制.方法 用不同浓度的葫芦素E孵育HepG2细胞6h,分别通过MTT检测药物对细胞的生长抑制作用、激光共聚焦显微镜观测细胞形态变化、流式细胞仪检测细胞凋亡比率、Western blot检测凋亡相关蛋白的表达变化.结果 经过葫芦素E孵育后,HepG2细胞的生长受到显著抑制,形态学上胞膜发生翻转,为典型细胞凋亡形态变化,流式细胞检测发现,随着葫芦素E药物浓度的升高,细胞凋亡比率上升.同时,细胞中活化的Caspase 3蛋白比例上升.体内实验表明,葫芦素E可以提高Bax蛋白表达,促使裸鼠人原位移植肝癌细胞核酸断裂.结论 葫芦素E可以影响HepG2细胞形态学改变,并诱导体内与体外HepG2细胞发生凋亡,而且呈现药物浓度依赖性.
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葫芦素E抑制HeLa细胞mTORC1的活性并诱导细胞自噬
目的：研究葫芦素E诱导HeLa细胞发生细胞自噬的作用机制。方法改良MTT法测定葫芦素E对HeLa细胞增殖的影响，免疫印迹法检测mTORC1下游信号蛋白的磷酸化以及自噬相关蛋白的表达。结果葫芦素 E对 HeLa细胞增殖有剂量依赖性抑制作用，其24 h 的 IC50为4.01μmol·L-1。通过对mTORC1底物磷酸化水平的检测发现，葫芦素E对p70S6K的磷酸化(活化)作用有明显的剂量和时间依赖性抑制作用。同时，葫芦素E增加自噬小体标志物LC3-Ⅱ的表达，氯喹能进一步提高其水平；葫芦素E还能降低p62/SQSTM1的水平，表明诱导了完整的细胞自噬过程。细胞自噬的诱导与mTORC1下游底物ULK1 S757磷酸化水平的下降有正相关性。结论葫芦素 E 可能通过抑制mTORC1活性而诱导细胞发生自噬作用。
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葫芦素E脂质体的制备及含量测定
目的:制备葫芦素E(cucurbitacin E,CuE)脂质体,建立HPLC测定CuE脂质体含量的方法.方法:乙醇注入法制备CuE脂质体;使用Diamonsil C18柱(200 mm×4.6 mm,5 μm);流动相:乙腈-水-冰醋酸(66∶ 34∶ 0.01,v/v);流速:1 ml/min;检测波长:228 nm;柱温:35 ℃.结果:制得CuE脂质体的平均包封率为89.7%,在实验条件下所用辅料对CuE的测定无干扰,在3.5 mg/L～84 mg/L浓度范围内线性关系良好(r=0.9999,n=9);CuE平均回收率99.9 %,RSD为0.4 %(n=9).结论:乙醇注入法可用于制备CuE脂质体;高效液相色谱法简便易行、结果准确,可用于CuE脂质体含量的测定.
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自噬介导葫芦素E对乳腺癌细胞Bcap-37的细胞毒作用
目的 研究葫芦素E(Cucurbitacin E,CuE)或CuE联合自噬抑制剂氯喹(Chloroquine,CQ)对乳腺癌Bcap-37细胞增殖的影响,并探讨其分子机制.方法 MTT法检测乳腺癌Bcap37细胞增殖抑制作用,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测LC3-Ⅰ/Ⅱ、P62蛋白表达.透射电子显微镜检测自噬溶酶体形成.结果 CuE通过诱导凋亡显著抑制Bcap-37增殖.经CuE处理的Bcap-37细胞中自噬特异性标志物LC3-Ⅱ表达增高,而LC3-Ⅰ、P62表达降低.细胞内自噬溶酶体形成.结论 CuE可诱导Bcap-37细胞凋亡及细胞保护性自噬.抑制自噬可增加CuE对Bcap-37的细胞毒性.
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钴60-γ射线辐射对天花粉有效成分的影响
目的:考察钴60(60 Co-γ)射线辐照灭菌效果及对天花粉有效成分含量的影响.方法:选择辐照剂量为0,5,8,10 kGy对天花粉药材辐照灭菌,采用微生物限度检查法考察灭菌前后需氧菌总数和霉菌、酵母菌总数变化;HPLC法比较有效成分葫芦素B、葫芦素E的含量变化,并检验其显著性情况.结果:天花粉经8 kGy辐照剂量灭菌可达到中国药典微生物限度要求;天花粉中有效成分葫芦素B、葫芦素E的含量在≤8 kGy辐照后无明显变化(P>0.05),但经10 kGy辐照后,葫芦素B、葫芦素E含量变化显著(P<0.05).结论:辐照剂量为8 kGy时,60Co-γ射线可作为天花粉药材辐照灭菌方法.
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5种葫芦科植物中葫芦素类成分的含量测定及灰色关联度分析
目的: 建立同时测定葫芦素B和E含量的测定方法,利用灰色关联法评价5种葫芦科植物质量.方法: 采用Diamonsil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈-0.1%冰醋酸水溶液,梯度洗脱,流速1.0 ml·min-1,检测波长234 nm, 柱温:30 ℃;用灰色关联度分析对5种葫芦科植物质量进行综合评价.结果: 葫芦素 B 和葫芦素 E分别在0.894~44.715 μg·ml-1(r=0.999 6)和0.257~12.825 μg·ml-1(r=0.999 7)范围呈良好线性关系;平均加样回收率分别在为98.8%~100.3%和98.0%~100.1%,RSD均小于0.88%(n=6).利用灰色关联分析法,得出甜瓜蒂质量优,而木鳖子质量评价差.结论: 本方法快速、简便,能为葫芦科植物中葫芦素检测提供方法参考,并为综合评价植物药材质量提供依据.
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葫芦科植物药材中葫芦素类成分的含量差异
目的:分别测定6种葫芦科植物药材中总葫芦素、葫芦素B、葫芦素E的含量,比较不同药材中葫芦素类成分的含量差异.方法:建立UV-Vis分光光度法测定总葫芦素含量,显色剂:5％香草醛-冰醋酸-浓硫酸溶液,检测波长:543 nm.采用HPLC同时测定葫芦素B、葫芦素E的含量,流动相:乙腈-0.1％冰醋酸水溶液(49∶51),检测波长230nm.结果:总葫芦素含量以木鳖子、栝楼高,南瓜蒂低;葫芦素B含量以甜瓜蒂高,雪胆、栝楼、南瓜蒂均较低;葫芦素E含量以栝楼、甜瓜蒂高,雪胆、南瓜蒂较低.结论:所建立UV-Vis分光光度法测定总葫芦素含量,简便、可靠、准确、重复性好.不同药材中葫芦素类成分含量有一定差异,可作为葫芦科植物药材质量评价、新药组方药材选择、中药药效机理研究的基本依据.
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葫芦素E对人外周血单个核细胞体外活化及细胞因子表达的影响
目的：分析葫芦素 E （CucE）对二丁酸佛波醇酯（PDB）和离子霉素（Ion）刺激的人外周血单个核细胞（PBMC）活化及促炎因子表达的影响，探讨其潜在的抗炎效应及作用机制。方法：利用流式细胞术分析人外周血PBMC 活化抗原 CD69和 CD25表达，用流式微球陈列检测白介素2（IL-2）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和干扰素γ（IFN-γ）表达的变化。结果：CucE 能明显抑制 PDB 和 Ion 刺激引起的 CD3＋ T 细胞早期活化标志分子 CD69和中期活化分子 CD25的表达；同时，CucE 以剂量依赖方式抑制 PDB 和 Ion 诱导的 IL-2、TNF-α和 IFN-γ的表达。结论：CucE 对人外周血 CD3＋ T 细胞的活化具有明显抑制作用，同时减少炎症相关细胞因子的表达，提示其通过对适应性免疫的调控发挥抗炎效应。
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葫芦素E对人结肠癌细胞Caco-2增殖与迁移的影响及其作用机制
目的 研究葫芦素E(CuE)对人结肠癌细胞Caco-2增殖与迁移的影响,并探讨CuE作用的分子机制.方法 用0.001、0.01、0.1、1、10 μmol/L的CuE分别处理培养的Caco-2细胞,CCK-8法检测细胞增殖能力,采用划痕实验及Transwell小室细胞跨膜实验检测细胞迁移能力,荧光法检测细胞F-actin与G-actin相对含量,激光共聚焦显微镜观察细胞骨架F-actin,Western blot分别检测cofilin、p-cofilin、LIMK2及p-LIMK2蛋白表达.结果 CCK-8法、划痕实验与Transwell跨膜实验显示:0.1、1、10 μmol/L的CuE对Caco-2细胞的增殖与迁移均具有明显的抑制作用(P＜0.05),并呈现出剂量与时间依赖性;荧光法表明0.1 μmol/L的CuE能增加Caco-2细胞G-actin含量(P＜0.05),引起F-actin/G-actin的动态平衡失调,并在0.1μmol/L的CuE处理1、2、6、12、24 h后,对细胞骨架F-actin有明显的破坏作用,Western blot检测显示,不同浓度CuE处理Caco-2细胞后,cofilin、p-cofilin及p-LIMK2的蛋白表达明显降低(P＜0.05),而LIMK2表达与对照组比较无明显差异.结论 CuE可能通过抑制LIMK/cofilin信号通路而损害细胞骨架actin,从而导致结肠癌Caco-2细胞的增殖与迁移受到抑制.
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葫芦素E诱导结肠癌细胞凋亡
目的 体外研究葫芦素E(CuE)对人结肠癌细胞株Caco-2凋亡的影响及其相关分子机制.方法 用0.001、0.01、0.1、1、10 μmol/L CuE分别处理培养的Caco-2细胞24、48、72 h,Hoechst 33258染色法观察细胞核形态变化,TUNEL染色法及Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞分析法检测细胞凋亡,蛋白免疫印迹法检测Caspase-3、cleaved Caspase-3、PARP、cleaved PARP及Bcl-2蛋白表达变化.结果 Hoechst 33258染色法和TUNEL染色法结果均显示,CuE能明显诱导Caco-2细胞凋亡(P＜0.05),并呈现出剂量及时间依赖性.Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞分析表明,随着CuE浓度升高,凋亡细胞占总细胞比例明显升高(P＜0.05).蛋白印迹分析结果显示,用CuE处理Caco-2细胞24 h后,Caspase-3及PARP蛋白表达明显降低,而cleaved Caspase-3及cleaved PARP蛋白表达明显增加,同时Bcl-2蛋白表达明显降低(P＜0.05).结论 CuE能明显引起人结肠癌细胞Caco-2发生凋亡,其分子机制可能与其抑制Bcl-2表达,激活Caspase-3,从而引起PARP裂解有关.
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葫芦素E抑制多发性骨髓瘤细胞增殖及与阿霉素的协同效应?
目的：研究葫芦素 E 对人多发性骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响，并观察葫芦素 E 与阿霉素的协同效应。方法采用 CCK-8测定葫芦素 E 对4种多发性骨髓瘤细胞 MM1.S、MM1.R、U266和 RPMI8226的半数生长抑制率(GI50)，并通过 CalcuSyn 协同效应分析软件，计算药物合用指数(CI)，评价葫芦素 E 与阿霉素协同抗多发性骨髓瘤作用；流式细胞术检测葫芦素 E 对 MM1.S、MM1.R 的细胞周期、线粒体膜电位和细胞凋亡的影响；Western blot 检测凋亡相关蛋白 Caspase-3和 PARP 的变化，以及葫芦素 E 对 IL-10刺激的 RPMI8226细胞STAT3蛋白磷酸化的抑制作用。结果葫芦素 E 对4种多发性骨髓瘤细胞的 GI50均在(12.3~161.7)nM 范围内；葫芦素 E 导致多发性骨髓瘤细胞的 SubG1期细胞比例、凋亡细胞比例和线粒体膜电位下降细胞比例均明显增加，并出现凋亡相关的活化蛋白如 Cleaved Caspase-3和 Cleaved-PARP。葫芦素 E 能有效抑制 IL-10诱导的RPMI8226细胞 STAT3磷酸化，并能与阿霉素协同抗多发性骨髓瘤。结论葫芦素 E 通过抑制 STAT3蛋白磷酸化，诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡，并能协同阿霉素抗多发性骨髓瘤。
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葫芦素E对非小细胞肺癌细胞的生长抑制作用
目的：：体外观察葫芦素E( cucurbitacin E,CuE)对非小细胞肺癌细胞系A549增殖的影响及分子作用机制。方法：采用MTT法检测不同浓度 CuE(0、1、10、100以及1000nmol/L)处理A549细胞24、48和72小时后的细胞增殖情况。流式细胞仪检测CuE对A549细胞凋亡的影响。 Western blot法检测被处理细胞中p-STAT3、p-Raf-1、p-MEK1/2、p-ERK1/2、Bcl-2、Fas蛋白表达水平的变化。结果：CuE可显著抑制A549细胞的增殖(P<0.05),且呈时间和浓度依赖性。流式细胞仪检测显示随着CuE作用浓度的逐渐升高(0、100、200、400nmol/L),A549细胞凋亡率由(4.63±0.70)%分别提高到(6.80±0.10)%、(20.53±0.49)%、(24.57±0.55)%,差异有统计学意义(P均<0.05)。 Western blot结果显示CuE处理A549细胞,可降低p-STAT3、p-Raf-1、p-MEK1/2、p-ERK1/2、Bcl-2蛋白表达水平,增强Fas蛋白表达水平,且上述作用随CuE浓度升高而增强。结论：CuE可显著抑制A549细胞的增殖并诱导凋亡,其作用机制与阻断STAT3和Raf/MEK/ERK信号通路,同时激活Fas信号通路有关。
