抗体对小鼠相思子毒素中毒的免疫保护作用

目的开发相思子毒素(Abrin)的抗毒疫苗,为毒素中毒采取有效的急救预防措施提供依据.方法将Abrin加入到体积分数为3.4%的甲醛10 mmol/L磷酸缓冲液中,于37℃处理4 d,制备成毒性较低的类毒素.

石房蛤毒素对大鼠心血管和呼吸功能的影响/T-2毒素急性中毒对动物小肠的损伤/国外毒素气溶胶吸入毒理研究动向/试纸膜免疫层析法检测的蓖麻毒素/相思子毒素的放射免疫检测方法

相思子毒素抗原和抗体制备

[目的] 研究一种相思子毒素抗原、抗体的制备技术.[方法] 根据相思子毒素对半乳糖的特异性结合能力,采用亲和层析技术将相思子种子中大部分杂质除去;经凝胶过滤层析,进一步去除植物种子中与蛋白毒素并存的凝集素,获得电泳纯度天然相思子毒素纯品.[结果] 利用大肠埃希菌表达重组相思子毒素A链蛋白,经金属螯合层析法纯化,得到重组相思子毒素A链蛋白抗原.重组抗原免疫大耳白兔、昆明小鼠,采用辛酸-硫酸铵盐析法和亲和层析法纯化兔血清和鼠腹水获得多抗;2种抗体与天然毒素特异性结合的活性效价均为10<'6>.[结论] 抗原、抗体的制备为建立相思子毒素检测方法奠定了基础.

重组相思子毒素B链蛋白冻干保存与免疫效果评价

目的 探讨重组相思子毒素B链蛋白(rATB)的冻干保存条件及其免疫雌性Balb/C小鼠后的免疫效果评价.方法 rATB分别与不同冻干保护剂配方混合进行真空冷冻干燥,复融后免疫小鼠4次.每次免疫后,间接ELISA方法检测小鼠血清中IgG效价,四免后采用相思子毒素(abrin toxin,AT)攻毒,并进行小鼠体外中和试验.结果 rATB与10 g/L的蔗糖混合保存所测浓度高,纯度可达98％以上.四免后rATB组血清IgG效价与PBS对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).攻毒保护试验和体外中和试验结果说明,rATB可以抵抗5×LD50的天然AT攻毒.结论 rATB和10 g/L蔗糖混合冻干条件下所测定的浓度高,且冻干蛋白复融后免疫小鼠后显示出良好的免疫原性.

胶体金免疫层析技术快速定量检测相思子毒素

目的:建立胶体金免疫层析技术快速定量检测相思子毒素.方法:利用胶体金标记和双抗体夹心免疫层析技术,建立相思子毒素的快速检测方法,评价其特异性和敏感性,并拟合检测曲线进行定量检测.在面粉、饼干、奶粉、苹果汁、牛奶、果冻等食品样品中添加相思子毒素模拟污染样品,评价该方法对固体、半固体、液体等食品样品的检测能力.结果与结论:该法可在15 min内完成定性和半定量检测,灵敏度为30 ng/ml,线性范围30～600 ng/ml、回收率80%～110%,变异系数小于15%.所建立的检测相思子毒素的胶体金免疫层析方法,能快速、灵敏、特异、准确地检测样品中的相思子毒素,并可实现定量,适用于现场快速检测.

相思子毒素的分子特点及其在临床中的应用前景

相思子毒素是从豆科植物(Abrus Precatorius L.)种子中分离的一种细胞毒性蛋白.它由A,B两条链组成,由一个二硫键相连,B链具有半乳糖凝集活性,可与细胞膜上受体结合,帮助A链进入细胞内,A链进入细胞催化60S大亚基的28S rRNA的第4324位脱去腺嘌呤而使60S核糖体亚基失活,从而使细胞蛋白合成被抑制.本文综述了有关相思子毒素的分子结构特点、毒性机制和在临床中的应用前景.

重组相思子毒素B链蛋白免疫原性研究

[目的]评价重组相思子毒素B链蛋白(rATB)作为相思子毒素疫苗的免疫原性.[方法]以rATB为免疫原,采用2×2×2×3析因设计方式分别免疫雌性Balb/C小鼠,主因素包括:重组蛋白的剂量、免疫方式、免疫周期、攻毒剂量.每次采用间接ELISA方法检测小鼠血清中IgG,并进行天然毒素攻毒实验.体外中和实验依据上述所选的免疫方案进行,分析免疫保护效果.[结果]间接ELISA结果表明rATB蛋白免疫小鼠后血清中能检测到相应的抗AT特异性抗体,IgG的效价均可达到1∶106以上,PBS对照组则没有抗体产生(P＜0.05);小鼠攻毒保护实验和体外中和实验结果说明,腹腔注射rATB在25μg/只的蛋白免疫剂量下,免疫周期为0-14-28-42d,可以抵抗高剂量为5 ×LD50的天然AT毒素中毒,保护率为100％.[结论]rATB蛋白免疫小鼠后显示出良好的免疫原性,为相关疫苗研究奠定基础.

Balb/C小鼠免疫重组蓖麻毒素与相思子毒素B链嵌合体蛋白的免疫应答

[目的]探讨重组蓖麻毒素、相思子毒素B链蛋白(RTB-ATB)免疫Balb/C小鼠的免疫机制.[方法]雌性Balb/C小鼠随机分为两组:RTB-ATB组和PBS组,分别腹腔免疫4次,间隔1周;间接ELISA检测血清中IgG效价和抗体分型,流式细胞技术检测细胞因子IFN-γ、IL-4,并进行攻毒实验和体外中和实验.[结果]四免后RTB-ATB组血清IgG、IgG1的效价与PBS对照组差别有统计学意义(P＜0.05),而IgG2a未发生明显变化;IL-4的表达量RTB-ATB组与PBS组相比差别有显著性(P＜0.05),而IFN-γ未发生变化(P＞0.05).攻毒保护实验和体外中和实验结果说明,嵌合体蛋白RTB-ATB可以抵抗4×LD50的天然AT或RT攻毒.[结论]RTB-ATB诱导以IgG1为主的抗体和Th2优势应答且显示出良好的免疫原性,为二价疫苗的研制奠定基础.

重组蓖麻毒素与相思子毒素B链嵌合体蛋白的制备与分析

[目的]观察蓖麻毒素(ricin toxin,RT)、相思子毒素(abrin toxin,AT)B链的嵌合体蛋白原核表达并分析其抗原性和毒性.[方法]利用柔性linker-(G4S)3连接两个毒素B链基因(RTB和ATB),优化嵌合体基因RTB-ATB后构建表达质粒pQE80L-RTB/ATB,转化至E.coli M 15获得表达工程菌株,并对诱导表达条件和纯化条件进行优化;通过Western印迹检测RTB-ATB的抗原性;采用人正常肺上皮细胞Beas-2B和胃黏膜细胞GES-1进行嵌合体蛋白的细胞毒性实验.[结果]RTB-ATB全长1 647bp,编码549个氨基酸残基;E.coli M15在诱导条件为30℃、1 mmol/L IPTG,3h后获得包涵体形式表达的目的蛋白,相对分子量约为60×103 Da,经Ni柱纯化后纯度达98.9％;Western blotting印迹结果表明嵌合体蛋白保持RTB和ATB原有各自的抗原性;MTS实验结果表明目的蛋白无毒性.[结论]嵌合体蛋白RTB-ATB实现高表达,具有良好的抗原性,为研制针对RT和AT的双价疫苗奠定基础.

主动免疫：预防蓖麻毒素、相思子毒素中毒

蓖麻毒素( Ricin toxin, RT )和相思子毒素( Abrin toxin,AT)都属于大分子植物来源的蛋白毒素,属于Ⅱ型核糖体失活蛋白( Ribosome-inactivating proteins,RIP),能够抑制细胞蛋白合成而具有极强的细胞毒性。由于来源广、毒性强等特点,二者均被认为是重要的致死性生物毒素战剂,美国疾病控制中心( CDC)定义为B级生物威胁[1]。因此,开展对RT和AT的生防疫苗的研究,对提高军队和国家应对生物战和生物恐怖的能力和水平,增强生防能力和保障国家安全,具有非常重要的军事意义和社会意义。

BALB/c小鼠免疫重组相思子毒素B链蛋白的免疫应答

目的:评价重组相思子毒素B链蛋白(rATB)免疫雌性BALB/c小鼠的免疫效果,并初步探讨其免疫机制.方法:以rATB为免疫原,腹腔免疫雌性BALB/c小鼠,间接ELISA方法检测小鼠血清中IgG、IgG1、IgG2a,流式细胞技术检测IFN-γ、IL-4,并进行天然毒素攻毒实验和体外中和实验.结果:血清IgG、IgG1效价达到1:106以上,且攻毒后产生二次免疫应答,与PBS对照组差别有统计学意义(P<0.05);而IgG2a的血清效价未发生明显变化.细胞因子检测结果表明IFN-γ的表达量与PBS组差异无统计学意义,而IL-4的表达量显著提高(P<0.05).小鼠攻毒保护实验和体外中和实验结果说明,腹腔注射rATB可以抵抗高剂量为5×LD50的天然AT毒素中毒,保护率为100%.结论:rATB蛋白免疫小鼠后显示出良好的免疫原性,能诱导以IgG1为主的抗体和Th2优势应答,为候选疫苗的研制奠定基础.

蓖麻毒素和相思子毒素蛋白质芯片检测方法的建立

目的 建立蓖麻毒素和相思子毒素蛋白质芯片检测方法.方法 制备并纯化蓖麻毒素和相思子毒素单克隆抗体.采用竞争免疫法检测抗原,建立检测蓖麻毒素和相思子毒素的蛋白质芯片检测方法.应用蛋白质芯片检测两种毒素的模拟样品.结果 应用蛋白质芯片检测蓖麻毒素、相思子毒素和两种毒素混合的模拟样品时,在其相应区域均没有荧光信号,结果为阳性,与实验设计相符.结论 已成功建立了蓖麻毒素和相思子毒素蛋白质芯片检测方法,该方法具有广阔的应用前景.

相思子毒素抑制肿瘤活性研究进展

采用手工检索和联机检索相结合,查阅了近年来国外有关相思子毒素抗肿瘤的文献资料,对相思子毒素的抗肿瘤活性研究进行了综述,认为相思子毒素对大多数肿瘤有抑制作用,应进一步深入研究,很可能为癌症的治疗开辟新的途径.

双抗体夹心生物素-亲和素ELISA法检测相思子毒素

目的 建立相思子毒素(abrin)的酶联免疫检测方法,为abrin临床诊断、中毒治疗、法医学鉴定等应用领域提供技术基础和参考依据.方法采用双抗体夹心生物素-亲和素ELISA法来检测微量abrin.结果该法检测abrin线性范围为0.125～31.25 μg/L,线性回归方程为y=0.52369X+0.51632(r=0.9816,P＜0.0001,n=9),检测限为0.125 μg/L.不同浓度蓖麻毒素(ricin)、葡萄球菌肠毒素(SEB)对检测结果基本无干扰,表明该法检测abrin具有很好的特异性.该法能用于abrin毒素污染水样、土样、食品、血液等模拟样品的分析,相对标准差为2.35%～4.14%,具有较好的重现性.结论 成功建立了夹心BA-ELISA法检测abrin,巧妙地将多克隆抗体的强富集能力、单克隆抗体的特异性以及生物素-亲和素系统的放大作用结合起来,达到了提高检测的灵敏度和特异性的目的 ,可适用于各种微量abrin样品的分析.

双抗体夹心ELISA法检测相思子毒素

目的:建立相思子毒素(abrin)的酶联免疫检测方法, 为abrin临床诊断、中毒治疗、法医学鉴定等应用领域提供技术基础和参考依据.方法:采用双抗体夹心ELISA法来检测微量abrin.结果:该法检测abrin线性范围为0.25 ～125 μg/L, 线性回归方程为Y=0.51015X+0.4153(r=0.9880, n=10,P＜0.0001), 检测下限为0.25 μg/L.不同浓度蓖麻毒素(ricin)、葡萄球菌肠毒素B(SEB)对检测结果基本无干扰.该法能用于abrin毒素污染水样、土样、食品、血液等模拟样品的分析, 相对标准差为3.52% ～4.86%, 具有较好的重现性.结论:成功地建立了双抗体夹心ELISA法检测abrin, 将多克隆抗体的强富集能力和单克隆抗体(mAb)的特异性结合起来, 提高检测的灵敏度和特异性, 可适用于各种微量abrin样品的分析.

相思子毒素磁性纳米颗粒免疫捕获法的建立

目的 建立一种灵敏度高,特异性强的相思子毒素(abrin)检测方法.方法 使用包被abrin单克隆抗体(mAb)7D1的Fe3O4磁性纳米颗粒(MNP)和辣根过氧化物酶标记的abrin单克隆抗体(HRP-mAb),建立了abrin的免疫捕获检测法.同时将方法结果和传统双抗体夹心ELISA进行系统比较.结果 本方法的线性范围为2.5 ～ 60 ng/mL,检测限为2.5 ng/mL,线性回归方程为y =0.012x-0.015.蓖麻毒素对检测结果无干扰,表明方法特异性良好.该方法能用于污染水样、饮料、牛奶等基质中abrin的检测,相对标准偏差为5.18％ ～ 8.67％,具有较好的重现性.与建立的双夹心ELISA相比,提高了检测灵敏度,减少了反应时间.结论 成功建立了免疫捕获法检测abrin,适用于微量abrin样品的分析.