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R-多糖:引领天然食品防腐剂的革新——访北京星标智生物技术有限公司总经理廖光明
廖光明:北京大学光华管理学院MBA、一级营销师.曾任中国食品工业协会花卉食品专业委员会副秘书长,长期从事企业战略、营销、品牌、咨询等管理工作,致力于食品防腐剂新品种R-多糖的创新与推广工作.
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现场快检:食品合成色素检测盒优势突出
合成色素由于具有色泽鲜艳、性质稳定、易于调色、着色力强、成本低廉、使用方便等特点,因而不易为天然色素所取代.但是合成色素多是由苯、甲苯、萘等化工产品经过磺化、硝化、偶氮化等一系列有机反应化合而成,因而,容易对人体产生危害.
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T细胞、NKT和NK细胞在结核病诊断中的意义探讨
目的 探讨CD3+T细胞、CD3+CD16+CD56+N KT 细胞及CD3-CDl6+CD56+N K 细胞在肺结核患者外周血的表达状态及其临床意义.方法采用流式细胞仪分析123例肺结核患者(73例初治肺结核和50例复治肺结核)及83例健康者(43例结核菌素皮试阳性和40例结核菌素皮试阴性)外周血中T细胞、NKT和NK细胞的表达率.结果 初、复治肺结核患者的NKT细胞表达率明显高于健康者(P＜0.01),但初治肺结核患者的NK细胞、T细胞的表达率与健康者相比差异无统计学意义(P＞0.05).T 细胞表达率在不同程度的初治肺结核患者中差异有统计学意义(P＜0.01),疾病越重,表达越高.NKT、NK细胞差异无统计学意义(P＞0.05).复治肺结核患者的T细胞表达率显著高于初治肺结核患者(P＜0.01),但NK细胞、NKT 细胞的表达率在2组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 T 细胞、NKT细胞是结核病细胞免疫的重要组成部分.对NKT细胞只在活动性肺结核患者才会呈现高表达,测定外周血NKT细胞可能成为辅助诊断活动性肺结核的手段之一.
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相思子毒素抗原和抗体制备
[目的] 研究一种相思子毒素抗原、抗体的制备技术.[方法] 根据相思子毒素对半乳糖的特异性结合能力,采用亲和层析技术将相思子种子中大部分杂质除去;经凝胶过滤层析,进一步去除植物种子中与蛋白毒素并存的凝集素,获得电泳纯度天然相思子毒素纯品.[结果] 利用大肠埃希菌表达重组相思子毒素A链蛋白,经金属螯合层析法纯化,得到重组相思子毒素A链蛋白抗原.重组抗原免疫大耳白兔、昆明小鼠,采用辛酸-硫酸铵盐析法和亲和层析法纯化兔血清和鼠腹水获得多抗;2种抗体与天然毒素特异性结合的活性效价均为10<'6>.[结论] 抗原、抗体的制备为建立相思子毒素检测方法奠定了基础.
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微囊藻毒素LR对DNA和自然杀伤细胞的损伤效应研究
目的研究和探讨微囊藻毒素LR(microcystins LR,MCLR)的致癌和促癌机制.方法用单细胞微量凝胶电泳技术和3H-TdR释放法研究了MCLR对大鼠DNA及小鼠自然杀伤细胞(NK细胞)的损伤效应.结果研究表明,不同剂量的MCLR均可引起大鼠淋巴细胞DNA的损伤,其DNA迁移长度与对照组相比差异有高度显著性;随着剂量的增加和注射时间的延长对DNA的损伤效应未发现明显剂量反应关系;且在停止注射后DNA的损伤很快可得到修复.同时体内和体外动物试验还显示,MCLR可降低小鼠NK细胞对YAC-1细胞的杀伤活性,与对照组相比其差别有显著性.结论本研究将为进一步从分子水平及细胞水平阐明MCLR的促癌、致癌机制提供理论依据.
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天然糖蛋白的药理作用研究
糖蛋白(glycoprotein)是一类由糖类和蛋白质或多肽以共价键连接而形成的结合蛋白[1],是生物体内重要的生物大分子之一,它广泛存在于细胞膜、细胞间质、血浆以及黏液中,包括许多酶、激素、血浆蛋白、全部抗体、补体因子、毒素、动植物和微生物凝集素、血型物质、黏液组分、膜蛋白和受体等,对于细胞增殖的调控、受精、发育、分化以及免疫等生命现象,起着十分重要的作用.
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红景天提取物磷脂复合物的制备
天然活性成分磷脂复合物是一种新化合物,与原药物相比,磷脂复合物表现出较强的脂溶性,可溶于脂肪,在水中溶解度却明显下降[1-3].进而提高其体内吸收的特性,更利于药物作用的发挥,并产生强大而持久的药效作用[4].
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中医对高脂血症的认识及血脂康的临床应用
高脂血症是动脉粥样硬化、冠心病、脑梗死等心脑血管病的重要危险因素之一.有资料显示,富含多种天然他汀的纯中药制剂血脂康,有调节血脂、防治冠心病、降低肿瘤死亡危险等方面的作用.但对其主要成分中药红曲临床如何辨证用之,尚少见报道.试就相关问题作一探讨.
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可溶性HLA-G1与NK-92细胞表面ILT2及KIR2DL4受体相互作用的研究
目的 探讨可溶性 HLA-G1(sHLA-G1)对人 NK-92细胞杀伤活性的抑制与细胞表面免疫球蛋白样转录分子2(ILT2)和杀伤细胞免疫球蛋白样受体2DL4(KIR2DL4)受体的关系.方法 ①通过原核表达技术获得 sHLA-G1重组蛋白(重组蛋白),并采用蛋白质印迹法进行鉴定.②取NK-92细胞,加入终浓度20μg/ml的重组蛋白分别培养10、30 min,再分别加入抗HLA-G1/G5、抗ILT2和抗KIR2DL4抗体,采用流式细胞术检测各组 NK-92细胞表面sHLA-G1和ILT2、KIR2DL4受体表达阳性率;以NK-92细胞单独培养作为对照组.③以人白血病K562细胞为靶细胞,以经不同方式处理的NK-92细胞为效应细胞,效靶比为5∶1,共同培养2h,采用流式细胞术检测NK-92细胞对K562细胞的杀伤率.NK-92细胞处理方式为单纯重组蛋白处理(分别加入终浓度为0、10、20 μg/ml的重组蛋白培养30 min)和表面受体封闭+重组蛋白处理(分别加入抗ILT2、抗KIR2DL4、抗LT2+抗KIR2DL4抗体培养30min,再分别加入终浓度为0、10、20μg/ml的重组蛋白培养30 min).结果 ①蛋白质印迹分析表明所获重组蛋白为带有组氨酸标签的特异蛋白.②NK-92细胞与20μg/ml重组蛋白共培养30 min后,sHLA-G1表达阳性率明显高于而ILT2、KIR2DL4受体表达阳性率均明显低于对照组(均P＜0.05).③以终浓度0、10、20μg/ml的重组蛋白处理的NK-92细胞对K562细胞的杀伤率分别为39.79%±2.00%、27.79%±0.75%、21.36%±0.67%(两两比较,均P＜0.01);单独封闭ILT2受体,杀伤率分别为23.09%±1.63%、21.13%±0.38%、18.42%±0.47%(两两比较,均P＜0.01);单独封闭KIR2DL4受体,杀伤率分别为30.74%±0.44%、26.03%±0.38%、21.15%±0.35%(两两比较,均P＜0.01).结论 sHLA-G1通过与NK-92细胞表面ILT2和KIR2DL4受体直接结合而抑制 NK-92细胞的杀伤活性.
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GM-CSF与IL-21基因共转染卵巢癌细胞及其对NK细胞活性的影响
目的 探讨粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)与IL-21基因共转染的体外抗肿瘤效应.方法 制备pRSC-GM-CSF-IL21重组质粒,再用脂质体将质粒pRSC-GM-CSF、pRSC-IL21和pRSC-GM-CSF-IL21分别转染人卵巢癌SKOV3细胞(依次命名为SKOV3/GM.CSF、SKOV3/IL21、SKOV3/GM-CSF-IL21细胞).以RT-PCR方法检测GM-CSF与IL-21表达;倒置相差显微镜观察各组细胞形态学变化:噻唑蓝法测定各组细胞增殖活性:流式细胞仪检测各组细胞细胞周期分布,细胞表面HLA-ABC、主要组织相容性复合体Ⅰ类相关基因(MICA/B)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)的表达,以及各组细胞培养上清液对NK细胞活性的影响.以未转染的SK0V3细胞和转染空质粒pRSC的细胞(SKOV3/Neo)为对照.结果 经酶切与测序鉴定,pRSC-GM-CSF-IL21重组体构建正确,共转染SKOV3细胞中有目的基因GM-CSF、IL-21的表达.各组细胞的形态学、增殖特性、细胞周期分布及HLA-ABC表达无明显变化.SKOV3、SKOV3/Neo、SKOV3/GM-CSF、SKOV3/IL21和SKOV3,GM-CSF-IL21细胞的MIC A/B表达量分别为19.24%4±2.31%、31.11%±3.76%、37.27%±3.04%、54.97%±4.77%和63.94%±5.90%:ICAM-1表达量分别为35.88%±3.06%、37.75%±4.09%、68.59%±4.84%、78.53%±5.78%和84.10%±3.98%;加入各组细胞培养上清液后NK细胞活性分别为31.8%±3.6%、42.7%±3.3%、54.7%±7.4%、55.9%±4.4%及63.4%±6.4%.SKOV3/GM-CSF-IL21细胞分别与SKOV3、SKOV31Neo细胞比较,3项指标的差异均有统计学意义(P<0.01).结论 GM-CSF与IL-21基因共转染可上调SKOV3细胞表面MIC A/B与ICAM-1表达,表达产物可增强NK细胞活性,这有助于免疫细胞激活,增强抗肿瘤效应.
关键词： 卵巢肿瘤 粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 白细胞介素21 杀伤细胞 天然 -
几种天然镇痛多肽的研究进展
疼痛是与组织损伤或潜在损伤相关的一种不愉快的主观感觉和情感体验,是许多疾病的共同症状.以往临床治疗以阿片类和非甾体类镇痛药为主,但是对慢性神经源性等疼痛的治疗效果不理想,且阿片类镇痛药在发挥镇痛作用的同时往往还伴随饱和性和依赖性等副作用.
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成熟T和自然杀伤细胞淋巴瘤WHO新分类分析及CD30的表达
目的 统计中山大学肿瘤防治中心4年间诊断的所有成熟T和自然杀伤(NK)细胞淋巴瘤病例,分析其不同类型的构成比,研究各类型成熟T和NK细胞淋巴瘤CD30表达情况,为抗CD30抗体药物在成熟T和NK细胞淋巴瘤的应用提供参考数据.方法 选取2009年9月1日至2013年8月31日4年间中山大学肿瘤防治中心诊断的所有成熟T和NK细胞淋巴瘤,统计分析各类型淋巴瘤的发病情况.抽调其中存档的164例成熟T和NK细胞淋巴瘤患者的病理蜡块进行免疫组织化学EnVision法检测其CD30的表达.结果 4年间共诊断成熟T和NK细胞淋巴瘤625例.常见为结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤(ENKTL),共319例(51.0％),其余常见病例分别为血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤(AITL) 119例(19.0％)、非特指型外周T细胞淋巴瘤(PTCL-NOS)81例(13.0％)、间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)[包括系统性ALCL 48例(7.7％)及原发皮肤ALCL 11例(1.8％)].除ALCL外,在本院存档的164例病例中,CD30阳性率高的是NK/T细胞淋巴瘤,阳性率为62.1％(41/66).16例PTCL-NOS仅1例阳性,其余28例AITL及其他少见类型的淋巴瘤无1例阳性.结论 中山大学肿瘤防治中心收集的成熟T和NK细胞淋巴瘤不同类型的发病情况各异.CD30在多种成熟T和NK细胞淋巴瘤中均有不同程度表达,除间变性大细胞淋巴瘤,NK/T细胞淋巴瘤的阳性表达率高,有望成为抗CD30抗体药物治疗的候选病种.
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自然杀伤(NK)细胞发育相关转录因子在结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤中的表达及意义
目的 探讨自然杀伤(NK)细胞发育相关转录因子T-bet、EOMES、ETS-1和MEF在结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤中的表达及意义.方法 运用原位杂交检测录因子T-bet、EOMES、ETS-1和MEF,应用免疫组织化学(EnVision法)检测T-bet因子在40例结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤中表达情况,分析与患者预后的相关性,并与对照组外周T细胞淋巴瘤(PTCL)18例、B细胞淋巴瘤(BCL)10例以及正常脾、胸腺组织各5例和慢性炎性鼻黏膜组织10例进行对比.结果 在结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤及PTCL中,T-bet mRNA(82.5%,33/40及17/18)和蛋白(100%,40/40及13/18)呈高表达,而在BCL中不表达.EOMES、ETS-1和MEF在结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤呈高表达,分别为80.0%(32/40)、82.5%(33/40)和62.5%(25/40),而对照组均阴性.EOMES和T-bet在40例结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤中75%(30/40)共表达,具统计学意义(P<0.01).40例结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤患者平均和中位生存期分别为33和10个月,5年生存率10.5%.临床各影响因素中仅治疗方案对预后影响有意义,各转录因子表达对预后影响差异均无统计学意义(P>0.05);9例存活和lO例死亡者中,各转录因子表达差异均无统计学意义(均P>0.05).结论 T-bet表达与淋巴瘤类型有关,主要见于外周NK和T细胞淋巴瘤;NK发育重要功能基因在结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤中显著表达,是否为维持肿瘤高度侵袭性生物学行为所必需值得深入探讨.
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C型凝集素样自然杀伤(NK)细胞受体在结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤中表达及意义
目的 探讨C型凝集素样自然杀伤(NK)细胞受体CD94和NKG2在结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤中的表达及意义.方法 运用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测C型凝集素样NK细胞受体CD94和NKG2在经组织形态、免疫组织化学、EB病毒原位杂交及T细胞受体PCR克隆性重排分析确诊的21例结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤以及对照组同部位B细胞淋巴瘤8例、淋巴结外周T细胞淋巴瘤(PTCL)10例、脾脏5例、胸腺5例和慢性炎性鼻黏膜5例组织中的表达情况并进行随访.结果 21例结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤具有典型的形态学改变,表达CD3ε、CD56和细胞毒蛋白,TCR重排阴性,20例EB病毒阳性;RT-PCR扩增结果显示,在21例结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤中,18例(85.7%)CD94呈阳性表达;NKG2总阳性率为95.2%(20/21),各亚基表达阳性率依次为NKG2A/2B(85.7%)、NKG2D(61.9%)、NKG2F(14.3%)、NKG2C,/2E(4.8%).对照组中PTCL和B细胞淋巴瘤均不表达CD94和NKG2,仅2例脾脏和2例慢性炎性鼻黏膜组织表达CD94,1例脾脏组织表达NKG2A/2B,1例胸腺组织表达NKG2D.CD94和NKG2在结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤中的表达与T细胞淋巴瘤和B细胞淋巴瘤比较,差异均有统计学意义(P均<0.01).CD94和NKG2同时表达于17例结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤,共表达率为81.0%(17/21).结论 CD94和NKG2在结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤中呈特异性和顺序性表达,提示多数病例肿瘤细胞处于活化和功能NK细胞阶段.对这些分子的检测有可能成为NK细胞源性淋巴瘤诊断的重要手段.
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EB病毒阳性T/NK细胞淋巴组织增殖性疾病156例临床病理学特征
目的 分析EB病毒(EBV)阳性T/NK细胞淋巴组织增殖性疾病(EBV+T/NK-LPD)的临床病理学特征.方法 总结2002年8月至2015年3月北京友谊医院病理科156例EBV+T/NK-LPD患者的临床特点,进行形态学分级、免疫组织化学染色、EB病毒编码的小RNA(EBER)原位杂交及对45例患者进行T细胞受体(TCR)基因克隆性分析,并随访所有患者.结果 (1)156例患者中,男性106例,女性50例,年龄1～75岁,中位年龄20岁,病程2～540个月,中位病程20个月,伴有发热122例(78.2％),淋巴结肿大108例(69.2％),肝脾肿大75例(48.1％).(2)形态学分级1级33例,2级68例,3级55例.45例做了TCR检测,其中33例(73.3％)检测到克隆性重排,均为2或3级病例.(3)随访时间1～134个月,死亡44例(28.2％).死亡原因多为多器官功能衰竭21例(47.7％).随着分级增高,有死亡百分比增高的趋势,但分级间差异无统计学意义(P>0.05).结论EBV+T/NK-LPD病例种类多样,表现为系统性、相对局限性和局限性病变,应基于病理和临床参数的综合评估患者情况,形态学分级与病死率无显著相关性;一旦诊断该病,就要警惕和预防严重并发症的发生.
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侵袭性NK细胞白血病的临床病理学特点
目的 探讨侵袭性NK细胞白血病(ANKL)的临床病理学特点.方法 回顾性分析10例ANKL患者的临床病理档案资料,全部病例均行全血细胞计数以及外周血涂片、骨髓穿刺与骨髓活检标本的形态学观察.用流式细胞学(FCM)及免疫组织化学(EliVision法)进行免疫表型分析.聚合酶链反应(PCR)法检测T细胞受体(TCR)γ基因重排.结果 10例患者中,常见的血液学异常为贫血(7例)与血小板减少(9例).6例外周血涂片可见大颗粒淋巴细胞.骨髓穿刺涂片示8例淋巴细胞比例增高(＞20.0％).6例可见大颗粒淋巴细胞.骨髓活检切片示轻度浸润5例,中度浸润3例,重度浸润2例.骨髓切片中8例为间质型浸润,2例呈弥漫型浸润,4例可见噬血现象(吞噬成熟红细胞).免疫表型方面,FCM检测示全部病例为CD2+sCD3- CD4- CD56+CD57-.9例CD7、5例CD16、4例CD8和1例CD5阳性.8例行免疫组织化学相关抗原检测:cCD3 4例、CD566例、T细胞内抗原1(TIA-1)6例、颗粒酶B4例和穿孔素2例阳性.10例TCRγ基因重排检测均为胚系构型.结论 ANKL是一种NK细胞来源的高度侵袭性淋巴组织肿瘤,需进行全面的外周血与骨髓的形态学、免疫表型以及分子遗传学检测才能确诊,需注意与多种NK细胞与T细胞淋巴瘤鉴别.
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原发睾丸NK/T细胞淋巴瘤六例临床病理观察
目的 探讨原发睾丸NK/T细胞淋巴瘤(NKTCL)病理学特征、诊断及预后.方法 观察首都医科大学附属北京友谊医院2007年1月至2016年12月收集的6例睾丸NKTCL镜下形态及免疫表型,并进行临床随访,结合文献报道加以分析.结果 本组睾丸NKTCL患者的中位年龄45岁(范围32~65岁),均以单侧睾丸肿大为首发症状(6/6),其中5例(5/6)发生在右侧;发病时病灶均局限于睾丸,处于Ann ArborⅠ期,但进展迅速,2例(2/6)于诊断后2个月死亡,3例(3/6)得到完全缓解,1例(1/6)失访.形态学上,肿瘤细胞弥漫浸润睾丸实质,围绕和浸润生精小管,均可见明显嗜血管生长模式,部分病例(4/6)可见坏死和核碎片.肿瘤细胞多以中等大小为主,胞质少或中等量,核型扭曲.免疫表型与鼻腔NKTCL相同,表达胞质型CD3、CD56、细胞毒性分子和EB病毒编码的小RNA(EBER),所有病例均可见CD5抗原的丢失.结论 原发睾丸NKTCL十分少见,临床呈高度侵袭性,尚无统一的治疗标准,预后差,诊断睾丸淋巴瘤时需考虑NKTCL的可能.
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963例成熟T和自然杀伤细胞/T细胞淋巴瘤的临床病理特征分析
目的 观察广东地区不同类型成熟T和自然杀伤(NK)细胞/T细胞淋巴瘤及其亚型的临床病理特点.方法 按WHO(2008版)标准重新评估广东地区2002-2006年1137例成熟T和NK/T细胞淋巴瘤患者.由多名血液病理医师复查,补做必要的免疫组织化学染色及原位杂交.结果 963例确诊为成熟T和NK/T细胞淋巴瘤,占同期所有淋巴瘤20.1%(963/4801),发生于结内319例(33.1%),结外644例(66.9%);非特殊型外周T细胞淋巴瘤293例(30.4%);结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤281例(29.2%);间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)198例(20.6%);血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤(AILT)46例(4.8%).男女比为1.99:1,发病中位年龄为44岁.非特殊型外周T细胞淋巴瘤好发于55～64岁;结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤好发于25～54岁;间变性淋巴瘤激酶(ALK)阳性ALCL多见于年轻人而阴性多见于中老年人;AIIJT好发于65～74岁.结论 广东地区成熟T和 NK/T细胞淋巴瘤多见于结外,好发于男性,总体发病与年龄增长无明显关系,但具体类型有不同的年龄侧重群;常见的类型依次为非特殊型外周T细胞淋巴瘤、结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤及ALCL;EB病毒感染与NK/T细胞淋巴瘤关系密切.
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乙型肝炎病毒C蛋白对NK细胞功能影响的体外研究
目的 研究乙型肝炎病毒C蛋白在NK细胞中的表达及其对NK细胞功能的影响.方法 用脂质体转染法将HBV C基因真核表达载体pHBI-CMV-HBC转入NK-92细胞,通过WesternBlot检测C基因在NK-92细胞中表达,用ELISA法检测NK细胞分泌IFN-γ水平,MTT法检测NK细胞对HepG2细胞的细胞毒作用.结果 Western Blot证实转染有pHBI-CMV-HBC的NK-92细胞能表达HBV C蛋白.转染了重组真核表达质粒的NK-92细胞IFN-γ水平均高于空质粒对照组和空白对照组(P<0.01).与两对照组相比,重组真核表达质粒转染组NK-92细胞对于HepG2细胞的细胞毒活性明显提高,差异具有统计学意义(P<0.01).结论 HBc基因瞬时高表达可影响NK-92细胞分泌IFN-γ和细胞毒功能.
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新生儿脐血NK细胞亚群分布及功能研究
目的 探讨新生儿脐血中自然杀伤细胞(natural killer cell)亚群分布和功能.方法 收集2013年8月至2013年12月在北京地坛医院妇产科分娩的HBV DNA阴性(＜500拷贝/ml)孕妇所生新生儿脐带血以及正常成人外周静脉血,采用流式细胞术测定全血中NK细胞不同亚群频数及分布以及pDC频数和表面分子(CD80、CD83、CD86)的表达;采用Luminex技术检测两组血清中IFN-r、IFN-a、IL-10、IL-6水平.结果 新生儿CD16+ CD56+ NK细胞频数显著低于成人组(19.36±11.41,44.30±9.79,P=0.000),其中CD16+ CD56dim NK阳性率显著低于成人组(20.01 ±11.47,43.77±9.72,P=0.000),但CD16-CD56bright NK在两组中差异无统计学意义;新生儿pDC频数及其表面CD80、CD83、CD86阳性率均显著低于成人组(P=0.000);脐血中细胞因子IFN-r含量显著低于成人组(P=0.003),但IFN-a、IL-6和IL-10在两组之间差异无统计学意义.结论 新生儿NK细胞和pDC的频数低于成人.
