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二烯丙基二硫化物对HL-60白血病细胞株VEGF表达及分泌的影响
为了研究二烯丙基二硫化物(diallyl disulfide,DADS)对白血病HL-60细胞株VEGF mRNA的表达及VEGF蛋白分泌的作用,并从影响VEGF生成的角度探讨DADS的抗白血病机制,应用ELISA法检测药物作用前后白血病HL-60细胞培养上清液中VEGF蛋白的含量;RT-PCR法检测药物作用前后白血病HL-60细胞VEGFmRNA的相对含量.结果表明:HL-60细胞中均有VEGF mRNA的表达和VEGF蛋白的分泌;与空白对照相比,DADS 3个浓度组(0.625,1.25,2.5μg/ml)作用HL-60细胞48小时和72小时均能下调HL-60细胞VEGF mRNA的表达及VEGF蛋白的分泌(P＜0.01).3个浓度组间差异显著(P＜0.01),其下调HL-60细胞VEGFmRNA的表达及VEGF蛋白的分泌效果与浓度相关(r＞0.9,P＜0.01).结论:DADS可能通过抑制VEGF mRNA的表达及VEGF蛋白的分泌发挥抗白血病效应.
关键词： 二烯丙基二硫化物 HL-60细胞 白血病 血管内皮细胞生长因子 -
二烯丙基二硫化物诱导G2/M期阻滞对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响
目的 探讨二烯丙基二硫化物(DADS)诱导G2/M期阻滞对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响及其可能的分子机制.方法 将不同浓度的DADS分别处理卵巢癌SK-OV-3和OVCAR-3细胞,采用MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡率,裸鼠移植模型观察体内抑瘤效果.进而应用流式细胞术检测细胞周期分布的变化,Western blot检测细胞中G2/M检验点相关信号通路、增殖和凋亡相关蛋白的表达.结果 MTT法检测显示,不同浓度的DADS作用SKOV-3 (F=247.86,P=0.000)和OVCAR-3细胞(F=302.54,P=0.000)后,随着DADS浓度增高,细胞增殖抑制率明显升高,呈浓度依赖性.DADS处理24h时SK-OV-3 (F =335.12,P=0.000)和OVCAR-3细胞(F=347.43,P=0.000)的增殖抑制率明显高于处理12 h和48 h时的细胞抑制率,呈明显的时间依赖性.流式细胞术检测结果显示,不同浓度的DADS作用SK-OV-3、OVCAR-3细胞后,随着DADS浓度的增高,细胞凋亡率明显升高,呈明显的浓度依赖性(P＜0.05).DADS处理24h时SK-OV-3和OVCAR-3细胞的凋亡率明显高于处理12和48h时,呈明显的时间依赖性(P＜0.05).与空白处理组相比,腹腔注射DADS溶液可明显抑制卵巢癌细胞的裸鼠移植瘤体积(F=548.23,P=0.000;F=311.84,P=0.000).将30 mg/L的DADS作用于SK-OV-3和OVCAR-3细胞24h后,与空白处理细胞相比,DADS处理后的SK-OV-3和OVCAR-3细胞中处于G2期的细胞百分率明显增加(F=375.11,P=0.000;F=256.48,P=0.000).将30 mg/L DADS分别作用于SK-OV-3和OVCAR-3细胞24h后,p-Chk1 (ser345) (F=108.89,P=0.013;F=97.58,P=0.018)、p-CDC25C(ser216) (F=87.25,P=0.025;F=114.25,P=0.009)、p-P53 (ser15) (F=112.41,P=0.011;F=255.87,P=0.000)、P21WAF1(F=246.38,P=0.001;F=141.36,P=0.005)和p-CDK1(Thr14/Tyr15)蛋白(F=298.12,P=0.000;F=233.15,P=0.000)的表达明显增加,CDK1 (F=308.24,P=0.000;F=257.55,P=0.000)和CyclinB1蛋白(F =223.15,P=0.001;F=241.28,P=0.000)的表达明显减少,增殖和凋亡相关蛋白PCNA(F=77.36,P=0.031;F=157.28,P=0.001)、Ki-67(F=205.64,P=0.007;F=315.22,P=0.000)和Survivin蛋白(F=122.13,P=0.013;F=188.24,P=0.000)表达明显减少,Cleaved-caspase3蛋白表达明显增加(F=86.46,P=0.023;F=99.11,P=0.009).结论 DADS可抑制卵巢癌细胞增殖,诱导其凋亡;其分子机制可能与G2/M检验点Chk1-CDC25C和P53-P21WAF1通路激活、CDK1活性降低、CDK1和CyclinB1蛋白表达减少,终导致卵巢癌细胞G2/M期阻滞有关.
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AD模型小鼠脑组织AQP4、SNTA1表达水平的变化及DADS的干预研究
目的 探讨二烯丙基二硫化物(DADS)对阿尔茨海默病(AD)模型小鼠的干预作用,为AD的防治提供理论依据.方法 将20只5月龄APPswe/PS1 dE9双转基因鼠按窝别和体质量分为AD模型组和AD干预组,同时将野生型小鼠分为野生对照组和野生干预组,每组10只.干预组小鼠每日1次灌胃给予50 mg/kg DADS,AD模型组小鼠和野生对照组小鼠每日1次灌胃等量溶媒,连续处理6月.采用水迷宫和旷场实验测定小鼠神经行为学变化.免疫组化法分析大脑皮质β-淀粉样蛋白(Aβ)沉积情况,qRT-PCR和Western blot法分别检测大脑皮质水通道蛋白4(AQP4)、α-互养蛋白(SNTA1) mRNA及蛋白的表达水平.结果 与对照组相比,AD模型组小鼠水迷宫实验中定位航行逃避潜伏期延长、穿越平台次数减少,在旷场实验中中央停留时间延长、穿格次数和直立次数减少,大脑皮质Aβ沉积数量增多,AQP4mRNA及蛋白表达升高,SNTA1mRNA及蛋白的表达水平下降,差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜ 0.01).与AD模型组相比,DADS干预组小鼠的定位航行逃避潜伏期缩短、穿越平台次数增多,中央停留时间缩短、穿格次数和直立次数增多,大脑皮质Aβ沉积数量减少,AQP4及SNTA1 mRNA及蛋白的表达水平上调,差异均有统计学意义(P＜ 0.05或P＜ 0.01).结论 AD模型小鼠大脑皮质AQP4表达升高,但SNTA1表达的降低可改变AQP4极性分布而影响AQP4的功能.DADS可明显减少AD模型小鼠大脑皮质Aβ沉积,改善认知能力,其作用机制可能与DADS调节AQP4表达及其极性分布有关.
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二烯丙基二硫化物诱导胃癌BGC823细胞周期G_2/M期阻滞的机制制
目的:以细胞周期作为抗癌药物新靶点的研究,可能是很有前途的.笔者的前期工作发现,二烯丙基二硫化物(diallyl disulfide,DADS)可抑制人胃癌BGC823细胞增殖,其增殖抑制与细胞周期G_2/M期阻滞有关;DADS可能是通过抑制细胞分裂周期蛋白25C(Celldivision cycle protein25C,Cdc25C)、cyclinB1表达使部分BGC823细胞停滞在G_2/M期,但G_2/M期阻滞的机制还未完全阐明.本研究进一步探讨DADS诱导人胃癌BGC823细胞周期G_2/M期阻滞的可能机制.方法:RT-PCR检测Chk1和Chk2在mRNA水平的改变;Western blot检测DADS处理BGC823细胞前后细胞周期相关蛋白ATM-RAD3相关基因(ATM-RAD3-related gene,ATR)、细胞周期检查点蛋白激酶1(checkpoint kinase1,Chk1)、细胞周期检查点蛋白激酶2(checkpoint kinase2,Chk2)表达和ATR、chk1、Chk2的磷酸化程度;免疫共沉淀检测Chk1、Chk2与Cdc25C结合情况.结果:RT-PCR检测显示,Chk1和Chk2的mRNA水平在处理组与未处理组之间无显著性差异(P>0.05).Western blot检测显示,总Chk1和Chk2蛋白表达在细胞处理前后均无明显改变,但15mg/L DADS刺激BGC823细胞2h后,处理组细胞Chk1磷酸化程度明显增加,并呈时间依赖性(P<0.05),而Chk2磷酸化程度在处理组与未处理组之间无显著性差异(P>0.05).15mg/L DADS作用15～120min,ATR磷酸化程度明显增加.呈时间依赖性(P<0.05),而ATR表达无改变.免疫共沉淀分析表明,DADS能促进BGC823细胞Chk1与Cdc25C结合,而对Chk2与Cdc25C结合无影响.结论:DAD诱导人胃癌BGC823细胞G_2/M期阻滞与Chk1的活化有关,DADS可能是通过激活ATR、Chk1,调节Cdc25C的表达引起人胃癌BGC823细胞G_2/M期阻滞.
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Cdc25C cyclin B1在二烯丙基二硫化物诱导人胃癌BGC823细胞G2/M期阻滞中的作用
目的:研究二烯丙基二硫化物(DADS)对人胃癌BGC823细胞的增殖及细胞周期的影响以及Cde25C、cvclin B1的作用.方法:采用MTT法检测BGC823细胞的生长活性;流式细胞术分析DADS对细胞周期分布的影响;Westerablot观察DADS对Cdc25C蛋白、eyelin B1蛋白表达的影响.结果:MTT比色实验结果显示,DADS对人胃癌细胞具有明显的生长抑制作用,且呈显著的剂量一效应依赖关系(P＜0.05).流式细胞分析发现,DADS作用12h时,G2/M期细胞增加到30.1%;24h时增加到58.1%;36h达50.2%(P＜0.05).Western blot结果表明,DADS呈时间依赖性抑制人胃癌BGC823细胞周期Cdc25C磷酸酶的表达,cyclinB1表达在DADS处理24h后开始下降(P＜0.05).结论:DADS可抑制人胃癌BGC823细胞增殖,其增殖抑制与细胞周期C2/M期阻滞有关;DADS可能是通过抑制Cdc25C、eyclinB1表达使部分BGC823细胞停滞在G2/M期.
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洋葱营养价值高
洋葱,又称甜葱、胡葱、球葱和洋葱头等,是一种集营养、治疗和保健于一身的蔬菜.英国大文豪史蒂文森赞美洋葱为“根中玫瑰”.洋葱含有蒜素、硫化硒及谷胱甘肽等物质,能抑制致癌物质的合成,促进吞噬细胞破坏癌细胞,因此具有抗癌作用.洋葱所含的二烯丙基二硫化物及少量硫氨酸等化合物,除降血脂、降胆固醇外,还可预防动脉粥样硬化,对高血压、高血脂、糖尿病、动脉硬化均有调理和治疗作用.
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p42/44 MAPK激酶抑制剂增强二烯丙基二硫化物诱导CNE2细胞凋亡
目的:探讨二烯丙基二硫化物(DADS)诱导CNE2细胞凋亡及p42/44MAPK信号转导通路对此过程的作用.方法:DADS处理CNE2细胞24h后,荧光显微镜下观察形态学变化及凋亡细胞计数,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法测定细胞活性,流式细胞仪检测凋亡细胞,蛋白质印迹法检测磷酸化p42/44 MAPK表达.结果:DADS(50～150 μmol·L-1)作用24 h后,诱导CNE2细胞产生典型的凋亡细胞形态学变化(核浓染核碎裂),流式细胞仪结果显示,随着DADS给药浓度增加,细胞凋亡率呈浓度依赖性逐渐升高,细胞周期中各期细胞所占百分率的变化无规律,DADS(50～150μmol·L-1)浓度依赖性刺激磷酸化p42/44 MAPK的表达,p42/44 MAPK抑制剂U0126显著增强DADS致凋亡作用.结论:DADS诱导CNE2细胞凋亡时激活磷酸化p42/44MAPK表达,磷酸化p42/44 MAPK抑制剂能增强DADS诱导CNE2细胞凋亡效应.
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p38 MAPK激酶抑制剂增强二烯丙基二硫化物诱导CNE2细胞凋亡
目的研究二烯丙基二硫化物(DADS)诱导CNE2细胞凋亡及p38 MAPK信号转导通路对此过程的作用.方法 DADS处理CNE2细胞24 h后,荧光显微镜下观察形态学变化及凋亡细胞计数,MTT法测定细胞活性,流式细胞仪检测凋亡细胞,蛋白质印迹法检测磷酸化p38 MAPK表达.结果在培养的CNE2细胞中, DADS(50～150 μmol*L-1)作用24 h后,DADS诱导CNE2细胞产生典型的凋亡细胞形态学变化(核浓染,核碎裂),流式细胞仪结果显示,随着DADS给药剂量增加,细胞周期中各期细胞所占百分率的变化无规律,细胞凋亡呈剂量依赖性,DADS(50～150 μmol*L-1)浓度依赖性刺激磷酸化p38 MAPK的表达,p38 MAPK抑制剂SB203580明显增强DADS致凋亡作用.结论 DADS诱导CNE2细胞凋亡时激活磷酸化p38 MAPK表达,磷酸化p38 MAPK抑制剂增强DADS诱导CNE2细胞凋亡效应.
关键词： 细胞凋亡 磷酸化 p38 MAPK 二烯丙基二硫化物 蛋白质印迹 CNE2细胞 -
洋葱对人体的八大益处
洋葱又名葱头,它作为蔬菜已有5000余年的历史,洋葱含有丰富的钙、磷、铁、维生素B1、维生素C、胡萝卜素、尼克酸、前列腺素A、二烯丙基二硫化物及硫氨基酸等成分,其中的硫氨基酸具有降低血脂和血压的功效,前列腺素A具有扩张血管、降低血黏度、预防血栓的作用.
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二烯丙基二硫化物对小鼠Lewis肺癌细胞增殖的抑制作用
目的 探讨大蒜提取物二烯丙基二硫化物(DADS)对小鼠Lewis肺癌细胞增殖的抑制作用.方法 取对数生长期的细胞,分别用0、20、50、100、200 μmol/L的DADS处理24h,用CCK-8法测算细胞生长抑制率.结果 用20、50、100、200 μmoL/L的DADS处理24h后,小鼠Lewis肺癌细胞生长抑制率分别为16.35％±0.40％、28.85％±0.70％、35.09％±0.50％、41.14％±1.10％,不同DADS药物浓度间比较,P均＜0.01.结论 DADS呈浓度依赖性抑制Lewis肺癌细胞的增殖.
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二烯丙基二硫化物诱导人肺癌细胞凋亡机制
目的 研究大蒜提取物二烯丙基二硫化物(DADS)诱导人非小细胞性肺癌细胞H1299凋亡及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)对此过程的影响,探讨DADS抗肿瘤的可能机制. 方法用MTT法检测DADS处理24 h后 H1299细胞活性;用蛋白质印迹法测定H1299细胞内磷酸化-p42/44 MAPK的表达.结果 与对照组相比,DADS呈浓度依赖性诱导H1299细胞凋亡;蛋白质印迹法分析显示,DADS可激活p42/44 MAPK,且磷酸化-p42/44 MAPK的表达呈浓度依赖性增加.结论 DADS能诱导H1299人非小细胞性肺癌细胞发生细胞凋亡,并呈浓度依赖性诱导磷酸化-p42/44 MAPK表达.
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从大蒜有机硫化合物开发抗癌药的潜在可能
有机硫化合物(OSCS)是从大蒜中提取的油溶性有机硫化合物.大量研究表明,OSCS能通过多种信号途径抑制肿瘤细胞生长,并诱导肿瘤细胞凋亡.该文主要综述大蒜素有机硫化合物主要成分二烯丙基三硫、二烯丙基二硫的抗癌机制及其作为抗癌药的潜在应用前景.
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大蒜有效成分的药理作用研究进展
大蒜含有多种化学成分,目前发现其主要的生物活性物质是二烯丙基一硫化物、二烯丙基二硫化物、二烯丙基三硫化物和蒜氨酸等硫化物,这些有效成分具有抗氧化、抗肿瘤、抗感染、防治心脑血管疾病、调节肝脏药物代谢酶、抗神经变性和调节细胞内Ca2+水平等广泛的药理学作用.
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DADS提高HSV-tk/GCV自杀基因系统对兔晶状体上皮细胞旁观者效应的机制
目的:探讨二烯丙基二硫化物(dialyl disulfide,DADS)提高重组腺相关病毒(recombinant adenoassociated virus,rAAV)介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpes simplex virus kinase,HSV-tk)/丙氧鸟苷(ganciclovir,GCV)系统对兔晶状体上皮细胞旁观者效应的可能机制.方法:应用免疫组织化学方法检测正常兔晶状体上皮细胞间隙连接蛋白43(conRexin 43,Cx43)及转染HSV-tk基因的晶状体上皮细胞Cx43的表达,以及不同浓度的DADS诱导下的2种细胞的Cx43表达,MTT比色法检测细胞存活率.结果:兔晶状体上皮细胞Cx43及转染HSXV-tk基因的晶状体上皮细胞的Cx43经DADS诱导后表达阳性明显增强,尤其以50μmol/L DADS明显.MTT比色法检测显示DADS增强了HSV-tk/GCV自杀基因系统的旁观者效应.结论:DADS可以提高晶状体上皮细胞Cx43的表达,并可提高HSV-tk/GCV自杀基因系统对兔晶状体上皮细胞的旁观者效应.
关键词： 二烯丙基二硫化物 旁观者效应 单纯疱疹病毒胸苷激酶 间隙连接蛋白43 -
二烯丙基二硫化物对膀胱癌细胞p-ERK表达的影响研究
目的 观察大蒜提取物二烯丙基二硫化物对人膀胱癌T24细胞株p ERK表达的影响,以探讨二烯丙基二硫化物抗膀胱癌的作用,为应用于临床肿瘤的治疗提供部分理论基础.方法 用培养的人膀胱癌T24细胞株与二烯丙基二硫化物共孵育培养48 h后,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测二烯丙基二硫化物对人膀胱癌T24细胞株p-ERK基因转录的影响;并裂解人膀胱癌T24细胞株提取细胞总蛋白,蛋白免疫印迹检测p-ERK蛋白的表达情况.结果 人膀胱癌T24细胞株与二烯丙基二硫化物共孵育后,p-ERK基因表达mRNA的水平明显降低(P＜0.05),而对照组表达水平无明显变化(P＞0.05);人膀胱癌T24细胞株与二烯丙基二硫化物共孵育后即可检测出p-ERK蛋白的表达减少(P＜0.05),而对照组表达水平无明显变化(P＞0.05).结论 二烯丙基二硫化物可下调人膀胱癌T24细胞株p-ERK基因的转录与p-ERK蛋白的表达,这可能是二烯丙基二硫化物抗癌的机制之一.
关键词： 二烯丙基二硫化物 人膀胱癌T24细胞株 p-ERK -
蒜汁复合饮驱铅效果初探
大蒜的主要化学成份为二烯丙基二硫化物、蒜素和蒜氨酸。蒜氨酸在蒜氨酸酶的作用下生成蒜素。大蒜中还含有二十多种微量元素和十八种游离氨基酸；富含维生素C、维生素A、维生素B1、B2等，微量元素锗、硒。近年来，国内外研究证明，大蒜具有强力解毒作用，可以中和经由空气、食物和水等媒介进入人体内的一切毒素，避免身体受到伤害[1]，但对蒜汁复合饮驱铅作用的研究尚无完整报道。本研究在探索大蒜脱臭新工艺的基础上，配制成蒜汁复合饮，对印刷行业接铅工人进行驱铅效果的初步探讨。1 内容和方法1.1 择时象选择尿铅在0.24tmol／L左右的印刷行业铅作业工人10人，以尿铅为主要观察指标，每日服用蒜汁复合饮50 ml(蒜汁复合饮含大蒜34％)，连服15 d。另选尿铅在0．24 μmol／L左右的印刷行业铅作业工人10人，作为对照组，采用配对t检验,观察其排铅效果。接铅作业工人服用蒜汁复合饮的同时，均继续从事铅作业。1.2 尿样的采集收集一次尿样(50ml)于聚乙烯瓶中，每100 ml尿样加1ml硝酸防腐，在4℃冰箱中保存。1.3 方法采用双硫腙比色法，日本岛津UV-120型分光光度计在波长510 nn处比色定量。三组数据测定均在同一实验条件下进行。每人每次取尿样三份，取其平均值。
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二烯丙基二硫化物诱导人肺癌H1299细胞凋亡机理研究
目的:研究大蒜提取物二烯丙基二硫化物(DADS)诱导人非小细胞性肺癌细胞H1299凋亡及细胞周期阻滞对此过程的影响,探讨DADS抗肿瘤的可能机制.方法:MTT法检测细胞活性、Hoechst 33258染色法计数凋亡细胞、流式细胞术检测细胞凋亡率及周期分布.结果:与未处理的对照组相比,DADS可诱导H1299细胞产生典型的凋亡细胞形态学变化,并呈浓度依赖性诱导H1299细胞凋亡;较高浓度的DADS能诱导G2/M期细胞百分率显著升高.结论:DADS能诱导H1299细胞发生细胞凋亡,并诱导H1299细胞发生G2/M期阻滞.
