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ShRNA靶向干扰BHRF1基因抑制鼻咽癌细胞增殖的实验研究
目的：观察BHRF1 shRNA质粒载体转染对人鼻咽癌CNE2细胞中的BHRF1基因沉默及细胞增殖和凋亡的影响，以及肿瘤细胞对放射敏感性的变化。方法利用RNAi技术将负载BHRF1 shRNA的质粒载体转染至人鼻咽癌CNE2细胞，一组为BHRF1 shRNA质粒载体转染过的CNE2细胞（观察组），未进行转染的CNE2细胞确定为对照组，经RT-PCR扩增人鼻咽癌组织中BHRF1 cDNA 片段， RT-PCR和Western blot检测BHRF1基因的蛋白水平的表达。并且利用顺铂进行实验，观察使用顺铂后，BHRF1 shRNA转染后的肿瘤细胞是否对放射敏感性有变化。结果 BHRF1 shRNA转染鼻咽癌CNE2细胞后，细胞内BHRF1 mRNA表达量（2.02±0.53），对照转染前明显下调，明显下调，与对照组的（29.82±0.64）比较，差异有显著性意义（P<0.01）；DDP和8G放疗作用24 h以后，被转染的细胞的中的蛋白表达大大降低（P<0.05），癌细胞凋亡率上升，明显比对照组癌细胞的凋亡率高（P<0.05）。结论利用RNA干扰技术对人鼻咽癌治疗具有潜在应用价值，BHRF1 shRNA质粒载体不仅仅能调控细胞基因的表达，而且还能够提高癌细胞对顺铂的敏感性。
关键词： BHRF1 shRNA CNE2细胞 BHRF1 顺铂 RT-PCR -
热毒净对鼻咽癌细胞株CNE2抑制作用的研究
目的:观察热毒净对表达EB病毒抗原的CNE2细胞致瘤的影响及其细胞毒作用.方法:用MTT法测定热毒净对CNE2细胞的细胞毒作用,抑瘤实验检测热毒净对CNE2细胞致瘤的影响.结果:MTT法显示在低浓度下,热毒净对体外培养的CNE2细胞生长没有明显的抑制作用,但在高浓度下,对细胞生长有抑制作用.热毒净在无细胞毒的浓度下,能抑制CNE2细胞在SCID小鼠体内所致肿瘤的生长.浓度越高,热毒净对肿瘤生长的影响越明显.结论:热毒净能抑制CNE2细胞在SCID小鼠体内的致瘤作用.
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甘蔗叶多糖对CNE2细胞的体外抑制作用研究
目的:研究甘蔗叶多糖对鼻咽癌CNE2细胞株的体外抑制作用,并初步探讨其作用机制.方法:采用热水浸提及DEAE-纤维素层析柱法提纯甘蔗叶多糖,以MT研去观察其体外抗肿瘤活性,透射电子显微镜观察凋亡细胞的超微结构,采用流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡率,实时荧光定量PCR检测凋亡相关促凋亡基因(Bax)、凋亡抑制基因(Bcl-2)的变化.结果:浓度为10、20、40、80、160μg/mL的甘蔗叶多糖作用后,CNE2细胞抑制率及凋亡率均明显增加(P＜0.01),且呈浓度依赖性.电镜下可见160μg/mL浓度的甘蔗叶多糖可使CNE2细胞出现凋亡小体.荧光定量PCR技术测定Bax在CNE2细胞中表达上调,Bcl-2则表达下调,并呈浓度依赖关系.结论:甘蔗叶多糖能明显抑制人鼻咽癌CNE2细胞增殖,诱导细胞凋亡,可能通过提高Bax表达及降低Bcl-2的表达,从而发挥抗肿瘤作用.
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人鼻咽癌吉西他滨耐药细胞系的建立及其生物学特性
目的 建立人鼻咽癌吉西他滨耐药细胞系并研究其生物学特性.方法 采用药物大剂量冲击法和浓度梯度递增法建立人鼻咽癌吉西他滨多药耐药细胞亚系CNE2/Gem,MIT法检测CNE2和CNE2/Gem对几种常用抗肿瘤药物的半数抑制浓度(IC50)和耐药系数(RI),流式细胞术测定细胞周期及细胞内荧光药物罗丹明的蓄积,绘制细胞生长曲线,计算倍增时间并在光镜下观察细胞形态.结果 从生长曲线计算出(CNE2和CNE2/Gem的倍增时间分别为17.13和23.13h.CNE2和(CNE2/Gem对吉西他滨的IC50分别为2.84±1.63和42.95±7.53μg/ml,RI为23.61(P＜0.001),对顺铂(DDP)、5-氟尿嘧啶(5-FU)及长春新碱(VCR)的RI分别为15.00(P＜0.001)、6.98(P＜0.01)及12.80(P＜0.05),表明其具有多药耐药特征.流式细胞测定显示(CNE2/Gem内罗丹明的蓄积明显低于CNE2(3.56 vs 220.35).光镜下见CNE2/Gem胞体变圆,大小不一,胞质内有较多颗粒.结论 成功建立了稳定的人鼻咽癌吉西他滨耐药细胞系CNF2/Gem,且耐药性能显著,可作为进一步研究鼻咽癌吉西他滨耐药机制较为理想的模型.
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苦参碱改构体X抑制鼻咽癌细胞CNE2增殖作用的实验研究
目的:探讨苦参碱改构体X对人鼻咽癌细胞株CNE2的增殖抑制作用及其可能的机制.方法:本实验分5组,即实验组、阴性对照组、正常细胞对照组、溶剂组、空白对照组(调零孔);倒置光学显微镜下观察细胞形态:采用MTT实验检测药物抑制率;流式细胞仪检测细胞周期的分布和凋亡情况.结果:加药细胞组形态变圆、变小、胞内可见空泡;MTT检测可见药物对人鼻咽癌细胞株CNE2有显著的抑制作用(P＜0.05),抑制率大可达到97.9%,但是对人脐静脉内皮细胞没有表现出相应的抑制作用,抑制率大仅达到7.7%;流式细胞仪检测结果可见CNE2细胞的周期阻滞在S期和有浓度依赖性的明显凋亡,凋亡率大可达89.71%.结论:苦参碱改构体X可通过细胞周期S期阻滞和诱导细胞凋亡来抑制鼻咽癌细胞的增殖分裂.
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白杨素联合喜树碱促进鼻咽癌细胞CNE2凋亡作用研究
目的 研究白杨素联合喜树碱对鼻咽癌细胞CNE2凋亡的影响,并对其分子机制做初步探讨.方法 白杨素以不同浓度(10、20、40 μmol/L)单独/联合喜树碱(1 μg/mL)处理CNE2细胞后,于普通及荧光倒置显微镜下观察细胞形态变化,获得细胞死亡的定性资料;MTT法分析细胞活性,获得细胞死亡的定量资料;并以Western blotting方法检测凋亡标志蛋白caspase-3和PARP的变化情况及凋亡抑制蛋白Bcl-xL随时间的变化规律.结果 形态学观察发现,与对照组比较,白杨素联合喜树碱处理CNE2细胞后,细胞出现明显的死亡量增加,而单独白杨素、喜树碱和未处理的对照组则未观察到细胞的明显减少;MTT法分析的定量资料也支持这一结果,联合处理组细胞存活率随着白杨素剂量增加而下降,与未处理的对照组比较均有统计学意义(P＜0.05),而且与单独白杨素及单独喜树碱组比较均有统计学意义(P＜0.05);Hochest 33342荧光染色在联合处理组可观察到明显的核固缩细胞增加;Western blotting检测到凋亡标志蛋白caspase-3和PARP原蛋白减少、相应的活化裂解片段出现;全caspase酶抑制剂z-VAD-fmk可有效抑制联合处理引起的CNE2细胞凋亡,阻止凋亡标志蛋白caspase-3和PARP的活化降解;喜树碱引起的凋亡抑制蛋白Bcl-xL表达量增加,随联合处理时间延长而明显下调.结论 白杨素联合喜树碱具有促进CNE2细胞凋亡的能力,凋亡抑制蛋白Bcl-xL表达下调是其重要的分子机制.
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miR-10b调控PLK1蛋白对鼻咽癌细胞恶性生物学行为的作用
目的 探讨微小核糖核酸-10b(miR-10b)调控PLK1蛋白对鼻咽癌细胞恶性生物学行为的作用.方法 检测miR-10b鼻咽癌组织和细胞株中的表达水平,miR-10b和PLK1蛋白之间的关系;miR-10b对鼻咽癌细胞增殖和细胞周期影响;miR-10b对裸鼠移植瘤中PLK1表达的影响.结果 鼻咽癌肿瘤组织中miR-10b的表达水平低于正常组织,且在CNE2细胞株中表达水平低(P<0.05);抑制miR-10b后PLK1蛋白的表达水平上调,增加miR-10b的表达可抑制鼻咽癌细胞的增殖(P<0.05).miR-10b-mimic组G1和M期细胞比例减少,S期和G2期的细胞比例增加;miR-10b组裸鼠肿瘤平均体积和平均质量均高于对照组(P<0.05),miR-10b-mimic组裸鼠肿瘤中ki67和PCNA表达水平较强.结论 miR-10b靶向PLK1对鼻咽癌细胞增殖行为有一定的抑制作用,miR-10b在人鼻咽癌的发生发展过程中扮演着重要角色.
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人参皂苷单体Rh2对人鼻咽癌CNE2细胞株增殖、凋亡的影响及其机制
目的 研究人参皂苷单体Rh2对人鼻咽癌CNE2细胞株增殖、凋亡的影响及其可能的机制.方法 取对数生长期的CNE2细胞,用不同浓度的Rh2(20、40、60、80、100 μmol/L)处理不同时间(24、48、72 h),并设对照组(正常培养),采用MTT法检测各组细胞的增殖活力;用适作用浓度的Rh2分别处理CNE2细胞24、48、72 h,采用Hoechst荧光染色法观察细胞凋亡形态;流式细胞术检测细胞凋亡率、周期分布以及膜电位的变化;Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3、CyclinD1、P53的表达水平.结果 Rh2对CNE2细胞的增殖具有明显的抑制作用,且呈时间和剂量依赖性,60 μmol/L Rh2作用72 h为适作用浓度和时间.经60 μmol/L的Rh2作用48、72 h后,凋亡细胞数目增多,凋亡细胞体积变小,细胞核出现染色质不均匀,核浓缩聚集、碎裂,边集程度增大等现象.与对照组比较,经60 μmol/L的Rh2作用24、48、72 h,CNE2细胞的凋亡率逐渐增加(P＜0.01);G0/G1期细胞比例逐渐升高(P＜0.01),S期(P＜0.01)和G2/M期细胞比例逐渐下降;细胞的膜电位逐渐降低(P＜0.05);促凋亡蛋白Bax、激活型CasPase-3和P53蛋白表达上调(P＜0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2和细胞周期相关蛋白CyclinD1表达下调(P＜0.05).结论 人参皂苷单体Rh2具有抑制CNE2细胞增殖,使细胞周期阻滞在G0/Gi期,诱导细胞凋亡的作用,其机制可能是通过Caspase/CyclinD1信号通路实现的.
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二烯丙基二硫诱导人鼻咽癌CNE2细胞凋亡及其可能的分子机制
背景与目的:二烯丙基二硫(DADS)是大蒜中的一种脂溶性单体化合物,对多种肿瘤细胞有促凋亡作用.本实验旨在探讨DADS抑制人鼻咽癌CNE2细胞增殖与诱导凋亡的生物学效应及可能的分子机制.方法:分别采用MTT、光学显微镜、流式细胞仪、DNA琼脂糖凝胶电泳与Western blot检测DADS抑制CNE2细胞增殖与诱导凋亡作用及Bcl-2、Bax和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase 3)蛋白的表达.结果:MTT结果显示,50、100、200及400 μmol/L DADS作用CNE2细胞48 h,抑制率分别为3.66%、14.25%、29.66%及61.28%,呈浓度依赖性(P＜0.05).形态学观察发现,DADS处理24 h后,部分CNE2细胞变圆,体积明显缩小,胞质强嗜酸性,核固缩、深染,核染色质积聚至核膜周边,呈现凋亡细胞形态学改变.流式细胞术分析显示,50、100、200和400 μmol/L DADS作用24 h,凋亡率分别为(10.8±1.3)%、(14.8±1.1)%、(21.7±2.0)%及(29.8±2.6)%,呈浓度依赖性诱导CNE2细胞凋亡(n=3,P＜0.05).200及400 μmol/L DADS分别作用CNE2细胞24 h后,DNA凝胶电泳出现典型梯形条带.Western blot检测显示,50、100、200和400 μmol/L DADS处理CNE2细胞24 h后,Bcl-2蛋白与β-Actin的灰度值比分别是1.92±0.21、1.21±0.18、0.89±0.14及0.41±0.09,与对照组(2.24±0.26)比较,差异有显著性(P＜0.05);Bax蛋白与β-Actin的灰度值比分别是0.78±0.14、1.12±0.19、1.54±0.22及2.08±0.27,与对照组(0.33±0.08)比较,差异有显著性(P＜0.05);随浓度的增加,Bcl-2蛋白下调,Bax蛋白表达上调.200、400 μmol/L DADS处理CNE2细胞24 h后,与对照组相比,Caspase 3酶原蛋白条带变细并且可见到蛋白裂解产物,表明DADS可以促进Caspase 3的活化.结论:DADS具有抑制人鼻咽癌CNE2细胞增殖和诱导凋亡的作用,其机制可能与Bcl-2蛋白下调,Bax蛋白表达上调导致Bcl-2/Bax比值下降,促进Caspase 3的活化有关.
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RNAi沉默Survivin基因抑制人鼻咽癌细胞生长
目的 观察RNA干扰沉默Survivin基因对人鼻咽癌CNE2细胞在体内外生长的抑制作用.方法 将Survivin特异性shRNA表达载体pGenesil-1 -survivin经LipofectamineTM 2000介导转染人鼻咽癌CNE2细胞,经G418筛选获得稳定转染的CNE2细胞,荧光显微镜和流式细胞仪检测细胞转染效率；逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot分别检测Survivin基因mRNA和蛋白表达水平；噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力的变化.以稳定转染细胞建立裸鼠荷瘤模型,观测瘤体积的变化,绘制移植瘤生长曲线.结果 流式细胞仪检测pGenesil-1 -survivin细胞转染百分率为(87.13 ±2.21)％；RT-PCR和Western blot结果显示,pGenesil-1 -survivin组对人鼻咽癌CNE2细胞Survivin mRNA和蛋白的抑制率分别为64.55％和51.24％,均较随机序列构建载体的阴性对照(pGenesil-1 -NC)组和空白对照组明显下调(均P＜0.05)；MTT结果显示,pGenesil-1 -survivin组细胞增殖能力明显较pGenesil-1 -NC组和空白对照组降低(均P＜0.05)；体内实验表明,pGenesil-1 -survivin组较pGenesil-1 -NC组和空白对照组能有效抑制BALB/C裸鼠人鼻咽癌的生长(均P＜0.05).结论 沉默Survivin基因可以有效抑制人鼻咽癌CNE2细胞在体内外的增殖,Survivin基因有望成为鼻咽癌基因治疗的有效靶点.
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二烯丙基二硫对人鼻咽癌CNE2细胞周期的阻滞作用
目的 探讨二烯丙基二硫(DADS)对人鼻咽癌CNE2细胞周期的阻滞作用及分子机制.方法 体外培养CNE2细胞,采用MTT比色实验、细胞计数法、细胞形态学观察、流式细胞仪和Western blotting方法分析DADS对CNE2细胞的增殖抑制作用、细胞周期分布的影响及细胞周期相关蛋白p21WAF1的表达.结果 MTT法显示,不同浓度DADS(90、140、240、400 μmol/L)处理CNE2细胞48小时后,生长抑制率分别为3.3%、12.9%、28.3%、56.9%;细胞计数法表明,常规培养CNE2细胞群体倍增时间为24.5小时,DADS的浓度由90 μmol/L增加到400 μmol/L时,其细胞群体倍增时间由27.6小时延长到93.1小时;HE染色结果显示,不同浓度DADS处理CNE2细胞48小时后细胞异型性明显减少,核浆比例明显减少;流式细胞仪分析显示DADS呈浓度依赖性将CNE2细胞阻滞在G0/G1期;Western blotting分析表明,在细胞周期阻滞的同时有p21WAF1蛋白表达上调.结论 DADS对CNE2细胞的抑制增殖作用与G0/G1期阻滞有关,其分子机制可能与调节p21WAF1表达有关.
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p42/44 MAPK激酶抑制剂增强二烯丙基二硫化物诱导CNE2细胞凋亡
目的:探讨二烯丙基二硫化物(DADS)诱导CNE2细胞凋亡及p42/44MAPK信号转导通路对此过程的作用.方法:DADS处理CNE2细胞24h后,荧光显微镜下观察形态学变化及凋亡细胞计数,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法测定细胞活性,流式细胞仪检测凋亡细胞,蛋白质印迹法检测磷酸化p42/44 MAPK表达.结果:DADS(50～150 μmol·L-1)作用24 h后,诱导CNE2细胞产生典型的凋亡细胞形态学变化(核浓染核碎裂),流式细胞仪结果显示,随着DADS给药浓度增加,细胞凋亡率呈浓度依赖性逐渐升高,细胞周期中各期细胞所占百分率的变化无规律,DADS(50～150μmol·L-1)浓度依赖性刺激磷酸化p42/44 MAPK的表达,p42/44 MAPK抑制剂U0126显著增强DADS致凋亡作用.结论:DADS诱导CNE2细胞凋亡时激活磷酸化p42/44MAPK表达,磷酸化p42/44 MAPK抑制剂能增强DADS诱导CNE2细胞凋亡效应.
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p38 MAPK激酶抑制剂增强二烯丙基二硫化物诱导CNE2细胞凋亡
目的研究二烯丙基二硫化物(DADS)诱导CNE2细胞凋亡及p38 MAPK信号转导通路对此过程的作用.方法 DADS处理CNE2细胞24 h后,荧光显微镜下观察形态学变化及凋亡细胞计数,MTT法测定细胞活性,流式细胞仪检测凋亡细胞,蛋白质印迹法检测磷酸化p38 MAPK表达.结果在培养的CNE2细胞中, DADS(50～150 μmol*L-1)作用24 h后,DADS诱导CNE2细胞产生典型的凋亡细胞形态学变化(核浓染,核碎裂),流式细胞仪结果显示,随着DADS给药剂量增加,细胞周期中各期细胞所占百分率的变化无规律,细胞凋亡呈剂量依赖性,DADS(50～150 μmol*L-1)浓度依赖性刺激磷酸化p38 MAPK的表达,p38 MAPK抑制剂SB203580明显增强DADS致凋亡作用.结论 DADS诱导CNE2细胞凋亡时激活磷酸化p38 MAPK表达,磷酸化p38 MAPK抑制剂增强DADS诱导CNE2细胞凋亡效应.
关键词： 细胞凋亡 磷酸化 p38 MAPK 二烯丙基二硫化物 蛋白质印迹 CNE2细胞 -
Bmi-1基因沉默对鼻咽癌细胞CNE2生物学行为的影响
目的 探讨慢病毒靶向沉默Bmi-1基因对鼻咽癌细胞CNE2生物学行为的影响.方法 设计3条Bmi-1shRNA干扰系列,构建慢病毒重组载体PLVx-shRNA2-Bmi-1,用重组载体转染293T细胞,收集上层病毒液浓缩、滴定.将CNE2细胞随机分为5组,对照组不进行感染,shRNA1、2、3组分别感染表达shRNA1、2、3的慢病毒,空载体组感染空载的慢病毒.感染48 h,用RT-PCR及Western blotting法分别检测Bmi-1基因及蛋白的相对表达量,筛选沉默Bmi-1效率佳的干扰序列.用平板克隆形成实验检测Bmi-1基因沉默后CNE2细胞增殖能力,用流式细胞术检测细胞凋亡率和周期分布.结果 插入的序列与设计的3条shRNA序列碱基排列一致,说明目的片段均已正确插入,PLVx-shRNA2-Bmi-1慢病毒表达载体构建成功.与其他两组比较,Bmi-1-shRNA1、2、3组Bmi-1 mRNA及蛋白相对表达量低(P均＜0.05),Bmi-1-shRNA3组低(P均＜0.05),沉默效率佳.与空载体组比较,Bmi-1-shR-NA3组增殖能力弱(P均＜0.05),细胞凋亡率高(P均＜0.05),Bmi-1-shRNA3组G1期细胞比例高、S期细胞比例低(P均＜0.05).结论 沉默Bmi-1基因可抑制鼻咽癌CNE2细胞增殖、促进其凋亡,并改变细胞周期.
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水蛭素对人鼻咽癌细胞增殖的影响及机制
目的 探讨水蛭素对人鼻咽癌细胞(CNE2)增殖的影响及机制.方法 取对数生长期的CNE2细胞随机分为对照组与水蛭素组.对照组常规培养,水蛭素组加入不同浓度的水蛭素进行培养.倒置显微镜下观察细胞形态学变化;MTT法测算CNE2细胞生长抑制率,计算不同时间点半抑制浓度(IC 50);实时荧光定量PCR检测CNE2细胞内Bax、p21 mRNA表达.结果 不同浓度不同时间点水蛭素组生长抑制率均高于对照组,水蛭素组各浓度各时间点生长抑制率比较差异均有统计学意义(P均<0.05).药物作用24、48、72 h的IC 50分别为(8.28±2.1)、(5.11±0.7)、(4.83±0.5)ATU/mL,48、72 h时间点IC 50比24 h高(P均<0.05).与对照组比较,5、8 ATU/mL水蛭素组Bax、p21 mRNA相对表达量高(P均<0.05),8 ATU/mL水蛭素组高(P均<0.05).结论 水蛭素可明显抑制CNE2细胞增殖,该作用可能与水蛭素上调Bax、p21 mRNA表达有关.
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CNE1、CNE2、C666-1和Hone-1细胞的放射生物学特性测定
目的:测定人鼻咽癌细胞CNE1、CNE2、Hone-1及C666-1的放射牛物学特征参数.方法:采用平板集落形成法测定CNE1、CNE2、Hone-1及C666-14种鼻咽癌细胞在0、1、2、3、 4、 6、8、10 Gy照射后的存活分数;通过单击-多靶模型和线性-二次模型分别拟合细胞存活曲线;并计算Do、Dq、N、α、β、α/β值及2 Gy照射时的存活分数(SF2)等放射生物学参数值.结果:4种细胞在2种数学模型拟合的细胞存活曲线差异均有统计学意义(P均<0.05);其参数Do、Dq、N、α、β、α/β和SF2分别在1.818～2.379、0.192～0.880、1.276～2.388、0.085～0.392、0.026～0.036、2.36～15.08和0.416～0.733.结论:较大的放射敏感性差异可能存在于不同甚至相同分化程度的鼻咽癌细胞之间,提示临床鼻咽癌放疗剂量的个体化需求.
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组蛋白乙酰化在二烯丙基二硫抑制CNE2细胞生长增殖中的作用
目的 探讨二烯丙基二硫(DADS)在抑制CNE2细胞生长增殖中,组蛋白乙酰化状态的改变情况.方法 采用MTT、细胞计数、细胞形态学和Western blot方法,分析DADS对CNE2细胞的增殖抑制作用及与其调控细胞组蛋白乙酰化水平的关系.结果 MTT法、细胞计数显示,DADS能明显抑制CNE2细胞增殖,细胞群体倍增时间延长,呈浓度和时间依赖性;HE染色显示,DADS处理CNE2细胞48 h后,细胞异型性明显降低,核浆比明显减少;Western blot分析表明,90 μmol/L、140 μmol/L、240μmol/L和400 μmol/L DADS处理CNE2细胞48 h后,组蛋白H3乙酰化的表达较对照组分别增加20%、32%、42%和30%,差异有统计学意义(P<0.05);组蛋白H4乙酰化程度较对照组差异无统计学意义.结论 DADS可抑制CNE2细胞生长增殖,其作用机制可能与组蛋白H3乙酰化水平提高有关.
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白花蛇舌草多糖诱导鼻咽癌细胞凋亡及其机制研究
目的:研究白花蛇舌草多糖(PEHD)体外抑制鼻咽癌CNE2细胞株增殖,诱导细胞凋亡及其凋亡机制.方法:用不同剂量PEHD(2、4、6 mg/ml)处理CNE2细胞24 h、48 h、72 h,用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测CNE2细胞的增殖情况,计算抑制率.在不同药物浓度(2、4、6 mg/ml) PEHD作用48 h后,用Annexin V-FITC/碘化丙锭双染法(Annexin V/PI)标记的流式细胞术检测CNE2细胞的凋亡率.采用Western blot检测用药前后细胞中Bax蛋白、Bel-2蛋白和easpase-3蛋白的表达水平.结果:MTT结果显示,2、4、6 mg/ml PEHD可以明显抑制CNE2细胞增殖(均P＜0.05),高抑制率可达76.5％,在2～6 mg/ml浓度内随着浓度的增加、时间的延长抑制作用逐渐增强,呈时间-剂量依赖性.流式细胞术检测到4、6 mg/ml PEHD作用48 h后,CNE2凋亡细胞比例显著增加,凋亡率分别为31.32％、46.28％,高于空白对照组4.86％ (P＜0.01).Western blot显示PEHD处理48 h后,CNE2细胞Bax蛋白和caspase-3蛋白表达上升,Bcl-2的表达下降.结论:在一定浓度范围内PE-HD(2、4、6 mg/ml)能够明显抑制鼻咽癌CNE2细胞的增殖,呈时间-剂量依赖性,其抑制作用与诱导细胞凋亡有关;PEHD可通过上调Bax、caspase-3蛋白表达、下调Bel-2蛋白表达,诱导CNE2细胞凋亡.
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海带多糖和茶多酚对鼻咽癌细胞HONE1和CNE2增殖的影响
目的:观察海带多糖(LJP)和茶多酚(TP)单独及联合应用对鼻咽癌(NPC)细胞HONE1和CNE2增殖的影响,了解L JP对体内移植瘤的抑制作用,探讨其抗癌机制.方法:以NPC细胞HONE1和CNE2为研究对象,绘制两者生长曲线,计算倍增时间确定对数生长期细胞,采用MTT检测LJP和TP单独及联合应用对两组细胞的增殖抑制率,运用Annexin V加PI双染法检测LJP对HONE1细胞凋亡的影响；以人NPC 细胞株HONE1建立裸鼠皮下移植瘤模型及行体内抑瘤实验.结果:LJP和TP均对两组细胞有增殖抑制作用,LJP和TP联合应用对两组实验细胞抑制作用均高于两者单独应用的效果,且这种作用呈浓度依赖关系.流式细胞仪检测结果显示,LJP具有诱导HONE1细胞凋亡的作用,凋亡率随着LJP浓度的增加而增高,320 mg/L的凋亡率为(49.51±1.89)％(P＜0.01).体内实验中,25.0 mg/kg LJP组、50.0 mg/kg LJP组的抑瘤率分别为33.7％(P＜0.05)和47.0％(P＜0.01),具有明显抑制移植瘤的作用,而12.5 mg/kg LJP组的抑瘤率仅为16.4％ (P＞0.05).结论:LJp和TP对鼻咽癌细胞HONE1和CNE2增殖均有抑制作用,两者联合应用更具有显著效果,LJP作用机制可能是通过诱导癌细胞凋亡而实现的.
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鼻咽癌CNE2细胞X射线照射诱导的多药耐药
目的 探讨鼻咽癌CNE2细胞X射线照射前后细胞P糖蛋白(P-gp)表达的差异及鼻咽癌CNE2细胞不同时期X射线照射时抑制率的差异,为临床鼻咽癌综合治疗的放化疗顺序的安排提供理论依据.方法 用免疫细胞学检测CNE2细胞株X射线照射前后P-gp阳性表达的差异.用四甲耦氮唑盐(MTT)法检测CNE2细胞株X射线照射前、后化疗药处理及同时X射线照射化疗药处理抑制率的差异.结果 鼻咽癌CNE2细胞X射线照射前P-gp阳性表达率为6.7%、X射线照射后阳性表达率为72.7%(P＜0.05).鼻咽癌CNE2细胞株X射线照射后化疗药处理抑制率较X射线照射前化疗药处理及X射线照射化疗药同时处理,在顺铂、紫杉醇、氟尿嘧啶均下降(P＜0.05).鼻咽癌CNE2细胞X射线照射化疗药同时处理抑制率与X射线照射前化疗药处理比较,在顺铂、氟尿嘧啶,紫杉醇均差异无显著性(P＞0.05).结论 鼻咽癌CNE2细胞X射线照射后可以诱导P-gp表达升高,降低对化疗药物的敏感性.鼻咽癌综合治疗时先化疗再放疗或同时放化疗可能效果更好.
