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  • 疏血通的临床应用

    作者:鲁鑫;权晓丹

    疏血通注射液是纯中药复方制剂,临床用于治疗中风、脑缺血性疾病有很好的疗效.1 药理作用疏血通以水蛭、地龙等动物药组方.水蛭具有破血逐瘀之功效.现代医学认为其作用机理是抗凝血和扩张血管而促进血液循环.其主要成分为水蛭素,是一种特异的凝血酶高亲和抑制剂,为含65个氨基酸的多肽物质,具有抑制凝血酶和血小板聚集的作用.

  • 复方中药制剂对脑缺血模型大鼠血小板聚集影响的实验研究

    作者:张永顺;刘建清;郭国际

    目的探讨银杏叶提取物与水蛭素在抗血小板聚集上的协同作用.方法将银杏叶提取物与水蛭素按2:25(mg/ml)的比例制成无菌注射液,分组经静脉注入脑缺血模型大鼠体内,并用生理盐水和水蛭素作为对照组,分别于6h后采血制备PRP与PPP,与ADP为诱导剂,用比浊法测定血小板聚集率.结果复方中药制剂不同剂量组以及水蛭素均能降低血小板聚集率,延长血小板大聚集率发生时间(P<0.01);复方制剂大剂量组的抗血小板聚集作用明显强于水蛭素组(P<0.01).结论银杏叶提取物与水蛭素在抗血小板聚集上具有一定的协同作用.

  • 抗血栓药物临床应用研究

    作者:王胜红

    目的 分析抗血栓药物在临床治疗中的药理,应用现状及效果,以指导临床合理用药.方法 通过数据分析、临床研究、文献整理来分析抗血栓药物的临床应用现状.结果 抗血栓药物临床治疗效果比较明显的药物是利伐沙班、阿司匹林.结论 血栓性疾病是人类健康的杀手,我们应该致力于研发新型的抗血栓药物,应该加强在水蛭素、小分子抗凝血药物领域的研究.

  • 络风宁0号方对体外培养的人冠状动脉平滑肌细胞和内皮细胞生长的影响

    作者:李红梅;王显

    目的:探讨络风宁0号方不同配比对体外培养的人冠状动脉平滑肌细胞( HCASMC)和内皮细胞( HCAEC)生长的影响及剂量依赖关系,明确中药复合物抗再狭窄的有效性和可行性,为中药药物涂层支架的研发提供实验数据支持。方法用体外培养的HCASMC和HCAEC 3~5代,加入96孔细胞培养板,选择抑制HCASMC生长,而对HCAEC无抑制作用的浓度范围(0.2~3.13 mg/ml)作为佳的水蛭素浓度与1μmol/L紫杉醇组成复合物干预两种细胞,培养48 h后用噻唑蓝比色试验( MTT法)测定各孔吸光值( A值),选择对HCASMC抑制程度大,而对HCAEC抑制程度小且与单用紫杉醇比较能大程度减轻对HCAEC抑制作用的浓度作为络风宁0号方的佳配比。结果在对HCAEC增殖的影响方面,复合药物组与单药紫杉醇组比较,差异无统计学意义( P﹥0.05),而对HCASMC的抑制率明显高于单药紫杉醇组( P﹤0.05),且1μmol/L紫杉醇+0.39 mg/ml水蛭素组可明显降低单药紫杉醇对HCAEC的抑制率。结论选择1μmol/L紫杉醇+0.39 mg/ml水蛭素作为络风宁0号方的佳配比,可大限度抑制HCASMC增殖的同时对HCAEC有小的抑制作用,具备抗再狭窄的有效性和可行性,为新型中药药物涂层支架的研发提供新的思路。

  • 水蛭素基因DNA家族改组方法的建立

    作者:龙铟;刘家云;刘莉;王宗仁

    目的:运用DNA家族改组技术,增加改组分子库的多样性.方法:取水蛭素HV1、HV2、HV3基因等量混合,用DNase Ⅰ消化,回收50bp左右的片段,再经无引物和有引物PCR扩增获得与原基因大小相同的改组分子,将其与载体连接获得水蛭素改组文库,DNA测序观察改组效果.结果:随机挑取3个克隆均为3种模板基因片段的杂合体,表明改组分子库多样性较好,改组方法较为成功.结论:水蛭素基因DNA家族改组方法的成功建立为进一步筛选高活性的水蛭素奠定了基础.

    关键词: 水蛭素 DNA改组 基因
  • 水蛭素鼻腔给药的影响因素研究

    作者:葛卫红;郭建友;韩玉环;石森林;陈立兵

    目的:探讨蛋白多肽类中药水蛭素的经鼻吸收特性及其影响因素.方法:用离体蟾蜍上颚黏膜模型,评价水蛭素的鼻纤毛毒性;采用Valia-chien水平扩散池实验与在体大鼠鼻腔灌流实验,观察水蛭素鼻腔给药的吸收特性以及药物浓度、pH值等因素对吸收的影响.结果:Vali-Chien水平扩散池实验和在体大鼠鼻腔灌流实验显示水蛭素能够透过鼻黏膜吸收;介质pH值、药物浓度等因素均能影响水蛭素的吸收,但水蛭素的浓度与渗透系数、吸收速度间线性关系不明显,水蛭素浓度为0.6mg·mL-t时,鼻黏膜吸收较好.结论:水蛭素对离体蟾蜍上颚黏膜纤毛影响较小,并且能透过鼻黏膜吸收;药物的浓度和介质的pH值对鼻黏膜的吸收均有影响.

  • 水蛭素抑制体外模拟增生陛瘢痕模型的实验研究

    作者:李旋;刘达恩;张国佑;席庆春;牛占国;贾宇博;易成刚;夏炜;郭树忠

    目的:研究水蛭素对体外人增生性瘢痕模型的收缩能力,成纤维细胞的增殖、胶原分泌等功能的影响.方法:体外培养人增生性瘢痕成纤维细胞(HSFB),建立含增生性瘢痕成纤维细胞的胶原网架系统(FPCL),用1、10、50U/ml的水蛭素溶液干预该模型,测定凝胶块收缩指数,利用MTT染色计数活细胞,逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)法检测细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达.结果:浓度为10U/ml和50U/ml水蛭素溶液能够抑制HSFB的活力,使FPCL收缩指数降低,抑制FPCL中HSFB Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达(P<0.05).结论:水蛭素溶液可抑制体外人增生性瘢痕三维模型的收缩功能和成纤维细胞增殖、分泌胶原功能.

  • 黄芪、水蛭、水蛭素及水蛭黄芪配方含药血清对大鼠肾小球系膜细胞生长周期及凋亡的影响

    作者:任现志;蒋淑敏;翟文生

    目的:比较黄芪、水蛭、水蛭素及水蛭黄芪配方对大鼠肾小球系膜细胞(GMCs)生长周期、凋亡的影响及凋亡的形态学观察.方法:应用流式细胞仪检测GMCs生长周期与凋亡;用瑞氏染色,显微镜观察凋亡细胞的形态.结果:水蛭、水蛭素、黄芪、水蛭黄芪配方含药血清均能使大量GMCs处于G0/G1期,与对照组比较有显著性差异(P<0.01);均能提高GMCs凋亡率,水蛭、水蛭黄芪配方与对照组比较有显著性差异(P<0.01).结论:水蛭、水蛭素、黄芪、水蛭黄芪配方含药血清均能阻止GMCs进入S期从而达到抑制增生的目的,且能提高GMCs的凋亡率,水蛭黄芪配方效果优.水蛭次之.

  • 比伐芦定对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化的影响

    作者:孔令东;王耿

    目的 观察比伐芦定对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化的影响.方法将20只ApoE-小鼠随机分成模型组和治疗组,10只C57BL/6J小鼠作为空白对照组.模型组和治疗组给予高脂饲料喂养,空白组给予普通饲料喂养.于第9周开始,治疗组给予比伐芦定治疗4周.全自动生化分析仪检测血清中TG、TC、HDL-C、LDL-C含量,Elisa法检测各组小鼠血清 TNF-α、IL-6水平变化,RT-PCR法检测主动脉VEGF、MMP-9、HIF-1 α mRNA表达水平.结果与空白对照组比较,模型组小鼠血清TC、TG、LDL-C、TNF-α、IL-6水平显著升高(P<0.01),HDL水平显著降低(P<0.01),VEGF、MMP-9、 HIFl-α mRNA表达水平显著升高(P<0.01);与模型组比较,治疗组小鼠血清水平、炎症因子水平以及VEGF、MMP-9、 HIF1-α mRNA表达水平明显改善(P<0.01).结论中药水蛭的有效成分水蛭素的人工合成药物比伐芦定能够通过改善血脂水平,血清炎症因子水平及血管新生等方面发挥良好的抗动脉粥样硬化作用.

  • 水蛭炮制前后质量比较

    作者:张永太

    目的:讨论炮制方法对水蛭的影响.方法:以热浸法测定水溶性浸出物与醇溶性浸出物的含量;以凝血酶法测定水蛭素的含量;以HPLC测定次黄嘌呤的含量.结果:生水蛭的含水量,水溶性浸出物含量,醇溶性浸出物含量,水蛭素含量,均高于制水蛭的含量,而制水蛭的次黄嘌呤含量则高于生水蛭的次黄嘌呤含量.结论:滑石粉炒水蛭使水蛭药性峻烈的活性成分含量降低,从而降低毒性,缓和其破血通经之性.

  • 斑点免疫印迹法快速测定水蛭炮制品中水蛭素水解产物含量

    作者:王厚伟;田景振

    目的:测定4批次水蛭炮制品水蛭素水解产物含量,建立斑点免疫印迹法评价相应生药材药效成分明确的中药炮制品质量新方法.方法:以鼠抗水蛭素单抗为一抗,应用斑点免疫印迹法对水蛭炮制品中水蛭素水解产物作定性检测,杂交信号应用Quantity one软件作定量分析.结果:4批次水蛭炮制品所含水蛭素水解产物的质量分数分别为296.51,165.47,95.58,298.05 μg·g-1.结论:不同批次水蛭炮制品之间水蛭素水解产物含量差异显著,斑点免疫印迹法简便快捷,结果准确,无需大型设备,可用于水蛭与类似中药材炮制品的品质评价.

  • 水蛭素对大鼠实验性脑出血急性期保护作用的研究

    作者:张颖;冯加纯;吴江;戈亚平;张尉华;胡利华;韩威

    目的:通过观察凝血酶特异性抑制剂-水蛭素对脑出血后血肿周围组织胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达及脑组织含水量变化的影响,探讨水蛭素在脑出血后继发性损伤中的保护作用.方法:采用自体未抗凝动脉血注入法,制作实验性脑出血动物模型.将大鼠随机分为正常对照组,脑出血组,水蛭素组.光镜下定性观察脑出血后血肿周围组织的病理变化;采用干湿比重法定量测定脑组织含水量;免疫组化染色观察脑出血后GFAP的变化.结果:光镜示从脑出血后6 h开始血肿周围组织水肿进行性加重,3 d达高峰.脑出血后脑组织含水量逐渐增加,从1 d开始增加显著(P<0.05),3 d达高峰,7 d较3 d组虽有所下降,但与正常对照组相比差异显著.脑出血后1 dGFAP表达明显增强,随后持续增加,7 d达高峰.水蛭素组较相同时间点脑出血组血肿周围组织病理损伤减轻;脑组织含水量降低(P<0.05);GFAP表达有所下降(P<0.05).直线回归分析表明,脑出血后1周内GFAP的变化与脑组织含水量变化呈正相关关系.结论:脑出血后1周内血肿局部应用凝血酶特异性抑制剂-水蛭素具有保护作用,并为脑出血的治疗提供一种新的给药途径.

  • 水蛭中水蛭素含量测定的改进

    作者:范尚坦;李金兰;张勇;赖丽萍

    水蛭素活性测定方法目前主要有以chromonymTH为生色底物的比色法、光散射法和凝血酶滴定法.2005年版<中国药典>收载了用凝血酶滴定法测定水蛭药材中的水蛭素[1],其原理是水蛭素可与凝血酶以1:1比例结合,而凝血酶已有标准的国际单位NIH,因此可以用抗凝血酶活力单位ATU来表示水蛭素的活性,即1个ATU等于中和1个NIH凝血酶的水蛭素量.

  • 以D2EHPA为流动载体的乳状液膜萃取菲牛蛭中的水蛭素实验研究

    作者:方富永;苗艳丽;刘惠钦;何燕君;陈绍红;廖艳;刘少彬;宋文东;赵云涛

    目的:研究以菲牛蛭为原料,二-(2-乙基已基)磷酸(D2EHPA)作流动载体,脱水山梨醇脂肪酸酯(Span 80)为乳化剂,辛烷与D2EHPA混合构成膜溶液,稀HC1溶液作内水相的水蛭素乳状液膜体系萃取.方法:用正交试验优化膜相、内水相体积比(MIPVR),内、外水相的pH,流动载体浓度等水蛭素对照品萃取条件,然后用水蛭素粗提液进行纯化实验.结果:萃取的优条件为:MIPVR 10∶3,内水相pH 2.6,外水相pH 3.4,流动载体质量分数2%;当水蛭素初始浓度为1抗凝血酶活力单位( ATU)·mL -时,对照品ATU回收率为83.06%,粗提液达到82.99%,样品比活力为3 289.48 ATU·mg-1,不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳及光谱扫描结果表明纯度与对照品相当.结论:乳状液膜体系萃取水蛭素工艺较简单,实验样品纯度及ATU回收率均较高.

  • 疏血通注射液治疗外伤性颅内血肿的临床观察

    作者:金晓滢;金晨宇;单建贞;徐粟;楼建国

    疏血通注射液主要成分为水蛭素,是一种特异性凝血酶抑制剂,能对抗凝血酶诱导的神经毒性作用,已广泛应用于治疗缺血性脑血管病.本科近3年来在常规治疗的基础上加用疏血通注射液治疗外伤性颅内血肿32例,并与常规治疗36例对照,现报告如下.

  • 水蛭素对特发性肺间质纤维化大鼠肺组织中纤溶酶原抑制剂-1(PAI-1)mRNA及蛋白表达的干预研究

    作者:李红;谢海彬;刘敏;沈明霞;王海霞;马玉坤

    目的:本研究选用天然水蛭素作为研究药物,采用RT-qPCR、Western blot方法检测IPF大鼠肺组织中PAI-1 mRNA及蛋白表达,观察水蛭素干预大鼠IPF的作用,探讨其可能的作用机制,为临床运用水蛭治疗IPF提供理论依据,从而拓宽IPF的治疗途径.方法:选取180只SPF级同月龄健康的Wistar大鼠,随机数字表法抽取18只大鼠作为空白(K)组,剩余162只大鼠气管内注射博莱霉素统一造模,造模成功后随机选取108只分为模型(M)组、激素(J)组、水蛭素高剂量(G)组、水蛭素中剂量(Z)组、水蛭素低剂量(D)组、水蛭素中剂量联合激素(ZJ)组,每组18只,造模成功后第2天开始给药,分别在造模后7 d、14 d、28 d处死大鼠并收集标本,采用Western blot法检测大鼠肺组织中PAI-1的蛋白表达,RT-qPCR法检测PAI-1的基因表达.结果:不同时间点,M组大鼠肺组织PAI-1基因和蛋白表达均强(P<0.01),而且随着时间的推移,表达强度逐渐增强,说明肺纤维化处于发展趋势,28天大鼠肺间质纤维化程度重.各用药组进行比较发现:在7 d、14 d、28 d,ZJ组大鼠肺组织PAI-1基因和蛋白表达均弱(P<0.01),G组次之(P<0.01),J组表达仅次于G组(P<0.01),J组表达显著低于Z组和D组(P<0.01),而Z组和D组相当(P>0.05).结论:本实验证明,水蛭素具有治疗大鼠肺间质纤维化的作用,通过降低PAI-1基因和蛋白表达水平从而起到治疗大鼠肺间质纤维化是其作用机理之一.同样发现,水蛭素的治疗作用有明显的剂量依赖性,而水蛭素联合激素治疗大鼠肺间质纤维化的疗效更佳.

  • 小口径微孔聚氨酯人工血管的动物体内植入研究

    作者:潘仕荣;李松奇;唐兴奎;郑欢玲;易武;陶军

    将内径4mm的聚氨酯微孔人工血管植入Beagle狗体内,置换一段腹主动脉,研究血管内腔的内皮细胞化过程.该小口径血管具有以下特点:内腔偶联水蛭素以增加抗血栓性;顺应性接近天然血管;血管内表面孔径为40μm,并且管壁的孔径由内到外呈梯度增大.植入初始,人工血管内腔先吸附血浆纤维蛋白.14d见有少量梭形内皮样细胞生成.41d后形成完整内膜,由表面的内皮细胞单层和其下的平滑肌细胞组成.90d后生成稳定的内膜,平均厚度223μm.偶联水蛭素组和无偶联水蛭素组的通畅率分别为88.9%和75.0%.结果表明,改善抗血栓性、顺应性和微观结构可提高小口径人工血管的性能,有效促进内腔自然内皮细胞化,显著提高长期通畅率.

  • 水蛭素融合蛋白研究进展

    作者:张传领;于爱平;靳继德;吴祖泽

    水蛭素是一种高效特异的凝血酶抑制剂,临床上用于血栓病的预防和治疗,但它半衰期短、出血副作用强和功能单一.近年来,通过把水蛭素与某些功能蛋白融合表达来解决这些问题,得到的融合蛋白或在体内延长水蛭素的半衰期,或降低其出血副作用,或带来新的功能,如:溶栓、抑制血小板凝集、特异寻靶等.本文对近年来国内外水蛭素融合蛋白研究状况进行综述.

  • 水蛭素对脑损伤影响的研究现状

    作者:李蓉杰;段大航

    水蛭,俗称蚂蝗,其性味咸苦平,有小毒,入肝、膀胱经,具有破血逐瘀、通经消痰之功,水蛭为破血化瘀的传统中药.近代研究发现,主要成分水蛭素具有抗凝、纤溶、抑制血小板凝聚、降低全血比黏度及降血脂等药理作用.此外,尚含有肝素、抗血栓素,故有很强的抗凝、改善微循环作用.

  • 水蛭素对脑损伤影响的研究现状

    作者:李蓉杰;段大航

    水蛭,俗称蚂蝗,其性味咸苦平,有小毒,入肝、膀胱经,具有破血逐瘀、通经消痰之功,水蛭为破血化瘀的传统中药.近代研究发现,主要成分水蛭素具有抗凝、纤溶、抑制血小板凝聚、降低全血比黏度及降血脂等药理作用.此外,尚含有肝素、抗血栓素,故有很强的抗凝、改善微循环作用.

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