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急性胰腺炎大鼠胰腺组织中Smac/DIABLO、XIAP mRNA的表达及其意义
目的 检测急性胰腺炎(AP)大鼠胰腺组织中促凋亡基因Smac/DIABLO和凋亡抑制基因XIAP的mRNA表达,分析其与疾病严重程度的关系.方法 54只SD大鼠按数字表法随机分成假手术组、急性水肿性胰腺炎(AEP)组、急性坏死性胰腺炎(ANP)组.通过胰胆管逆行注射1%、3.5%脱氧胆酸钠方法分别制备AEP、ANP模型.收集制模后3、6、12 h胰腺标本,常规病理检查;TUNEL法检测细胞凋亡;实时定量PCR法检测Smac/DIABLO、XIAP mRNA的表达.结果 胰腺病理改变表示模型制备成功.术后6 h假手术组、AEP组、ANP组胰腺腺泡细胞凋亡指数分别为0.67±0.82、6.62±0.78和4.70±0.82,各组间相差显著(P＜0.05).AEP组Smac/DIABLO mRNA的表达随时间延长而逐渐增加,ANP组则随时间延长而逐渐下降,以假手术组为参考,6 h时AEP组和ANP组的表达量分别为2.41±0.92和1.47±0.53,相差显著(P＜0.05).相反,AEP组XIAP mRNA的表达随时间延长逐渐下降,而ANP组表达逐渐增加,6 h时表达量分别为5.51±1.07和6.99±1.00,相差显著(P＜0.05).结论 AP时胰腺组织Smac/DIABLO mRNA的表达与细胞凋亡指数一致,与病情严重程度相反,而XIAP mRNA的表达与病情严重程度一致.XIAP、Smac/DIABLO基因参与细胞凋亡的调节.
关键词： 胰腺炎 细胞凋亡 Smac/DIABLO X-连锁凋亡抑制蛋白 -
奥沙利铂对胃癌凋亡相关蛋白PDCD5和XIAP表达影响研究
目的 PDCD5和XIAP均为细胞凋亡关键分子,然而晚期胃癌奥沙利铂化疗与PDCD5和XIAP表达水平相关性尚不明确.本研究探讨奥沙利铂对胃癌组织细胞凋亡及凋亡诱导因子程序性细胞死亡蛋白-5(programmed cell death 5,PDCD5)和凋亡抑制因子X-连锁凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)表达水平的影响.方法 将活性良好的1×107个MGC-803人胃癌细胞接种于裸鼠背部皮下,制备裸鼠胃癌荷瘤模型,HE染色分析肿瘤组织病理形态学.根据实验目的,将荷瘤小鼠随机分为奥沙利铂组、生理盐水组和空白组,每组6只,接种胃癌细胞2周后,奥沙利铂组予以腹腔给药(25 mg/kg),生理盐水组予以腹腔注射生理盐水(25 mg/kg),空白组不予以特殊处理.每周1次,给药6次后处死动物,剥离肿瘤并组织匀浆,实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)检测各分组细胞凋亡诱导因子PDCD5和凋亡抑制因子XIAP基因表达,蛋白质印迹法评估各组PDCD5和XIAP蛋白表达,并对比分析各分组肿瘤组织质量以评估治疗效果,TUNEL染色检测肿瘤组织内细胞凋亡情况.实验数据采用单因素多样本方差分析.结果 MGC-803人胃癌细胞皮下接种裸鼠2周即可成瘤,成瘤大小约1.5 cm×2.0 cm.qPCR结果显示,与生理盐水组、空白组相比,奥沙利铂组显著上调细胞凋亡诱导因子PDCD5基因表达(F=49.452,P<0.001),降低凋亡抑制因子XIAP基因表达水平,F=12.467,P=0.001.蛋白质印迹法证实,与空白组或生理盐水组相比,奥沙利铂组高表达PDCD5蛋白(F=89.954,P<0.001),低表达XIAP蛋白,F=13.032,P=0.001.处死裸鼠后,对比各分组肿瘤组织重量,奥沙利铂组化疗能使裸鼠MGC-803人胃癌移植瘤体积显著缩小,F=9.828,P=0.002.TUNEL染色证实奥沙利铂组移植瘤内细胞凋亡水平高,F=117.148,P<0.001.结论 奥沙利铂化疗能显著增加小鼠胃癌组织内凋亡诱导因子PDCD5表达,同时也明显降低凋亡抑制因子XIAP表达,可促进胃癌组织细胞凋亡.
关键词： 奥沙利铂 胃癌 细胞凋亡 程序性细胞死亡蛋白-5 X-连锁凋亡抑制蛋白 -
大鼠癫(癎)持续状态后海马内X-连锁凋亡抑制蛋白及其负性调控因子的表达
目的 研究大鼠癫(癎)持续状态(SE)后海马组织中X-连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)及其负性调控因子Smac、HtrA2、XAF1的表达变化.方法 建立氯化锂-匹罗卡品致(癎)大鼠SE模型,应用免疫组织化学染色和Western blot方法检测大鼠SE后各时点海马CA3区XIAP、Smac、HtrA2、XAF1及半胱氨酸蛋白酶(caspase)-3蛋白的表达.结果 SE后大鼠海马CA3区XIAP蛋白呈弥散性分布于整个神经元内,SE后2 h(0.5503±0.0172)起逐渐增高(t=115.87),8 h(0.6221±0.0238)达高峰(t=136.69).与对照组(0.1507±0.0165)比较,差异有统计学意义(P<0.01).Same、HtrA2及XAF1蛋白在对照组弱表达,在SE后呈弥散性分布于整个神经元内.2～72 h增高.海马CA3区caspase-3活性蛋白在对照组呈阴性,在SE后4～72 h明显增高.Western blot发现,SE组各时间点XIAP蛋白表达量与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),Smac、HtrA2及caspese-3蛋白在对照组很少表达,在SE后2～72 h增高(P<0.01).结论 XIAP及其负性调控因子Smac、HtrA2、XAF1涉及了SE后神经元凋亡的调节,参与了SE后神经元损伤.
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X-连锁凋亡抑制蛋白与肿瘤关系的研究进展
凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis protein LAP)是一类在结构上具有同源性的细胞内源性凋亡抑制蛋白家族,它们能够对抗各种凋亡诱导因素,抵抗细胞凋亡.
关键词： X-连锁凋亡抑制蛋白 肿瘤 研究进展 -
蒽贝素体外抑制人胰腺癌细胞Mia PaCa-2细胞增殖和诱导凋亡的作用及其机制研究
目的：探讨X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）抑制剂蒽贝素抑制人胰腺癌细胞Mia PaCa-2凋亡的作用及其可能机制。方法 MTT法和流式细胞术检测不同剂量蒽贝素对Mia PaCa-2细胞增殖和凋亡的影响；RT-PCR法对蒽贝素处理前后Mia PaCa-2细胞中XIAP基因的表达进行检测。Western blotting方法检测蒽贝素作用后细胞XIAP、Caspase 3、促凋亡蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bcl-2表达的变化。结果蒽贝素对人胰腺癌细胞增殖具有显著抑制作用（P＜0.05），经不同剂量蒽贝素处理后Mia PaCa-2细胞凋亡率明显增高，与未处理组比较差异具有显著性（P＜0.01）；RT-PCR显示对照组细胞中XIAP的-△△CT值是实验组的11.31倍；经蒽贝素作用24 h后，Mia PaCa-2细胞出现Caspase 3裂解片段，且Bax/Bcl-2比值增大。结论蒽贝素在体外可显著抑制Mia PaCa-2细胞增殖，诱导细胞凋亡，其机制可能是通过拮抗XIAP的作用，激活Caspase相关性的细胞凋亡内源性途径而诱导人胰腺癌细胞发生凋亡。
关键词： 蒽贝素 X-连锁凋亡抑制蛋白 胰腺癌细胞 凋亡 Caspase 3 -
重组人促红细胞生成素对大鼠癫痫持续状态X-连锁凋亡抑制蛋白的影响及作用机制的实验研究
目的 观察重组人红细胞生成素(rHuEPO)对戊四氮(PTZ)点燃的癫痫持续状态(SE)的SD大鼠海马神经元的影响,应用磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂LY294002,观察X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)的变化情况,进一步探讨rHuEPO作用的可能机制.方法 采用PTZ点燃大鼠SE模型,将大鼠随机分为正常对照组(生理盐,NS)、PTZ组(PTZ+NS)、rHuEPO组(PTZ+rHuEPO)、LY294002组(PTZ+LY294002+rHuEPO)、二甲基亚砜(DMSO)对照组(PTZ+DMSO+rHuEPO),检测大鼠行为学和脑电图(EEG)的改变及苏木精-伊红染色观察海马病理学的改变;免疫组织化学法观察磷酸化蛋白激酶B(p-PKB/p-Akt)、X-连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)的表达;反转录多聚酶链反应(RT-PCR)方法检测各组大鼠海马XIAPmRNA的表达,Western blot方法检测各组大鼠海马Akt、p-Akt、XIAP蛋白的表达.结果 PTZ点燃大鼠SE后下调了p-Akt、XIAP的表达;rHuEPO可以增加p-Akt、XIAP的表达,发挥神经保护作用;加入PI3K抑制剂LY294002,海马p-Akt、XIAP蛋白、XIAPmRNA的表达较rHuEPO组减少,减弱了rHuEPO的保护作用.结论 从正反两个方面佐证了PI3K/Akt信号通路是rHuEPO发挥神经保护作用的通路之一,其作用机制可能是rHuEPO活化PI3K/Akt通路后,对线粒体凋亡途径的相关调控因子XIAP的表达进行了调控,进而介导线粒体凋亡途经,发挥抗凋亡、促存活的神经保护作用.
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脑缺血缺氧后X-连锁凋亡抑制蛋白的表达及黄体酮的干预研究
目的 观察脑梗死大鼠脑缺血半暗带脑组织内X-连锁凋亡抑制蛋白的表达情况,并观察黄体酮治疗对其表达水平及神经细胞凋亡的影响,以进一步探讨黄体酮神经保护作用的机制.方法 选择成年雄性S-D大鼠102只,质量为260 ～310 g,随机分为假手术组、模型组、溶剂治疗组、黄体酮治疗组.分别于脑梗死12 h、24h、48 h3个时间点处死大鼠,取出脑组织,应用免疫组化染色、Western blot技术检测各组大鼠缺血半暗带内X-连锁凋亡抑制蛋白的表达情况;应用原位末端标记法检测脑组织细胞的凋亡情况.采用单因素方差分析对上述结果进行统计学分析,取α=0.05为检验水准.结果 脑梗死发生后,缺血半暗带内X-连锁凋亡抑制蛋白的表达水平较假手术组有所增高,经黄体酮治疗后,其表达水平明显升高,与模型组、溶剂治疗组比较,差异有统计学意义(P＜0.05),黄体酮治疗组凋亡细胞数明显减少,与模型组、溶剂治疗组比较,差异亦有统计学意义(P＜0.05).结论 黄体酮可减少脑梗死大鼠缺血半暗带内的脑细胞凋亡,提高脑组织中X-连锁凋亡抑制蛋白表达可能是其发挥保护作用的分子机制之一.
关键词： 黄体酮 脑梗死 凋亡 X-连锁凋亡抑制蛋白 大鼠 -
慢病毒载体介导RNAi稳定抑制XIAP表达及对胰腺癌细胞增殖、凋亡影响的实验研究
目的:探讨运用慢病毒载体介导的RNA干扰技术对X-连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)的抑制效率及对胰腺癌细胞增殖、凋亡的影响,建立XIAP表达稳定抑制的胰腺癌细胞株.方法:应用pGJCSIL-PUR慢病毒载体构建针对XIAP的ShRNA载体,转染包装细胞293T,收集病毒上清转染胰腺癌细胞系SW1990,经嘌呤霉素(puromycin)筛选并扩大培养得到稳定克隆;实时荧光定量PCR和western-blot免疫印迹检测癌细胞内XIAP的表达:四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖;caspase3/7活性测定和DAPI染色检测细胞凋亡.结果:成功构建3个XIAP-ShRNA慢病毒栽体(X1、X2、X3)及XIAP表达稳定抑制的胰腺癌细胞株,对XIAP的抑制效率均达70%以上;MTT检测显示X1、X3稳定抑制XIAP后胰腺癌细胞增殖明显减慢,但caspase3/7活性及细胞凋亡并没有明显增加.结论:慢病毒栽体介导的靶向XIAP的RNAi可有效抑制XIAP表达,降低胰腺癌细胞的增殖能力;成功建立的XIAP表达稳定抑制的胰腺癌细胞株为进一步研究打下基础.
关键词： 胰腺癌 RNA干扰 X-连锁凋亡抑制蛋白 慢病毒载体 细胞增殖 -
垂体腺苷酸环化酶激活肽对脑缺氧缺血新生大鼠胱冬酶-3和X-连锁凋亡抑制蛋白表达的影响
目的 观察垂体腺苷酸环化酶激活肽(pituitary adenylate cyclase activating peptide,PACAP)对脑缺氧缺血(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)新生大鼠胱冬酶-3和x-连锁凋亡抑制蛋白(x-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)的影响,探讨其脑保护作用和有效剂量.方法 60只新生大鼠随机分为假手术组、生理盐水对照组以及PACAP大剂量组(10-8 mol)、中等剂量组(10-9 mol)和小剂量组(10-8 mol),建立HIBD动物模型.应用实时荧光定量聚合酶链反应法榆测新生大鼠HIBD后24 h损伤侧脑组织的胱冬酶-3 mRNA和XIAP mRNA表达情况,应用分光光度法检测胱冬酶-3活性.结果 在HIBD后24 h,生理盐水对照组胱冬酶-3 mRNA表达和酶活性以及XIAP mRNA表达均显著高于假手术组(P均<0.01);PACAP各剂量组胱冬酶-3 mRNA表达和酶活性均显著低于生理盐水对照组(P均<0.01),而XIAP mRNA表达均显著高于牛理盐水对照组(P均<0.01).结论 PACAP能上调XIAP mRNA表达,抑制胱冬酶-3 mRNA表达和酶活性,对新生大鼠HIBD具有保护作用,而且在大剂量、中等剂量和小剂量时均有效.
关键词： 垂体腺苷酸环化酶激活肽 缺氧缺血 脑 大鼠 X-连锁凋亡抑制蛋白 胱冬酶-3 -
褪黑素对重症急性胰腺炎的保护作用
目的 探讨褪黑素(melatonin,MT)对重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)大鼠胰腺组织中Smac/DIABLO、XIAP mRNA表达的影响及可能机制.方法 54只SD大鼠随机分成假手术(SO)组、重症急性胰腺炎(SAP)组以及MT干预SAP(MS)组,每组18只.通过胰胆管逆行注射3.5%脱氧胆酸钠方法 制备大鼠SAP模型,MS组制造模型前30 min腹腔注射MT.收集各模型组3 h、6 h、12 h标本,观察胰腺组织,检测胰腺组织细胞凋亡.实时定量(real-time)PCR分析胰腺组织中Smac/DIABLO、XIAP mRNA的表达.结果 SAP组和MS组胰腺组织损伤较SO组严重.与SAP组相比,在3 h、6 h、12 h各时点MS组胰腺病理损伤明显减轻,细胞凋亡指数下降(P<0.05),胰腺组织中Smac/DIABLO mRNA表达下调(P<0.05),XIAP mRNA表达上调(P<0.05).结论 MT能明显改善SAP胰腺组织损伤,对急性胰腺炎有保护作用;这可能与调节Smac/DIABLO、XIAPmRNA的表达有关.
关键词： 褪黑素 急性胰腺炎 细胞凋亡 Smac/DIABLO X-连锁凋亡抑制蛋白 -
X-连锁凋亡抑制蛋白与神经变性疾病的研究进展
神经系统变性疾病（neurodegenerative disease ）影响全球3700万人，在发达国家是导致死亡的第4大原因［1］，其主要包括阿尔茨海默病（Alzheimer Disease，AD）、帕金森病（Parkinson’ s disease，PD）、肌萎缩性侧索硬化（amyotrophic lateral sclerosis， ALS）等。近年研究发现，神经元凋亡是神经变性疾病的普遍病理特征，在AD、PD、ALS 等疾病的神经元变性死亡中可能起着重要作用［2］，胞浆内的半胱氨酸蛋白酶（cysteine aspartic acic specific protease，caspase ）在神经元凋亡过程中起关键作用，被各种诱发因子激活的caspase是毁损细胞生存的介导因子和激活细胞凋亡的终效应子，人们正在试图用caspase 抑制剂来治疗各种神经变性疾病［3-4］。而凋亡抑制蛋白（inhibitor of ap-optosis family of proteins，IAPs）的发现，有可能作为靶蛋白为这些疾病的治疗开辟新的路径。
关键词： X-连锁凋亡抑制蛋白 XAF1 Caspase 神经变性疾病 -
TAT-XIAP融合蛋白对学习记忆障碍大鼠的影响及其机制
目的 探讨TAT-XIAP融合蛋白对学习记忆障碍大鼠的影响及其与大脑海马神经元凋亡的关系,为学习记忆的深入研究提供实验依据.方法 利用基因工程技术制备具有生物学活性的TAT-XIAP融合蛋白,通过D-半乳糖(D-Gal)腹腔注射和Aβ1-42海马注射建立学习记忆障碍大鼠模型,将大鼠随机分为TAT-XIAP组(左侧脑室注射TAT-XIAP融合蛋白,每天80 mg/kg,共3d)和模型组(侧脑室注射等体积PBS)各30只,采用水迷宫评价大鼠的学习记忆能力,TUNEL法检测大鼠海马神经元凋亡.结果 1TAT-XIAP组大鼠在各象限入水至爬上平台的时间均明显缩短,平均值为(48.31±9.44)s,明显低于模型组的(87.80±10.32)s(P＜0.05)；TAT-XIAP组大鼠穿越平台的次数、在原平台象限游程百分比、在原平台象限时间百分比均明显增加,分别为(4.78±0.93)次、(47.39±5.84)％、(48.43±5.75)％,与模型组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).2 TAT-XIAP组大鼠海马凋亡神经元明显减少,凋亡神经元计数为(16.37±3.15)个/mm2,模型组为(54.66±7.20)个/mm2,两者差异有统计学意义(P＜0.05).结论 TAT-XIAP融合蛋白可明显改善学习记忆障碍大鼠学习记忆功能,其机制可能与大鼠海马神经元凋亡减少有关.
关键词： 学习记忆障碍 X-连锁凋亡抑制蛋白 海马 神经元凋亡 转录反式激活因子 -
肿瘤坏死因子α、X-连锁凋亡抑制蛋白在特发性胎儿生长受限中的表达
目的 探讨特发性胎儿生长受限(IFGR)患儿母血和脐血TNF-α及胎盘组织中X-连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)的表达及其意义.方法 选取郑州大学第三附属医院2010年7月-2011年7月行剖宫产分娩的IFGR孕妇34例作为实验组,同期因社会因素行剖宫产分娩的健康足月孕妇30例作为健康对照组.采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定2组母血、脐血TNF-α水平,免疫组织化学法检测2组胎盘组织中XIAP的表达.结果 1.实验组母血、脐血TNF-α水平[(90.12±6.43)μ·L-1,(98.73±7.29)μg·L-1]均明显高于健康对照组[(72.97±8.51)μg·L-1,(80.87±6.92)μg.L-1],差异均有统计学意义(Pa＜0.05).2.实验组XIAP在胎盘合体滋养细胞中的表达(114.56±5.17)明显低于健康对照组(144.40±7.31),差异有统计学意义(P＜0.05).3.实验组母血、脐血中TNF-α与胎盘组织中XIAP均呈负相关(Pa＜0.05)；健康对照组母血、脐血中TNF-α与胎盘组织中XIAP均无相关性(Pa＞0.05).4.实验组母血、脐血中TNF-α与新生儿体质量均呈负相关(Pa＜0.05),健康对照组母血、脐血中TNF-α与新生儿体质量均无相关性(Pa＞0.05).5.实验组新生儿并发症显著高于健康对照组(P＜0.05).结论 母血、脐血中TNF-α升高及胎盘组织中XIAP表达降低,可能通过促进胎盘滋养细胞过度凋亡参与IFGR的发病,并影响新生儿预后.
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三七总皂苷对脑出血大鼠脑内XIAP蛋白表达的影响
目的 探讨三七总皂苷对脑出血大鼠脑内XIAP蛋白表达的影响.方法 建立大鼠脑出血模型,腹腔注射三七总皂苷,免疫组织化学法检测XIAP蛋白表达,比较神经行为学评分.结果 治疗组在4,7,14d时的神经行为学评分分别为0.85±0.44,0.56±0.22,0.36±0.55,明显低于对照组(P＜0.05)；治疗组在1,4,7,14 d时的XIAP阳性细胞数分别为48.87±4.90,37.02±3.35,35.40±2.98,34.79±2.86,明显高于对照组(P＜0.05),XIAP阳性细胞数随三七总皂苷剂量增大而增多(P＜0.05).结论 三七总皂苷可通过上调XIAP表达而促进大鼠脑出血后神经功能恢复.
关键词： 三七总皂苷 脑出血 X-连锁凋亡抑制蛋白 -
shRNA稳定抑制XIAP和survivin表达对胰腺癌细胞生物学特征的影响
目的:探讨慢病毒载体介导的RNA干扰(RNAi)技术对胰腺癌细胞X-连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)和生存素( survivin)的抑制作用及对胰腺癌细胞增殖、凋亡及化疗敏感性的影响.方法:应用pGCSIL-PUR和pGCSIL-NEO分别构建针对XIAP和survivin的shRNA慢病毒载体,转染胰腺癌细胞株SW1990和Panc-1,经嘌呤霉素和新霉素筛选并扩大培养得到稳定转染株；实时荧光定量PCR和Western blot检测胰腺癌细胞内XIAP和survivin的表达；MTT法检测细胞增殖和化疗敏感性；caspase-3/7活性测定和DAPI染色分析细胞凋亡情况.结果:筛选XIAP和survivin的有效干扰靶点后,获得XIAP和survivin表达稳定抑制的SW1990和Panc-1细胞株.MTT检测显示稳定抑制XIAP或survivin后,两种胰腺癌细胞增殖均明显减弱,且两者联合抑制后作用增强；虽然抑制XIAP或survivin后对两种胰腺癌细胞凋亡无明显影响,但能明显增加其对化疗药物(5-FU,吉西他滨)的敏感性,且两者联合抑制后作用明显增强.结论:慢病毒载体介导的靶向XIAP和survivin的RNAi可有效抑制XIAP和survivin的表达,降低胰腺癌细胞的增殖能力并增强其对化疗药物的敏感性,且两者联合具有协同作用.
关键词： 胰腺肿瘤 RNA干扰 X-连锁凋亡抑制蛋白 生存素 慢病毒 -
X-连锁凋亡抑制蛋白通路与神经系统疾病
X-连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)是重要的内源性凋亡抑制因子,通过抑制不同的半胱天冬酶等多种途径而发挥抗凋亡作用.许多神经系统疾病的发生与发展涉及细胞凋亡机制,XIAP在细胞凋亡机制中扮演着一个重要角色.
关键词： X-连锁凋亡抑制蛋白 神经系统疾病 细胞凋亡 半胱天冬酶 -
Smac/Diablo与X-连锁凋亡抑制蛋白在ATP耗竭再恢复诱导肾小管上皮细胞凋亡中的作用
目的 研究线粒体蛋白Smac/Diablo和细胞X-连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)在ATP耗竭及再恢复导致肾小管上皮细胞凋亡中的作用和机制.方法 应用代谢抑制剂暂时性阻断人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)内ATP的生成,再换用含糖的培养液使细胞内ATP再恢复,诱导肾小管上皮细胞凋亡.应用Hoechst33342检测肾小管上皮细胞凋亡的发生.用间接免疫荧光检测Smac/Diablo在细胞内的分布.分别提取胞质蛋白和细胞总蛋白,以Westem印迹检测胞质中Smac/Diablo、XIAP和活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3前体(pro-caspase-3)的蛋白水平.结果 肾小管上皮细胞内ATP耗竭及再恢复时,Hoechst33342染色可见HK-2细胞核固缩和凋亡小体的形成;间接免疫荧光可见Smac/Diablo由线粒体释放至胞质;Western印迹可见胞质内Smac/Diablo的含量增多(P＜0.01);XIAP和pro-caspase 3的蛋白水平降低(P＜0.05).结论 肾小管上皮细胞内ATP耗竭及再恢复时,Smac/Diablo释放至胞质,XIAP蛋白水平降低,进而激活caspase 3,介导肾小管上皮细胞凋亡.
关键词： 凋亡 Smac/DIABLO X-连锁凋亡抑制蛋白 肾小管上皮细胞 腺苷三磷酸 -
槲皮素对大鼠癫痫持续状态后海马XIAP mRNA与蛋白表达的影响
目的 研究大鼠癫痫持续状态(SE)后海马组织XIAP的表达变化及槲皮素对其表达的影响.方法 建立氯化锂-匹罗卡品致痫大鼠SE模型,应用免疫组化和RT-PCR方法检测XIAP与caspase-3蛋白以及XIAPmRNA的表达.结果 海马CA3区XIAP蛋白在SE后2 h(0.5503±0.0172)起逐渐增加,8 h(0.6221±0.0238)达高峰,与对照组比较(0.1507±0.0165),差异有统计学意义(P<0.01).海马CA3区caspase-3活性蛋白在对照组未见明显表达,在SE后4～72 h明显增多.与对照组比较,SE组海马XIAP mRNA表达水平在2～8 h增加(P<0.01).与SE组比较,槲皮素组海马XIAP mRNA表达水平及CA3区XIAP蛋白表达在8 h、24 h高于SE组(P<0.01),CA3区caspase-3活性蛋白表达在8 h、24 h、72 h低于SE组(P<0.01).结论 XIAP可能参与了SE后神经元凋亡的调控过程,槲皮素可以提高SE后海马神经元XIAP的表达.
关键词： 癫痫持续状态 匹罗卡品 X-连锁凋亡抑制蛋白 槲皮素 -
重组人红细胞生成素对癫痫持续状态大鼠海马p-Akt和XIAP的影响
目的 观察重组人红细胞生成素(recombinant human EPO,rHuEPO)对戊四氮(Pentylenetetrazol,PTZ)点燃的癫痫持续状态(status epilepticus,SE)的SD大鼠海马神经元磷酸化蛋白激酶B(p-PKB/p-Akt)和X-连锁凋亡抑制蛋白(X-linked inhibtor of apoptosis protein,XIAP)表达的影响,应用磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidyl inositol 3 kinase,P13K)抑制剂LY294002进一步探讨rHuEPO作用的可能机制.方法 采用PTZ制作大鼠SE模型,将点燃后的大鼠随机分为PTZ组(PTZ+NS)、rHuEPO组(PTZ+rHuEPO)、LY294002组(PTZ+LY294002+rHuEPO)、LY294002溶剂二甲基亚砜(DMSO)对照组(PTZ+DMSO+rHuEPO),正常对照组腹腔注射生理盐水(n=35).观察大鼠行为学和脑电图的改变;TUNEL法检测海马神经细胞的凋亡情况;免疫组织化学法观察p-Akt、XIAP的表达;RT-PCR法检测各组大鼠海马XIAPmRNA的表达;Western blot法检测各组大鼠海马Akt、P-Akt蛋白的表达.结果 正常对照组仅见少量凋亡细胞,p-Akt和XIAP阳性细胞、p-Akt蛋白、XIAP mRNA均有少量表达;PTZ组与rHuEPO组、LY294002组、LY294002溶剂DMSO对照组比较,p-Akt和XIAP阳性细胞数、P-Akt蛋白表达及XIAP mRNA表达均减少(P<0.05),凋亡细胞数增加(P<0.05);rHuEPO组、LY294002溶剂DMSO对照组与LY294002组比较,p-Akt和XIAP阳性细胞数、p-Akt蛋白表达及XIAP mRNA表达均增加(P<0.05),凋亡细胞数减少(P<0.05).结论 rHuEPO在SE模型中活化了PI3K/Akt,提高p-Akt蛋白的表达,进而对线粒体凋亡途径的相关调控因子XIAP的表达进行了调控,从而介导线粒体凋亡途经,发挥抗凋亡、促存活的神经保护作用.
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雨蛙素刺激大鼠胰腺腺泡细胞AR42J后对XIAP表达及细胞凋亡的影响
探讨雨蛙素(CAE)刺激大鼠胰腺腺泡细胞AR42J后,其X-连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)的表达变化规律及与细胞凋亡的关系.CAE刺激组及空白对照组,加药后继续培养12 h设为0 h时间点,分别在0、4、8、12及24 h收集细胞,电镜观察细胞超微结构变化,实时荧光定量PCR法检测XIAP及细胞凋亡指标caspase-3和caspase-9的mRNA表达,用Western blot法检测XIAP蛋白表达,用流式细胞术检测NF-κB激活率.结果发现,CAE刺激后,AR42J细胞凋亡在8 h明显;XIAP表达随时间呈先降低后恢复的趋势,并在8 h达低点(与其余各组差异均有统计学意义,P＜0.05);caspase-3及caspase-9含量则随时间呈先升高后恢复的趋势,且与XIAP含量呈负相关(P＜0.001);而NF-κB激活增加,并在4～8 h达高峰.由此推测,在CAE刺激所导致的炎症条件下,XIAP负向调控AR42J细胞的凋亡,而随着炎症的进展,NF-κB的激活逐渐增多,上调XIAP的表达,细胞凋亡指标的表达逐渐恢复.
关键词： 急性胰腺炎 大鼠胰腺腺泡细胞株AR42J 雨蛙素 X-连锁凋亡抑制蛋白 凋亡
