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蒽贝素体外抑制人胰腺癌细胞Mia PaCa-2细胞增殖和诱导凋亡的作用及其机制研究
目的：探讨X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）抑制剂蒽贝素抑制人胰腺癌细胞Mia PaCa-2凋亡的作用及其可能机制。方法 MTT法和流式细胞术检测不同剂量蒽贝素对Mia PaCa-2细胞增殖和凋亡的影响；RT-PCR法对蒽贝素处理前后Mia PaCa-2细胞中XIAP基因的表达进行检测。Western blotting方法检测蒽贝素作用后细胞XIAP、Caspase 3、促凋亡蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bcl-2表达的变化。结果蒽贝素对人胰腺癌细胞增殖具有显著抑制作用（P＜0.05），经不同剂量蒽贝素处理后Mia PaCa-2细胞凋亡率明显增高，与未处理组比较差异具有显著性（P＜0.01）；RT-PCR显示对照组细胞中XIAP的-△△CT值是实验组的11.31倍；经蒽贝素作用24 h后，Mia PaCa-2细胞出现Caspase 3裂解片段，且Bax/Bcl-2比值增大。结论蒽贝素在体外可显著抑制Mia PaCa-2细胞增殖，诱导细胞凋亡，其机制可能是通过拮抗XIAP的作用，激活Caspase相关性的细胞凋亡内源性途径而诱导人胰腺癌细胞发生凋亡。
关键词： 蒽贝素 X-连锁凋亡抑制蛋白 胰腺癌细胞 凋亡 Caspase 3 -
蒽贝素对三氧化二砷抑制白血病干细胞生长的影响
目的 探讨X连锁凋亡抑制蛋白小分子抑制剂蒽贝素对三氧化二砷抑制白血病干细胞生长的影响.方法 将白血病干细胞分成三氧化二砷干预组、蒽贝素干预组、联合干预组和生理盐水阴性对照组.采用MTT法考察各组对白血病干细胞增殖的影响.采用流式细胞术考察各组对三氧化二砷诱导的细胞凋亡的影响.细胞划痕实验考察各组对白血病干细胞的运动性和迁移能力.以非糖尿病型严重的联合免疫缺陷(non-obese diabetic severely combined immunodeficient,NOD-SCID)小鼠制备白血病动物模型,考察蒽贝素联合三氧化二砷对白血病荷瘤小鼠生存期的影响.结果 与生理盐水组和单独给药组相比,联合干预组能明显抑制白血病干细胞的增殖,差异有统计学意义(P＜0.05).流式结果显示蒽贝素能够通过抑制X连锁凋亡抑制蛋白,促进白血病干细胞凋亡.细胞划痕实验结果显示联合干预能够有效抑制白血病干细胞的迁移.体内治疗实验结果显示,蒽贝素与三氧化二砷联合干预能够显著延长荷瘤小鼠的中位生存期.结论 X连锁凋亡抑制蛋白小分子抑制剂蒽贝素能够有效增强三氧化二砷对白血病干细胞的增殖抑制作用,蒽贝素联合三氧化二砷是一种潜在治疗白血病干细胞的方法.
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蒽贝素联合阿霉素对乳腺癌细胞MCF-7增殖和荷瘤裸鼠肿瘤生长的影响
目的：探讨阿霉素（doxorubicin，DOX）联合X连锁凋亡抑制蛋白小分子抑制剂蒽贝素（embelin，EB）对乳腺癌细胞MCF-7增殖及荷瘤裸鼠肿瘤生长的影响。方法根据加入药物的不同将MCF-7细胞分为生理盐水组、阿霉素干预组、蒽贝素干预组和联合干预组（蒽贝素＋阿霉素）。MTT法检测各组对乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响。流式细胞术检测各组肿瘤细胞凋亡情况。构建乳腺癌MCF-7细胞肿瘤球模型，探讨阿霉素联合蒽贝素对肿瘤球的生长抑制作用。建立乳腺癌裸鼠移植瘤模型，探讨阿霉素联合蒽贝素对乳腺癌异位瘤的生长抑制作用。结果乳腺癌MCF-7细胞在给药后48h，联合干预组对肿瘤细胞的增殖抑制率显著大于其他给药组，差异具有统计学意义（P＜0.01）；细胞凋亡实验和肿瘤球生长抑制实验都表明联合干预组的肿瘤细胞抑制能力显著强于其他组，差异具有统计学意义（P＜0.01）；荷瘤小鼠实验结果显示，联合干预组的肿瘤生长抑制作用显著强于其他组，差异具有统计学意义（P＜0.01）。结论阿霉素与蒽贝素均具有抑制乳腺癌增殖的作用，2者联合应用能够发挥协同作用，增强抗肿瘤能力。
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蒽贝素对脂多糖诱导小鼠心脏炎症损伤的影响
目的 研究蒽贝素对脂多糖(LPS)诱导小鼠心肌损伤的影响及其作用机制.方法 从80只C57BL/6J(B6)雄性小鼠中随机抽取16只作为正常对照组,腹腔注射生理盐水10 mg/kg;其余64只腹腔注射10 mg/kg LPS,等分为脓毒症阳性对照组和低、中、高浓度治疗组4组,每组16只,治疗组小鼠再分别腹腔注射5、10、20 mg/kg蒽贝素.采用双位点酶免法测定血清中心肌肌钙蛋白I(cTnI)水平,免疫组化法检测心肌PPAR-γ和TNF-α水平,蛋白免疫印迹试验(WB)检测NF-κB水平.结果 正常对照组、中浓度治疗组、高浓度治疗组小鼠血清cTnI水平、细胞核内NF-κB蛋白灰度比值和心肌细胞TNF-α黄染率均低于脓毒症阳性对照组(均P<0.05);脓毒症阳性对照组与正常对照组小鼠心肌细胞PPAR-γ黄染率差异无统计学意义(P>0.05),各治疗组小鼠心肌细胞PPAR-γ黄染率均升高(P<0.01).结论 蒽贝素可剂量依赖性地改善LPS诱导的小鼠心肌损伤,其机制可能为上调PPAR-γ表达、抑制NF-κB活化和减少TNF-α合成.
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5-氟尿嘧啶联合蒽贝素治疗结肠癌的研究
目的:探讨5-氟尿嘧啶(5-FU)联合蒽贝素对结肠癌的治疗作用.方法:MTT法和肿瘤球生长实验考察5-FU联合蒽贝素对结肠癌C26细胞的毒性.建立结肠癌小鼠移植瘤模型,随机分为生理盐水组、5-FU组、蒽贝素组和联合给药组.各组小鼠均3d一次尾静脉注射给药.观察给药过程中瘤体体积的变化,考察不同给药组对小鼠肿瘤生长的抑制效果.结果:给药48 h后生理盐水组肿瘤细胞存活率为95％,5-FU组、蒽贝素组和联合给药组肿瘤细胞存活率分别为48％、69％和18％,与单独给药组相比,联合给药能够显著增强对C26细胞的增殖抑制作用(P＜0.01).给药7d后,生理盐水组肿瘤球持续生长,体积增大1.52倍,3个给药组肿瘤球体积出现了不同程度的减小,5-FU组、蒽贝素组和联合给药组分别使肿瘤体积减小到原体积的71％、89％和33％(P＜0.01);生理盐水组、蒽贝素组、5-FU小鼠肿瘤体积成长分别变为给药前肿瘤体积的1.85倍、1.79倍和1.49倍,而联合给药组为1.21倍(P＜0.01).联合给药组与蒽贝素组和5-FU组单独给药组间差异具有统计学意义(P＜0.01).同时联合给药能够延长荷瘤小鼠的中位生存期.结论:5-FU与蒽贝素都具有抗结肠癌作用,且二者联合使用效果更显著.
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蒽贝素对大鼠胶原诱导性关节炎炎症评分及炎症细胞因子的影响
目的：探讨蒽贝素对胶原诱导性关节炎（collagen induced arthritis，CIA）大鼠炎症评分及炎症细胞因子的影响。方法将50只大鼠随机分为正常对照组（8只）和造模组（42只）。造模组大鼠采用注射牛Ⅱ型胶原（bovine type Ⅱ collagen，CⅡ）＋完全弗氏佐剂（complete Freund’s adjuvant，CFA）乳剂进行初次免疫，1周后注射 CⅡ＋不完全弗氏佐剂（incomplete Freund’s adjuvant，IFA）乳剂加强免疫，建立 CIA 模型。将造模成功的32只 CIA 大鼠随机分为4组：CIA 模型组、甲氨蝶呤组（1 mL·100 g－1灌胃，2次·周－1）和蒽贝素低剂量、高剂量2组（均以1 mL·100 g－1灌胃，1次·d－1），每组8只。CIA 模型组、正常对照组均以0．5％羧甲基纤维素钠1 mL·100 g－1灌胃，1次·d－1。分别于实验第14、21、28、35天各组称体质量及对关节炎症进行评分。实验第36天检测各组血清肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白细胞介素-1β（interleukine-1β，IL-1β）的水平。结果与正常对照组比较，CIA 模型组、甲氨蝶呤组，蒽贝素低剂量、高剂量2组实验第14、21、28、35天体质量均减轻和关节炎症评分及实验第36天血清 TNF-α、IL-1β水平均明显升高（均 P ＜0．05）；与 CIA 模型组比较，甲氨蝶呤组，蒽贝素低剂量、高剂量2组实验第21、28、35天体质量均增加和关节炎症评分及实验第36天血清 TNF-α、IL-1β水平均明显降低（均 P ＜0．05）；与甲氨蝶呤组比较，蒽贝素高剂量组实验第28、35天体质量均增加，实验第36天血清 IL-1β含量明显降低（均 P ＜0．05）。结论蒽贝素可降低胶原诱导性关节炎大鼠炎症细胞因子水平，缓解关节炎的症状，具有抗炎作用，可能对类风湿关节炎有一定的疗效。
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蒽贝素协同增强肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体诱导乳腺癌细胞凋亡性死亡的实验
目的 研究小分子化合物蒽贝素(Embelin)是否能协同增强肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)诱导乳腺癌细胞MDA-MB-231的凋亡性死亡.方法 应用Embelin、TRAIL或者联合应用分别处理MDA-MB-231细胞.MTT法测定药物处理的细胞毒性,APOP-BRDU试剂盒及流式细胞仪测定细胞凋亡率,Western blot观察Caspase3,9和PARP的表达水平.半定量PCR和Western blot分别观察Embelin处理以后X连锁的凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP) mRNA、蛋白表达水平的变化.结果 MDA-MB-231细胞呈TRAIL部分耐药,Embelin的细胞毒性在MDA-MB-231细胞呈浓度依赖性.亚毒性浓度的Embelin能显著增强TRAIL诱导的细胞毒性、凋亡率、Caspase 3,9的活化和PARP的切割.但是,亚毒性浓度的Embelin未直接改变XIAP的蛋白和mRNA表达水平.结论 Embelin能显著增强TRAIL诱导的乳腺癌细胞MDA-MB-231的凋亡性死亡.
关键词： 乳腺癌 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 凋亡 蒽贝素 -
5-氟尿嘧啶联合蒽贝素对结肠癌小鼠Caspase-3及NF-κB活性表达的影响
目的探讨5-氟尿嘧啶联合蒽贝素对结肠癌小鼠Caspase-3及NF-KB活性表达的影响。方法入选小鼠结肠癌细胞系SW480培养，并建立动物模型，对实验细胞及动物分为四组，每组10只，实验组分别予以5-氟尿嘧啶、蒽贝素、5-氟尿嘧啶联合蒽贝素，对照组予以生理盐水，对四组培养细胞分别进行细胞活性、肿瘤球体积大小、NF-kB活性及caspase-3活性、细胞凋亡的检测，对实验动物行肿瘤球变化率及小鼠生存时间检测，比较四组间差异。结果联合应用5-FU及蒽贝素组细胞caspase-3活性显著高于对照组及单纯使用5-FU、蒽贝素组(P<0.05)；而NF-资B活性低于其他各组(P<0.05)；5-FU、蒽贝素组caspase-3活性显著高于对照组(P<0.05)，NF-资B活性低于对照组(P<0.05)；联合应用5-FU及蒽贝素组细胞的肿瘤体积变化率及生存时间显著优于对照组及单纯使用5-FU、蒽贝素组(P<0.05)；联合应用5-FU及蒽贝素组细胞的细胞处理24 h后细胞凋亡率显著高于对照组及单纯使用5-FU、蒽贝素组(P<0.05)；单纯使用5-FU、蒽贝素组24h后细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.05)。结论蒽贝素同5-FU对C26结肠癌细胞抑制增殖促进凋亡有协同作用，经抑制NF-资B通路进而影响肿瘤生长，经与XIAP蛋白BIR-3功能Ⅱ的结合，提高Caspase-3活性，进而导致细胞增殖，促进细胞凋亡，为临床治疗结肠癌开辟新的化疗途径提供更多的实验依据。
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蒽贝素候选化学对照品的制备及分析研究
目的 研究蒽贝素候选化学对照品的制备方法及其质量标准,为含蒽贝素药材及其相关产品的质量控制提供参考.方法 酸藤子用有机溶剂提取,硅胶柱色谱和反相制备型高效液相色谱进行分离纯化、重结晶得到高纯度蒽贝素,通过波谱等确证化学结构,采用高效液相色谱法测定样品色谱纯度,炽灼残渣法测定灰分,以质量平衡法计算蒽贝素的含量.结果 蒽贝素候选化学对照品高效液相色谱纯度测定均值为99.13％,炽灼残渣测定均值为0.02％,以质量平衡法计算含量为99.11％.结论 制备得到的高纯度蒽贝素对照品符合中药化学对照品技术要求,可作为中药材或中药复方制剂质量控制的对照品;建立的分析方法准确、可靠,可为对照品质量控制提供科学依据.
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蒽贝素对胶原诱导性关节炎大鼠 IL-6和IL-17A 的影响
目的：探讨蒽贝素治疗类风湿关节炎（RA）的可能作用机制。方法选取Lewis雌性大鼠建立胶原诱导性关节炎（CIA）模型，将造模成功的大鼠随机分为 CIA 模型组、甲氨蝶呤组、蒽贝素20 mg／kg 组、蒽贝素40 mg／kg 组4组，另设正常对照组，每组各8只大鼠。其中甲氨蝶呤组予甲氨蝶呤0．5 mg／kg、每周2次，蒽贝素20 mg／kg 组和40 mg／kg 组分别予每日1次相应剂量蒽贝素灌胃，正常对照组及 CIA 模型组灌服等体积溶媒。共给药21 d，期间每周评估大鼠足趾肿胀程度，实验结束时行腹主动脉取血，ELISA 法测血清 IL-6和 IL-17A 含量，比较各组间的差异。结果治疗第14日，CIA 大鼠双侧足趾均较正常对照组大鼠肿胀（P 均＜0．01）；随着治疗时间的延长，甲氨蝶呤组与蒽贝素20 mg／kg 组和40 mg／kg 组大鼠的鼠爪肿胀较 CIA 模型组明显好转（P 均＜0．01），甲氨蝶呤组与蒽贝素20 mg／kg 组和40 mg／kg 组间比较差异均无统计学意义（P 均＞0．05）。影像学观察，CIA 模型组出现骨质疏松、关节间隙模糊、狭窄，甲氨蝶呤组与蒽贝素20 mg／kg 组和40 mg／kg 组存在轻度骨质疏松，足趾小关节间隙清楚，尚未变窄。治疗后，甲氨蝶呤组与蒽贝素20 mg／kg 组和40 mg／kg组血清 IL-6和 IL-17A 水平均低于 CIA 模型组（P 均＜0．01），其中甲氨蝶呤组与蒽贝素20 mg／kg 组和40 mg／kg 组血清 IL-6水平比较差异均无统计学意义（P 均＞0．05），蒽贝素组20 mg／kg 组和40 mg／kg组的血清 IL-17A 水平均低于甲氨蝶呤组（P 均＜0．05），但甲氨蝶呤组与蒽贝素20 mg／kg 组和40 mg／kg 组血清 IL-6和 IL-17A 水平与正常对照组比较差异仍有统计学意义（P 均＜0．05）。结论蒽贝素可能通过抑制 Th17细胞分化信号通路中相关靶点，降低血清 IL-6和 IL-17A，缓解关节炎症状。
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蒽贝素对雄性大鼠血浆性激素水平及附睾精子质量的影响
目的 研究蒽贝素对雄性大鼠血浆性腺激素水平、附睾精子质量、睾丸组织结构的影响,探讨蒽贝素降低雄性大鼠生育能力的作用机制.方法 给雄性性成熟大鼠sc蒽贝素铵盐溶液30d,末次给药后2h,测定血浆性激素水平;检查附睾精子质量;观察睾丸组织结构.结果 与对照组比较,给药30 d后,蒽贝素高、中剂量(40、20 mg/kg)组大鼠血浆睾酮、黄体生成素、卵泡刺激素水平、附睾精子活率、精子密度明显降低,组间差异有统计学意义(P＜0.05),附睾精子畸形率和顶体完整率无明显变化,显微镜下见睾丸组织呈萎缩性病变,曲精细管扁平、塌陷,管内精母细胞减少,附睾精细管内精子稀少.结论 蒽贝素抑制丘脑-垂体-性腺轴活动,降低雄性大鼠血浆性激素水平,引起睾丸萎缩和附睾精子活率、精子密度降低,使雄性大鼠生育能力下降.
