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KAI1基因抑制人胰腺癌细胞转移的体内实验
目的研究体内直接注射KAI1基因抗胰腺癌转移作用.方法 MiaPaCaⅡ胰腺癌细胞裸鼠皮下接种后,随机分为2个大组 (接种后第10天和第21天治疗组),每组再分别瘤内注射pCMV-KAI1重组质粒100 μg,pCMV-KAI1-脂质体(50μg∶50μg)和生理盐水,每7 d注射1次,共注射3次.于第50天观察KAI1对胰腺癌生长转移影响.结果接种后10 d进行基因注射组中,KAI1治疗组和脂质复合物治疗组肿瘤体积、瘤重、肺重、肝重和肺表面转移结节数均小于对照组(P < 0.05),体积抑瘤率分别为63.79%和73.51%,瘤重抑瘤率分别为77.12%和83.26%,肺重分别为(0.33 ± 0.09)g和(0.30 ± 0.09)g,肝重分别为(1.01 ± 0.27)g和(0.99 ± 0.21)g,对照组肺肝重分别为(0.45 ± 0.09)g和(1.62 ± 0.39)g,对照组肺表面转移结节数平均为(2.33 ± 1.63)个,治疗组结节数仅为(0.5 ± 0.83)个.pCMV-KAI1治疗组与脂质复合物治疗组相比差异无显著性(P > 0.05);接种后21 d进行基因注射组中,治疗组肿瘤体积、瘤重、肺重、肺转移灶和肝重与对照组相比差异无显著性(P > 0.05).结论 KAI1基因瘤内注射具有抑制MiaPaCaⅡ胰腺癌生长及转移作用,KAI1基因对已成瘤的胰腺癌生长的抑制作用与瘤内给药时间密切相关.
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KAI1基因在胰腺癌中的突变分析
目的探讨KAI1基因在胰腺癌中的突变情况.方法对17例伴有淋巴结转移的原发性胰腺癌(Ⅲ期),7例无淋巴结转移的原发性胰腺癌(2例Ⅰ期,5例Ⅱ期)和9例正常胰腺组织标本进行KAI1基因突变分析.结果24例胰腺癌标本中,7例证实有KAI1点突变.这种突变出现在886位核苷酸上,导致从A到G的转变,缬氨酸置换异亮氨酸,且有突变的癌标本均属于晚期有转移的胰腺癌(Ⅲ期).结论上述结果提示KAI1基因突变使KAI1 mRNA水平降低可能是胰腺癌转移的主要因素之一.
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KAI1 复制缺陷型腺病毒载体抑制人胰腺癌细胞迁移实验研究
目的 构建携带人肿瘤转移抑制基因KAI1复制缺陷型腺病毒载体并初步研究其对体外肿瘤细胞迁移的影响.方法 用Ad-EasyTM系统大肠杆菌中同源重组的方法,构建Ad-KAI1腺病毒载体,并在293细胞中包装、扩增和纯化,用其感染人胰腺癌细胞并检测KAI1的表达.结果 构建的Ad-KAI1可以高效感染人胰腺癌细胞系PANC1,并检测到感染Ad-KAI1的PANC1细胞中KAI1的高表达;同时观察到Ad-KAI1可以抑制胰腺癌细胞系PANC1的迁移.结论 携带人肿瘤转移抑制基因KAI1复制缺陷型腺病毒载体可抑制人胰腺癌细胞转移,为KAI1抗胰腺癌转移基因治疗提供依据.
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KAI1基因对人胰腺癌裸鼠种植瘤淋巴转移的影响
目的 探讨KAI1基因对裸鼠胰腺癌种植瘤淋巴结转移及淋巴管新生的作用.方法 建立裸鼠的人胰腺癌MiaPaCa-2细胞皮下种植瘤模型,成瘤后应用KAI1腺病毒(Ad-KAI1)瘤内注射治疗,每周1次,共3次,以瘤内注射腺病毒(Ad)或生理盐水组作为对照,记录肿瘤生长情况.成瘤50 d收集瘤体及肿大淋巴结,常规病理学检查,并采用免疫组化法检测瘤组织中淋巴管特异性标志物LYVE-1表达,计算微淋巴管密度(MLVD).结果 裸鼠接种MiaPaCa-2细胞2周后100％成瘤.生理盐水组、Ad组、Ad-KAI1组裸鼠种植瘤的生长速度无明显差异(P＞0.05);50 d后收集的瘤体重量分别为(2514.4 ±351.3)、(2466.1±295.5)、(2294.4±255.4) mg,组间差异无统计学意义.生理盐水组8只(80％)发现肿大淋巴结转移,共收集到肿大淋巴结20枚,平均2.0枚/只;Ad组7只(70％)发现肿大淋巴结,共收集到肿大淋巴结15枚,平均1.5枚/只;Ad-KAI1组4只(40％)发现肿大淋巴结,共收集到肿大淋巴结6枚,平均0.6枚/只.所有肿大淋巴结均经病理学检查确定为肿瘤的淋巴转移灶.3组裸鼠肿瘤淋巴结转移及每只裸鼠平均淋巴结转移数的差异均有统计学意义(F值分别为3.14、3.35,P值均＜0.05).生理盐水组、Ad组、Ad-KAI1组裸鼠胰腺癌种植瘤组织中MLVD分别为(18.70±5.60)、(19.40±4.58)、(9.80±4.10)个/400倍视野,Ad-KAI1组MLVD显著低于生理盐水组和Ad组,差异有统计学意义(F值分别为10.76、11.36,P值均＜0.05),而生理盐水组和Ad组间的差异无统计学意义.结论 KAI1可能通过减少裸鼠种植瘤组织中的淋巴管新生、降低微淋巴管密度来抑制胰腺癌的淋巴转移.
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siRNA干扰人胰腺癌T3细胞系KAI1基因的表达
目的 应用小分子干扰RNA(small interference RNA,siRNA)干扰KAI1基因在人胰腺癌T3细胞系的表达,为基因治疗胰腺癌打下基础.方法 针对KAI1基因CD82片段序列设计A、B、C、D 4个siRNA靶序列,构建针对KAI1基因(CD82)含siRNA片段的慢病毒载体.以脂质体2000转染T3细胞,测定病毒滴度.以空载体、含不同靶序列siRNAd1载体的病毒感染T3细胞(MOI=5),采用实时PCR方法检测CD82mRNA的表达.结果 正常对照组、空载体对照组、A靶序列组、B靶序列组、C靶序列组和D靶序列组CD82 mRNA表达量分别为1.398 ±0.242、1.311 ±0.048、0.664±0.093、0.345 ±0.032、0.641 ±0.049和0.147±0.049,各靶序列组的表达量明显低于空载体对照组(P＜0.01).结论 应用RNAi可有效抑制T3细胞KAI1基因CD82片段的表达.
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KAI1基因转染对乏氧培养下胰腺癌MiaPaCa-2细胞增殖、迁移及VEGF表达的影响
目的 观察转染KAI1基因的人胰腺癌MiaPaCa-2细胞在乏氧条件下培养后细胞增殖、迁移、侵袭能力的变化,探讨其可能机制.方法 应用KAl1基因过表达质粒转染乏氧条件培养后的人胰腺癌MiaPaCa-2细胞,采用蛋白质印迹法检测转染细胞KAI1、VEGF-C、VEGF-A蛋白的表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测转染细胞的增殖,细胞划痕及Transwell小室实验观察转染细胞的迁移及侵袭能力,酶联免疫吸附测定法检测培养上清液中人VEGF-C、VEGF-A含量.结果 转染KAI1基因后的MiaPaCa-2-K细胞的KAI1蛋白表达量较未转染细胞显著增加[(0.549 ±0.021)比0].乏氧条件培养后转染细胞的增殖无明显变化,但它的迁移距离明显缩短,穿膜细胞数显著减少[(14.0±5.8)比(43.0±14.4)个,P＜0.05];细胞的VEGF-C表达显著降低[(0.218±0.043)比(0.745±0.069).P＜0.05],但VEGF-A表达变化不显著;细胞培养上清液中VEGF-C含量显著减少[(1236±247)比(2045±221) pg/ml,P＜0.01].结论 转染KAl1基因的MiaPaCa-2细胞在乏氧条件下培养后的细胞迁移、侵袭能力减弱,其机制可能是通过下调VEGF-C的表达来抑制胰腺癌淋巴转移的.
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KAI1基因抑制胰腺癌转移的体内实验
目的 研究瘤体注射携带KAI1基因的腺病毒(Ad-KAI1)抗胰腺癌转移的作用.方法 首先建立胰腺癌荷瘤裸鼠模型,分别将其分为生理盐水对照组、Ad组和Ad-KAI1组.从成瘤第10天开始,每7 d注射1次,共注射3次,观察肿瘤的重量和体积,肝、肺重及病理改变.结果 3组移植瘤的重量和体积无显著差异.Ad-KAI1组肺重(0.366±0.041)g,肝重(1.35±0.21)g;Ad组肺重(0.57±0.065)g,肝重(1.58±1.828)g;对照组肺重(0.66±0.13)g,肝重(1.95±0.34)g.Ad-KAI1组与对照组差异显著(t=5.984,P<0.05),Ad组与对照组差异无显著性(t=1.089,P>0.05).Ad-KAI1组肺转移灶平均(1±1)个,肝转移灶平均(2±1)个,淋巴结转移灶平均(2±2)个;Ad组分别为(6±2)个、(5±1)个和(10±2)个;对照组分别为(7±2)个、(6±2)个和(11±3)个.Ad-KAI1组转移灶显著少于对照组(t=7.44、4.34、8.16,P<0.05),而Ad组与对照组无显著差异(t=0.92、0.64、0.42,P>0.05).结论 Ad-KAI1肿瘤内直接注射具有抑制胰腺癌转移的作用.
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KAI1基因抑制胰腺癌细胞鞘氨醇激酶活性及其迁移
目的 研究复制缺陷型腺病毒介导人肿瘤转移抑制基因KAI1在胰腺癌细胞中高表达对细胞鞘氨醇激酶(SPK)信号的影响.方法 构建重组腺病毒Ad-KAI1;通过流式细胞技术检测感染人胰腺癌细胞KAI1的表达;应用[γ-32P]ATP掺入法和扩散盒检测SPK酶活性及胰腺癌细胞的迁移.结果 成功构建的Ad-KAI1可以高效感染人胰腺癌细胞PANC Ⅰ达86.3%,同时检测到PANC Ⅰ细胞SPK高表达,而Ad-KAI1可以降低PANC Ⅰ细胞的SPK活性,并抑制其迁移.结论 高表达的KAI1基因具有抑制胰腺癌细胞SPK活性及其促迁移作用.
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KAI1基因抑制胰腺癌细胞转移机制的探讨
目的将pCMV-KAI1重组质粒转染人高转移胰腺癌细胞株MiaPaCa Ⅱ中,观察转染前后KAI1基因对胰腺癌细胞侵袭转移能力和运动能力的影响,从基因水平探讨KAI1基因抗胰腺癌转移机制.方法通过脂质体转染法成功将重组质粒转染到MiaPaCa Ⅱ中,利用Transwell小室测定细胞穿膜侵袭运动能力,采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测明胶酶活性.结果 pCMV-KAI1重组质粒转染后,显微镜下细胞计数示转染后胰腺癌细胞穿透基底膜的数量较转染前明显减少(P<0.05),细胞运动能力明显减弱.聚丙烯酰胺凝胶电泳显示负染带宽度比转染前变窄,亮度减弱,降解基质膜和细胞外基质的能力和侵袭转移能力下降.结论 KAI1基因控制胰腺癌细胞转移可能是通过抑制癌细胞侵袭及运动功能来实现的.
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KAI1基因在喉鳞癌中的表达及其临床意义
目的探讨KAI1基因在喉鳞状细胞癌中的表达及其临床意义.方法取40例喉鳞癌及9例正常对照喉组织,应用半定量的RT-PCR方法,检测KAI1 基因mRNA的表达.结果正常喉黏膜KAI1 基因mRNA的中、低表达率和阴性率均为33.3%(3/9);无淋巴结转移组喉癌高、中、低表达率和阴性率分别为40.0%(10/25)、28.0%(7/25)、20.0%(5/25)和12.0%(3/25);淋巴结转移组喉癌中、低表达率和阴性率分别为20.0%(3/15)、26.7%(4/15)和53.3%(8/15),无淋巴结转移组喉癌与正常喉组织比较,KAI1 mRNA表达升高差异有统计学意义(P<0.05),有淋巴结转移与无淋巴结转移组喉癌比较,KAI1基因mRNA表达下降差异有统计学意义(P<0.05).病理高分化喉癌KAI1基因 mRNA高、中、低表达率分别为50.0%(5/10)、30.0%(3/10)和20.0%(2/10);病理低分化喉癌其高、中、低表达率和阴性率分别为8.3%(1/12)、 16.7%(2/12)、16.7%(2/12)和58.3%(7/12);高分化与低分化比较,KAI1基因mRNA表达差异有统计学意义(P<0.05).结论 KAI1基因mRNA表达下降可能与喉鳞状细胞癌的病理低分化和淋巴结转移有关.
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KAI1基因对乳腺癌细胞体外增殖的抑制作用
目的 研究KAI1基因对乳腺癌细胞体外增殖的抑制作用.方法 应用脂质体法将pCMV-KAI1质粒转染入高转移性人乳腺癌细胞株MDA-MB-231中,免疫印迹方法检测蛋白表达;利用四甲基偶氮唑盐(MTT)法、平板克隆形成实验、体外黏附及侵袭力实验判断细胞增殖能力及黏附、侵袭力的变化.流式细胞术检测细胞生长周期的变化.结果 获得了稳定表达KAI1基因的MDAMB-231乳腺癌细胞克隆.MTT法显示,转染KAI1基因组的集落形成率(25.33%±2.36%)较转染前(43.17%±2.75%)明显降低(P＜0.05).体外黏附及侵袭力实验表明,转染组的细胞黏附侵袭能力低于未转染组和转染空载体组(P＜0.05).流式细胞术显示,转染KAI1后,G0/G1期细胞数量增高,从36.78%±0.61%升高至64.00%±7.56%;G2/M期数量降低,由17.88%±0.76%降至7.63%±0.60%,差异有统计学意义.结论 KAI1基因可以抑制乳腺癌细胞的增殖黏附和侵袭能力,并可能通过调节细胞周期来影响细胞的增殖.
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大肠癌相关肿瘤转移抑制基因的研究进展
肿瘤转移抑制基因能抑制肿瘤细胞的转移,由于肿瘤转移抑制基因的突变或缺失,从而导致肿瘤的浸润和转移.与大肠癌有关的肿瘤转移抑制基因有nm23、KAI1、E-钙黏素基因、p16、Tip30/CC3、DPC4/SMAD4等.它们在大肠癌中的低表达可能会导致癌组织发生浸润和转移,提示患者预后不良.因此,它们可能成为判断大肠癌的生物学行为及预后的重要指标.
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KAI1基因与消化道恶性肿瘤关系的研究现状
抗癌1号基因(KAI1)是近年来发现的一种新的肿瘤转移抑制基因,与许多恶性肿瘤的进展、转移密切相关.本文就KAI1基因与消化道恶性肿瘤关系的研究现状进行简要综述.
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KAI1基因对乳腺癌细胞生物学特征的影响
目的:研究稳定转染外源性KAI1基因对人乳腺癌细胞体外生物学特性的影响.方法:应用脂质体将pCMV-KAI1质粒转染入人乳腺癌细胞株MDA-MB-231中,免疫印迹方法检测蛋白表达,分别利用MTT法,体外粘附及侵袭力实验判断KAI1基因对细胞增殖能力及粘附,侵袭力的影响,并利用ELISA法检测转染前后游离组织间粘附因子-1(sICAM-1)的动态变化.结果:获得了稳定表达KAI1基因的MDA-MB-231乳腺癌细胞克隆,并有KAI1蛋白的高表达.MTT法显示转染组的细胞增殖力低于未转染组和转染空载体组(P＜0.05),体外粘附及侵袭力实验表明转染组的细胞粘附侵袭能力低于未转染组和转染空载体组(P＜0.05).转染后sICAM-1含量下降.结论:KAI1基因可抑制人乳腺癌细胞的恶性特征,并可能是通过影响一些粘附因子作用而抑制肿瘤细胞转移.
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乳腺癌KAI1基因表达及其临床病理意义
目的:探讨乳腺癌KAI1表达及其临床病理意义.方法:采用免疫组织化学和半定量逆转录多聚酶链反应(RT-PCR).检测83例乳腺癌标本中KAI1蛋白和mRNA的表达并与临床病理资料比较分析.结果:免疫组化的阳性率48.19%(40/83)和阴性率51.81%(43/83),RT-PCR的阳性率41.17%(35/83)和阴性率57.83% (48/83).结论:免疫组化和RT-PCR的结果基本一致(P＞0.05).并与乳腺癌的转移呈负相关.在Ⅲ、Ⅳ期以及发生淋巴结等转移的病人中,KAI1的表达明显下调(P＜0.01).
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KAI1基因与恶性肿瘤浸润转移机制关系的研究进展
浸润转移是恶性肿瘤的重要特性,也是引起肿瘤患者死亡的主要原因.尽管肿瘤的诊断和治疗水平不断改进,但总的治疗效果并不令人满意,其根本原因在于无法控制肿瘤的浸润和转移.随着分子生物学的深入研究,人们认识到肿瘤转移与肿瘤发生一样是由多种基因调控的,不仅有转移促进基因的激活,还伴有转移抑制基因的失活.目前,肿瘤分子生物学的研究热点逐渐转入分离和克隆肿瘤转移基因与转移抑制基因,期望通过揭示肿瘤转移在基因水平的本质,为改进肿瘤的诊断和治疗手段提供依据.
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跨膜蛋白KAI1和FasL蛋白在乳腺癌中的表达及临床意义
目的 探讨乳腺癌组织及其癌旁正常乳腺组织、纤维腺瘤组织中KAI1和FasL蛋白表达及与淋巴结转移的关系.方法 采用免疫组化检测25例伴淋巴结转移的乳腺癌、40例无淋巴结转移的乳腺癌、纤维腺瘤组及20例癌旁正常组织中KAI1和FasL蛋白的表达.结果 乳腺癌组织中KAI1蛋白表达阳性率显著低于纤维腺瘤组、癌旁正常组织,差异有统计学意义(P＜0.05).且随着淋巴结转移的出现,KAI1 蛋白表达阳性率降低,各组间差异具有统计学意义(P＜0.05),与组织分级成正相关;乳腺癌组织中FasL蛋白表达阳性率显著高于纤维腺瘤组、癌旁正常乳腺组织,差异有统计学意义(P＜0.05),且与淋巴结转移、组织分级呈负相关.结论 KAI1 基因表达下调和FasL 基因表达上调在乳腺癌发展中起重要作用,且二者的表达阳性率与乳腺癌淋巴结转移有关.
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KAI1基因转染人乳腺癌细胞系的建立及初步研究
目的:通过将外源性KAI1基因转染入高转移性人乳腺癌细胞株,为乳腺癌基因治疗的实验室研究提供靶细胞,并初步探讨该基因对乳腺癌细胞增殖能力及细胞周期的影响.方法:采用脂质体法将pCMV-KAI1质粒转染入低表达KAI1基因的人乳腺癌细胞株MDA-MB-231中,经G418筛选后获得抗性克隆,利用RT-PCR、Western blot分析目的基因及其蛋白的表达情况,并利用MTT法和平板克隆形成实验初步探讨该基因对乳腺癌细胞体外增殖能力的影响,流式细胞术检测细胞生长周期的变化.结果:稳定转染KAI1基因的细胞株中有外源性目的基因和相应蛋白的高表达;MTT法示细胞增殖力下降,转染KAI1基因的集落形成率(25.33+2.36)%较转染前(43.17+2.75)%明显降低(P＜0.05),流式细胞术显示转染KAI1基因后G1/G0期细胞数量由未转染前的(36.78+0.61)%升高至(64+7.56)%,M/G2期细胞数量则由(17.88+0.76)%降至(7.63+0.60)%,差异有显著性.结论:通过脂质体转染法获得了高表达KAI1基因及其蛋白的人乳腺癌细胞株,并发现该细胞株的体外增殖能力明显下降,这可能是KAI1基因通过调节细胞周期来实现的.
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KAI1在宫颈鳞癌中的表达及临床意义
目的 探讨KAI1在宫颈鳞癌组织中的表达,及其与宫颈癌侵袭、转移的关系.方法 采用免疫组化S-P法、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法和Western blot方法,检测92例宫颈鳞癌组织中KAI1的表达.结果 免疫组化结果显示:KAI1在宫颈癌组织中的表达率明显低于宫颈正常上皮组和宫颈上皮内瘤变组,差异有统计学意义(χ2=29.51,P<0.01;χ2=22.38,P<0.01),且有淋巴结转移的癌变组织其表达情况明显低于未转移的宫颈癌组织,差异显著(χ2=11.15,P<0.01),KAI1在宫颈癌中的阳性表达与临床分期无关,但随着病理分期的增加阳性表达率逐渐减少,且有统计学意义(χ2=7.16,P<0.05).RT-PCR及Western blot同样证实:KAI1在宫颈癌组中的相对表达量明显低于宫颈正常上皮组(F=6.6,P<0.01;F=9.73,P<0.01).结论 宫颈癌中KAI1的异常表达与宫颈癌的恶变程度有关.
关键词： KAI1基因 宫颈鳞癌 Western blot RT-PCR 免疫组化 -
Ⅰ期乳腺癌中KAI1表达与腋淋巴结微小转移的研究
目的 探讨Ⅰ期乳腺癌中KAI1蛋白表达与腋淋巴结微小转移的关系.方法 对56例Ⅰ期乳腺癌的原发癌灶用抗KAI1 及常规病理学检查未发现癌转移的840枚腋窝淋巴结用抗上皮细胞膜(抗EMA)分别进行免疫组化染色.结果 KAI1阳性表达率为32.1%(18/56);被检病例的21.4%(12/56)存在淋巴结内癌的微小转移;在非浸润性乳腺癌中KAI1阳性表达率为75.0%(6/8)明显高于浸润性乳腺癌(25.0%;12/48);淋巴结微小转移者KAI1阳性率为8.3%(1/12),显著低于无转移者(38.6%;17/44).结论 在乳腺癌转移的早期已经发生KAI1表达下降,并与肿瘤的侵袭能力密切相关,该基因表达的变化是临床上推断乳腺癌早期淋巴结转移与否的有用指标.
