首页 > 文献资料
-
胰腺癌组织中SMO mRNA的表达及其临床意义
目的研究胰腺癌组织SMO mRNA的表达及其与临床肿瘤指标的关系.方法收集28例手术切除的新鲜胰腺癌及癌旁胰腺组织,利用RT-PCR方法分别检测癌组织和癌旁胰腺组织SMO mRNA的表达情况.结果 28例胰腺癌组织中20例胰腺癌组织有SMO mRNA表达(阳性率71.4%);28例癌旁胰腺组织中无SMO mRNA的表达;胰腺癌组织和癌旁组织SMO mRNA阳性表达率差异有显著性(P＜ 0.01);SMO mRNA阳性表达率与肿瘤分化程度有关(P＜ 0.05),与肿瘤的大小、淋巴结及远处转移无关(P ＞ 0.05).结论 SMO mRNA在胰腺癌组织中有较高的阳性表达率,检测其表达有助于胰腺癌的诊断,并可作为判断胰腺癌恶性程度的重要指标.
-
反义核酸药物的合成和纯化
反义核酸药物是能与特定mRNA序列互补的不同长度的短小DNA片段,能够通过与靶mRNA形成杂交双链而干扰基因表达.反义核酸药物的合成、纯化是新药临床前评价的基础.本文就国内外反义核酸药物合成中常用的载体、硫代试剂、脱保护试剂的发展,纯化常用的聚丙烯酰胺凝胶电泳、薄层色谱、高效膜吸附色谱、寡核苷酸纯化柱芯和高效液相色谱等方法进行了综述,对其各自的特点、应用前景及优缺点等进行了介绍.
-
去除神经支配大鼠骨骼肌中钠钾三磷酸腺苷酶表达的变化
背景:胰岛素诱导的离子运输改变可影响代谢调节,并且胰岛素抵抗条件下钠钾三磷酸腺苷酶活性的降低导致高血压以及糖原合成、葡萄糖氧化和ATP产生的减少.目的:观察钠钾三磷酸腺苷酶在胰岛素抵抗模型中的表达调控.设计:对照实验.单位:英国邓迪大学生命科学学院分子生理学系.材料:实验于1999-10/2000-02完成.使用15只体质量200～250 g的清洁级成年雄性Sprague Dawley大鼠.每次实验使用5只,相同实验重复3次.方法:去除大鼠一侧后肢神经支配,4 d后将骨骼肌从去除神经支配的后肢和对侧对照后肢中解剖并分离,从红色肌肉(比目鱼与红色腓肠肌)和白色腓肠肌中分离粗制细胞膜.应用免疫印迹法和Northern杂交分析法分别检测蛋白质和mRNA的表达.使用Bio-Rad GS-670图像密度仪对蛋白质和mRNA的信号强度进行定量.主要观察指标:对照侧和去除神经支配后肢骨骼肌中钠钾三磷酸腺苷各亚基蛋白质和mRNA表达水平的比较.结果:15只大鼠全部进入结果分析.与对照侧相比,去除神经支配的后肢中:①红色骨骼肌中α2和β1亚基的蛋白质表达分别下降46%和77%.在红色和白色骨骼肌中,α1亚基的蛋白质表达分别增加了20%和15%.β2亚基的蛋白质表达在红色和白色骨骼肌中均未发生显著变化.②在红色腓肠肌和比目鱼肌中,α2亚基的mRNA水平分别下降了29%和39%,β1亚基的mRNA水平分别下降了80%和52%.在红色和白色腓肠肌中,α1亚基的mRNA水平分别增加了9倍和1.3倍.β2亚基的mRNA水平在红色腓肠肌中无显著变化,但在白色腓肠肌中减少了59%.结论:①在去除神经支配的大鼠骨骼肌中,钠钾三磷酸腺苷酶各亚基的表达受转录和转录后双重调控.②α2和β1亚基的蛋白质表达显著下降的结果提示,在大鼠骨骼肌中,去除神经支配造成的胰岛素抵抗使原本受胰岛素调节的钠钾三磷酸腺苷酶亚基的表达机制被破坏.
关键词： Na(+)K(+)交换ATP酶 去除神经支配 胰岛素抗药性 RNA信使 -
积雪草酸对HSC-T6细胞Smad7和PPARγ的mRNA表达的影响
目的 检测积雪草酸对HSC-T6细胞Smad-7和PPARγ的mRNA表达的影响,探讨积雪草酸抗肝纤维化的分子生物学机制.方法 用MTT实验检测积雪草酸对HSC-T6细胞的增殖抑制作用,计算抑制率,确定积雪草酸作用浓度;设置空白对照组与积雪草酸干预组,用半定量RT-RCR检测两组HSC-T6细胞Smad7和PPAR γ的mRNA表达差异.结果 积雪草酸抑制HSC-T6细胞的增殖,药物浓度为10、20、30、40、50、70、90μmol/L时,抑制率分别为7.47%、12.42%、13.97%、21.32%、47.31%、51.18%、60.36%.空白对照组和积雪草酸干预组的半定tRT-PCR的结果分别为:Smad7/GAPDH mRNA空白对照组为0.267±0.037,积雪草酸干预组为0.358±0.035;PPAR γ/GAPDH mRNA空白对照组为0.157±0.054,积雪草酸干预组为0.570±0.066.两组结果间比较差异具有统计学意义,P<0.05.结论 积雪草酸可以上调HSC-T6细胞Smad7和PPAR γ的mRNA的表达,从而抑制HSC-T6细胞合成和分泌胶原,改善肝纤维化的病理表现.
-
肝细胞生长因子及其受体mRNA在星形细胞瘤中的表达
目的探讨肝细胞生长因子(HGF)及其受体(c-Met)mRNA在正常脑组织和脑星形细胞瘤中的表达规律,探讨其与肿瘤增殖、肿瘤血管生成、临床病理及生存时间之间的关系.方法用原位杂交法检测57例脑星形细胞瘤和5例正常脑组织标本HGF、c-Met mRNA的表达;用免疫组织化学方法检测PCNA在肿瘤细胞中的表达,CD34免疫组化反应检测并计算微血管密度(MVD),并结合临床病理资料进行分析.结果在正常脑组织中未见HGF和c-Met表达,而在脑星形细胞瘤中HGF、c-Met、PCNA及CD34表达随病理级别的增高而明显增强(P＜0.05),随生存期的延长而明显减弱(P＜0.05),并且与患者的性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤直径无关(P＞0.05);HGF表达与c-Met、PCNA的表达及MVD之间显著相关.结论HGF/c-Met在脑星形细胞瘤的形成与发展过程中起重要作用,它可促进肿瘤增殖及瘤组织内微血管的发生,并对预后判断有指导意义.
-
联合免疫磁珠与逆转聚合酶联反应在肝细胞癌患者外周血癌细胞检测中的应用
目的研究联合免疫磁珠分类与巢式逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)在肝细胞癌患者外周血癌细胞检测中的应用价值. 方法分别收集肝细胞癌(45例)、肝硬化(16例)、肝炎(20例)患者及健康人(18例)的外周血,以CD45和Ber-EP4免疫磁珠富集血液中的癌细胞,用巢式RT-PCR检测其外周血甲胎蛋白(AFP) mRNA水平. 结果 AFPmRNA在肝细胞癌、肝硬化和肝炎患者的检出率分别为72.1%、43.8%和25.0%,肝细胞癌组与肝硬化组和肝炎组比较的差异均有显著性意义(P<0.05和P<0.01). 结论联合免疫磁珠分类与巢式RT-PCR法可提高肝细胞癌患者外周血AFPmRNA的检出率.
-
胃癌中BORIS的表达及其临床意义
目的 检测胃癌组织中BORIS的表达,探讨其临床意义.方法 采用RT-PCR及Western-blot技术检测39例胃癌及18例正常胃组织中BORIS的表达.结合胃癌的临床生物学特性分析BORIS表达与胃癌组织学类型、淋巴结转移等因素的关系. 结果 BORIS在正常胃组织中无表达,而在胃癌组织中均有表达,其表达量的多少与患者的性别、年龄无关,而与组织学分级及有无淋巴结转移有关. 结论 BORIS在胃癌中表达异常可能与胃癌的发生有关,可能作为一种新的肿瘤标记物在胃癌的诊断中起一定作用.
-
人巨细胞病毒先天性感染胎鼠大脑皮质钙调素基因mRNA表达的研究
目的研究先天性人巨细胞病毒(HCMV)感染致脑损害后钙调素(calmodulin,CaM )基因mRNA表达的改变,以探讨先天性HCMV感染所致脑损害的机制.方法选用10周龄Balb/c小鼠,雌雄小鼠腹腔内分别注射1.0 ml、0.5 ml、0.25 ml HCMV后合笼交配以建立先天性HCMV中枢神经系统(CNS)感染小鼠模型,并以腹腔注射1.0 ml 1640液鼠为对照.剖腹取21天胎龄小鼠大脑皮质,以自行设计的CaM cDNA编码区的一对引物与一条Ca M特异性探针,分别用逆转录聚合酶链反应(RP-PCR)技术CaM mRNA相对含量,用原位杂交检测大脑皮质细胞内相应mRNA的表达及定位.结果母鼠腹腔内接种HCMV量为1 .0 ml与0.5 ml的临产胎鼠大脑皮质分离出相应病毒,病理学检查等确诊发现了侵袭性脑膜脑炎性病理改变,证实HCMV可以小鼠宫内传播至CNS.1.0 ml组与0.5 ml组胎鼠RT-PCR 产物浓度明显高于0.25 ml组及对照组,而1.0 ml组与0.5 ml组间亦有明显差异.电泳结果显示对照组与0.25 ml组胎鼠未见阳性条带,而1.0 ml组胎鼠特异性条带信号强于0.5 ml胎鼠,仅略低于同组母鼠.原位杂交显示CaM mRNA不但出现在1.0 ml组胎鼠大脑皮质大神经元胞核及胞浆内,在中小神经元及胶质细胞的胞核及胞浆亦有高密度表达,阳性细胞的突起中亦有弱信号存在.结论本研究结果揭示先天性感染HCMV胎鼠大脑皮质内CaM mRNA表达量明显增加,且神经元及胶质细胞均有表达,并与感染剂量有依赖关系. 提示CaM mRNA表达增高可直能直接参与了HCMV先天性感染脑损害的过程.
-
胃癌组织中环氧化酶-2 mRNA及蛋白的表达
[目的]检测环氧化酶-2(Cyclooxygenase-2,COX-2)mRNA及其蛋白在胃癌组织中的表达并探讨其意义.[方法]对60例胃腺癌及对应的癌旁组织中利用RT-PCR法检测COX-2 mRNA的表达,免疫组织化学SP法检测COX-2蛋白的表达.[结果]CO)X-2 mRNA及其蛋白在胃癌组织中的表达阳性率分别为51.7%及48.3%,两者相比差异无显著,且相关分析显示,两检测法的结果呈正相关.而癌旁组织中均不表达COX-2 mRNA及其蛋白,与胃癌组织中相比差异有显著性(P＜0.05).[结论]COX-2的表达与胃癌的发生有关,COX-2 mRNA或其蛋白的检测两者均可反映出胃癌组织中COX-2的表达情况.
关键词： 胃肿瘤/病理学 前列腺素内过氧化物合酶/分析 RNA信使 蛋白质类 -
前列腺癌基因诊断新进展
前列腺癌是男性生殖系统常见的恶性肿瘤之一,近年来发病率有逐年上升趋势,目前对于前列腺癌仍缺乏有效治疗手段,转移及复发是前列腺癌死亡的重要原因之一.早期诊断、及时治疗是提高前列腺癌疗效的重要措施,目前针对该疾病的实验室检查如前列腺特异抗原(Prostate specific antigen,PSA)血清学检查、骨扫描、前列腺活检、免疫荧光实验及流式细胞仪等均无法检测出存在于血液、骨髓及淋巴结等处的前列腺癌微转移灶.前列腺癌主要通过血道向远处转移,血液中微转移癌细胞的检测对于前列腺癌的早期诊断、疗效观察及预后判断均具有重大意义.近年来,随着分子生物学技术的发展,特别是逆转录聚合酶链反应(Reverse transcrip-tion-polymerase chain reaction,RT-PCR),经PCR循环后,可以使单拷贝基因经过35个循环后变成109,敏感度极高,可检测出每毫升血中含有的一个转移癌细胞,且极少出现假阳性,故特异性强,已成为检测微转移癌细胞的新手段,目前是人们研究的热点,本文就这方面的新进展作一综述.
-
家兔未成熟心肌摄钙功能的实验研究
目的从亚细胞水平研究未成熟心肌缺血-再灌注损伤中肌浆网(Sarcoplasmic reticulum, SR)摄钙功能和mRNA的表达. 方法将18只幼兔和18只成年兔随机分为4组,进行离体心灌注.测定各组心功能、冠状动脉流出液血气,单细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i),肌浆网钙离子-三磷酸腺苷酶(Sarcoplasmic reticulum Ca2+-adenosine triphosphatase, SR Ca2+-ATPase)活性,肌浆网45Ca2+(SR45Ca2+)摄取,并用斑点杂交(dot blot)检测SR Ca2+-ATPase mRNA表达. 结果缺血-再灌注后,成熟与未成熟心肌均发生钙超载(P＞0.05).未成熟心肌SR Ca2+-ATPase活性恢复率明显高于成熟心肌(P＜0.01), SR45Ca2+摄取恢复率高于成熟心肌(P＜0.05),SR Ca2+-ATPase mRNA表达上调低于成熟心肌(P＜0.01). 结论未成熟心肌缺血-再灌注损伤钙超载中,SR45Ca2+摄取功能不起主要作用.
