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甲钴胺对脑缺血再灌注损伤大鼠细胞凋亡及细胞色素C表达的影响
目的：探讨甲钴胺对脑缺血再灌注大鼠脑组织细胞色素C表达的影响。方法选择Wistar大鼠132只，随机分为假手术组（24只）、模型组（27只）、尼莫地平组（27只）、甲钴胺低剂量组（27只）、甲钴胺高剂量组（27只）。采用改良线栓法栓塞大脑中动脉3 h制作大鼠脑缺血再灌注模型；分别于6、12、24 h用 TUNEL法检测大脑皮质细胞凋亡、Western blot检测大脑皮质细胞色素C蛋白的表达。结果尼莫地平组、甲钴胺低、高剂量组6、12、24 h阳性细胞数较模型组明显降低（ P＜0．01）；模型组6、12、24 h细胞色素C表达较假手术组明显升高（ P＜0．05，P＜0.01）；尼莫地平组、甲钴胺低、高剂量组6、12、24 h细胞色素C表达较模型组明显降低（ P＜0．05，P＜0．01）；甲钴胺高剂量组6、12 h细胞色素C表达较甲钴胺低剂量组明显降低（0．466±0．046 v s 0．617±0．033，P＜0．01；0．163±0.081 v s 0．552±0．132，P＜0．05）。结论甲钴胺对脑缺血再灌注损伤保护机制可能与抑制细胞色素C蛋白表达有关，以高剂量效果较好。
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脑缺血预处理中线粒体通透性转换及细胞色素C的变化及意义
目的 研究大鼠脑缺血预处理(BIP)中线粒体通透性转换(MPT)及细胞色素C的变化,探讨缺血预处理引起的脑保护机制.方法 36只雄性SD大鼠,随机分为3组:假手术组、脑缺血组、BIP组,每组12只.用免疫组织化学方法检测大鼠海马组织细胞色素C水平变化;3组分别以无Ca2+、低浓度Ca2+(25 μmol/L)和高浓度Ca2+(150 μmol/L)激发5 min后,紫外分光光度法测定MPT的吸光度(A)值.结果 与假手术组比较,BIP组和脑缺血组大鼠细胞色素C表达明显升高(P<0.05);MPT A值明显降低(P<0.05).BIP组细胞色素C表达明显低于脑缺血组(P<0.05);MPTA值明显高于脑缺血组(P<0.05);低浓度Ca2+激发,BIP组MPTA值高于脑缺血组(P<0.05).结论 BIP后,大鼠的脑组织耐受性明显增强,对再次缺血产生脑保护作用.BIP后线粒体对低浓度Ca2+有抵抗.
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瞬时受体电位香草酸受体1在神经血管单元受损中的研究进展
神经血管单元(neurovascular unit,NVU),主要由神经元、星形胶质细胞、血管内皮细胞及小胶质细胞等其他支持细胞组成,是动态变化、相互依存的,是神经系统的基本结构和功能单元[1].而在脑缺血状态下,NVU中的每一个部分都参与了组织的损伤过程,是缺血性脑损伤的重要病理生理基础之一[2].瞬时受体电位(TRP)通道是一个庞大的通道蛋白家族,其包括TRPC、TRPM、TRPV等通路;TRP香草酸受体1(TRPV1)是其中重要的一种通道[3].由于作为辣椒主要生物活性成分的辣椒素(capsaicin)是其高选择性受体激动剂,因此,TRPV1又被称为辣椒素受体;在血管内皮细胞、星形胶质细胞和小胶质细胞中都有表达,在细胞信使传递、调节血管内皮细胞功能、或促使细胞凋亡、调控细胞代谢等方面有重要作用.我们拟从血管内皮细胞、小胶质细胞和星形胶质细胞3个方面,综述中枢神经系统TRPV1在NVU受损中的研究进展.
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内质网应激介导的细胞凋亡与心力衰竭
心力衰竭(heart failure,HF)是各种心脏疾病的终末阶段,具有高发病率、高病死率的特点,其5年生存率仅约50％[1].如何有效的防治HF,已成为21世纪心血管领域的两大挑战之一.HF病因较多,发病机制复杂.防治HF,在疾病初期即通过分子生物学手段,从细胞水平机制人手,可能有望逆转HF的进展,降低病死率.
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依据维生素K环氧化物还原酶和细胞色素基因多态性应用华法林抗凝的临床观察
目的 探讨依据维生素K环氧化物还原酶复合体亚单位1(VKORC1)和细胞色素P450 2C9 (CYP2C9)基因多态性指导老年患者使用华法林抗凝的效应和安全性. 方法 收集2011年2月至2012年8月急诊科和呼吸科有华法林抗凝适应证并初次抗凝的老年患者41例,其中依据基因多态性指导华法林用药20例(观察组),依据临床指标和相关指南给药21例(对照组),比较两组患者抗凝治疗不同时间段国际标准化比值(INR)达标率、INR达稳定目标值(2.0～3.0)的时间差异及随访半年内患者出血并发症的发生率. 结果 观察组和对照组INR达标率第3天0.0％和0.0％；第4天42.1％(8/19)和10.0％(2/20),P＜0.05；第5天52.6％(10/19)和25.0％(5/20),P＞0.05；第7天68.4％(13/19)和35.0％(7/20),P＜0.05.观察组INR达稳定目标值的时间较对照组缩短[(9.5±2.4)d比(12.3±4.8)d,P＜0.05],观察组出血并发症3例,对照组5例,两组间差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 依据基因多态性指导老年患者使用华法林,能缩短华法林抗凝INR首次达标和达到稳定目标值的时间,但仍要高度警惕出血并发症的风险.
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转基因小鼠bcl-xl过表达在大脑中动脉栓塞中的保护作用及机制
目的 观察探讨大脑中动脉栓塞模型转基因小鼠中bcl-xl的过表达对脑缺血及缺血后再灌注是否具有保护作用及其作用机制.方法 建立bcl-xl过表达转基因小鼠,将该模型小鼠与同种系野生型小鼠同时行线栓永久性阻塞大脑中动脉,在缺血24 h时测其神经功能评分,观察转基因小鼠与野生型小鼠的差别.在缺血后不同时间点分别检测两种小鼠脑梗死体积及其动态变化,比较其脑组织中bcl-xl的表达量的差异、再灌注时凋亡细胞的数量和分布情况及脑中细胞色素C的表达量.结果 转基因小鼠的神经功能评分低于野生型小鼠.在缺血后不同时间点转基因小鼠的梗死体积、缺血局部细胞色素C的表达、皮质缺血区内的凋亡细胞数明显少于野生型小鼠,且保护作用发生时间早,持续时间较长.梗死前后转基因小鼠的皮质细胞bcl-xl的表达量均明显高于野生型小鼠,且梗死后两种小鼠体内的bcl-xl的表达量均有所增加,但二者之间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 转基因小鼠中bcl-xl的过表达能降低脑梗死的体积并改善小鼠的神经功能,这种效应可能是通过抑制细胞凋亡而实现的,其机制可能是bcl-xl的过表达抑制了细胞色素C的释放.
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低氧预适应对大鼠肝切除后残肝组织凋亡相关蛋白表达的影响及意义
目的 观察低氧预适应对大鼠肝切除术后残肝组织凋亡相关蛋白细胞色素C和caspase 3表达的影响及其意义.方法 采用SD大鼠肝切除模型研究低氧预适应对残肝组织凋亡相关蛋白表达的影响及意义.将SD大鼠随机分为对照组(NC组)、单纯肝切除组(HR组)和低氧预适应组+肝切除组(HP组),每组24只.HP组术前用10％氮氧混合气体处理90 min,分别于术后1h、6h、12 h、24 h处死大鼠取肝脏标本,取门静脉血检测肝功能,Western-Blot法测定肝切除大鼠残肝组织细胞色素C和caspase 3蛋白的表达,并在电镜下观察各组肝细胞形态学改变、线粒体损伤程度等.结果 HP组血清ALT和AST水平显著低于HR组,差异有统计学意义(P＜0.05);HP组各时段的肝功能明显优于HR组;HP组各时段细胞色素C和caspase 3蛋白表达明显低于HR组,透射电镜下HR组肝细胞出现典型的凋亡征象,而HP组肝细胞无明显凋亡形态.结论 HP对肝切除后残肝组织的肝细胞凋亡有明显的抑制作用;可能是通过下调细胞色素C和caspase 3蛋白的表达、减轻线粒体损伤途径而发挥其保护作用.
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微囊化肝细胞移植对急性肝衰竭大鼠肝组织Smac及细胞色素c mRNA表达的影响
目的 动态观察微囊化肝细胞腹腔移植对急性肝衰竭大鼠肝组织Smac/DIABLO及细胞色素c(cyt-e)mRNA表达的影响.方法 D-氨基半乳糖诱导大鼠急性肝衰竭模型,并设微囊化肝细胞移植组、裸肝细胞移植组和对照组.RT-PeR法测定大鼠肝脏凋亡指标Smac/DIABLO和cyt-cmRNA表达情况.样本比较采用重复测量的多元方差分析或单因素方差分析,组间比较采用t检验.结果 急性肝衰竭大鼠肝组织中Smac/DIABLO及cyt-c mRNA的表达较对照组明显增加(F值为4.345、14.821、47.565、42.178、62.961,P值均<0.05).裸肝细胞移植组和对照组肝组织中的Smac/DIABLO和cyt-c mRNA表达在48 h高,而微囊化肝细胞移植组的峰值略微前移,在24 h高.结论 Smac/DIABLO及cyt-c mRNA的表达随着急性肝衰竭的进程而波动,可以较好地判断肝细胞凋亡情况.
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新生早产大鼠高氧暴露肺组织细胞色素C变化及其与肺细胞凋亡的关系
目的 研究新生早产大鼠吸入高浓度氧(以下简称高氧)后肺组织细胞内细胞色素C(cytochrome C,Cytc)表达及分布的变化及其与肺细胞凋亡的关系,探讨Cytc变化在高氧肺损伤中的作用. 方法 将新生早产SD大鼠随机分为高氧组和空气组,高氧组暴露于浓度为85%左右的氧气中建立高氧肺损伤模型.在生后1、4、7、10、14 d各组取材,分别用RT-PCR技术检测肺组织Cytc和caspase-9 mRNA表达,用免疫组化法检测Cytc蛋白分布,脱氧核糖核酸转移酶介导的X-dUTP缺口末端标记(terminal deoxynucleotid transferase-mediated X-dUTP nick end labeling, TUNEL)法检测肺细胞凋亡情况. 结果 生后第4天高氧组肺组织Cytc mRNA水平为0.5739±0.0228,第7天为1.1000±0.1050,均高于空气组(分别为0.4001±0.0383和0.6330±0.0740)(P均＜0.05);高氧组肺组织caspase-9 mRNA第4天为1.2975±0.0729,第7天为1.2012±0.0615,也分别高于空气组(分别为0.8428±0.0272和0.8086±0.0167)(P＜0.05).生后各时间点肺组织Cytc免疫组化平均灰度值和肺组织细胞凋亡阳性率均高于空气组(P均＜0.01). 结论 高氧暴露可致新生早产大鼠肺组织Cytc mRNA表达增加和Cytc分布变化,可能通过激活caspase-9进而导致肺细胞凋亡,从而导致高氧肺损伤.
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粒细胞集落刺激因子对大鼠脑缺血再灌注损伤脑Caspase-3与细胞色素C表达的影响
目的 探讨粒细胞集落刺激因子(G-CSF)在大鼠脑缺血再灌注损伤中的神经保护作用机制.方法 将36只健康成年雄性SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、G-CSF治疗组,每组12只.采用线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,于脑缺血2 h再灌注0 h及24 h给予G-CSF治疗组G-CSF(按体质量50μg/kg)腹部皮下注射,给予假手术组和缺血再灌注组等量生理盐水.采用Longa评分法进行神经功能评分,采用免疫组化法检测各组大鼠脑组织细胞色素c、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达水平,应用原位末端转移酶标记(TUNEL)检测神经细胞凋亡情况,TTC染色检测脑梗死体积.结果 假手术组大鼠未发现脑梗死病灶,细胞色素C和Caspase-3阳性细胞数及凋亡细胞亦少见.G-CSF治疗组细胞色素C、Caspase-3阳性细胞数及凋亡细胞数均较缺血再灌注组明显减少(P<0.01);缺血再灌注组和G-CSF治疗组均可见大脑中动脉供血区梗死灶,但G-CSF治疗组梗死灶较缺血再灌注组明显缩小(P＜0.01),神经功能明显改善.结论 G-CSF对脑缺血再灌注损伤有神经保护作用,其作用机制可能通过阻断线粒体/细胞色素C途径抑制细胞凋亡.
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高血糖对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡及细胞色素C、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3表达的影响
目的 研究高血糖对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡和细胞色素C(CytC)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)表达的影响及高血糖加重脑缺血损伤的作用机制.方法 将30只雄性Sprague-Dawley大鼠分为3组:高血糖组(10只)、正常血糖组(10只)和假手术组(10只).按体质量4 g/kg给予大鼠尾静脉注射25%葡萄糖,造成大鼠高血糖状态;继而制作大脑中动脉阻塞脑缺血再灌注模型.于缺血2 h再灌注24 h进行神经功能评分,采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)检测大鼠脑组织细胞凋亡数,采用免疫组化染色及Western blot技术检测大鼠脑组织CytC和caspase-3表达情况[吸光度(A)值].组间检测数据比较采用单因素方差分析,两两比较采用SNK-q法.结果 (1)高血糖组神经功能评分[(4.20±0.63)分]显著高于正常血糖组[(3.50±0.71)分,q=15.56,P<0.05].(2)高血糖组凋亡细胞数[(19.10±0.99)个]明显多于正常血糖组[(17.50±1.08)个,q=14.84,P<0.05].(3)高血糖组CytC蛋白表达A值为1.369±0.055,显著高于正常血糖组(1.196±0.088,q=23.51,P<0.05).(4)高血糖组caspase-3蛋白表达A值(1.133±0.047)明显高于正常血糖组(1.085±0.033,q=27.58,P<0.05).结论 高血糖可增加缺血再灌注后脑神经细胞凋亡,CytC、caspase-3的激活及表达增强可能是高血糖加重脑缺血再灌注损伤的机制之一.
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蓝光致人视网膜色素上皮细胞凋亡与线粒体膜电位和细胞色素C的关系
目的 探讨蓝光光照对体外培养的人视网膜色素上皮(RPE)细胞凋亡及对线粒体膜通透性转运功能的影响.方法 用蓝光光照体外培养的人RPE细胞.实验分为三部分.第一部分:不同光照度,分为3组,第1组光照度(500±100)lx,第2组光照度(2000±500)lx,第3组光照度(3000±500)lx;光照RPE细胞时间6 h,光照结束后24 h终止培养.第二部分:同一光照度、不同光照时间,检测RPE细胞亚型时分为3组,第1组光照时间6 h,第2组光照时间12 h,第3组光照时间24 h,光照度均为(2000±500)lx;检测线粒体膜电位时也分为3组,第1组光照时间3 h,第2组光照时间6 h,第3组光照时间12 h,光照度均为(2000±500)lx.第三部分:同一光照度和光照时间,光照度(2000±500)lx,光照RPE细胞时间6 h;不同细胞培养终止时间分为4组,第1组终止细胞培养时间为光照后6 h,第2组为光照后12 h,第3组为光照后24 h,第4组为光照后36 h.利用末端脱氧核糖核酸转移酶介导的原位缺口末端标记(TUNEL)染色、荧光素标记的Annexin V-FITC和PI双染流式细胞检测、透射电镜等手段观察RPE细胞凋亡情况.罗丹明123荧光染料孵育人RPE细胞,流式细胞仪检测线粒体膜电位,酶联免疫法测定细胞色素C活性,比色测定法测定Caspase-3的活性.结果 第二部分第1组TUNEL染色阳性细胞的体积缩小变圆,胞核浓缩,边聚成新月形或帽状,细胞核碎裂成数个,细胞膜出胞.透射电镜观察发现细胞内线粒体肿胀,线粒体内膜嵴消失,粗面内质网扩张,溶酶体增加.第一部分(500±100)lx光照未引起明显的RPE细胞损伤,但线粒体膜电位明显下降;随着光照度增加,RPE细胞出现凋亡、凋亡继发性坏死及坏死,同时线粒体膜电位逐渐下降.第二部分光照6和12 h,凋亡细胞百分比增加,荧光强度明显下降;光照24 h凋亡继发性坏死细胞、坏死细胞百分比增加.第三部分光照后6和12 h,RPE细胞凋亡百分比逐渐增加;光照后24、36 h凋亡继发性坏死细胞和坏死细胞百分比明显增加,光照后各时间点RPE细胞荧光强度明显下降.以光照度(2000±500)lx照射6和12 h,可见光照后24和36 h两组的细胞色素C浓度明显升高,未检测到Caspase-3活性变化.结论 蓝光照射可导致体外培养的人RPE细胞凋亡、凋亡继发性坏死及坏死,其损伤程度与光照度和时间相关;蓝光照射导致培养的人RPE细胞损伤过程与线粒体膜电位降低、细胞色素C释放有关;线粒体膜电位可作为检测蓝光致人RPE细胞凋亡的早期指标.
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雌激素对慢性间歇性低氧大鼠颏舌肌线粒体细胞色素C氧化酶活性及其亚基表达的影响
目的 通过研究雌激素对慢性间歇性低氧(chronic intermittent hypoxia,CIH)大鼠颏舌肌线粒体细胞色素C氧化酶(cytochreme C oxidase,COX)活性及其亚基(COX Ⅰ、COXⅣ)表达的影响,探讨阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)发病中雌激素所起的作用.方法 3个月龄健康雄性SD大鼠48只,分为正常对照组(NC组)、慢性间歇性低氧组(CIH组)及慢性间歇性低氧+雌激素干预组(E+CIH组).后两组建立CIH模型,同时E+CIH组给予苯甲酸雌二醇0.2 mg/kg,NC组、CIH组给予无菌橄榄油0.2 ml/次,2次/周,肌肉注射.密度梯度离心法分离大鼠颏舌肌线粒体,极谱法测量COX活性;Western blotting分析COX Ⅰ和COXⅣ蛋白表达;实时聚合酶链反应(real-time polymerase chain action)法检测COX Ⅰ和COXⅣ的基因表达.结果 CIH组大鼠颏舌肌线粒体COX活性为(0.143±0.029)μkat/mg,与NC组[(0.273±0.058)μkat/mg]相比显著降低(P＜0.01),E+CIH组COX活性[(0.203±0.073)μkat/mg]较CIH组有所回升(P＜0.05),但仍显著低于NC组(P＜0.05).CIH组与E+CIH组COX Ⅰ蛋白表达分别为(10.789±8.144)和(25.593±11.108),与NC组(47.325±7.502)相比均显著降低(P＜0.01),且E+CIH组COX Ⅰ蛋白表达显著高于CIH组(P＜0.05).3组COXⅣ蛋白表达的差异无统计学意义(P＞0.05);3组COX Ⅰ、COXⅣmRNA表达量的差异无统计学意义(P＞0.05).结论 CIH可抑制大鼠颏舌肌线粒体COX蛋白表达及活性,而雌激素干预可部分恢复COX蛋白表达及活性.
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细胞色素C依赖的线粒体途径在hTERT干扰促进肝癌HepG2细胞凋亡中的作用
目的 检测靶向RNAi抑制hTERT基因对HepG2肝癌细胞凋亡的促进作用及其与线粒体凋亡途径的关系,探讨hTERT干扰促进细胞凋亡的可能机制.方法 收集第20代hTERT基因RNAi真核表达载体稳定转染细胞、对照细胞(转染空载体质粒)及未转染HepG2细胞,采用Western blot检测线粒体、胞质细胞色素C (cyt C)的表达及细胞内caspase-9、Bcl-2、Bax和hTERT的表达.结果 与未转染细胞和对照细胞相比,转染细胞hTERT、Bcl-2和线粒体cyt C表达明显减少,Bax和胞质cyt C表达明显增加;未转染细胞及对照细胞仅见约46kD的前caspase-9条带,转染细胞可见46kD前caspase-9条带和35kD caspase-9 p35亚基条带.结论 RNAi靶向抑制hTERT基因可通过抑制Bcl-2表达和促进Bax表达引起线粒体cyt C释入胞质,激活caspase-9促进HepG2肝癌细胞凋亡.
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氧合血红蛋白诱导脑微血管内皮细胞凋亡中半胱天冬酶3和细胞色素C的变化
目的:探讨氧合血红蛋白(oxyhemoglobin,OxyHb)诱导体外培养的大鼠脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells,BMvECs)凋亡的可能机制. 方法:将原代培养的大鼠BMvECs分别与10 μmol/L和100 μmol/L的OxyHb共孵育,在孵育后6、12和24 h分别以流式细胞术、荧光分光光度计法和Western 印迹检测线粒体跨膜电位(mitochondrial transmembrane potentials,ΔΨm)、半胱天冬酶3(caspase-3)和细胞色素C(cytochrome C,Cyt-C)的表达水平. 结果:经10 μmol/L和100 μmol/L OxyHb刺激6～24 h后,与对照组相比,OxyHb能显著降低血管内皮细胞ΔΨm,而增强Cyt-C和caspase-3的表达,并呈刺激时间和刺激浓度依赖性.与10 μmol/L OxyHb分别孵育6、12和24 h,caspase-3的活性分别为0.103±0.010,0.126±0.010和0.234±0.031,而在OxyHb 100 μmol/L组,其6、12和24 h caspase-3的活性分别为0.154±0.012,0.205±0.020和0.302±0.015. 结论:ΔΨm的下降、caspase-3的激活以及Cyt-C的释放可能是OxyHb诱导BMvECs凋亡的重要机制.
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间歇低氧致人脐静脉内皮细胞凋亡与线粒体细胞色素C释放的相关性
目的 探讨间歇低氧(IH)致人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡与线粒体细胞色素C(cytC)释放的相关性.方法 研究分为IH组和对照组,IH组HUVECs接受IH刺激,置于1％ O25 min与21％ O25 min循环交替(37℃,5％ CO2)的孵育箱,观察时间分别为8、16、24h;对照组细胞则置于普通常氧孵育箱(37℃,5％ CO2)内24 h.应用Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡率,电镜观察细胞线粒体结构变化,差速离心法分离HUVECs胞质与线粒体并分别检测各组分中cytC的相对表达量.分析cytC的释放与细胞凋亡的相关性.结果 IH组HUVECs内线粒体结构发生明显变化,出现线粒体肿胀、嵴断裂、空泡化等现象;而对照组线粒体超微结构仍保持完整.IH组8、16、24h的HUVECs凋亡率分别为(6.710±0.599)％、(8.863±1.190)％、(9.607±1.266)％,均显著高于对照组的(2.450±0.795)％(均P＜0.05);且凋亡率随IH处理时间延长而增加.胞质cytC含量与细胞早期凋亡率呈正相关(r =0.741,P=0.022).结论 IH可致内皮细胞线粒体cytC释放入胞质,促进细胞凋亡,参与IH致血管内皮损伤.
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三氧化二砷诱导类风湿性关节炎滑膜细胞凋亡机制的体外研究
目的:探讨三氧化二砷(As2O3)诱导人成纤维样滑膜细胞( HFLS) 凋亡的可能机制.方法:用As2O3作用于类风湿性关节炎(RA)患者HFLS后,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测凋亡过程中Caspase-3水平,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Caspase-3和Bcl-2 mRNA表达.结果:凋亡早期细胞色素C(CytC)水平升高,不同浓度As2O3作用HFLS后不同时间胞浆中CytC含量差别有统计学意义(F浓度=2 541.065,F时间 =4 433.196,P < 0.01),且时间和浓度间存在着交互效应(F交互=825.472,P < 0.01).不同浓度的As2O3作用后细胞中Caspase-3 mRNA表达显著增强, Bcl-2 mRNA表达显著减弱,且分别与As2O3浓度呈正相关和负相关.结论:As2O3可能通过升高CytC及Caspase-3,抑制Bcl-2诱导HFLS凋亡.
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依布硒啉对大鼠急性脊髓损伤后线粒体的保护作用
目的：探讨依布硒啉对大鼠急性脊髓损伤后线粒体氧化损伤、细胞色素C释放及神经细胞凋亡的影响。方法将60只健康SD大鼠按随机数字表法分为5组，每组12只。采用Allen’s法制脊髓损伤（SCI）模型，假手术组仅行椎板切除，SCI模型组行椎板切除+打击，甲基泼尼松龙组打击后给予甲基泼尼松龙腹腔注射处理（30 mg/kg），依布硒啉组打击后给予依布硒啉腹腔注射处理（10 mg/kg），生理盐水组打击后给予等体积0.1%二甲基亚砜的生理盐水溶液腹腔注射处理。术后24 h取受损脊髓，检测丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）含量、细胞色素C表达及神经细胞凋亡情况。结果依布硒啉组较SCI模型组脊髓组织线粒体中MDA含量明显降低，GSH明显升高，Western blot检测细胞色素C的释放量减少，TUNEL法检测神经细胞凋亡数目明显减少（均P<0.01）。结论依布硒啉能够改善SCI后线粒体氧化损伤，减少线粒体细胞色素C释放，抑制神经细胞凋亡，对SCI起到保护作用。
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选择性线粒体分裂抑制剂对大鼠急性脊髓损伤后神经细胞的保护作用及其机制
目的：检测选择性线粒体分裂抑制剂-1（Mdivi-1）对大鼠急性脊髓损伤（ASCI）后神经细胞线粒体中丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）、细胞色素C（Cyt-C）及神经细胞凋亡的影响。方法成年雌性SD大鼠36只，体质量250~300 g，随机分为假手术组（Sham组）、单纯脊髓损伤组（SCI组）、Mdivi-1预处理组（1.20 mg/kg，Mdivi-1组），各12只。Sham组只暴露脊髓，不打击。SCI组和Mdivi-1组采用Allen’s方法制备脊髓损伤模型。Mdivi-1组在脊髓打击之前15 min尾静脉给予Mdivi-1，而SCI组给予等量二甲基亚砜（DMSO）。Sham组在暴露脊髓8 h后立即处死，SCI组和Mdivi-1组均于脊髓损伤后8 h处死；然后取出脊髓节段T9~T11，用分光光度计检测各组脊髓组织线粒体中MDA和GSH的含量，Western Blot法检测线粒体及胞浆内Cyt-C表达情况，荧光TUNEL法观察神经细胞凋亡情况。结果与Sham组相比，SCI组线粒体中Cyt-C和GSH明显减少，但线粒体中的MDA，胞浆中Cyt-C及神经细胞凋亡数目明显增多（P<0.01）；与SCI组相比，Mdivi-1组线粒体中Cyt-C和GSH明显增多，但线粒体中MDA，胞浆中Cyt-C以及神经细胞凋亡数目明显减少（P<0.01）。结论 Mdivi-1具有减轻ASCI后神经细胞线粒体氧化损伤，抑制线粒体中Cyt-C的释放及神经细胞凋亡的作用，促进了脊髓功能恢复。
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细胞色素C在Pim-3抗心肌急性损伤中的作用
目的:探讨原癌基因Pim-3对抗心肌急性损伤的作用是否与线粒体信号转导途径介导的细胞色素C(Cyt C)的释放有关.方法:采用大鼠乳鼠心肌细胞,随机分为4组,对照组;缺氧复氧(A/R)组,建立A/R损伤模型;pcDNA3.1+A/R组,将pcDNA3.1转染入心肌细胞,24 h后进行A/R损伤;pcDNA3.1/Pim-3+A/R组,将Pim-3重组质粒(pcDNA3.1/Pim-3)转染入心肌细胞,24 h后进行A/R损伤.实验结束后,检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH) 活性,四唑盐(MTT)比色试验测定细胞存活率,TUNEL法检测细胞凋亡,蛋白印迹检测Pim-3 蛋白表达水平,线粒体、胞浆Cyt C动态变化和caspase-3活性.结果:与对照组比较,A/R组细胞存活率明显下降,LDH值和凋亡指数明显升高,差异有统计学意义(P ＜ 0.01);与A/R组比较,pcDNA3.1/Pim-3+A/R组细胞存活率明显升高,LDH值和凋亡指数明显下降,并且Cyt C由线粒体向胞浆的释放明显被抑制,同时caspase-3活性也下降,差异有统计学意义(P ＜ 0.01).结论:Pim-3对抗心肌急性损伤的机制是通过抑制Cyt C易位释放入胞浆激活caspase-3而致.
