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镉诱导腺垂体细胞凋亡与半胱天冬酶信号变化初探
目的了解氯化镉诱导腺垂体细胞凋亡发生及半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶(procaspase-9)mRNA表达的变化,为阐明镉致腺垂体毒作用的分子机制提供科学依据.方法在整体实验中,将健康雄性SD大鼠48只,分为4组,每组12只,分别每天经口灌胃给予0、1.0、2.0、4.0 mg/kg氯化镉,6周后进行腺垂体激素促肾上腺皮质激素、黄体生成素、卵泡刺激素水平、超微结构、原位末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡及procaspase-9 mRNA表达检测;离体实验采用酶解分离大鼠之原代腺垂体细胞,37℃、5%CO2条件下培养120 h后分别以0、1.56、3.12、6.25、12.50、25.00、50.00、100.00 μmol/L氯化镉处理6 h,收获细胞以TUNEL法检测细胞凋亡及原位杂交法检测procaspase-9 mRNA表达.结果整体实验表明氯化镉作用后3个剂量组血中促肾上腺皮质激素、黄体生成素和1.0 mg/kg氯化镉剂量组卵泡刺激素水平均降低,腺垂体细胞呈现明显的凋亡征象;整体和离体实验结果均显示氯化镉以剂量依赖方式诱导腺垂体细胞procaspase-9 mRNA表达的增强,且可使凋亡细胞增多,与对照组比较,差异均具有统计学意义.结论在一定剂量条件下,氯化镉影响腺垂体激素分泌水平改变,并诱发腺垂体细胞凋亡,caspase-9通路在凋亡发生过程中可能发挥了一定的作用.
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尿毒症患者血清对人脐静脉内皮细胞凋亡及caspase-12水平的影响及重组人促红细胞生成素的干预作用
目的 探讨尿毒症患者血清对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡和caspase-12水平的影响及重组人促红细胞生成素(rhEPO)的干预作用.方法 选择重庆医科大学附属第一医院肾内科2011年1-4月收治的尿毒症患者和健康志愿者各15例,HUVECs分为3组:对照组(含10%健康者血清)、尿毒症组(含10%尿毒症患者血清)、rhEPO干预组(rhEPO 5、10、15 U/ml,分别加入含有10%尿毒症患者血清的培养基).各组干预24 h,流式细胞仪检测细胞凋亡,免疫组化法测定其caspase-12的水平.结果 尿毒症患者血清干预组内皮细胞凋亡指数及其caspase-12水平均高于对照组(P<0.01).随着rhEPO浓度的增加,内皮细胞凋亡指数和caspase-12水平都逐渐降低(P<0.05),rhEPO可抑制尿毒症患者血清诱导的内皮细胞凋亡(P<0.01),降低细胞内caspase-12水平.相关分析显示:凋亡指数与caspase-12水平呈正相关(r=0.82,P<0.01).结论 尿毒症患者血清可以诱导HU-VECs凋亡,其机制可能与caspase-12水平有关.rhEPO可能通过调控caspase-12的水平抑制尿毒症患者血清诱导的内皮细胞凋亡.
关键词： 尿毒症 细胞凋亡 半胱氨酸内肽酶类 重组人促红细胞生成素 -
胆汁内、外引流对梗阻性黄疸大鼠肠黏膜细胞增生与凋亡的影响
目的探究胆汁内、外引流对梗阻性黄疸（ OJ ）大鼠肠黏膜细胞增生与凋亡的不同影响。方法80只SD大鼠随机分为四组：假手术组（ A组）、梗阻性黄疸组（ B组）、胆汁内引流组（ C组）和胆汁外引流组（ D组），每组20只。造模一周后测定血清内毒素水平；取末端回肠黏膜组织，光镜下观察黏膜形态改变；采用IHC法检测肠黏膜细胞增殖细胞核抗原（PCNA）、半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）的表达。结果 C组大鼠血清内毒素水平较B组显著下降（P＜0.01），与A组无明显差别（P＞0.05）；D组较B组无明显差别（ P＞0.05），显著高于A组（ P＜0.01）；C组显著低于D组（ P＜0.01）。 C组大鼠肠黏膜细胞PCNA的表达较B组显著上升（P＜0.01），仍低于A组（P＜0.01）；D组较B组显著上升（P＜0.01），低于A组（P＜0.01）。 C组显著高于D组（ P＜0.01）。 C组大鼠肠黏膜细胞Caspase-3的表达较B组显著降低（ P＜0.01），仍高于A组（P＜0.01）；D组较B组显著下降（P＜0.01），高于A组（P＜0.01）。 C组显著低于D组（P＜0.01）。 C组大鼠肠黏膜形态较D组有明显的不同。结论胆汁在保护OJ大鼠肠黏膜细胞中起重要作用；胆汁内引流保护OJ大鼠肠黏膜细胞作用优于胆汁外引流。
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去泛素化酶UCH-L3和自噬基因LC3Ⅱ在急性髓细胞白血病诊断中的临床应用研究
目的 探讨自噬和UCH-L3在急性髓细胞白血病发生发展过程中的作用机制和相互关系,为白血病的诊断及治疗提供新的靶点和策略.方法 选取2014至2015年大连医科大学附属第一医院收治的84例AML患者(男47例,女37例)及健康体检对照组25名(男13名,女12名).AML初发组40例(男24例,女16例),中位年龄54岁(23～85岁);缓解组30例(男14例,女16例),中位年龄45岁(22～74岁);难治组14例(男9例,女5例),中位年龄50岁(18～80岁),其中M1型3例、M2型42例、M3型18例、M4型3例及M5型18例.HL-60细胞采用Real Time PCR及Western Blot法检测TCID处理前后UCH-L3和LC3II的表达变化.AML患者及对照组采用Real Time PCR方法检测外周血单个核细胞UCH-L3和LC3II基因mRNA的表达情况;比较其在初发组、缓解组、难治组及对照组间表达情况;分析AML不同型别之间UCH-L3和LC3II的表达水平;比较AML初发组LC3Ⅱ基因表达的高低与临床特征、临床分期、实验室检查结果及治疗效果的关系.追踪同一患者治疗前后UCH-L3及LC3ⅡmRNA的表达变化.计量资料用t检验,率的比较用χ2检验;相关性分析采用秩相关检验;不符合正态分布的数据用非参数检验.结果 TCID处理HL-60细胞后,UCH-L3及LC3 II在基因和蛋白水平上与未处理组相比表达均下调,差异有统计学意义(t=-29.435及-8.105,P均<0.05);AML初发组的UCH-L3表达量较健康对照组下调,差异有统计学意义(Z=-3.87,P<0.05);AML缓解组UCH-L3表达量与初发组和难治组相比均高表达,差异有统计学意义(Z分别为-6.70和-4.09,P均<0.05);AML初发组LC3Ⅱ的表达量与健康对照组,缓解组和难治组相比均高表达,差异有统计学意义(Z分别为-6.96、-5.32和-3.52,P均<0.05);LC3Ⅱ高表达组患者细胞遗传学异常更为常见(χ2=6.510,P<0.05);同一患者治疗前后UCH-L3及LC3Ⅱ的相对表达量均有显著差异(t=5.315及-7.353,P均<0.05),经化疗缓解后UCH-L3的表达量较初发治疗前上调,而LC3Ⅱ的表达量下调;初发与缓解组的AML患者各型别间UCH-L3及LC3Ⅱ的相对表达量无差异(F分别为0.014及0.143,P均>0.05).结论 UCH-L3和自噬可以通过相互协同作用而调控AML的发生发展.
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风湿性心房颤动患者calpain-Ⅰ/calpastatin和caspase-3与细胞凋亡的关系及其作用
目的检测在风湿性心脏病心房颤动(房颤)患者左心房中calpain-Ⅰ、calpastatin和caspase-3的含量以及细胞凋亡的发生率,探讨它们之间的相互关系,研究它们在房颤发病机制中的作用.方法选择接受外科换瓣手术的风湿性心脏病患者共43例,分为三组;其中窦性心律组15例,阵发性房颤(阵发房颤)组8例,永久性房颤(永久房颤)组20例.在外科手术中取左心房组织,应用免疫印迹法测定各组患者的calpain-Ⅰ、calpastatin和caspase-3的蛋白含量;应用TUNEL法检测各组患者左心房肌细胞凋亡,计算其凋亡指数(AI),分析比较它们之间的关系.结果与窦性心律组比较:(1) 永久房颤组的calpain-Ⅰ含量增加到(344.0±101.9)%,caspase-3含量增加到(394.0±99.4)%(P《0.01),calpastatin含量降低到(27.0±12.8)%(P《0.01);而阵发房颤组的各蛋白含量则无明显变化;(2)永久房颤组左心房心肌细胞AI为(24.6±9.1)%,明显升高(P《0.01);(3)在永久房颤组中,calpain-Ⅰ和caspase-3的蛋白含量及AI分别与左心房内径、房颤持续时间呈明显正相关(P《0.05～0.01);calpastatin的蛋白含量却分别与两者呈明显负相关(P=0.007,P=0.001);(4)calpain-Ⅰ的含量分别与caspase-3的含量、AI呈明显正相关(均为P 《0.01);而calpastatin的含量分别与calpain-Ⅰ、caspase-3的含量明显负相关(均为P《0.01).结论永久房颤时,左心房组织心肌细胞凋亡增加,calpain-Ⅰ、caspase-3、calpastatin蛋白表达出现变化,并且它们之间关系密切、相互影响,可能形成一个体系,使心房结构和功能改变,促使房颤发生和持续存在,可能是房颤发病的重要机制之一.
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LMP2和PPM1A在妊娠滋养细胞疾病组织中的表达及其意义
目的 榆测低分子质量多肽2(LMP2)和蛋白磷酸酶1A(PPM1A)在妊娠滋养细胞疾病组织中的表达,并探讨两者在预测葡萄胎恶变中的价值.方法 采用免疫组化EnVision二步法检测196例完全性葡萄胎(其中28例恶变)组织中LMP2和PPM1A蛋白的表达,选择妊娠滋养细胞肿瘤12例(侵蚀性葡萄胎7例、绒毛膜癌5例)和正常妊娠绒毛20例作为对照,回顾性分析其临床病理资料.结果 LMP2和PPM1A存细胞滋养细胞、合体滋养细胞和绒毛外滋养细胞中均有表达.LMP2在葡萄胎恶变者中的表达水平明显高于正常绒毛和葡萄胎良性转归者,分别为(6.79±2.38)、(3.10±1.65)、(5.26±2.63)分,分别比较,差异均有统计学意义(P均<0.01);而与妊娠滋养细胞肿瘤者[(6.42±2.68)分]比较,差异无统计学意义(P=0.113).PPM1A在正常绒毛、葡萄胎(良性转归、恶变)和妊娠滋养细胞肿瘤组织中的表达水平依次下调,分别为(6.30±2.98)、(4.93±2.50)、(4.43±2.04)、(3.33±2.06)分,分别比较,差异均有统汁学意义(P<0.01),且葡萄胎恶变者的表达低于良性转归者(P=0.001).LMP2表达与卵巢黄素化囊肿大小有关,PPM1A表达与子宫大小有关(P<0.05).LMP2与PPM1A的表达水平之间小存在相关性(P>0.05).结论 LMP2高表达和PPM1A低表达可能在滋养细胞的运动、侵袭及葡萄胎的恶性转化中发挥着重要作用.通过检测葡萄胎首次清官术组织中LMP2和PPM1A的表达,对判断葡萄胎的预后有一定的参考意义.
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滋养细胞自噬在子痫前期发病中的作用及其分子机制
目的 探讨子痫前期(PE)患者胎盘滋养细胞自噬的发生规律及其可能的分子机制.方法 2011年11月至2012年4月在南京妇幼保健院收集20例PE患者(PE组)及20例正常妊娠妇女(对照组)的胎盘组织,透射电镜观察滋养细胞自噬体的形成情况；蛋白印迹法和实时荧光定量PCR技术检测胎盘组织中自噬相关基因Atg4B、微管相关蛋白l轻链3(LC3)Ⅱ、Ⅰ蛋白和mRNA的表达变化.结果 与对照组孕妇相比,PE组孕妇胎盘组织在透射电镜下见滋养细胞胞质中典型的自噬体形成.蛋白印迹法和实时荧光定量PCR技术检测结果显示,PE组患者胎盘组织中LC3-Ⅱ/Ⅰ比值(1.43±0.23)高于对照组(0.59 ±0.12),两组比较,差异有统计学意义(P ＜0.05)；Atg4B蛋白的相对表达量(0.71±0.13)高于对照组(0.33±0.07),两组比较,差异也有统计学意义(P ＜0.05)；PE组Atg4B mRNA的表达水平上调,为对照组的(1.73±0.16)倍,两组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 PE患者滋养细胞白噬活性的增高,可能参与了PE的发生发展.
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DAPK诱导肺癌PGCl3细胞凋亡时Caspases的表达变化
目的:探讨死亡相关蛋白激酶(death associated protein kinase,DAPK)诱导PGCl3细胞凋亡的可能机制及其对半胱氨酸蛋白酶(Caspases)表达的影响.方法:真核表达载体pcDNA3.1-DAPK导入PGCl3细胞中.荧光染色法观察细胞凋亡,流式细胞仪检测凋亡峰、细胞周期和线粒体膜电位的变化.RT-PCR检测Caspase-3、 Caspase-6和Caspase-8表达变化.结果:pcDNA3.1-DAPK转染导致PGCl3细胞发生凋亡.pcDNA3.1-DAPK不影响PGCl3细胞周期和线粒体膜电位,t=1.816,P=0.328.DAPK诱导PGCl3细胞凋亡时,Caspase-3和Caspase-8基因表达上调,Caspase-6基因表达无明显变化.Caspase 的抑制剂crmA(100 μmol/L)不能完全抑制细胞凋亡,t=0.969,P=0.423.结论:过表达的DAPK诱导PGCl3细胞凋亡与Caspase-8和Caspase-3途径有关,Caspase-6相关途径可能不是主要路径,同时可能存在不依赖于Caspase激活途径.
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胰腺癌细胞凋亡伴随胱天蛋白酶依赖性BAG3蛋白剪切的研究
目的:前期研究表明,蛋白酶体抑制剂诱导甲状腺癌细胞凋亡时伴随抗凋亡蛋白BAG3的剪切.本研究探讨BAG3蛋白剪切是否为细胞凋亡伴随的普遍现象.方法:选取人胰腺癌细胞SW1990和PANCl,分别设培养液处理空白对照组、蛋白酶体抑制剂MG132单独或与z-VAD联合处理组、星形孢菌素(STS)单独或与z-VAD联合处理组、依托泊苷单独或与z-VAD联合处理组,TNFα单独或与z-VAD联合处理组以及紫外线单独照射或与z-VAD联合处理组;利用蛋白质印迹法检测各组细胞中BAG3蛋白的剪切情况;利用流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率.结果:与甲状腺癌细胞类似,蛋白酶体抑制剂MG132诱导胰腺癌细胞凋亡的同时,伴随BAG3蛋白的剪切;其他凋亡诱导剂如依托泊苷、星形孢菌素和紫外线照射在诱导胰腺癌细胞凋亡的同时,也可诱导BAG3蛋白剪切体的出现;而广谱胱天蛋白酶抑制剂z-VAD可以完全抑制BAG3蛋白的剪切.结论:胱天蛋白酶依赖性BAG3蛋白的剪切可能是细胞凋亡时的普遍现象,BAG3可能为胱天蛋白酶作用底物.
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粒细胞集落刺激因子对大鼠脑缺血再灌注损伤脑Caspase-3与细胞色素C表达的影响
目的 探讨粒细胞集落刺激因子(G-CSF)在大鼠脑缺血再灌注损伤中的神经保护作用机制.方法 将36只健康成年雄性SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、G-CSF治疗组,每组12只.采用线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,于脑缺血2 h再灌注0 h及24 h给予G-CSF治疗组G-CSF(按体质量50μg/kg)腹部皮下注射,给予假手术组和缺血再灌注组等量生理盐水.采用Longa评分法进行神经功能评分,采用免疫组化法检测各组大鼠脑组织细胞色素c、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达水平,应用原位末端转移酶标记(TUNEL)检测神经细胞凋亡情况,TTC染色检测脑梗死体积.结果 假手术组大鼠未发现脑梗死病灶,细胞色素C和Caspase-3阳性细胞数及凋亡细胞亦少见.G-CSF治疗组细胞色素C、Caspase-3阳性细胞数及凋亡细胞数均较缺血再灌注组明显减少(P<0.01);缺血再灌注组和G-CSF治疗组均可见大脑中动脉供血区梗死灶,但G-CSF治疗组梗死灶较缺血再灌注组明显缩小(P＜0.01),神经功能明显改善.结论 G-CSF对脑缺血再灌注损伤有神经保护作用,其作用机制可能通过阻断线粒体/细胞色素C途径抑制细胞凋亡.
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平阳霉素对体外培养血管内皮细胞的作用
目的研究平阳霉素对人脐静脉内皮细胞的抑制作用及其原理,以揭示其治疗头颈部血管瘤的机理.方法采用人脐静脉内皮细胞系ECV-304,用MTT实验比较平阳霉素作用24小时、48小时后的细胞抑制率,通过流式细胞术测定平阳霉素作用24小时后细胞周期、凋亡、半胱氨酸蛋白酶(Caspase 3)表达的变化.结果平阳霉素作用24小时和48小时其浓度和细胞抑制率存在依赖关系,24小时各浓度抑制作用均强于48小时;平阳霉素各浓度作用24小时后,G1期百分率增高,G1期前出现亚二倍体凋亡峰,S期百分率降低,G2期百分率无明显变化.平阳霉素作用后细胞凋亡百分率随药物浓度增加而增高,Caspase 3表达在平阳霉素各浓度组均增强.结论平阳霉素对脐静脉内皮细胞有确切的抑制作用,这种抑制作用主要是通过细胞凋亡实现的,Caspase 3参与了平阳霉素诱导血管内皮细胞凋亡的过程.
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鼻腔鼻窦鳞状细胞癌中细胞质凋亡抑制蛋白2和半胱氨酸蛋白水解酶4的表达
目的通过检测细胞质凋亡抑制蛋白2(cytoplasmic Inhibitor of apoptosis protein 2,c-IAP2)和半胱氨酸蛋白水解酶4(caspase-4)在鼻腔鼻窦鳞状细胞癌(简称鳞癌)组织中蛋白质水平的表达情况,研究其表达的相关性,探讨此2种凋亡相关基因控制蛋白在鼻腔鼻窦鳞癌发生、发展中的作用和机制.方法选取已确诊的41例鼻腔鼻窦鳞癌患者的标本为实验组,10例正常鼻黏膜标本为对照组,以免疫组化法检测caspase-4和c-IAP2在鼻腔鼻窦鳞癌中的表达,光镜下计数.结果①c-IAP2在41例鼻腔鼻窦鳞癌患者中36例阳性表达,阳性率为 87.8%, 其中14例表达(+++),15例(++),7例(+),5例表达缺失(-),与对照组相比差异有显著性(实验组平均秩=29.11,秩和T1=1194.00,对照组平均秩=13.20,秩和T2=132.00,统计量Z=-3.141,双侧渐近概率为0.0017),且c-IAP2的表达与临床分期无关(P>0.05),与病理分期(P<0.01)及临床预后(P<0.01)有相关性;②caspase-4在41例鼻腔鼻窦鳞癌患者中17例表达缺失(-),13例低表达(+),与对照组差异有显著性(实验组平均秩=23.76,秩和T1=974.00,对照组平均秩=35.20,秩和T2=352.00,统计量Z=-2.267,双侧渐近概率为0.0277),且caspase-4的表达与临床分期无关(P>0.05),而与病理分期(P<0.01)及临床预后(P<0.01)有相关性;③caspase-4与c-IAP2的表达具有一致性,两者的表达呈负相关关系.结论在鼻腔鼻窦鳞癌组织中,c-IAP2被激活而caspase-4被抑制,凋亡通路被阻断,导致了肿瘤细胞的不死性,与鼻腔鼻窦鳞状细胞癌的发生发展应有密切关系,并且可能与部分肿瘤的放射治疗和化学治疗失败有关.
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肿瘤坏死因子-α和半胱氨酸蛋白酶-3在子痫前期胎盘的表达
目的 探TNF-α和半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)在子痫前期胎盘的表达.方法 采用免疫组织化学技术检测TNF-α和Caspase-3在子痫前期胎盘的表达,并采用Morphology/BX51系统进行图像分析.结果 TNF-α与Caspase-3在正常孕妇、轻度子痫前期及重度子痫前期患者胎盘组织中的定位和分布基本一致,但表达强度逐渐增高(P＜0.01).阳性细胞为细胞滋养细胞与合体滋养细胞以及蜕膜细胞、血管平滑肌细胞、内皮细胞和绒毛间质细胞等.结论 子痫前期患者TNF-α在胎盘组织的表达升高可能是子痫前期发病机制的重要环节,与外周循环TNF-α的增高和胎盘细胞凋亡的发生有关.
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半胱氨酸蛋白酶L在卵巢癌中的研究进展
卵巢癌的早期发现率低,70%以上的患者诊断时已为进展期,由于广泛转移和耐药,其预后极差.半胱氨酸蛋白酶L(CTSL)是半胱氨酸蛋白酶家族的主要成员之一,可分布于细胞内或分泌到细胞外基质,以细胞内外多种蛋白为底物.CTSL在多种恶性肿瘤组织中表达水平增高,卵巢癌组织和卵巢癌患者血清中CTSL的水平也异常增高.CTSL促进卵巢癌的生长、转移、耐药、血管生成等恶性生物学行为.血清CTSL与其他生物标记联合应用有利于早期诊断卵巢癌,同时实验研究表明以CTSL为靶点的治疗对控制卵巢癌的进展有较好的效果.因此对CTSL在卵巢癌进展中的作用机制进行更深入的探讨有望为卵巢癌的早期诊断和治疗提供新的思路.
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钙蛋白酶10基因多态性与多囊卵巢综合征
多囊卵巢综合征（polycystic ovarian syndrome，PCOS）是女性常见的内分泌疾病，其家族聚集现象提示遗传因素的作用。近年研究认为，胰岛素抵抗（insulin resistance，IR）是PCOS病理生理的中心环节，多数PCOS患者存在IR。钙蛋白酶10（calpain-10，CAPN-10）基因是第1个被定位克隆的与2型糖尿病（type-2 diabetes mellitus，T2DM）有关的基因，该基因的变异与IR的发生有关，并影响T2DM的遗传易感性。因为PCOS与T2DM有共同的IR机制，CAPN-10也成为PCOS的重要候选基因。造成疾病遗传易感性差异的根本原因是基因组序列和修饰上的差异。其中，单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphisms，SNP）引起的变异占90%。目前，SNP数据库（data base of SNP，dbSNP）已列出521个人类CAPN-10 SNP位点。综述CAPN-10与PCOS的研究现况，特别是CAPN-10 SNP与PCOS的研究进展。
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恩度联合放疗对鼻咽癌裸鼠成瘤的抑制作用及机制
目的:观察恩度联合放疗对鼻咽癌裸鼠成瘤的抑制作用及对血管内皮生长因子(VEGF)和生存素SurvivinmRNA表达的影响.方法:建立鼻咽癌裸鼠成瘤模型,成瘤后随机分为对照组、恩度组、放疗组和恩度+放疗联合组(联合组),观察各组移植瘤的生长速度和瘤体大小的变化.4周后处死裸鼠摘取瘤体,电镜观察各组肿瘤凋亡情况,应用实时荧光定量PCR检测各组瘤体组织中的VEGF和Survivin mRNA的表达水平.结果:联合组肿瘤体积增长受到明显抑制,对照组生长迅速,恩度组与放疗组居中.恩度组、放疗组和联合组的VEGF表达水平均低于对照组,联合组低于放疗组,差异均有统计学意义(P＜ 0.05或P＜0.01),放疗组和联合组的Survivin表达水平均低于对照组,联合组低于放疗组,差异均有统计学意义(P＜ 0.05或P＜0.01).成瘤组织中VECF与Survivin的表达呈正相关(r=0.679,P＜0.01).结论:恩度联合放疗能明显抑制鼻咽癌裸鼠移植瘤的生长,这种作用可能与VEGF和Survivin表达下调有关.
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莲心碱促进膀胱癌5637细胞凋亡增强Caspase-7表达及活化
目的：研究莲心碱（Liensinine）对膀胱癌细胞株5637凋亡的影响，初步探讨其作用机制。方法使用CCK-8法及克隆形成实验检测莲心碱对5637细胞增殖的抑制作用；通过流式细胞术AnnexinV-FITC/PI双染法测定莲心碱对5637细胞凋亡的影响；采用Western blot技术分析细胞凋亡相关基因Caspase-7表达状况。结果 CCK-8法及克隆形成实验结果均表明莲心碱对膀胱癌细胞5637增殖有明显的抑制作用，并呈剂量-效应关系。流式细胞术结果提示莲心碱可使膀胱癌5637细胞发生早期凋亡；Western blot检测结果显示莲心碱增强5637细胞Caspase-7表达并促进其活化。结论莲心碱可抑制5637细胞增殖，使其发生早期凋亡，其作用机制可能与促进Caspase-7表达及活化有关。
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细胞焦亡的研究进展
细胞焦亡(pyroptosis)是促炎形式的程序性细胞死亡,并且依赖于半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶(caspases)活性.由caspases通过切割gasermin D(GSDMD)的氨基端和羧基端的连接体调控,后者移位到膜上并穿孔,诱导水分渗透,细胞肿胀并释放炎性因子,继而发生细胞焦亡.细胞焦亡的形态学特征、发生及调控机制等均不同于凋亡、坏死等其他细胞死亡方式,其是机体一种重要的天然免疫反应,在抗击感染以及疾病中均有重要作用.通过对细胞焦亡的更深入研究,可以认知其在相关疾病中的作用,为临床提供新的治疗思路.
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造血细胞磷酸酶与半胱氨酸蛋白酶基因在急性白血病患者中表达水平的研究
vs 20.0%、55.8%vs 0(均P＜0.01);caspase-1、3与SHP-1表达呈正相关(r=0.372、0.437,P＜0.05或＜0.01).结论 SHP-1可能是一个潜在的抑癌基因,它可能是通过激活下游的凋亡基因caspase1、3发挥作用;caspase-1、3与SHP-1基因表达呈正相关且与患者的CR率有关,表明它们均参与了急性白血病的转归,可同时作为判断急性白血病患者的疗效和预后指标.
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异丙酚对大鼠局灶性脑缺血再灌注时NF-κB活化和Bcl-2、Caspase-3基因表达的影响
目的观察异丙酚对大鼠局灶性脑缺血再灌注时NF-κB的活化和Bcl-2、Caspase-3基因表达的影响,并探讨其脑保护的机制.方法90只雄性Wistar大鼠,采用大脑中动脉线栓法建立局灶性脑缺血再灌注模型,随机将大鼠分为假手术组、缺血再灌注组(I/R)和异丙酚组(缺血前10 min腹腔注射异丙酚100 mg·kg-1).各组根据再灌注时间不同又分为缺血2 h再灌注2、3、6、12、24、72 h亚组,每亚组各5只大鼠.于再灌注2、6、12、24 h,采用免疫组织化学染色法分析NF-κB的移位,蛋白质印迹法检测NF-κB的表达量.于再灌注3、6、24、72 h,采用原位杂交法法检测脑组织Bcl-2 mRNA、Caspase-3mRNA的表达.于再灌注24 h作神经功能缺陷评分及苏木精-伊红(HE)染色观察缺血皮层组织形态学变化.结果与假手术组比较,I/R组缺血侧大脑皮层NF-κB于再灌注2～24 h明显从细胞浆移位于细胞核内,NF-κB和Bcl-2 mRNA、Caspase-3 mRNA的表达量增加(P＜0.01),大鼠神经功能缺陷评分升高(P＜0.01),组织形态学观察可见皮层水肿、淤血,神经元变性坏死.与I/R组比较,异丙酚组NF-κB从细胞浆向细胞核的移位被抑制,NF-κB和Caspase-3 mRNA的表达量减少(P＜0.05),Bcl-2 mRNA的表达量增加(P＜0.05),神经功能缺陷评分降低(P＜0.05),缺血大脑皮层组织形态学损伤减轻.结论异丙酚的脑保护作用可能与其抑制NF-κB的活化,上调Bcl-2基因和下调Caspase-3基因的表达,从而抑制神经组织细胞凋亡有关.
