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LMP2和PPM1A在妊娠滋养细胞疾病组织中的表达及其意义
目的 榆测低分子质量多肽2(LMP2)和蛋白磷酸酶1A(PPM1A)在妊娠滋养细胞疾病组织中的表达,并探讨两者在预测葡萄胎恶变中的价值.方法 采用免疫组化EnVision二步法检测196例完全性葡萄胎(其中28例恶变)组织中LMP2和PPM1A蛋白的表达,选择妊娠滋养细胞肿瘤12例(侵蚀性葡萄胎7例、绒毛膜癌5例)和正常妊娠绒毛20例作为对照,回顾性分析其临床病理资料.结果 LMP2和PPM1A存细胞滋养细胞、合体滋养细胞和绒毛外滋养细胞中均有表达.LMP2在葡萄胎恶变者中的表达水平明显高于正常绒毛和葡萄胎良性转归者,分别为(6.79±2.38)、(3.10±1.65)、(5.26±2.63)分,分别比较,差异均有统计学意义(P均<0.01);而与妊娠滋养细胞肿瘤者[(6.42±2.68)分]比较,差异无统计学意义(P=0.113).PPM1A在正常绒毛、葡萄胎(良性转归、恶变)和妊娠滋养细胞肿瘤组织中的表达水平依次下调,分别为(6.30±2.98)、(4.93±2.50)、(4.43±2.04)、(3.33±2.06)分,分别比较,差异均有统汁学意义(P<0.01),且葡萄胎恶变者的表达低于良性转归者(P=0.001).LMP2表达与卵巢黄素化囊肿大小有关,PPM1A表达与子宫大小有关(P<0.05).LMP2与PPM1A的表达水平之间小存在相关性(P>0.05).结论 LMP2高表达和PPM1A低表达可能在滋养细胞的运动、侵袭及葡萄胎的恶性转化中发挥着重要作用.通过检测葡萄胎首次清官术组织中LMP2和PPM1A的表达,对判断葡萄胎的预后有一定的参考意义.
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轻度认知障碍及阿尔茨海默病患者外周血淋巴细胞中蛋白磷酸酯酶-2A的改变
目的 探讨轻度认知功能障碍(MCI)及阿尔茨海默病(AD)患者外周血淋巴细胞蛋白磷酸酯酶-2A(PP-2A)的变化.方法 用放射性配体结合试验检测11名健康对照者、11例MCI患者及11例AD患者外周血淋巴细胞PP-2A的活性,并用Western bolt检测PP-2A蛋白的表达.结果 MCI组外周血淋巴细胞PP-2A活性(0.71±0.12)及蛋白表达(0.80±0.05)与健康对照组[分别为(1.01±0.09)和(0.96±0.07)]相比明显降低(均P＜0.01);AD组PP-2A活性(0.64±0.11)及蛋白表达(0.76±0.06)亦明显降低,与对照组相比差异有统计学意义(均P＜0.01);AD组PP-2A活性及蛋白表达比MCI组有降低的趋势,但差异无统计学意义.结论 MCI及AD患者外周血淋巴细胞PP-2A的活性及表达降低,在MCI的诊断中可能有参考价值,同时亦可能对AD的诊断有一定的潜在的意义.
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蛋白磷酸酶2A癌性抑制因子在喉鳞状细胞癌中的表达及临床意义
目的 研究蛋白磷酸酶2A癌性抑制因子(cancerous inhibitor of protein phosphatase 2A,CIP2A)在喉鳞状细胞癌(简称喉鳞癌)中的表达及其与喉鳞癌临床病理特征的关系.方法 应用实时荧光定量PCR及免疫组化方法检测40例喉鳞癌组织与25例癌旁组织中CIP2A的表达,并分析其与临床病理参数的关系.结果 与癌旁组织相比,CIP2A mRNA在喉鳞癌组织的表达量增加(Z=-3.182,P＜0.05).CIP2A蛋白阳性表达定位于细胞膜与细胞质,癌组织与癌旁组织的阳性表达率分别为70.0％ (28/40)和40.0％ (10/25),差异具有统计学意义(x2=5.70,P＜0.05)；CIP2A mRNA的表达水平和蛋白阳性表达率在Ⅲ期和Ⅳ期喉癌组明显高于Ⅰ期和Ⅱ期病例组(Z=-2.610,x2=5.560,P＜ 0.05),有淋巴结转移组明显高于无转移组(Z=-3.346,x2=3.815,P＜ 0.05).结论 CIP2A与喉鳞癌的发生及浸润转移密切相关,有望成为喉鳞癌治疗的靶点.
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丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶1/2A在缺氧预处理诱导人脐静脉内皮细胞耐受中的作用
目的 研究丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶1/2A (PP1/2A)在调节人脐静脉内皮细胞(HUVEC)对缺氧耐受相关信号转导中的作用.方法 采用缺氧预处理诱导HUVEC对缺氧损伤的耐受.采用细胞存活率、乳酸脱氢酶(LDH)释放及总抗氧化能力(T-AOC)评价HUVEC的耐受性.免疫细胞化学联合蛋白质印迹法检测核因子E2相关因子2(Nrf2)的亚细胞定位.蛋白质印迹法检测应激蛋白血红素氧合酶1(HO-1)的表达. 结果 缺氧90 min导致HUVEC存活率及T-AOC 降低,LDH释放增加.缺氧预处理(缺氧10 min 后4, 8及24 h)可提高HUVEC对随后缺氧90 min的耐受,细胞存活率及T-AOC较缺氧组显著提高,LDH 释出显著降低,并诱导Nrf2由胞浆向胞核移位,上调其下游信号分子HO-1的表达.缺氧预处理前用PP1/2A特异性抑制剂冈田酸(40 nmol·L-1)孵育HUVEC 10 min可部分抑制缺氧预处理诱导的Nrf2向核移位、HO-1表达及细胞耐受性.结论 PP1/2A至少部分参与缺氧预处理诱导HUVEC对缺氧损伤的耐受,其机制可能与调节Nrf2向核移位及HO-1表达有关.
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蛋白丝/苏氨酸磷酸酶1和2A抑制药对大鼠三叉神经元电压依赖性钠通道的影响
目的通过研究蛋白丝/苏氨酸磷酸酶1和2A特异性抑制药冈田酸对大鼠三叉神经元电压依赖性钠电流的影响,探讨磷酸酶在细胞信号转导中的作用.方法在成年大鼠三叉神经元上进行全细胞膜片钳记录.结果1 μmol*L-1冈田酸显著抑制总钠电流(INa-T),仅轻微抑制毒素不敏感型钠电流(INa-TTX-R),其抑制率分别为(20±13)%(n=9, P<0.05)和(4±3)%(n=6, P<0.05).冈田酸对INa-T的激活曲线产生明显的超极化位移,半激活电压从给药前的-(13±8)mV升至给药后的-(16±7)mV(P<0.05), 但是对INa-TTX-R的激活曲线没有影响.结论①蛋白丝/苏氨酸磷酸酶参与了大鼠三叉神经元电压依赖性钠通道的调节.②大鼠三叉神经元存在多种电压依赖性钠通道,它们对冈田酸具有不同的敏感性.
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过氧化氢对NIH/3T3细胞蛋白磷酸酶2A催化亚基C甲基化的影响
目的：探讨过氧化氢(H2 O2)对 NlH/3T3细胞中蛋白磷酸酶2A 催化亚基 C(PP2Ac)甲基化的影响。方法① H2 O20,0.1,1,5,10和25 mmol??L-1刺激 NlH/3T3细胞1 h,刃天青还原率检测细胞活性；② Western 蛋白印迹法检测 H2 O20,0.1,1和5 mmol??L-1作用1 h 后细胞内去甲基 PP2Ac 的表达；③分别用羧基端甲基酯酶(PME-1)抑制剂 AMZ300,0.1,0.5,1.0,5.0和10.0μmol??L-1和抗氧化剂 N-乙酰半胱氨酸(NAC)0,0.5,1和5 mmol??L-1预处理细胞30 min,再用 H2 O21 mmol??L-1作用细胞1 h,Western 蛋白印迹法检测细胞内去甲基 PP2Ac 的表达；④免疫荧光实验观察 NlH/3T3细胞 H2 O21 mmol??L-1处理1 h、AMZ3010.0μmol??L-1或 NAC 1 mmol??L-1分别预处理30 min 后再加 H2 O21 mmol??L-1处理1 h 细胞内去甲基 PP2Ac 的表达。结果①刃天青检测实验结果显示,H2 O2对细胞增殖具有显著的抑制作用,浓度≥0.1 mmol??L-1细胞活性显著降低(P<0.01)；② Western 蛋白印迹检测结果显示,H2 O2可致 NlH/3T3细胞内去甲基 PP2Ac 蛋白表达升高,H2 O20.1,1和5 mmol??L-1组与空白对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)；③ Western 蛋白印迹结果显示,AMZ30与 NAC 二者均可拮抗 H2 O2对细胞内 PP2Ac 去甲基的作用,与H2 O21 mmol??L-1组相比,加入 AMZ305.0和10.0μmol??L-1或 NAC 1和5 mmol??L-1细胞内去甲基 PP2Ac含量明显降低(P<0.01)；④免疫荧光实验结果显示,加入 H2 O21 mmol??L-1刺激1 h 后,细胞内去甲基PP2Ac 的表达要高于正常细胞组,而用 AMZ3010.0μmol??L-1与 NAC 1 mmol??L-1干预后,去甲基 PP2Ac表达降低。结论 H2 O2可诱导 NlH/3T3细胞内 PP2Ac 去甲基,而 PME-1抑制剂 AMZ30和抗氧化剂NAC 均能拮抗 H2 O2诱导的 PP2Ac 去甲基作用。
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二苯乙烯苷对慢性脑缺血大鼠学习记忆的影响
目的 观察何首乌有效成分二苯乙烯苷(TSG)对慢性脑缺血大鼠学习记忆能力的影响,并探讨其可能机制.方法 雄性SD大鼠双侧颈总动脉永久性结扎制备慢性脑缺血致痴呆模型.术前2周起,分别给TSG 30,60及120 mg·kg-1·d-1, ig,连续11周.术后8周时,分别用Morris水迷宫实验和避暗实验检测大鼠的空间学习记忆能力和被动回避学习记忆能力.术后9周时,采用生化方法检测海马乙酰胆碱酯酶(AChE)活性,免疫组化方法检测海马蛋白磷酸酶2A(PP-2A) 和微管相关蛋白2(MAP-2)的表达.结果 慢性脑缺血模型组大鼠空间和被动回避学习记忆能力明显降低,海马AChE活性显著升高, PP-2A和MAP-2表达明显减少.TSG给药10周可显著改善慢性脑缺血引起的学习记忆能力降低;给药11周明显抑制海马AChE活性增高,并增加PP-2A和MAP-2的表达.结论 TSG可改善慢性脑缺血大鼠的学习记忆能力,其机制可能与抑制海马AChE活性,增加海马PP-2A和MAP-2的表达有关.
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冈田酸对培养的大鼠三叉神经元电压门控性钾和钙通道的调节
目的 通过研究冈田酸对大鼠三叉神经元电压门控性钾、钙电流的影响,探讨磷酸酯酶在细胞信号转导中的调节作用.方法 采用全细胞膜片钳方法.结果 冈田酸1 μmol·L-1对瞬时外向钾电流(IA)的抑制率为28.6%,对延迟整流钾电流(IK)和钙电流(Ica)的增加率分别为22.7%和20.0%.冈田酸1 μmol·L-1使IA和IK的激活曲线以及IA的失活曲线发生超级化位移,对Ica激活和失活曲线的影响没有统计学意义.结论 ①蛋白丝/苏氨酸磷酸酯酶1和2A可能参与了大鼠三叉神经节神经元电压门控性钾和钙通道的调节.②电压门控性钾和钙通道对蛋白丝/苏氨酸磷酸酯酶1和2A的去磷酸化反应表现出不同的依赖性.
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p38MAPK与ERK1/2的协同效应及对成骨细胞分化的调控
目的探讨骨髓间质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)向成骨细胞分化过程中p38MAPK与ERK1/2的协同效应及其机制。方法 以成骨细胞分化添加剂诱导小鼠BMSCs向成骨细胞分化，测定碱性磷酸酶活性和钙沉积量。检测磷酸化p38MAPK和磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)的表达水平评估通路的激活状况。以SB203580或PD98059阻断p38MAPK或ERK1/2通路，观察对成骨细胞分化的影响。以SB203580或亚砷酸钠阻断或激活p38MAPK通路，观察p-ERK1/2的变化。以冈田酸抑制蛋白磷酸酯酶2A(protein phosphatases type 2A，PP2A)活性，观察p-ERK1/2的变化及对成骨细胞分化的影响。通过免疫共沉淀实验观察PP2A和ERK1/2间的结合及SB203580对结合的影响。结果成骨细胞分化添加剂诱导BMSCs向成骨细胞分化的过程伴有ERK1/2和p38MAPK通路的激活，SB203580剂量依赖性抑制成骨细胞分化，PD98059剂量依赖性增强成骨细胞分化。SB203580使p-ERK1/2表达增加，亚砷酸钠减弱其表达。冈田酸使p-ERK1/2表达增加，并使成骨细胞分化受到抑制。PP2A可直接与ERK1/2结合，SB203580使PP2A与ERK1/2的结合减弱。结论 p38MAPK可通过PP2A与ERKi/2产生协同效应，并调节BMSCs向成骨细胞分化。
关键词： 细胞外信号调节MAP激酶类 成骨细胞 细胞分化 磷蛋白磷酸酶 -
活性氧簇及抗氧化剂对钙调神经磷酸酶作用的研究
目的:研究活性氧簇(ROS)及抗氧化剂对钙调神经磷酸酶的作用.方法:测定并比较对照黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶ROS生成系统作用下及与超氧化物岐化酶(SOD)、过氧化氢酶、甘露醇或二巯基苏糖醇(DTT)共同作用下钙调神经磷酸酶的活性.结果:黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶系统产生的ROS使钙调神经磷酸酶活性下降33.1%.SOD、过氧化氢酶、DTT可显著减少ROS对钙调神经磷酸酶活性的抑制.结论:钙调神经磷酸酶受氧化还原作用调节.
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钙调神经磷酸酶在心肌缺血再灌注致凋亡中的作用
钙调神经磷酸酶(CalcineuTin,CaN)是迄今发现的惟一受Ca2+/钙调素(CaM)调节的丝/苏氨酸(Ser/Thr)蛋白磷酸酶,在分类上属于磷蛋白磷酸酶-2B(PP-2B).20世纪70,80年代首先在猪脑中发现并纯化成功,南于它能和钙调蛋白(CaM)结合且在动物神经元中大量存在,Klee[1]将其命名为calcinurin,汉泽为钙调神经磷酸酶.CaN在细胞信号传递过程中直接受ca2+的调节,起去磷酸化作用,参与多种细胞功能调节.
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螺内脂抑制醛固酮诱导大鼠心肌细胞中钙调神经磷酸酶的表达
目的:在引起心肌细胞肥大的刺激因素醛固酮作用下,应用醛固酮受体拮抗剂螺内脂进行共同培养,观察培养的原代大鼠心肌细胞钙调神经磷酸酶蛋白及mRNA表达水平.方法:实验于2004-07/12在基础医学研究所组织工程研究中心实验室进行.取出生1～3 d的Wistar乳鼠,进行心肌细胞培养.将培养的乳鼠心肌细胞分为4组:①空白对照组:不干预.②醛固酮组:予以醛固酮至浓度为1 nmol/L.③环孢素A组:予以醛固酮至1 nmol/L,同时给予环孢酶素A至5 mmol/L.④螺内脂组:予以醛固酮至1 nmol/L,同时给予螺内脂至3 μmol/L.通过免疫组织化学染色观察钙调神经磷酸酶Aβ蛋白表达,反转录-聚合酶链反应方法检测钙调神经磷酸酶蛋白AβmRNA的表达.结果:①钙调神经磷酸酶Aβ蛋白表达:免疫组织化学染色结果发现醛固酮组心肌细胞胞浆中阳性颗粒(棕色)多,表达增高,用环孢素A及螺内酯干预的大鼠心肌胞浆中阳性颗粒显著少于醛固酮组,与空白对照组接近.②钙调神经磷酸酶AβmRNA表达:醛固酮组心肌细胞表达显著高于空白对照组(P＜0.05),环孢素A及螺内酯组显著低于醛固酮组,与空白对照组无明显差异.结论:在醛固酮诱导下钙调神经磷酸酶蛋白及mRNA表达水平均升高,螺内酯通过拮抗醛固酮与受体结合可减少钙调神经磷酸酶蛋白及mRNA表达,其效果与钙调神经磷酸酶特异性抑制剂环孢素A相似.
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PPP4R1基因与肿瘤相关性的生物信息学预测及在胃癌组织中的初步验证
目的:应用生物信息学分析方法预测基因PPP4R1与胃癌发生和转移的关系,并采用RT-PCR进行验证.方法:利用基因功能模块原理,通过IntNetDB找到基因PPP4R1的伙伴基因,应用CFinder工具找其社团基因,Chilibot在线工具分析社团基因与肿瘤的关系,继而推测PPP4R1与胃癌的联系.采用RT-PCR法检测18对分别来自同一患者的转移和原位肿瘤组织、12对分别来自同一患者的原位肿瘤和癌旁正常组织PPP4R1基因表达,对上述生物信息学分析的结果进行验证.结果:生物学分析结果表明,PPP4R1的社团基因有CTDSP2、PPP2R5E、CTDP1、CTDSP1、FLJ22405、MTMR4、PPP1CA、PPP1CB、PPP1CC、PPP2R2A、PPP2R5A、PPP2R5C、PPP3CC,其中与癌相关的基因有9个,与癌及转移相关的基因有2个.PCR验证结果表明:18例原位胃癌组织中有15例基因PPP4R1表达高于其对应的转移组织(P<0.01);12例正常组织有9例高于其对应的癌组织(P<0.01).结论:基因PPP4R1可能与胃癌的发生和转移相关;生物信息学可能成为研究基因功能快速而有效的新方法.
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钙通道阻滞剂对缺氧大鼠右心室心肌CnAβmRNA及血浆NO、iNOS、ET-1水平的影响
目的 通过研究钙通道阻滞剂对缺氧大鼠右心室心肌钙调神经磷酸酶Aβ (CnAβ)mRNA及血浆NO、一氧化氮合酶(iNOS)、内皮素-1(ET-1)水平的影响,进一步探讨钙通道阻滞剂防治慢性缺氧致右心室肥大的机制.方法 实验大鼠分为3组, 采用配伍组设计,每组各10只,即正常组、缺氧组、苯磺酸氨氯地平(Norvasc)处理组(灌喂Norvasc 30 mg·kg-1·d-1),后2组置于氧浓度为(10.0±0.5)%的大型玻璃舱中,持续缺氧21 d.第21天处死大鼠,采血测NO、iNOS、ET-1的水平,分离心脏称质量,并留右心室测CnAβmRNA的表达.结果 ⑴缺氧组右室与左室加室间隔的重量比、右室重量与体重之比均明显高于正常组和处理组(P＜0.01).⑵缺氧组右心室心肌CnAβmRNA的表达明显高于正常组和处理组(P＜0.01).⑶缺氧组血浆NO、iNOS水平明显低于正常组和处理组(P＜0.01),ET-1水平则明显高于正常组和处理组(P＜0.01).结论 钙通道阻滞剂-Norvasc能够抑制慢性缺氧右心室肥大,也可能与调节血浆NO、iNOS、ET-1水平,改善肺动脉压力,下调CnAβmRNA的表达有关.
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PP2A在慢性粒细胞白血病急变中作用的研究进展
蛋白磷酸酶2A(PP2A)是真核生物体内Ser/Thr(丝氨酸/苏氨酸)蛋白磷酸酶的一种,能拮抗绝大多数Ser/Thr蛋白激酶的活性.由于它可以反向调节蛋白激酶所激活的信号,能够抑制细胞非限制性增生,目前被认为是一种肿瘤抑制因子.PP2A活性的抑制与慢性粒细胞白血病(CML)发生急变(BC)相关,并且PP2A与CML中主要致病分子BCR/ABL存在相互作用.
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蛋白磷酸酶2A催化亚基α显性负性突变体表达载体对肝癌细胞生长的影响
目的 构建肝癌组织特异性启动子驱动的蛋白磷酸酶2A催化亚基α显性负性突变体(DN-PP2Acα)表达载体,研究其对肝癌细胞生长的影响.方法 将甲胎蛋白(AFP)基因的增强子和磷酸甘油酸激酶(pgk)基因的启动子组合形成的肝癌组织特异性AFpg启动子.采用定点突变将野生型蛋白磷酸酶2A催化亚基α(PP2Acα)突变为DN-PP2Ac α.将AFpg启动子和DN-PP2Ac α编码序列构建成AFpg启动子调控的DN-PP2Ac α表达载体pGL3-Basic-AFpg-PP2Acα.荧光素酶报告基因实验检测AFpg启动子的转录活性.质粒pcDNA3.1(+)、pGL3-Basic、pcDNA3.1 (+)-DN-PP2Acα、pGL3-Basic-AFpg、pGL3-Basic-AFpg-PP2Ac α分别转染L02、SK-Hep-1、HepG2和Hep3B细胞,Western blot检测PP2Ac蛋白表达水平,四甲基偶氮唑盐比色法检测细胞生长情况.成组t检验分析不同处理组间的细胞活力差异.结果 L02、SK-Hep-1、HepG2和Hep3B细胞中,AFpg启动子相对荧光素酶活性分别为3.61±1.07、3.46±0.66、98.70±18.60、88.70±19.53,AFpg启动子在表达AFP的细胞中具有高转录活性.pGL3-BaSic-AFpg-PP2Acα可特异性地使DN-PP2Ac α表达于AFP阳性肝癌细胞HepG2和Hep3B,并抑制其生长,转染72 h后,HepG2细胞活力下降42.65％±3.99％,Hep3B细胞活力下降39.87％±3.91％,与0h时比较,差异均有统计学意义(t值分别为13.0563和12.9920,P值均＜0.01).pGL3-BaSic-AFpg-PP2Ac α对AFP阴性细胞的生长无明显影响.结论 AFpg启动子调控的DN-PP2Acα表达载体特异性地抑制AFP阳性肝癌细胞的生长,可用于肝癌组织特异性基因治疗.
