环孢菌素A不同制剂在稳定性和刺激性方面的比较研究

环孢菌素A作为一种含11个氨基酸的亲脂性环状多肽结构,是一种真菌的活性代谢产物,具有抑制B淋巴细胞和T淋巴细胞增殖的作用[1].环孢菌素A是高效的免疫抑制剂,在临床上被广泛应用于自身免疫系统疾病、骨髓移植以及器官移植患者的治疗,是目前为止,国际上认可的唯一可以治疗干眼症的处方药[2].

环孢菌素和糖皮质激素联合治疗再生障碍性贫血30例的疗效观察

目的：分析环孢菌素和糖皮质激素联合治疗再生障碍性贫血的疗效。方法：选取2013年8月～2014年8月本院收治的再生障碍性贫血患者30例为研究对象，根据治疗方式不同分为观察组及对照组各15例。对照组患者接受单纯环孢菌素治疗，观察组患者接受环孢菌素和糖皮质激素联合治疗，对比两组患者的Th1及 Th2水平、造血调控因子水平差异。结果：观察组 Th1、Th2、Th1／Th2水平均低于对照组（P ＜0.05）；观察组血清 TNF －α及 IFN －γ水平均低于对照组（P ＜0.05）。结论：环孢菌素联合糖皮质激素有助于优化机体免疫状态及造血调控因子水平，具有积极的临床意义。

再生障碍性贫血并全身多发骨关节结核一例

患者,女,65岁.因“右肩部肿痛5个月,加重3周”于2013年7月4日入住南方医院.5个月前右肩部肿痛并活动受限,于当地诊所按照肩周炎进行治疗,无好转.3周前局部肿痛加重,午后发热,高体温可达39℃,多饮水、休息后夜间可自行降温,晨起体温正常,夜间盗汗明显,无咳嗽、咯痰.于外院给予青霉素类抗生素治疗,体温无下降,近5个月体质量下降约10 kg.患者2年前曾于中山医科大学附属第一医院行髂骨穿刺后确诊为再生障碍性贫血(aplastic anemia,AA),后就诊于我院,再次给予髂骨穿刺活检,诊断为重型再生障碍性贫血,给予环孢菌素A(cyclosporin A,CsA)软胶囊(175 mg/次,2次/d)口服.患者无结核病病史,但患者的妹妹曾患肺结核.

柴苓汤可增强环孢菌素A对给予氨基核苷嘌呤霉素大鼠肾脏的保护作用

银屑颗粒联合雷公藤内酯软膏治疗寻常型银屑病80例疗效观察

银屑病为临床较为常见的慢性炎症性皮肤疾病，以鳞屑、红斑为主要表现，发病部位一般以头皮及四肢较为常见[1]。临床上银屑病大多以寻常型银屑病为主，多发于青壮年，病程长，易反复发作，严重影响患者的身体健康和生活质量[2]。目前，治疗用药以甲氨蝶呤、阿维 A、环孢菌素等免疫抑制剂为主，虽有一定疗效，但易产生不良反应[3]。本文采用银屑颗粒联合雷公藤内酯软膏治疗寻常型银屑病，取得满意疗效，现报告如下。

环孢菌素A加中药治疗骨髓增生异常综合征

骨髓增生异常综合征(MDS)是造血系统异质性克隆增殖性疾病,治疗有效率低,死亡率较高,是血液系统疾病治疗的重要研究课题.在MDS发病机理的研究中发现,存在细胞免疫和体液免疫功能异常以及造血细胞显示过度凋亡以致产生代偿性无效造血.

中医分型论治联合环孢菌素治疗骨髓增生异常综合征疗效初探

目的 观察中医分型论治联合环孢菌素治疗骨髓增生异常综合征的临床疗效及中医不同证型与西医分型在疗效方面的相关性.方法 58例骨髓增生异常综合征按FAB分型为难治性贫血和难治性贫血伴原始细胞增多两型,分别随机入组分成环孢菌素治疗组与全反式维甲酸对照组,两组均加用中药辨证分型论治.观察不同组别(西医分型及中医分型)间外周血象等的变化情况以观察及比较疗效.结果 治疗组的总有效率(73%)、缓解率及部分缓解率(33%)均高于对照组(39%,0);治疗组治疗后在血红蛋白、白细胞、血小板3个方面的改善均较治疗前差异有显著性(P＜0.05);对照组治疗后较治疗前仅血红蛋白有所提高(P＜0.05);中医气血两虚型总有效率及显效率明显高于其他类型.结论 中医分型论治联合环孢菌素治疗骨髓增生异常综合征取得了较好疗效.中医分型与西医分型在疗效等方面具有相关性,说明中医分型治疗的必要性.

中药生血宁加环孢菌素A治疗慢性再生障碍性贫血的临床观察

为探讨进一步提高慢性再生障碍性贫血(CAA)疗效的方法,采用同期随机对照方法,将45例患者分为两组.对照组19例予以康力龙4～6mg/d,分3次口服;治疗组26例予以环孢菌素A(商品名田可,华北制药厂产品)每天3～5mg/kg,分3次口服,生血宁(为中药蚕砂提取物,武汉联合药业有限责任公司生产)每次2粒,1日3次口服,两组疗程均在3个月以上,长20个月.

慢性髓系白血病患者同种异基因外周血干细胞移植后复发时停用CsA逆转嵌合体2例

本研究探讨慢性髓系白血病患者移植后复发时停用环孢菌素A(CsA)对逆转供者型嵌合体的作用.对2例CML进行了同种异基因外周血干细胞移植术(allo-PBSCT),术后出现嵌合体下降,融合基因和(或)染色体阳性,疾病复发,治疗中停用CsA,密切观察体温、皮疹、血象、肝功能及嵌舍体.结果表明:2例患者均出现急性GVHD表现,复查嵌合体表明2例均回复到100%供者型嵌合体,融合基因和或染色体转阴.结论:患者在移植后复发,通过停用CsA诱发GVHD以发挥GVL作用,使供者嵌合体逆转,对复发的治疗有一定作用.

两种剂量r-ATG联合CsA治疗儿童重型再生障碍性贫血的疗效比较

本研究旨在比较两组不同剂量的兔源抗胸腺球蛋白(r-ATG)联合环孢菌素A(CsA)治疗儿童重型再生障碍性贫血(severe aplastic anemia,SAA)的疗效和安全性.回顾性分析了我院2005年1月至2013年7月接受r-ATG联合CsA免疫抑制治疗(immunosuppressive therapy,IST)的儿童SAA 95例,其中55例的r-ATG治疗剂量为2.5 mg/(kg·d),连用5d(Ⅰ组),另40例r-ATG治疗剂量为3.5 mg/(kg·d),连用5d(Ⅱ组).95例患儿中男43例,女52例,年龄1-16岁.两组患儿一般临床资料具有可比性.治疗后第3、6、9、12个月评估并比较两组间治疗有效率,观察早期不良反应、早期死亡、远期克隆性疾病及复发情况.结果表明,治疗后第3、6个月,Ⅱ组的治疗反应率稍高于Ⅰ组(50％ vs32.1％,P=0.08;65％ vs 45.3％,P=0.059);第9、12个月,Ⅱ组和Ⅰ组的治疗反应率无明显差异(70.0％ vs71.1％,P=0.904;82.5％ vs 80.8％,P=0.832);第12个月,Ⅱ组完全反应率稍高于Ⅰ组(40.0％ vs23.1％,P=0.08);第3、6、9个月两组的完全反应率差异无统计学意义;两组血清病、近期感染及早期死亡发生率差异无统计学意义,2年总体生存率差异无统计学意义.对Ⅰ组39例已随访至2年以上,有3例复发,1例确诊为急性单核细胞白血病(M5),1例死亡.对Ⅱ组15例随访至2年以上,未出现复发、死亡及多克隆性疾病病例.结论:-ATG联合CsA是治疗儿童SAA的有效、安全治疗方法.r-ATG 3.5 mg(kg·d)方案6个月内疗效优于2.5 mg/(kg·d)方案,但两组终疗效相当,且近期不良反应和早期死亡率未增加.对远期并发症的发生及长期生存率需进一步探讨比较,以便为临床选择合适的r-ATG剂量提供依据.

r-ATG联合CsA治疗儿童再生障碍性贫血的疗效分析

本研究探讨兔源抗胸腺细胞球蛋白(r-ATG)联合环孢菌素(CsA)治疗儿童再生障碍性贫血(AA)的疗效并对疗效相关性因素进行分析.以应用r-ATG(剂量为3.5 mg/(kg·d)×5d]联合CsA治疗的25例AA患儿为对象,采用直接免疫荧光法和流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群及CD4+/CD8+比值和外周血粒细胞及红细胞膜表面CD55、CD59的表达情况,观察免疫抑制治疗(IST)起效时间、有效率、不良反应及感染发生情况,IST有效组和无效组T淋巴细胞亚群分布情况,并比较及分析与疗效相关的因素.结果表明,25例中对治疗有反应者21例,总反应率为84.0％,起效时间为3-6个月,平均为4个月；r-ATG联合CsA治疗后第3、6、9、12月末的有效率分别为56.0％、72.0％、80.0％和84.0％.年龄≥5岁、病程＜6个月、CD4+/CD8+比例超高或比例倒置和IST治疗后30 d中性粒细胞绝对值≥1.5×109/L的患儿,其IST治疗有效率高于年龄＜5岁、病程≥6个月、CD4+/CD8+比例正常和IST治疗后30 d中性粒细胞绝对值＜1.5×109/L者(94.4％ vs 57.1％;90.4％ vs 50.0％;94.1％ vs 62.5％；94.1％ vs 62.5％),两组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).CD55、CD59表达降低患儿的IST治疗有效率较高,但与CD55、CD59表达正常相比无明显差别(P＞0.05).结论:r-ATG[剂量为3.5 mg/(kg·d) ×5 d]联合CsA治疗是治疗儿童AA的一种安全有效的方法,对年龄≥5岁、病程＜6个月、CD4+/CD8+比例异常的AA患儿IST治疗疗效较好,对IST治疗后30 d中性粒细胞绝对值≥1.5×109/L的AA患儿疗效亦较佳,年龄、病程长短和CD4+/CD8+比值可作为预测AA患儿IST疗效的指标.

环孢素A促进HepG2.2.15细胞中乙型肝炎病毒核心蛋白入核的研究

目的 观察磷酸脂酶抑制剂环孢素A(CSA)对HBcAg表达和定位的影响,了解HBV生活的周期.方法 以30 μg/ml的CSA处理HepG2.2.15细胞2 d或4 d;共聚集显微镜观察细胞内HBcAg和HBsAg亚细胞定位;TUNEL方法检测细胞凋亡.结果 对照组HepG2.2.15细胞中HBcAg主要定位于胞质.CSA处理2 d后可使胞质中HBcAg和HBsAg水平下降,细胞核内HBcAg水平升高,可见约5%细胞发生凋亡.CSA处理4 d后细胞核内HBcAg水平进一步提高,约25%细胞核内表达强度明显高于胞质,并约有30%细胞发生凋亡.结论 CSA可促使HepG2.2.15细胞内HBcAg进入细胞核.HBcAg的核内表达定位增强可能与蛋白磷酸化水平增高,及细胞衰老或者凋亡有关.

小剂量环孢素A联合小剂量激素治疗原发性肾病综合征疗效观察

目的观察小剂量环孢素A（ CsA）联合小剂量强的松在原发性肾病综合征治疗中的疗效、不良反应及其与足量强的松的比较。方法67例原发性肾病综合征均经肾活检病理检查证实，前瞻性非随机观察18个月以上。治疗组（ n＝41）：小剂量CsA联合小剂量强的松，其中难治性肾病综合征8例，强的松0.5 mg· kg -1· d-1＋CsA 2.5 mg· kg-1· d-1，强的松大剂量30 mg/d，连服2～3个月后每隔2～4周强的松、CsA在原剂量基础上交替递减10％或持续应用原剂量。对照组（ n＝26）：足量强的松组，强的松1.0 mg · kg-1· d-1，强的松大剂量60 mg/d，连服2～3个月后每隔2～4周在原剂量基础上递减10％。其中10例联合环磷酰胺（ CTX）治疗，CTX 0.8 g·次-1·月-1，加入生理盐水500 ml静脉滴注，或口服0.1 g/d，CTX总量6.0～8.0 g。观察两组治疗前、治疗3、6、9、12、18个月24 h尿蛋白定量（ MTP）、肝功能（ TP、ALB、ALT）、肾功能（ Cr、UA）、血糖、血脂（ TC、LDL）及不良反应。结果两组患者治疗后MTP及ALB水平较治疗前均明显好转（ P＜0.01），治疗18个月后治疗组和对照组总有效率（显效＋有效）分别为80.5％和84.6％，两组间无统计学差异（ P＞0.05）。治疗组12个月时完全缓解率有升高趋势（ P＜0.01），但18个月后又降至正常，28例显效患者18个月后停CsA随访3年中有5例（17.9％）复发，复发后再次治疗仍然有效。治疗组不良反应：齿龈增生1例，血压升高4例，血尿酸升高6例，停药后或用药均可控制。结论与足量强的松治疗原发性肾病综合征比较，小剂量CsA联合小剂量强的松具有等同疗效，又可减少CsA及激素毒副作用，为治疗原发性肾病综合征提供了一个比较经济有效安全的方法。

基质效应对荧光偏振免疫测定技术和酶放大免疫测定方法检测环孢素A结果的影响

目的 通过荧光偏振免疫测定(fluorescence polarization immunoassay,FPIA)和酶放大免疫测定技术(enzyme-multiplied immunoassay technique,EMIT)测定环孢素A(cyciosporine,CsA),了解基质效应对检测结果的影响,解释在CsA室问质评结果中两方法的检测结果的差别,并找到纠正方法.方法 选择不同浓度的临床全血标本100份,用FPIA和EMIT技术进行检测,对比检测结果;通过添加Cu2+,zn2+评估离子残留对免疫反应的影响;用添加等体积血红蛋白富集液后再次抽提的方法,评价非全血基质对质控品和CsA标准品抽提率的影响.结果 检测临床全血标本FPIA(X)和EMIT(Y)检测结果具有良好的相关性(Y=0.926 8X-8.115,R2=0.996 9);金属离子残留对FPIA法和EMIT法均不产生下扰(P>0.05);非全血基质样本会降低两方法的抽提率;样本中血红蛋白含量≥30 g/L就可纠正非全血基质对抽提率的影响.结论 下发质控品的非全血基质是导致CsA室间质评结果中两系统的检测结果不一致的主要原因,可通过添加血红蛋白富集液进行纠正;遇器官移植受者有极低血红蛋白(<30 g/L)时,要允分考虑低血红蛋白对CsA检测结果的影响.

环孢菌素A对NK细胞免疫球蛋白样转录子4的表达和杀伤功能的影响

目的 探讨CsA对NK细胞抑制性受体ILT4的表达及NK细胞杀伤功能的影响.方法 以10 mg/L CsA分别处理NK细胞12、24、36 h作为3个实验组,以DMSO分别作用NK细胞12、24、36 h作为3个对照组.通过RT-qPCR和流式细胞术分别检测各组中NK细胞ILT4 mRNA和蛋白表达变化,同时测定人胃癌细胞株BGC-823、绒毛膜癌细胞株JEG-3 HLA-G的表达,采用MTT法检测NK细胞经CsA处理36 h前后对肿瘤细胞杀伤活性的变化.用药处理不同时间段ILT4表达数据比较先使用单因素方差分析,再进行各均数间两两比较Dunnett t检验,而JEG-3、BGC-823细胞HLA-G的表达差异及NK细胞对JEG-3、BGC-823细胞的杀伤活性比较采用t检验.结果 用RT-qPCR检测经CsA处理12、24、36 h组的NK细胞ILT4 mRNA相对表达水平依次为0.99±0.27、1.79±0.29、6.79±0.64,经DMSO处理的对照组分别为0.86±0.11、0.94±0.12、1.06±0.17；CsA处理NK细胞24、36 h组的ILT4表达较对照组明显增加(t值分别为4.69、14.99,P均＜0.05),而作用12 h前后组间的差异无统计学意义(t=0.78,P＞0.05).用流式细胞术检测经CsA处理12、24、36 h组的NK细胞ILT4蛋白表达阳性率分别为(5.16±0.42)％、(6.23±0.48)％、(23.8±1.5)％,分别高于经DMSO处理12、24、36 h组[(3.08±0.19)％、(3.35±0.12)％、(3.36±0.21)％],且不同处理组在不同处理时间的阳性率比较差异有统计学意义(t值分别为7.70、10.06、20.72,P均＜0.01)；CsA处理NK细胞36 h组的ILT4 mRNA和蛋白表达均显著高于处理12 h和24h组(t值分别为16.38、14.12、21.81、20.56；P均＜0.01).同时,当经CsA处理前后且效靶比为10∶1时,NK细胞对低表达HLA-G的肿瘤细胞BGC-823的杀伤率分别为(81.96±2.80)％、(60.23±1.57)％,CsA对NK细胞杀伤活性的抑制率为(26.48±2.42)％；而NK细胞对高表达HLA-G的JEG-3细胞的杀伤率分别是(53.46±2.21)％、(28.30±1.85)％,抑制率为(47.10±1.59)％.经CsA处理前后NK细胞对肿瘤细胞杀伤活性的变化表明CsA可抑制NK细胞对BGC-823和JEG-3细胞的杀伤(t值分别为11.74、15.16,P均＜0.01),对JEG-3细胞杀伤抑制率显著高于对BGC-823细胞的杀伤抑制率(t=12.31,P＜0.01).结论 CsA可上调NK细胞抑制性受体ILT4的表达,并通过ILT4与HLA-G相互作用影响NK对肿瘤细胞的杀伤.

环孢菌素A抑制内质网应激减轻β淀粉样蛋白25-35对PC12细胞凋亡的研究

目的 探讨环孢菌素A对β淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)诱导PC12细胞凋亡的保护机制.方法 PC12细胞传代培养,分为对照组、Aβ25-35组、Aβ25-35+环孢菌素A组(环孢菌素A组).Aβ25-35 10 μmol/L,环孢菌素A 20μmol/L.药物作用24 h后,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测内质网应激蛋白钙网蛋白、半胱天冬氨酸酶12 (caspase-12)活化片断的蛋白表达.结果 与对照组细胞凋亡率(2.0±0.2)％比较,Aβ2535组细胞凋亡率(45.0±3.7)％明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05)；而环孢菌素A组细胞凋亡率为(27.0±2.4)％,较Aβ25-35组明显下降,差异有统计学意义(P＜0.01).Western blot显示,与对照组比较,Aβ25-35组钙网蛋白、caspase-12活化片断表达明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05);与Aβ25-35组比较,环孢菌素A组钙网蛋白、caspase-12活化片断表达明显减少,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 环孢菌素A可通过抑制内质网应激相关蛋白表达,来减轻Aβ25-35对PC12细胞的凋亡作用.

老龄大鼠慢性脑灌注不足与认知功能障碍的研究

目的探讨老龄大鼠慢性脑灌注脑损害和认知功能障碍及其机制.方法 50只老龄大鼠用于实验,其中20只接受环孢菌素A(CsA)胃灌治疗.用光镜和电镜观察组织学改变,免疫组织化学法检测免疫细胞的活动,采用微机控制穿梭箱双向主动回避反应实验系统检测大鼠认知功能.结果大鼠持久性双侧颈总动脉结扎(2VO)诱导的慢性脑灌注不足造成了脑组织广泛免疫细胞活动和进行性脑损害,导致了大鼠进行性学习和记忆能力下降.CsA治疗组大鼠脑内免疫细胞的活动明显减少,脑损害明显减轻,学习和记忆能力显著提高.结论脑组织免疫细胞的活动贯穿于大鼠慢性脑灌注不足脑损害的病理过程,在脑损害和认知功能障碍的发生和发展中起重要作用;CsA可明显减轻脑内免疫细胞的活动,防治了大鼠的脑损害和认知功能障碍.

二氮嗪联合环孢菌素A减轻突触核蛋白片段对PC12细胞凋亡的作用机制

目的 探讨线粒体ATP敏感钾离子通道开放剂二氮嗪、线粒体膜渗透性转换孔抑制剂环孢菌素A,以及两者协同对α-突触核蛋白片段的非淀粉样成分(NAC)致PC12多巴胺能细胞凋亡的分子机制.方法 采用25 μmol/L的NAC对PC12细胞进行诱导建立帕金森病细胞模型,分为对照组、NAC处理组(NAC组)、NAC+二氮嗪干预组(干预1组)、NAC+环孢菌素A干预组(干预2组)、NAC+二氮嗪+环孢菌素A干预组(干预3组).二氮嗪、环孢菌素A及两者协同对其干预48 h,用流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测细胞色素C、Bcl-2、Bax、Bcl-2/Bax比值情况.结果 与对照组比较,NAC组细胞凋亡率、细胞色素C明显升高,Bcl-2、Bcl-2/Bax比值明显降低(P<0.01),Bax未见明显变化(P>0.05);与NAC组比较,干预1组、干预2组、干预3组细胞凋亡率、细胞色素C明显降低,Bcl-2、Bcl-2/Bax比值明显升高(P<0.01),Bax未见明显变化(P>0.05).结论 二氮嗪、环孢菌素A及两者协同作用通过抑制线粒体凋亡通路相关蛋白的表达来拮抗NAC的细胞凋亡作用.

二氮嗪联合环孢菌素A减轻突触核蛋白片段对PC12细胞的毒性效应

目的 探讨二氮嗪和环孢菌素A对α-突触核蛋白片段的非淀粉样成分(NAC)致PC12多巴胺能细胞毒性的影响.方法 PC12细胞分为A、B、C、D和E组,后4组采用NAC 25 μmol/L建立帕金森病细胞模型,后3组依次加入二氮嗪、环孢菌素A、二氮嗪加环孢菌素A干预48 h后,倒置显微镜下,观察细胞形态;MTT比色法检测细胞存活率;Apo-ONE均质荧光法检测caspase-3活性.结果 与A组比较,B组PC12细胞形态发生明显损伤性变化,细胞存活率明显降低,caspase-3活性升高(P<0.01);与B组比较,C、D和E组细胞存活率明显升高,caspase-3活性明显降低(P<0.01).结论 二氮嗪、环孢菌素A及两者协同,可以明显拮抗NAC的细胞毒性效应.

环孢菌素A治疗高龄患者大疱性类天疱疮一例

患者男性,92岁.2002年8月15日因双手足红斑、大疱伴糜烂渗出1个月,以大疱性类天疱疮住我院.给予泼尼松45 mg/d口服,治疗半个月,双手足皮疹干涸、结痂.