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NF-κB在丙肝病毒感染中的抗凋亡作用
NF-κB是一种核转录因子,众多研究发现NF-κB与肿瘤细胞抵抗凋亡有关,而抑制NF-κB则增强TNF的抗肿瘤效应.近年来研究发现丙肝病毒核心蛋白可激活NF-κB而拮抗细胞调亡,对HCV持续感染和致癌可能起到重要作用,为丙肝病毒感染的病因和防治提供了新的线索.本文对这方面的有关研究作一综述.
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电针对局灶性脑缺血大鼠缺血区脑组织神经细胞凋亡及神经生长因子影响的研究
目的:观察电针督脉经穴"大椎"、"百会"对大鼠缺血区脑组织神经细胞凋亡及NGLF的影响.方法:用凝闭一侧大脑中动脉的脑缺血大鼠为动物模型,采用TUNEL染色法和免疫组化染色S-P法进行观察.结果:缺血+电针组中,大脑皮层梗塞区内TUNEL染色阳性细胞较缺血组显著减少(P＜0.01),NGFR免疫阳性表达在细胞数量上及强度上也均较缺血组及假手术组明显增强(P＜0.01).结论:电针能抑制脑缺血后脑内神经细胞的凋亡,可增强局灶性脑缺血大鼠脑组织的NGFR的表达,对缺血性脑损伤具有一定的保护作用.为临床针灸治疗缺血性脑血管疾病奠定了理论基础.
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金乌健骨方兔含药血清冻干粉对类风湿关节炎滑膜细胞增殖作用的影响
目的:探讨苗药金乌健骨方兔含药血清对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(RA-FLS)增殖的作用.方法:选取符合RA诊断标准的骨科手术患者,取滑膜组织进行滑膜细胞培养,并制备金乌健骨方兔含药血清,用小牛血清调至不同浓度,取3-5代对数生长期滑膜细胞加入不同浓度含药血清冻干粉,采用MTT法检测各组细胞生长抑制情况,流式细胞仪检测凋亡情况.结果:空白对照组RA-FLS持续增殖,应用含药血清冻干粉干预48h后,随着金乌健骨方含药血清浓度的升高,OD值逐渐降低,细胞抑制率逐渐升高.流式细胞检测结果显示金乌健骨方高、中、低剂量组和阳性药对照组细胞凋亡率增加,与空白对照组比较,均具有统计学意义(P＜0.01).结论:苗药金乌健骨方兔含药血清冻干粉具有抑制类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞的增殖作用.
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动物病毒诱导的细胞凋亡及其生理意义
细胞凋亡是指细胞受到内外信号刺激时发生的一种由细胞内部基因控制的主动性死亡行为,是细胞内在的机制,也是决定生物个体发育和组织平衡的一个重要机制,对于抵御外界各种因素干扰起着非常关键的作用.它呈现一系列典型的生化和形态学特征,如染色质凝集、趋边化以及凋亡小体(apoptotic body)的产生.伴随着形态学上的变化,凋亡细胞的染色质在核小体间被活化的DNase特异水解,形成大约为180～200bp或其多聚体组成的寡核苷酸片段,被包裹在凋亡小体内,琼脂糖凝胶电泳表现为DNA"梯带"(DNA ladder)[1].大量的研究证实,很多病毒在其感染周期过程中可诱导细胞凋亡[2,3],病毒感染诱发的细胞凋亡也常与一些疾病的发生密切相关.所以,研究病毒诱导细胞调亡及其生理意义对于阐明细胞凋亡分子机制和病毒与宿主的相互作用具有重要的意义.
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水合淫羊藿素对THP-1细胞增殖和凋亡的影响及机制研究
目的:探讨水合淫羊藿素(icaritin)对THP-1细胞增殖和凋亡的影响及其可能的作用机制.方法:用MTS法、流式细胞术和Hoechst 33258荧光染色检测icaritin对THP-1细胞的增殖抑制及促凋亡作用,Western blot技术检测BCL-2、BAX和Caspase-3蛋白的表达.结果:4-32 μmol/L icaritin作用24-72 h对THP-1细胞有增殖抑制作用(P＜0.05),且呈时间-剂量依赖关系(r=0.946);4-32 μmol/L icaritin作用24和48 h,对THP-1细胞有凋亡诱导作用(P＜0.05),也显示时间-剂量依赖关系(r=0.924).icaritin作用THP-1细胞48 h后,THP-1细胞BCL-2蛋白的表达较对照组显著降低(P＜0.05),而BAX和Caspase-3表达较对照组显著增高(P＜0.05).结论:Icaritin对THP-1细胞有增殖抑制及促凋亡作用,icaritin可能通过线粒体途径诱导THP-1细胞的凋亡.
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索拉非尼通过抑制WNT信号通路诱导白血病细胞株U937凋亡
本研究观察多激酶活性抑制药物索拉非尼对急性白血病细胞株U937细胞增殖活力的影响及诱导凋亡的作用,并探讨其可能的作用机制.以不同浓度的索拉非尼作用于U937细胞48小时后,使用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞增殖活力变化;Annexin V/PI染色后通过流式细胞仪观察索拉非尼对U937细胞株的促凋亡作用;PI染色后利用流式细胞仪分析细胞周期中各期细胞比例变化;Western blot检测GSK-3β、β-catenin、Cyclin-D1蛋白表达变化.结果表明,同对照组相比较,索拉非尼以浓度依赖方式抑制U937细胞增殖,使细胞阻滞于G1/G0期并促进其调亡(p<0.05).Westem blot检测结果显示,与索拉非尼处理前后相比,WNT通路中失活型GSK-3β蛋白、β-catenin及cyclinD1表达均下调,并呈现出浓度依赖性.使用GSK-3β抑制剂氯化锂上调失活型GSK-3β蛋白后仍得出同样趋势(p<0.05).结论:索拉非尼通过减少WNT信号通路负向调节蛋白GSK-3β失活,进而下调β-catenin,cyclin-D1水平,使U937细胞阻滞于G1/G0期并促进其凋亡.
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He-Ne激光照射对HeLa细胞Fas、bcl-2、NF-κB基因表达的作用
目的 探讨He-Ne激光对HeLa细胞Fas、bcl-2、NF-κB基因表达的作用.方法 将HeLa细胞接种于小鼠背部脾区皮下,24h后采用24mW He-Ne激光器照射小鼠脾区(瘤区),然后采用免疫组化方法观测Fas、bcl-2、NF-κB的表达.结果 激光照射组瘤块重量、bcl-2、NF-κB表达明显低于非激光照射组,而Fas表达明显高于非激光照射组,组间比较,差异有显著意义(P＜0.05).结论 He-Ne激光具有促进HeLa细胞调亡信号形成,从而发挥抗肿瘤免疫效应.
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坎地沙坦对左室肥厚大鼠心肌组织血管紧张素Ⅱ受体表达的影响
背景和目的 血管紧张素Ⅱ受体在心血管疾病中起着至关重要的作用,血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(ARB)临床的大量使用,对心血管疾病有明显保护作用.但ARB心血管保护机制尚未明确.实验观察继发性高血压左室肥厚(LVH)大鼠心肌组织血管紧张素Ⅱ 1型受体(AT1R)和血管紧张素Ⅱ 2型受体(AT2R)的表达及坎地沙坦改善LVH是否是仅依赖阻断AT1R还是通过阻断AT1R时激活AT2R发挥作用.方法 采用腹主动脉缩窄法建立LVH模型,21只SD大鼠随机分为:假手术组(n=7);心肌肥厚组(n=7);坎地沙坦组[10 mg/(kg·d)灌胃,n=7].假手术组和心肌肥厚组给于等量的蒸馏水灌胃,6周后采集标本.用免疫组化法及RT-PCR检测AT的表达,同时检测LVH指标:左室质量指数(LVMI)、心肌细胞横切面积(CSA)、心肌细胞凋亡指数(APOI),血浆血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)水平.结果 心肌肥厚组较假手术组血压、LVMI、CSA、APOI、血浆AngⅡ水平及AT1R和AT2R蛋白和mRNA的表达水平均升高(均P<0.01);坎地沙坦干预6周后,血压、LVMI均显著下降(P<0.01),CSA减小(P<0.05),达对照组水平(P>0.05);坎地沙坦组APOI显著升高(P<0.05,P<0.01);血浆Ang Ⅱ水平亦显著升高(均P<0.01);与心肌肥厚组比较,坎地沙坦组AT<,1>R蛋白和mRNA的表达水平下降(P<0.05,P<0.01),AT2R蛋白和mRNA的表达水平差异无统计学意义(P>0.05).与假手术组比较,AT<,1>R蛋白和mRNA的表达水平均上调(均P<0.05),AT2R蛋白和mRNA的表达水平均上调(均P<0.01),与心肌肥厚组和假手术组比较,AT2R/AT1R升高(均P<0.01).结论 LVH大鼠心肌组织AT1R和AT2R表达升高,二者共同参与LVH过程,但可能发挥相互拮抗的作用;坎地沙坦改善左室肥厚可能与阻断AT1R,降低AT1R表达,使AT2R/AT1R升高,激活AT2R发挥抗增殖促凋亡的作用有关.
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生长抑素和生长激素对急性重症胰腺炎胰腺细胞凋亡的影响
目的:探讨生长抑素联合生长激素治疗大鼠急性坏死性胰腺炎对胰腺细胞调亡和调控基因Bax和Bcl-2的影响.方法:以牛胆酸钠诱导SD大鼠急性坏死性胰腺炎模型,并应用TUNEL染色,免疫组化SABC法检测胰腺组织中基因Bax、Bcl-2蛋白表达以及生长抑素联合生长激素治疗后对胰腺细胞凋亡及凋亡调控基因Bax、Bcl-2蛋白表达的影响.结果:TUNEL染色显示生理盐水治疗组胰腺细胞凋亡指数显著低于生长抑素治疗组和生长抑素联合生长激素治疗组.免疫组化SABC法生长抑素联合生长激素治疗组胰腺细胞Bax染色阳性率明显高于生理盐水组,而生长抑素治疗组Bax染色阳性率虽高于生理盐水组,但无统计学意义;生理盐水组胰腺细胞Bcl-2染色阳性率明显高于生长抑素治疗组及生长抑素联合生长激素治疗组.结论:生长抑素治疗急性坏死性胰腺炎的机制之一可能是诱导损伤的胰腺细胞凋亡以减轻胰腺炎症反应,细胞凋亡机制可能与抑制Bcl-2的表达有关而与促进Bax的表达无关;生长抑素和生长激素联合治疗急性坏死性胰腺炎的机制之一可能是诱导损伤的胰腺细胞凋亡,这机制可能与促进Bax的表达及抑制Bcl-2的表达有关.
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线粒体融合素2突变体对血管平滑肌细胞凋亡的影响
目的 研究大鼠线粒体融合素2(mitofusin 2,Mfn2)基因蛋白激酶A(PKA)磷酸化位点的2种突变体对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)凋亡及其相关的信号通路的影响.方法 构建4种重组腺病毒,分别携带磷酸化位点突变为丙氨酸(重组1组)、Mfn2基因(重组2组)、突变为天冬酰胺(重组3组)和半乳糖苷酶基因(对照组),感染培养的VSMCs,另设未感染腺病毒的空白组.流式细胞术比较各组细胞的凋亡率,JC-1染色法检测线粒体膜电位变化,Western blot分析各组Mfn2蛋白的表达以及磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)和活性半胱天冬酶9(caspase-9)表达.结果 与空白组和对照组比较,重组1组、重组2组和重组3组Mfn蛋白显著增加(P<0.01);重组1组和重组2组细胞凋亡率显著增强(P<0.01);线粒体膜电位显著降低(P<0.01);p-Akt表达水平显著降低(P<0.01),活性caspase-9表达水平显著增高(P<0.01);且重组1组作用较重组2组更明显(P<0.01);而重组3组上述指标无显著差异(P>0.05).结论 Mfn2突变为丙氨酸的位点PKA通过Akt信号及线粒体途径诱导VSMCs凋亡的作用较Mfn2更明显,表明PKA磷酸化位点是调控Mfn2诱导VSMCs凋亡的重要功能位点.
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环孢菌素A抑制内质网应激减轻β淀粉样蛋白25-35对PC12细胞凋亡的研究
目的 探讨环孢菌素A对β淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)诱导PC12细胞凋亡的保护机制.方法 PC12细胞传代培养,分为对照组、Aβ25-35组、Aβ25-35+环孢菌素A组(环孢菌素A组).Aβ25-35 10 μmol/L,环孢菌素A 20μmol/L.药物作用24 h后,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测内质网应激蛋白钙网蛋白、半胱天冬氨酸酶12 (caspase-12)活化片断的蛋白表达.结果 与对照组细胞凋亡率(2.0±0.2)％比较,Aβ2535组细胞凋亡率(45.0±3.7)％明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05)；而环孢菌素A组细胞凋亡率为(27.0±2.4)％,较Aβ25-35组明显下降,差异有统计学意义(P＜0.01).Western blot显示,与对照组比较,Aβ25-35组钙网蛋白、caspase-12活化片断表达明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05);与Aβ25-35组比较,环孢菌素A组钙网蛋白、caspase-12活化片断表达明显减少,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 环孢菌素A可通过抑制内质网应激相关蛋白表达,来减轻Aβ25-35对PC12细胞的凋亡作用.
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多奈哌齐治疗类阿尔茨海默病模型大鼠的实验研究
阿尔茨海默病(Alzheimer's disease AD)主要临床表现为进行性记忆力减退,智能障碍以及人格改变.中枢胆碱能神经系统与学习和记忆有关,乙酰胆碱酯酶(AchE)在AD大脑中活性的增高致使乙酰胆碱(Ach)缺失,而且已证实Ach缺失的严重程度与痴呆程度密切相关,因此安理申(盐酸多奈哌齐)作为乙酰胆碱酯酶抑制剂(CHEIs)治疗AD已广泛应用于临床.在临床上,多奈哌齐作为治疗AD是主要强调了其抑制AchE的作用,而对其是否有抗氧化作用、抑制Aβ聚集及减少细胞调亡等其他的作用尚不清楚.我们将通过多奈哌齐治疗Aβ25-35所致类AD模型大鼠,进一步探讨多奈哌齐治疗AD大鼠的其它作用机制,从而为临床治疗提供科学依据.
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左旋四氢巴马汀在大鼠全脑缺血再灌注时对核因子-κB表达的影响
脑缺血再灌注损伤的机制尚未完全阐明,目前认为缺血再灌注后的炎症反应可能是其重要机制之一[1].核因子-κB(NF-κB)是目前发现的与炎症有关的重要转录因子之一,参与多种细胞因子和炎症介质的转录调节.肿瘤坏死因子-α(TNF-α)是重要的前炎症细胞因子,在脑缺血再灌注的炎症反应中起重要的级联放大作用.左旋四氢巴马汀(L-THP)在研究中已被证明其在脑缺血再灌注损伤中可起到抗氧化和抑制细胞调亡的作用[2,3],但能否抑制炎症反应尚不清楚.
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低氧诱导因子-1α介导成骨细胞凋亡的实验研究
目的:观察低氧诱导因子-1 α(Hypoxia inducible factor-1 α,HIF-1α)在化学诱导的低氧状态下培养的原代鼠胚成骨细胞中的表达变化,并初步探讨其与细胞调亡之间的关系.方法:采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测低氧和常氧培养不同时间的成骨细胞HIF-1α以及参与细胞调亡的关键基因Caspase-3与Bcl-2的表达变化.应用免疫印迹(Western-blotting)方法分别检测了低氧和常氧培养下成骨细胞Caspase-3和bcl -2蛋白的表达情况.结果:反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测各基因的表达变化:经氯化钴处理后,HIF-1 α和Caspase-3mRNA的表达随时间的延长逐渐增加(P＜0.01),除第0天外,均高于常氧组(P＜0.01),而常氧组各时间段则无明显变化(P＞0.05);Bcl-2 mRNA表达与前两者相反,随时间的延长呈逐渐降低(P＜0.01),除第0天外,均低于常氧组(P＜0.01),常氧组各时间段则无明显变化(P＞0.05).免疫印迹(Western-blotting)检测各蛋白的表达变化:通过ECL(enhanced chemi luminescence)显色观察结果并经Lab-work软件分析可见,经氯化钴处理后,Caspase-3蛋白的表达逐渐增加(P＜0.01),除第0天外,均高于常氧组(P＜0.01),而常氧组各时间段则无明显变化(P＞ 0.05); Bcl-2蛋白表达与前者相反,呈逐渐降低(P＜0.01),除第0天外,均低于常氧组(P＜0.01),常氧组各时间段则无明显变化(P＞ 0.05).结论:氯化钴可以化学模拟低氧状态,使成骨细胞表达大量的HIF-1α. HIF-1 α可能通过调节Caspase-3和Bcl-2的表达而促进成骨细胞凋亡,且这种促进作用与缺氧的时间有关.
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浅述帕金森病的临床治疗方法
帕金森病是中枢神经系统慢性进行性病变，是黑质-纹状体神经细胞变性，细胞分泌多巴胺神经递质减少而引起一系列临床症状的神经系统疾病。据研究，与环境因素、遗传、年龄老化、细胞调亡、自身免疫、氧化应激、兴奋性神经毒素等因素有密切关系。因确切病因不明，给治疗带来了巨大困难，但绝对不是不治之症，目前主要治疗方法有以下几种。
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FAS及FAS-L在心脏黏液瘤组织中的表达及临床意义
近年研究表明,细胞调亡与肿瘤等许多人类疾病相关[1].心脏黏液瘤是心脏常见的原发性肿瘤,其具体发病机制尚不清楚[2].为探讨Fas及Fas-L在心脏黏液瘤发生发展中的作用,我们用免疫组织化学方法对其进行检测,现报道如下.
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丁酸钠对大鼠小肠上皮细胞株-6细胞增殖和凋亡的影响
目的 观察丁酸钠对大鼠小肠上皮细胞株-6(intestinal epithelium cell line No.6,IEC-6)细胞增殖和凋亡的作用. 方法 不同浓度丁酸钠(低浓度2 mmol/L,中浓度8 mmol/L,高浓度14、20 mmol/L)处理IEC-6细胞,细胞计数试剂盒CCK-8法检测细胞增殖情况,分光光度法检测细胞内Caspase-3活性程度,流式细胞术检测细胞凋亡率. 结果 (1)加入丁酸钠(2、8、14、20mmol/L)共培养24 h后,2、8 mmol/L丁酸钠组细胞增殖速度比对照组快,差异有统计学意义(P<0.01);48 h后,14、20 mmol/L丁酸钠组细胞增殖较对照组明显受抑制,差异有统计学意义(P<0.01);72 h后,8、14、20 mmol/L丁酸钠组增殖亦明显受抑制,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01).(2)加入丁酸钠(2、8、14 mmol/L)共培养12 h后,8、14 mmol/L丁酸钠组与对照组比较Caspase-3活性明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);24 h后,2、8、14 mmol/L丁酸钠组与对照组比较Caspase-3活性均升高,差异有统计学意义(P<0.05);48 h后,8、14 mmol/L丁酸钠组与对照组比较Caspase-3活性亦升高,差异有统计学意义(P<0.05).(3)加入丁酸钠(2、8、14 mmol/L)共培养12、24、48 h后,8、14 mmol/L丁酸钠组与对照组比较IEC-6细胞凋亡率均有升高,差异有统计学意义(P<0.05). 结论 中、高浓度丁酸钠有诱导IEC-6细胞凋亡,抑制IEC-6细胞增殖作用,而低浓度丁酸钠没有这种作用.
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阿糖胞苷及蟾蜍灵对HL-60细胞增殖抑制和诱导凋亡的研究
目的探讨阿糖胞苷(Ara-C)及蟾蜍灵对人白血病细胞株HL-60的作用及影响机制,验证两种药物治疗血液肿瘤的优越性.方法在体外设定的浓度梯度和作用时间下应用Ara-C及蟾蜍灵,采用原位末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡率,以流式细胞术分析细胞凋亡,以噻唑蓝抑制实验(MTT比色法)观察上述两种物质对细胞的抑制作用.结果(1)蟾蜍灵明显抑制细胞分裂增殖,其半数抑制浓度约为0.03μmol/L,随蟾蜍灵浓度增加诱导细胞凋亡时间缩短,程度增加;(2)Ara-C抑制细胞分裂增殖,其半数抑制浓度约为2.4μmol/L,随浓度增加诱导细胞凋亡时间缩短,程度增加;(3)蟾蜍灵联合Ara-C则抗增殖作用增强80%以上,凋亡率比单用Ara-C增加近30%.结论Ara-C对细胞的诱导凋亡作用主要作用于sub-G1期,在蟾蜍灵联合作用下其作用增强,可为临床治疗应用提供理论参考.
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淋巴细胞凋亡与特发性血小板减少性紫癜研究进展
特发性血小减少性紫癜(idiopathic thrombocytopenic purpura,ITP)是一种儿童常见的由于血小板破坏增多的出血性自身免疫病.目前,虽然许多学者在体液免疫、细胞免疫、血小板功能及内分泌等多方面进行了深入的探讨,但该病的发病机制仍然未完全明了.年近来,由于分子生物学、分子免疫学、细胞生物学等技术的飞速发展,细胞调亡成为ITP发病机制研究的热点,关于细胞凋亡在特发性血小板减少性紫癜中的研究已取得许多新进展.
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化疗药物对人肺腺癌细胞死亡受体DR4与DR5表达影响的研究
目的:研究化疗药物依托泊苷(Vp-16)、顺铂(DDP)、多西他赛(TXT)对A549细胞死亡受体(death receptor,DR)DR4、DR5基因表达的影响.方法:采用逆转录-聚合酶链反应(PT-PCR)方法对亚毒性剂量Vp-16、DDP和TXT作用不同时间后的人肺腺癌细胞株A549细胞的死亡受体DR4、DR5的mRNA表达进行半定量检测.结果:1)亚毒性剂量Vp-16可上调A549细胞DR4、DR5基因表达.7.5μg/mL Vp-16处理A549细胞8 h后,DR4/β-actin、DR5/β-actin的比值分别为1.13±0.13和1.06±0.25.7.5μg/mLVp-16处理A549细胞12 h后,DR4/β-actin、DR5/β-ac-tin的比值分别为1.18±0.20和1.02±0.02,两者与对照组之间比较,差异均有统计学意义,P＜0.05(P值分别为0.04、0.02、0.00和0.02).2)亚毒性剂量DDP和TXT对A549细胞DR4、DR5基因转录水平无明显影响.5μg/mLDDP、0.005 μmol/L TXT(约为4ng/mL)作用A549细胞4、8 h后DR4、DR5基因转录水平与对照组之间比较,差异无统计学意义,P＞0.05.结论:药物干预对TRAIL凋亡通路以及耐药机制的影响存在多样性.部分化疗药物可上调肿瘤细胞死亡受体DR4、DR5基因表达,同时不排除其他作用机制的存在.
