首页 > 文献资料
-
中药提取物联合西药治疗肿瘤的研究进展
中西医结合医学治疗恶性肿瘤是近来的热点。有多项研究报道蟾蜍灵、康莱特、人参皂苷Rg3等中药提取物在抗肿瘤方面前景广阔，以其联合西药能加强疗效，减轻不良反应，在临床上也取得一定成果。以上这些药物都需要我们进一步研究，前景值得期待。
-
127 蟾蜍毒素的抗肿瘤作用
中药蟾酥的主要活性成分蟾蜍毒素通过促进肿瘤细胞分化、诱导肿瘤细胞凋亡而具有很强的抗肿瘤作用，其作用机理与干扰细胞生长周期、抑制细胞膜Na+／K+-ATP酶、降低拓扑异构酶活性、增强有丝分裂原激活蛋白酶活性、改变肿瘤细胞基因表达等有关。
-
蟾蜍灵诱导人白血病HL60细胞凋亡的初步研究
目的：探讨中药蟾蜍灵诱导白血病HL60细胞凋亡作用。方法：应用台盼蓝染色法测定HL60细胞的生长曲线，应用相差显微镜、电子显微镜和DNA琼脂糖凝胶电泳等技术分析细胞凋亡。结果：蟾蜍灵与HL60细胞共育时，能明显抑制细胞生长，细胞呈典型的凋亡形态学改变：细胞皱缩，染色质凝集，沿核膜内侧分布，呈新月形，可见由膜包被细胞内容物的凋亡小体的产生；细胞DNA裂解成180～200 bp及其倍数的片段，电泳得到特有的梯形条带。结论：蟾蜍灵诱导细胞凋亡是其抗肿瘤的作用机制之一。
-
蟾蜍灵诱导人胃癌细胞凋亡的实验研究
用MTT 法、形态学观察法、 DNA 电泳和流式细胞仪观察蟾蜍灵(Bufalin)诱导的胃癌细胞凋亡.结果表明,0.01mmol/L 蟾蜍灵作用 MGc-803细胞48 h,即可显著抑制细胞生长,IC50值约为0.1 mmol/L.琼脂糖凝胶电泳获得梯形图谱,流式细胞仪DNA直方图上出现典型的亚二倍体峰,凋亡主要发生在G1/G0期,细胞凋亡率随药物浓度和作用时间的增加而增高.以上结果提示,bufalin对胃癌细胞具有很强的抑制作用,诱导凋亡是其主要作用机制之一.
-
蟾蜍灵抑制TGF-β1诱导人肾小管上皮细胞-间充质细胞系转换
目的 探讨蟾蜍灵对转化生长因子(TGF)-β1诱导的人肾小管上皮细胞-间充质细胞转换的影响.方法 将体外培养的人近端肾小管上皮细胞系(HK-2)细胞分为3组:1)对照组;2)TGF-β1组:在细胞培养基中加入TGF-β1(浓度为5 μg/L);3)蟾蜍灵+TGF-β1组:在细胞培养基中分别加入蟾蜍灵和TGF-β1(浓度为5μg/L),按蟾蜍灵的浓度分为A、B、C3个亚组:分别为1×10-9、1×10-8和1×10-7 mol/L.72 h后,用倒置相差显微镜观察细胞形态;用实时定量PCR、蛋白印迹法和免疫荧光检测细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达.结果 TGF-β1组HK-2细胞从原有典型的铺路石样上皮细胞转变为长梭形肌成纤维细胞;胞质内大量表达cα-SMA,同时E-cadherin的表达明显减少(P＜0.叭);蟾蜍灵处理后TGF-β1诱导的细胞形态学改变减轻,胞质内α-SMA的表达减少(P＜0.05),同时E-cadherin的表达明显恢复,且呈剂量依赖性.结论 蟾蜍灵能有效抑制TGF-β1诱导的HK-2细胞转换,对肾脏病治疗具有潜在应用前景.
关键词： 蟾蜍灵 转化生长因子-β1 上皮细胞-间充质细胞转换 -
蟾蜍灵在诱导HL-60细胞凋亡时对SYK和CBL家族蛋白的影响
为了探讨酪氨酸蛋白激酶SYK和CBL家族泛素连接酶在蟾蜍灵诱导HL-60细胞凋亡过程中的作用机制,采用台盼蓝染色检测细胞活力,采用流式细胞术检测细胞凋亡,采用Western blot和免疫沉降技术检测CBL、CBL-b表达和SYK的磷酸化.结果显示,蟾蜍灵以时间和剂量依赖方式抑制HL-60细胞增殖.24、48和72小时抑制细胞活力的IC50浓度分别约为26.3,7.8和2.0 nmol/L.高剂量蟾蜍灵从8小时即开始诱导HL-60细胞凋亡;与此同时蟾蜍灵快速活化SYK,并以时间依赖的方式下调CBL和CBL-b表达.结论:SYK活化及CBL家族蛋白表达下调可能参与蟾蜍灵对HL-60细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用.
-
蟾蜍灵在诱导HL-60细胞凋亡过程中对Bcl-2和PKC的影响
为了研究蟾蜍灵在诱导HL-60细胞凋亡过程中对Bcl-2表达与裂解和磷酸化的作用,及对蛋白激酶C(PKC)活性与PKCs亚细胞定位的影响,分别采用台盼蓝拒染法检测细胞生存率,细胞染色法观察凋亡形态,流式细胞术分析细胞周期,琼脂糖凝胶电泳检测凋亡DNA片段化,[γ-32P]同位素掺入法测定PKC活性,Western blot 分析Bcl-2及PKC蛋白表达.结果表明:①蟾蜍灵抑制HL-60细胞增殖,24、48及72小时的IC50分别为(25.8±2.1)、(8.0±1.2)及(2.3±0.3)nmol/L;②50 nmol/L蟾蜍灵作用24小时可诱导HL-60细胞凋亡;③50 nmol/L蟾蜍灵处理HL-60细胞6-24小时,Bcl-2蛋白表达水平明显下调,并出现23 kD的裂解片段,磷酸化水平逐渐降低;④1-100 nmol/L蟾蜍灵分别作用30分钟,对PKC总活性无影响,但可促使PKCβⅡ膜转位.结论:蟾蜍灵诱导HL-60细胞凋亡可能与Bcl-2表达降低、裂解及脱磷酸化有关.
-
蟾蜍灵抑制人多发性骨髓瘤细胞生长的实验研究
目的 研究蟾蜍灵对人多发性骨髓瘤细胞U266的作用.方法 台盼蓝拒染法观察蟾蜍灵对细胞增殖的抑制作用.结果 12.5～100nmol/L蟾蜍灵处理U266细胞12 ～72 h后,蟾蜍灵以时间、剂量依赖方式抑制U266细胞增殖.12.5 ～ 100nmol/L/L蟾蜍灵于24h开始明显抑制U266细胞生长(P＜0.05).结论 蟾蜍灵以时间、剂量依赖方式抑制U266细胞生长.
-
蟾蜍灵抑制多发性骨髓瘤细胞的机制研究
目的 探讨蟾蜍灵( bufalin)对多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)的白细胞介素-6(interleukin -6,IL -6)表达的影响,以期证实蟾蜍灵抗MM的分子生物学机制.方法 人MM细胞系U266与不同浓度的蟾蜍灵作用,逆转录聚合酶链反应( RT - PCR)检测IL -6基因表达.结果 不同浓度的蟾蜍灵作用U266细胞48h后RT - PCR检测结果表明:U266细胞的IL -6基因表达与对照相比均明显降低；差异有显著性意义(P＜0.01).结论 蟾蜍灵能抑制U266细胞的IL -6基因表达.提示降低IL -6的表达是蟾蜍灵抗MM的机制之一.
-
蟾蜍灵对前列腺癌PC3细胞增殖和凋亡的作用及其机制
目的 探讨蟾蜍灵对前列腺癌细胞PC3生长特性的影响及其机制.方法 采用不同浓度的蟾蜍灵作用于雄激素非依赖性前列腺癌细胞PC3.四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测细胞增殖变化,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western杂交的方法检测细胞增殖和凋亡相关基因Bcl-2、Akt和P-Akt蛋白的表达.结果 蟾蜍灵对前列腺癌细胞PC3的生长抑制作用呈时间和剂量依赖关系,促进细胞凋亡,并且可以抑制增殖和凋亡相关基因Bcl-2和P-Akt的表达.结论 蟾蜍灵可以抑制前列腺癌细胞PC3的生长,促进细胞凋亡,通过Akt/Bcl-2途径发挥作用.
-
阿糖胞苷及蟾蜍灵对HL-60细胞增殖抑制和诱导凋亡的研究
目的探讨阿糖胞苷(Ara-C)及蟾蜍灵对人白血病细胞株HL-60的作用及影响机制,验证两种药物治疗血液肿瘤的优越性.方法在体外设定的浓度梯度和作用时间下应用Ara-C及蟾蜍灵,采用原位末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡率,以流式细胞术分析细胞凋亡,以噻唑蓝抑制实验(MTT比色法)观察上述两种物质对细胞的抑制作用.结果(1)蟾蜍灵明显抑制细胞分裂增殖,其半数抑制浓度约为0.03μmol/L,随蟾蜍灵浓度增加诱导细胞凋亡时间缩短,程度增加;(2)Ara-C抑制细胞分裂增殖,其半数抑制浓度约为2.4μmol/L,随浓度增加诱导细胞凋亡时间缩短,程度增加;(3)蟾蜍灵联合Ara-C则抗增殖作用增强80%以上,凋亡率比单用Ara-C增加近30%.结论Ara-C对细胞的诱导凋亡作用主要作用于sub-G1期,在蟾蜍灵联合作用下其作用增强,可为临床治疗应用提供理论参考.
-
蟾蜍灵对胃癌组织MGC-803细胞周期作用机制的研究
目的:探讨蟾蜍灵对胃癌MGC-803细胞周期及周期蛋白的影响.方法:采用台盼蓝拒染法测定细胞增殖活力;瑞士-姬姆萨染色观察细胞形态学的变化;流式细胞仪检测细胞周期;免疫组织化学方法检测细胞周期相关蛋白p16、p21、pRb的表达.结果:1)蟾蜍灵抑制胃癌MGC-803细胞的增殖,24、48、72 h的IC50分别为0.086、0.048和0.036μmol/L.2)蟾蜍灵在0.01～0.1umol/L时作用24～72 h,形态学上可见细胞体积增大,出现双核、多核细胞.3)流式细胞仪显示蟾蜍灵浓度为0.01～0.1μmol/L时可明显诱导细胞周期G2/M期阻滞.4)蟾蜍灵作用于胃癌MGC-803细胞,观察到p16、p21、pRb蛋白的表达明显上调.结论:蟾蜍灵引起胃癌MGC-803细胞的周期阻滞可能与p16、p21、pRb蛋白的上调有关.
-
Bufalin抑制食管癌TE13细胞迁移机制探讨
目的 蟾蜍灵(Bufalin)是中医抗癌药物蟾酥的有效成分之一,但其抗肿瘤的机制并不十分清楚.本研究通过分析不同浓度Bufalin对食管癌TE13细胞株迁移距离、MEK1/2及其活化形式P-MEK1/2和基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinase,MMP)表达的影响,初步探讨Bufalin抑制食管癌TE13细胞迁移能力的作用机制.方法 采用四甲基偶氮唑蓝[3-(4,5-dimethyhhiazol-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide,MTT]法测定细胞药物毒性,细胞划痕实验分别测量不同浓度(0、10、25、50和100 nmol/L)Bufalin处理组食管癌TE13细胞的迁移距离.蛋白质印迹法及免疫细胞化学法检测MEK1/2和P-MEK1/2蛋白的表达.逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测MMP-2、MMP-9 mRNA的表达情况.结果 MTT法结果显示,Bufalin药物大无毒浓度(TC0)为100 nmol/L.细胞划痕实验结果显示,不同浓度Bufalin处理组在划痕36 h后与对照组相比迁移的距离不同,随着Bufalin浓度的增加,细胞迁移距离下降,100 nmol/L迁移距离小(F=243.163,P＜0.01),Bufalin能有效抑制食管癌细胞迁移距离.蛋白质印迹法及免疫细胞化学检测结果显示,Bufalin对MEK1/2蛋白的表达无影响,但能显著抑制其活化形式P-MEK1/2的表达,并呈剂量依赖性,随Bufalin浓度的升高(0、10、25、50和100 nmol/L),P-MEK1/2相对表达量逐渐下降,分别为0.710±0.006、0.676±0.010、0.656±0.010、0.599±0.020和0.521±0.021,F=76.369,P＜0.01.P-MEK1/2阳性细胞数随着Bufalin浓度的升高而减少,分别为(80.330±1.905)％、(68.407±2.219)％、(67.297±1.797)％、(52.617±2.368)％和(26.97±2.912)％,F=243.348,P＜0.01.RT-PCR结果显示,随着Bufalin药物浓度的升高,MMP-2 mRNA相对表达量分别为0.772±0.010、0.725±0.019、0.663±0.015、0.582±0.019和0.519±0.019,F=112.990,P＜0.01;MMP-9 mRNA相对表达量分别为0.783±0.013、0.740±0.010、0.703±-0.006、0.601±0.017和0.531±0.010,均低于对照组,F=179.417,P＜0.01.结论 Bufalin可能通过下调MEK1/2的活性,从而抑制食管癌TE13细胞的迁移能力.
-
蟾蜍灵在诱导K562细胞凋亡过程中下调TOPO-Ⅱα蛋白表达
目的:探讨蟾蜍灵(bufalin)诱导K562细胞凋亡的分子机制.方法:用流式细胞仪和形态学检测细胞凋亡;用免疫组化SP法检测TOPO-Ⅱα蛋白表达.结果:蟾蜍灵在诱导K562细胞凋亡过程中,下调TOPO-Ⅱα蛋白表达;细胞外信号转导激酶抑制剂(extracellular signal-regulated kinase, ERK)PD98059能协同蟾蜍灵下调TOPO-Ⅱα蛋白表达;而四癸酰佛波酯(TPA)却拮抗蟾蜍灵的作用.结论:蟾蜍灵诱导K562细胞凋亡可能与抑制ERK信号途径以及下调TOPO-Ⅱα蛋白表达有关.
-
蟾蜍灵对人鼻咽癌细胞CNE-1的放射增敏作用
目的:观察蟾蜍灵对鼻咽癌细胞的放射增敏作用.方法:通过MTT法获得单纯蟾蜍灵作用于鼻咽癌细胞CNE-1的细胞存活曲线及抑制细胞增殖50%的药物浓度(IC50),然后采用蟾蜍灵及放射线单独或联合作用于CNE-1细胞,用克隆形成法经SPSS 9.0软件绘制细胞存活曲线,获得不同处理条件下的放射增敏比.结果:单纯用药组,CNE-1细胞的存活率随蟾蜍灵浓度的增加而降低,其IC50约为2.5×10-7mol/L.2.5×10-9和2.5×10-7mol/L的蟾蜍灵作用CNE-1细胞24 h后均见到放射增敏作用,增敏比分别为1.21和1.42.结论:蟾蜍灵对鼻咽癌细胞CNE-1有放射增敏作用,且增敏作用随浓度的增加而增强.
-
基于均匀设计法对蟾酥中单体体外抗癌配伍研究
目的:优选蟾酥中3种单体(蟾蜍灵、华蟾蜍精、脂蟾毒配基)体外抗癌佳配伍.方法:采用均匀设计法分成7组给药,分别为丝裂霉素组及给药A～F组,分别作用于肺癌(H441)宫颈癌(Hela)和白血病(HL-60)细胞株,采用WST-8细胞计数试剂盒,评价对3种癌细胞的抑制作用,筛选蟾蜍灵、华蟾蜍精、脂蟾毒配基佳配伍.对佳配伍进行比较和验证试验.结果:与对照组比较,在肺癌(H441)和宫颈癌(Hela)细胞上A,B组抑制作用与丝裂霉素相当(P＞0.05),在白血病(HL-60)细胞上A组抑制作用于丝裂霉素相当(P＞0.05).经多元统计分析,蟾蜍灵、华蟾蜍精、脂蟾毒配基佳配伍组合为100,100,15 μmol·L-1.结论:应用均匀设计和体外抗癌作用评价相结合确定蟾酥中3种单体蟾蜍灵、华蟾蜍精、脂蟾毒配基佳配伍的方法是可行的,验证实验表明,蟾蜍灵、华蟾蜍精、脂蟾毒配基佳配伍体外抑制癌细胞的作用与丝裂霉素相当,略好于组合中的每个单体.
-
蟾蜍灵对肝癌细胞SMMC 7721的细胞毒作用及生长相关基因表达的影响
为探讨蟾蜍灵的抗癌作用机理，以肝癌SMMC 7721细胞为靶细胞，应用噻唑蓝还原法检测细胞毒作用，双荧光染色法和DNA电泳技术检测细胞凋亡与坏死；免疫组织化学方法检测细胞生长相关基因p21waf1/cip1和增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白表达. 结果表明, 0.01 μmol*L-1及以上浓度蟾蜍灵对SMMC 7721细胞具有显著细胞毒作用，形态学和DNA片段化检测证实蟾蜍灵诱导的细胞死亡以凋亡为主；p21waf1/cip1在蟾蜍灵诱导下表达上调，同时PCNA的表达下降，两者呈负相关（P<0.01）. 提示蟾蜍灵通过上调p21waf1/cip1表达，下调PCNA表达，从而抑制肝癌细胞生长.
-
蟾蜍灵对食管癌ECA109细胞凋亡的影响及机制探讨
目的 观察蟾蜍灵对食管癌ECA109细胞凋亡的影响并探讨其机制.方法 MTT法检测蟾蜍灵对细胞的增殖抑制作用；流式细胞术分析细胞凋亡情况；Western-Blot法检测凋亡抑制蛋白survivin,caspeas-3蛋白的表达.结果 随着蟾蜍灵浓度及作用时间的增加,细胞存活率逐渐降低(P＜0.05),细胞凋亡率明显增高(P＜0.05)；随着药物浓度增加,survivin蛋白表达逐渐下降,同时活化caspase-3.结论 蟾蜍灵可诱导食管癌ECA109细胞凋亡,其机制可能与抑制survivin蛋白和活化caspase-3有关.
-
蟾蜍灵对人食管鳞癌EC9706细胞增殖及凋亡的影响
目的 观察蟾蜍灵对人食管鳞癌EC9706细胞增殖及凋亡的影响,探讨其对人端粒酶逆转录酶(hTERT)核-线粒体定位的影响.方法 采用不同浓度蟾蜍灵作用EC9706细胞,CCK-8法测定细胞增殖抑制并计算半数抑制浓度(IC50),PI染色流式细胞仪分析细胞周期,Hoechst 33342染色荧光显微镜观察凋亡核形态改变,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot法及多重免疫荧光标记激光共聚焦显微镜检测hTERT亚细胞定位及蛋白表达.结果 随作用时间及浓度的增加,蟾蜍灵可显著抑制人食管鳞癌EC9706细胞的增殖(P均＜0.01).100 nmol/L蟾蜍灵作用EC9706细胞时,随着作用时间的延长,G1期细胞逐渐减少,S及G2/M期细胞显著增加(P均＜0.05);细胞核发生典型的凋亡形态学改变,凋亡率逐渐增加(P＜0.01).hTERT可表达于EC9706细胞线粒体中,在蟾蜍灵诱导的凋亡过程中,细胞核hTERT的表达减少,而线粒体hTERT的表达则有所增加(P＜0.05).结论 蟾蜍灵可抑制EC9706细胞增殖,诱导其凋亡,细胞周期阻滞于S及G2/M期.hTERT除细胞核外还定位于线粒体中,并在蟾蜍灵诱导的凋亡过程中由细胞核向线粒体转位.
-
蟾蜍灵对白血病U937细胞生长抑制和凋亡诱导作用
蟾蜍灵是蟾蜍毒素的主要成分之一,蟾蜍毒素具有强心、麻醉、解毒、止痛、开窍、醒神等药理作用,已被广泛应用于临床.近年来发现,含有蟾蜍毒素的中药制剂在体外能抑制多种肿瘤细胞生长,诱导白血病细胞的分化.临床观察提示,含有蟾蜍毒素的中药制剂对肝癌、肺癌、胃癌、食管癌、白血病等具有明显的抑制作用.
