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HPLC法测定麝香保心片中华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的含量
建立麝香保心片中华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的含量测定方法.应用HPLC法,采用ODSC1s柱,0.5%磷酸二氢钾溶液一乙腈(45:55)(用磷酸调节pH值为3.2)为流动相,检测波长为296nm.结果:华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的平均加样回收率分别为97.54%和97.60%,RSD分别为1.43%和1.69%,精密度和重现性均良好.结论:本法操作简便、快速、准确,可用来控制样品的质量.
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复方蟾酥镇痛巴布膏剂体外透皮吸收研究
目的:探讨复方蟾酥镇痛巴布膏剂中药物透皮吸收的动力学模式及氮酮对药物透皮吸收的影响,以提高复方蟾酥镇痛巴布膏剂的疗效;方法:采有体外扩散池法,以复方蟾酥镇痛巴布膏剂中华蟾酥毒基、脂蟾毒配基的经皮渗透量为指标,模拟二者透皮吸收的动力学方程式.结果:加入氮酮能够显著增加华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的吸收量和吸收速度.氮酮加入量的不同,对二者的吸收速度和吸收量及动力学方程亦不同.结论:复方蟾酥镇痛巴布膏剂中加入5%的氮酮能够显著增加华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的吸收速度和吸收量
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温度、光照及pH对蟾酥提取液中指标成分稳定性的影响
目的:考察温度、光照及pH对蟾酥提取液中华蟾酥毒基、脂蟾毒配基、总蟾毒色胺稳定性的影响.方法:采用HPLC测定蟾酥提取液中华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的含量,检测波长296 nm,流动相乙腈-水(58∶42);利用UV测定蟾酥提取液中总蟾毒色胺的含量,检测波长559 nm.分别考察高温(60,40 ℃),强光照射[(4 500±500) Lx]及不同pH(40℃,pH分别为4.32,4.99,5.73,6.47,6.97,7.75)条件下蟾酥提取液放置0,5,10 d后华蟾酥毒基、脂蟾毒配基、总蟾毒色胺的含量变化.结果:60 ℃条件下放置10 d后3种指标成分降解率均＞5％;40℃及(4 500±500) Lx条件下华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的降解率均＜5％;总蟾毒色胺在上述条件下的降解率均＞5％.华蟾酥毒基、脂蟾毒配基、总蟾毒色胺分别在pH 5.73,6.47,6.47时降解慢.结论:蟾酥提取液中华蟾酥毒基和脂蟾毒配基受高温及强光照射的影响较小,总蟾毒色胺受高温及强光照射的影响较大;pH是影响蟾酥提取液中3种指标成分稳定性的主要因素,不同pH条件对3种指标成分的稳定性有不同程度的影响.
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高效液相色谱法测定心可宁胶囊中华蟾酥毒基、脂蟾毒配基的含量
用HPLC法测定心可宁胶囊中华蟾酥毒基、脂蟾毒配基的含量.用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;0.5%磷酸二氢钾溶液-乙腈(50:50)(用磷酸调pH值3.2)为流动相分离效果佳.平均回收率华蟾酥毒基为99.29%,RSD为1.47%;脂蟾毒配基为99.13%,RSD为1.65%(n=5).本法简单、灵敏、重复性好.
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正交法对蟾酥提取工艺影响研究
目的:采用正交法探索蟾酥佳提取工艺.方法:通过L9(34)正交试验法,以华蟾酥毒基和脂蟾毒配基为指标成分,考察乙醇浓度、提取时问、提取次数、提取温度对提取效果的影响.结果:各因素影响大小为:乙醇浓度A>提取次数C>提取时间B>提取温度D,乙醇浓度影响大,温度影响小.确定蟾酥佳醇提工艺为用80%乙醇在70℃下提取2次、每次90min.结论:乙醇浓度、提取次数、提取时间、提取温度对蟾酥醇提工艺存在一定的影响,特别是乙醇浓度,为蟾酥乙醇炮制工艺的深入研究提供依据和良好的基础.
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不同产地及蟾蜍品种来源蟾酥华蟾酥毒基和脂蟾毒配基测定与比较
目的:考察新的药源产地和动物品种对蟾酥质量的影响.方法:HPLC检测产自江苏、安徽、河南、内蒙、吉林的中华大蟾蜍,产自黑龙江、吉林的花背蟾蜍,产自四川的华西蟾蜍之蟾酥华蟾酥毒基和脂蟾毒配基含量.结果:从蟾酥毒基和脂蟾毒配基总量来看,来自于中华大蟾蜍(7％-12％)和花背蟾蜍(7％-8％)样本两种成分总含量绝大多数都达到的《中华人民共和国药典》标准(6％),华西蟾蜍含量较低(2％-4％);总含量以江苏高(11％-12％),其他地区次之(7％-9％);此外花背蟾蜍脂蟾毒配基与华蟾酥毒基比例明显高于中华大蟾蜍,而华西蟾蜍则相反.结论:在蟾酥采集中需考虑华蟾酥毒基和脂蟾毒配基含量的差别,以保证药物的质量和临床疗效.
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RP-HPLC法测定牛黄消炎片中华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的含量
牛黄消炎片是由牛黄、大黄、珍珠母、蟾酥、青黛、天花粉、雄黄共7味中药组成,具有清热解毒、消肿止痛的功效,用于咽喉肿痛、疔、痈、疮等疾病.由于处方中蟾酥为有毒药材,为保证制剂的安全有效,建立含量测定.华蟾酥毒基和脂蟾毒配基是该药的主要有效成分,故以华蟾酥毒基和脂蟾毒配基为指标进行含量测定,控制成品的质量.蟾酥的含量测定方法是在2000年版<中国药典>方法的基础上对其流动相的比例进行调整测定,方法简便,稳定,重现性好.
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HPLC法测定梅花点舌丹中华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的含量
目的 建立梅花点舌丹中药材蟾酥中华蟾酥毒基和脂蟾毒配基含量测定方法.方法 采用HPLC法,色谱柱为Hypersil ODS(250 nm×4.6 nm);流动相:乙腈-水(43.5:56.5);柱温:室温;流速:1.0 mL/min;检测波长为296 nm;进样量20 μL.结果 华蟾酥毒基和脂蟾毒配基在5.31～63.75 μg/mL、6.00～72.00 μg/mL范围内与峰面积积分值呈现良好线性关系,相关系数r分别为0.999 8和0.999 7,平均回收率分别为99.45%、99.39%,RSD分别为1.32%、0.55%(n=6).结论 该方法准确、重复性好,可有效控制该产品的质量.
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RP-HPLC法测定救心丸中华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的含量
目的建立救心丸中华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的高效液相色谱含量测定方法.方法Waters SymetryShield RP18(3.9 mm×250 mm,5 μm),流动相为乙腈-0.5 mol/L磷酸二氢钾溶液(用磷酸调节pH值至3.2)(42:58);柱温30℃;流速1.0 mL/min;检测波长为296 nm.结果华蟾酥毒基线性范围为0.0696～0.8352 μg,精密度试验RSD为0.5 3%,稳定性试验RSD为0.71%,重现性试验RSD为4.8 3%,回收率为101.86%,RSD为1.81%;脂蟾毒配基线性范围为0.1576～0.9456 μg,精密度试验RSD为0.15%,稳定性试验RSD为0.76%,重现性试验RSD为5.00%,回收率为102.07%,RSD为1.62%.结论本方法快速、简便、准确、重现性较好,结果可靠,可为救心丸的质量评价提供有效手段.
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高效液相色谱法测定小儿奇应丸中华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的含量
目的：建立高效液相色谱法测定小儿奇应丸中蟾酥的主要成分华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的含量测定方法,通过测定华蟾酥毒基和脂蟾毒配基含量对其质量进行控制；方法采用高效液相色谱法,选用色谱柱为Phenonmenex synergi Hydro-RP 80A (150 mm×4.60 mm,4μm),流动相为乙腈-水(45：55),柱温为25℃,流速为1.0 ml/min,检测波长为296 nm；进样量为10μl；结果华蟾酥毒基进样量在0.1527~1.2725μg范围内线性良好, r=0.9993,脂蟾毒配基进样量在0.1514~1.2615μg范围内线性良好, r=0.9992；华蟾酥毒基的平均加样回收率为100.09%(RSD=1.26%, n=6),脂蟾毒配基的平均加样回收率为101.42%(RSD=1.40%, n=6)。结论该方法简便准确,重现性好,可用于小儿奇应丸中华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的含量测定。
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基于均匀设计法对蟾酥中单体体外抗癌配伍研究
目的:优选蟾酥中3种单体(蟾蜍灵、华蟾蜍精、脂蟾毒配基)体外抗癌佳配伍.方法:采用均匀设计法分成7组给药,分别为丝裂霉素组及给药A～F组,分别作用于肺癌(H441)宫颈癌(Hela)和白血病(HL-60)细胞株,采用WST-8细胞计数试剂盒,评价对3种癌细胞的抑制作用,筛选蟾蜍灵、华蟾蜍精、脂蟾毒配基佳配伍.对佳配伍进行比较和验证试验.结果:与对照组比较,在肺癌(H441)和宫颈癌(Hela)细胞上A,B组抑制作用与丝裂霉素相当(P＞0.05),在白血病(HL-60)细胞上A组抑制作用于丝裂霉素相当(P＞0.05).经多元统计分析,蟾蜍灵、华蟾蜍精、脂蟾毒配基佳配伍组合为100,100,15 μmol·L-1.结论:应用均匀设计和体外抗癌作用评价相结合确定蟾酥中3种单体蟾蜍灵、华蟾蜍精、脂蟾毒配基佳配伍的方法是可行的,验证实验表明,蟾蜍灵、华蟾蜍精、脂蟾毒配基佳配伍体外抑制癌细胞的作用与丝裂霉素相当,略好于组合中的每个单体.
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蟾酥固体脂质纳米粒包封率测定
目的:考察超滤膜型号、吸附性、透过能力对蟾酥固体脂质纳米粒(SLN)包封率(EE)测定的影响,确定包封率测定方法.方法:分别选择不同截留相对分子质量超滤膜进行考察,优选适宜型号超滤膜,评价其对不同浓度SLN混悬液中药物的吸附性,并考察其对SLN的透过能力,综合评价超滤膜在蟾酥固体脂质纳米粒的包封率测定中的适应性.结果:截留相对分子质量为10 kDa的超滤膜测定所得药物包封率较高,华蟾酥毒基与脂蟾毒配基包封率分别为(92.62±1.22)％和(91.07±0.46)％；超滤膜对所测指标性成分基本无吸附,且可以有效截留SLN;采用优选的超滤膜测定方法,测得3批蟾酥SLN样品中CBG与RBG的包封率分别为(91.94±0.72)％和(92.38±0.65)％.结论:超滤膜孔径对SLN混悬液的包封率测定结果有较大影响,优选的超滤膜适用于蟾酥SLN混悬液包封率的测定.
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心灵丸质量标准修订研究
目的:建立心灵丸(蟾酥、人工麝香、冰片、体外培植牛黄、熊胆、人参、三七等)的质量标准.方法:采用显微鉴别处方中的珍珠;采用GC及TLC分别对处方中的人工麝香、冰片等进行定性鉴别;采用HPLC法测定华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的含量.结果:在GC图谱中可检测到与麝香酮对照品相同保留时间的色谱峰;在TLC图谱中可检出人参、三七等药材的特征斑点;华蟾酥毒基在0.0398～0.4776μg之间线性关系良好,r=0.9998,精密度试验RSD=0.3%(n=6),平均回收率为100.18%,(RSD=0.5%,n=6);脂蟾毒配基在0.0419～0.5026μg之间线性关系良好,r=0.9998,精密度试验RSD=0.6%(n=6),平均回收率为97.00%,(RSD=0.9%,n=6).结论:所采用的方法准确、可靠,可行性及重复性良好,能有效控制该制剂的质量.
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HPLC法测定益心丸中的华蟾酥毒基、脂蟾毒配基含量
目的:建立测定益心丸中的华蟾酥毒基、脂蟾毒配基含量的高效液相色谱分析方法.方法:采用HPLC法,Diamonsil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以0.5%磷酸二氢钾-乙腈(50:50)(用磷酸调节pH值为3.2)为流动相;流速为1.0 mL·min-1,检测波长为296 nm.结果:华蟾酥毒基、脂蟾毒配基在进样量分别为0.127～5.096μg和0.124～4.960 μg范围内线性关系良好,平均回收率分别为102.81%和98.83%,RSD分别为0.98%和0.42%.结论:本方法简便、准确、快速,可作为该制剂的质控方法.
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国产蟾酥药材质量综合评价研究
目的 综合考察国产蟾酥药材质量.方法 用HPLC测定14批蟾酥药材中华蟾酥毒基、脂蟾毒配基、蟾毒灵等7种指标成分含童,并考察样品中华蟾酥毒基、脂蟾毒配基、蟾毒灵等7种指标成分TLC鉴别和水分、总灰分、酸不溶灰分、醇浸出物等药材常规理化实验项目.结果 各样品中均可检测出7种指标成分的色谱峰,蟾酥药材指标成分含量和常规理化实验项目测定结果表明,不同产地蟾酥药材间品质差异较大.结论 本实验为蟾酥药材综合质量评价体系的建立提供理论和实验依据.
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脂蟾毒配基对人宫颈癌Hela裸鼠移植瘤生长的抑制作用
目的观察脂蟾毒配基对人宫颈癌Hela裸鼠移植瘤生长的抑制作用.方法于给药前、给药期间(15 d)及停药期间(6 d)每3 d测量肿瘤的长径及短径,并计算近似瘤体积,停药第6天取瘤称重并进行病理学观察.结果①高剂量脂蟾毒配基(15 mg/kg)有较强的急性神经毒性.②脂蟾毒配基对荷瘤鼠体重无明显影响.③高剂量脂蟾毒配基(15 mg/kg)对人宫颈癌Hela裸鼠移植瘤生长有明显的抑制作用,停药后没有明显的后续抑制作用,15 mg/kg的脂蟾毒配基与5 mg/kg平阳霉素对肿瘤增长的抑瘤强度相当.④脂蟾毒配基未发现明显的近期毒性.结论脂蟾毒配基对裸鼠的Hela宫颈癌移植瘤有明显的抑瘤作用,脂蟾毒配基是中药蟾酥抗癌的重要成分,但也发现该化合物有明显的急性神经毒性,进一步开发需要慎重.
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HPLC法同时测定救心丸中华蟾酥毒基、脂蟾毒配基含量
目的:建立救心丸中华蟾酥毒基、脂蟾毒配基的含量测定方法.方法:色谱柱:C18(250 mmx4.6mm,5μm);柱温:40℃;流动相:乙腈-0.5%磷酸二氢钾(pH=3.2)(50:50);流速:1.0 ml/min;检测波长:296 nm.结果:华蟾酥毒基在0.498～2.490μg范围内线性关系良好;脂蟾毒配基在0.570～2.850μg范围内线性关系良好.结论:本方法简便、准确,重复性好,可作为救心丸的质量控制方法.
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HPLC-MS法同时测定六神丸中9种蟾蜍二烯内酯类化合物
目的 建立HPLC-MS法同时测定六神丸中9种蟾蜍二烯内酯类化合物(和蟾蜍他灵、沙蟾毒精、远华蟾毒精、去乙酰华蟾毒它灵、蟾毒它灵、华蟾毒它灵、蟾毒灵、华蟾酥毒基和脂蟾毒配基)的方法.方法 采用ODS-2(250 mm× 4.6mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.15％磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱,体积流量1 mL/min,柱温40℃,检测波长296 nm.HPLC-MS联用的色谱条件与HPLC分离基本条件一致,流动相为乙腈-0.2％甲酸水溶液.通过电喷雾离子源,正离子模式扫描,对六神丸中9种蟾蜍二烯内酯类化合物进行分析鉴别.结果 9种蟾蜍二烯内酯类化合物均得到良好分离,线性关系良好(r≥0.999 6).加样回收率均在92％～105％,RSD＜5％.应用建立的HPLC-MS方法测定了10批六神丸中9种蟾蜍二烯内酯类化合物的量,分别为和蟾蜍他灵0.40～0.88 mg/g,沙蟾毒精0.32～0.83 mg/g,远华蟾毒精0.61～2.11 mg/g,去乙酰华蟾毒它灵0.15～0.32 mg/g,蟾毒它灵0.84～1.85 mg/g,华蟾毒它灵25.76～62.14 mg/g,蟾毒灵0.96～2.06 mg/g,华蟾酥毒基2.30～4.75 mg/g,脂蟾毒配基1.20～2.61 mg/g.结论 所建立的定量测定方法简便、快速、准确可靠,专属性强,可用于六神丸的质量控制.
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RP-HPLC法测定梅花点舌丸中脂蟾毒配基、华蟾毒配基的含量
目的建立梅花点舌丸中脂蟾毒配基、华蟾毒配基的含量测定方法.方法采用反相高效液相色谱法,使用C18柱,乙腈-0.5%KH2PO4溶液(50:50)为流动相,检测波长:296 nm.结果此方法线性关系良好,脂蟾毒配基的平均加样回收率为97.40%,RSD为2.22%.华蟾毒配基的平均加样回收率为97.78%,RSD为2.63%.结论方法简便、可靠,分离度较好,结果稳定,可用于梅花点舌丸的质量控制.
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蟾酥干燥炮制前后化学成分和药效学变化考察
目的 考察蟾酥Bufonis venenum鲜浆干燥炮制加工(日晒干燥、50℃真空干燥、50℃鼓风干燥、80℃鼓风干燥、冷冻干燥)前后化学成分及药效变化.方法 HPLC法和TLC法研究蟾酥不同干燥方式炮制前后化学成分的变化,MTT法测试不同炮制干燥品抑制5种不同肿瘤细胞株增殖的效果.结果 5种不同加工炮制方法所得蟾酥,性状有较大差异;化学成分的种类及含量没有明显差异;华蟾酥毒基和脂蟾毒配基含量之和都符合《中国药典》2015年版标准,大于6％;50℃和80℃鼓风干燥所得蟾酥具有比其他干燥方法更强的肿瘤细胞抑制效果.结论 日晒及50℃鼓风干燥法所得蟾酥符合《中国药典》要求的外观性状.真空干燥和冷冻干燥虽然颜色不符合《中国药典》的规定,但主要有效成分并未发生较大变化.
