首页 > 文献资料
-
ERK1/2通路及其介导多发性硬化发病的研究进展
丝裂原活化蛋白激酶1/2(ERK1/2)通路是第一个被发现的细胞信号转导通路,由Ras、Raf、MEK1/2和ERK1/2组成.ERK1/2通路激活后可以将细胞外信号从细胞膜转到细胞核,参与了细胞的多种生理病理功能,如细胞的生长、增殖、分化和凋亡等,并且与多种疾病的发病有关,包括多发性硬化(MS)和实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE).ERK1/2通路的激活可以引起星形胶质细胞、MG、T细胞、巨噬细胞等活化,释放多种炎性因子,引起髓鞘损伤,导致MS/EAE的发病.多项研究表明,通过抑制ERK1/2通路可以减少炎性因子的释放,减轻髓鞘损伤,改善MS/EAE的病情,为治疗MS药物的开发提供了重要的靶点.
-
Bufalin抑制食管癌TE13细胞迁移机制探讨
目的 蟾蜍灵(Bufalin)是中医抗癌药物蟾酥的有效成分之一,但其抗肿瘤的机制并不十分清楚.本研究通过分析不同浓度Bufalin对食管癌TE13细胞株迁移距离、MEK1/2及其活化形式P-MEK1/2和基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinase,MMP)表达的影响,初步探讨Bufalin抑制食管癌TE13细胞迁移能力的作用机制.方法 采用四甲基偶氮唑蓝[3-(4,5-dimethyhhiazol-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide,MTT]法测定细胞药物毒性,细胞划痕实验分别测量不同浓度(0、10、25、50和100 nmol/L)Bufalin处理组食管癌TE13细胞的迁移距离.蛋白质印迹法及免疫细胞化学法检测MEK1/2和P-MEK1/2蛋白的表达.逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测MMP-2、MMP-9 mRNA的表达情况.结果 MTT法结果显示,Bufalin药物大无毒浓度(TC0)为100 nmol/L.细胞划痕实验结果显示,不同浓度Bufalin处理组在划痕36 h后与对照组相比迁移的距离不同,随着Bufalin浓度的增加,细胞迁移距离下降,100 nmol/L迁移距离小(F=243.163,P＜0.01),Bufalin能有效抑制食管癌细胞迁移距离.蛋白质印迹法及免疫细胞化学检测结果显示,Bufalin对MEK1/2蛋白的表达无影响,但能显著抑制其活化形式P-MEK1/2的表达,并呈剂量依赖性,随Bufalin浓度的升高(0、10、25、50和100 nmol/L),P-MEK1/2相对表达量逐渐下降,分别为0.710±0.006、0.676±0.010、0.656±0.010、0.599±0.020和0.521±0.021,F=76.369,P＜0.01.P-MEK1/2阳性细胞数随着Bufalin浓度的升高而减少,分别为(80.330±1.905)％、(68.407±2.219)％、(67.297±1.797)％、(52.617±2.368)％和(26.97±2.912)％,F=243.348,P＜0.01.RT-PCR结果显示,随着Bufalin药物浓度的升高,MMP-2 mRNA相对表达量分别为0.772±0.010、0.725±0.019、0.663±0.015、0.582±0.019和0.519±0.019,F=112.990,P＜0.01;MMP-9 mRNA相对表达量分别为0.783±0.013、0.740±0.010、0.703±-0.006、0.601±0.017和0.531±0.010,均低于对照组,F=179.417,P＜0.01.结论 Bufalin可能通过下调MEK1/2的活性,从而抑制食管癌TE13细胞的迁移能力.
-
十子代平方影响小鼠MIN6细胞凋亡及MEK1/2、ERK1/2的表达
背景：胰岛细胞渐进凋亡与长期高糖高脂损伤密切相关。
目的：观察十子代平方对高糖高脂损伤的MIN6细胞凋亡和胰岛素分泌的作用，分析十子代平方对MIN6细胞的保护作用和凋亡相关机制。
方法：细胞实验以MIN6细胞株作为实验对象，设正常组、模型组、二甲双胍组、十子代平方-高、十子代平方-中、十子代平方-低。CCK-8试剂盒检测十子代平方对MIN6细胞活性的影响；ELISA法检测其对胰岛素分泌的影响；Annexin V-FITC&PI 双染法检测其对凋亡的影响，Western Blotting法检测MEK1/2、ERK1/2和p-ERK1/2的表达水平。
结果与结论：①十子代平方能显著改善MIN6细胞在高糖高脂损伤下的细胞活力(P<0.05)，减少细胞早期凋亡，增加高糖刺激后上清液中的胰岛素水平(P<0.05)，提高MEK1/2、ERK1/2和p-ERK1/2表达水平(P<0.05)；②结果说明，十子代平方能够提高高糖高脂损伤的胰岛MIN6细胞活力、减轻胰岛素分泌负荷、抑制MIN6细胞凋亡，从而保护MIN6细胞。 -
抑制ERK1/2通路激活改善大鼠心房纤维化和缝隙连接蛋白40重构
目的 探讨ERK1/2通路抑制剂U0126对盐酸异丙基肾上腺素(ISO)诱导的大鼠心房纤维化和缝隙连接蛋白40(Cx40)重构的影响.方法 将32只雄性SD大鼠随机等分为空白对照组、DMSO组、ISO[5 mg/(kg·d)]+DMSO组(模型组)和ISO[5 mg/(kg·d)]+U0126[0.5 mg/(kg· d)]+DMSO组(干预组).每组1次/d给予相关试剂,连续7d后处死大鼠并取心肌组织.用放射免疫法测血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)含量；H-E和Masson染色法观察心肌纤维化程度；免疫组化法测定磷酸化丝裂原活化蛋白激酶激酶1/2 (p-MEK1/2)、磷酸化细胞外信号调节激酶1/2( p-ERK1/2)以及Cx40的表达.结果 (1)空白对照组[(242.133±4.870) ng/L]与DMSO组[(239.412±1.795)ng/L]的AngⅡ含量差异无统计学意义,而模型组[(500.250±8.869)ng/L]和干预组[(498.695±9.340)ng/L]的AngⅡ含量较空白对照组与DMSO组均升高,差异有统计学意义(P均＜0.01).(2)空白对照组与DMSO组无心房纤维化,而干预组心房纤维化程度较模型组减弱(P＜0.01).(3)空白对照组与DMSO组中p-MEK1/2和p-ERK1/2的含量差异无统计学意义,模型组中两者含量较空白对照组与DMSO 组均增加(P均＜0.01),干预组中两者含量与空白对照组和DMSO组比较差异均无统计学意义,而与模型组比较差异有统计学意义(P＜0.01).(4)空白对照组与DMSO组中Cx40含量差异无统计学意义且呈线性分布于心肌细胞闰盘处,模型组中Cx40含量较空白对照组和DMSO组均减少(P均＜0.01)且分布无规律性,而干预组中Cx40含量与空白对照组和DMSO组比较差异均无统计学意义且部分呈线性分布于心肌细胞闰盘处；干预组中Cx40含量减少程度较模型组减弱(P＜0.01),且部分呈线性分布于心肌细胞闰盘处.结论 心肌组织中AngⅡ含量长期升高可能参与了心房纤维化的形成和Cx40重构,U0126通过抑制ERK1/2通路激活可有效改善心房纤维化程度和Cx40重构.
-
贝母素乙对肺纤维化大鼠肺组织 MEK1／2、ERK1／2及其磷酸化的影响
目的：探讨贝母素乙对博莱霉素致肺纤维化大鼠肺组织 MEK1／2、ERK1／2及其磷酸化的影响。方法大鼠麻醉后，经气管软骨环间隙向心端穿刺，注入博莱霉素5 mg／kg 建立大鼠肺纤维化模型，假手术组大鼠在同样麻醉条件下气管内注入等容积生理盐水。术后第2天开始每天灌胃给药，假手术组和模型组给予蒸馏水，地塞米松组给予等容积地塞米松蒸馏水溶液，贝母素乙 A 组、B 组分别给予等容积贝母素乙5、2．5 mg／kg 蒸馏水溶液。灌胃28 d 后，麻醉并颈动脉取血后处死大鼠，肺组织固定，包埋切片，常规脱蜡，行免疫组化 SABC 法检测肺组织 MEK1／2、ERK1／2水平，Western blot 法检测 p-MEK1／2、p-ERK1／2水平。结果贝母素乙可显著降低肺纤维化大鼠的肺组织 ERK1／2、MEK1／2水平（P ＜0．01），与地塞米松作用相似（P ＞0．05），贝母素乙 A 组、B 组之间比较未见明显差异（P ＞0．05）。贝母素乙可以显著降肺纤维化大鼠的肺组织 p-MEK1／2、p-ERK1／2水平（P ＜0．01），较地塞米松更为显著（P ＜0．01），贝母素乙 B 组较贝母素乙 A 组更为显著（P ＜0．01）。结论贝母素乙减轻博莱霉素致肺纤维化大鼠的 MEK1／2、ERK1／2及其磷酸化水平可能是其抗纤维化的作用机理之一。
-
胰腺癌细胞系PC1.0、PC-1、MEK1/2仓鼠模型的建立及成瘤特性的比较
目的:观察不同肿瘤细胞系在仓鼠体内种植生长的差异,阐明不同胰腺癌细胞系的侵袭转移特性.方法:胰腺癌细胞系PC1.0、PC-1、MEK1/2行仓鼠胰腺原位种植、腹腔注射,建立不同的胰腺癌细胞侵袭动物模型.结果:高侵袭转移PC1.0组在肿瘤组织生长大小、腹水出现情况、肿瘤腹腔转移情况明显高于其他3组细胞;MEK1基因敲减组在胰腺种植、腹腔种植肿瘤组织生长比MEK2基因敲减组生长减小,腹膜及肝脏转移及周围脏器侵袭比MEK2基因敲减组增多.结论:PC1.0肿瘤生长旺盛且转移多;PC-1肿瘤生长一般且转移少;MEK1基因敲减肿瘤生长受抑制,但侵袭转移正常;MEK2基因敲减肿瘤生长不受抑制,但侵袭转移受抑制.
-
新疆哈萨克族食管癌c-myc的表达及其调控机制
目的 本研究通过检测新疆哈萨克族食管癌组织中MEK1/2、ERK1/2、JAK1/2、STAT3和c-myc的表达,探讨调控c-myc表达的主要信号传导通路.方法 对52例新疆哈萨克族食管癌组织及远端正常组织,采用RT-PCR检测c-myc的表达,并在c-myc差异表达的标本中检测MEK1/2、ERK1/2、JAK1/2及STAT3的表达水平.结果 c-myc在肿瘤组织中显著高表达(P＜0.05).其中,ERK2和STAT3均与c-myc的表达呈正相关(P＜0.05),而JAK1/2和ERK1则与c-myc的表达无关；但ERK2与MEK1、MEK2和STAT3的表达呈正相关(P＜0.05)；此外,ERK1与MEK1和MEK2的表达也呈正相关(P＜0.05).结论 在新疆哈萨克族食管癌发生发展过程中,可能通过MEK/ERK2/STAT3信号传导通路调控c-myc,而JAK/STAT3信号途径可能不是激活c-myc的主要途径.
-
苦参碱对K-ras基因突变型结肠癌细胞株增殖的抑制作用及机制研究
【目的】观察苦参碱对K-ras基因突变型结肠癌SW480细胞增殖的抑制作用及机制。【方法】以不同浓度苦参碱干预K-ras基因突变型人结肠癌SW480细胞，采用新型四唑氮盐（MTS）做比色分析测定细胞增殖，流式细胞技术（FCM）检测细胞凋亡，细胞划痕法观察细胞侵袭转移能力的变化， Western blotting方法检测细胞内丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路下游关键激酶MEK1/2蛋白的表达。【结果】与空白对照组比较，0.125~1 mg/mL浓度的苦参碱能显著抑制SW480细胞增殖，促进细胞凋亡，有效抑制结肠癌细胞的移行，降低MEK1/2蛋白的表达（P＜0.05），其作用强度随药物浓度增加有升高的趋势。【结论】苦参碱可能通过下调MAPK信号通路下游MEK1/2蛋白的表达，有效抑制SW480细胞的增殖和移行，并促进其凋亡。
-
MEK1/2抑制剂PD98059对ox-LDL诱导HUVEC损伤的保护机制及对LOX-1表达影响
目的 探讨MEK1/2抑制剂PD98059对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的保护机制及对低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)表达的影响.方法 使用ox-LDL诱导HUVEC损伤模型并进行PD98059处理,分阴性对照组、ox-LDL组、阳性对照组和PD98059+OX-LDL组;检测抑制MEK1/2对ox-LDL诱导HUVEC损伤的影响.结果 与阴性对照组比较,ox-LDL组LOX-1、pMEK1/2、RhoA、ROCK1、ROCK2、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)的释放增多,细胞增殖能力及培养液中一氧化氮(NO)水平降低(P＜0.05);与ox-LDL组比较,阳性对照组和PD98059+ox-LDL组LOX-1、pMEK1/2、RhoA、ROCK1、ROCK2、TNF-α和IL-6的释放减少,细胞增殖能力及NO水平增高(P＜0.05).结论 PD98059抑制MEK1/2信号通路可降低HUVEC中LOX-1的表达以减轻ox-LDL诱导的内皮细胞损伤.
