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HPLC同时测定皖贝止咳滴丸中3种有效成分的含量
目的:建立HPLC同时测定皖贝止咳滴丸中贝母素甲、贝母素乙及异贝母素甲含量的方法.方法:采用CAPCELL PAK C18色谱柱,柱温35℃,流动相乙腈-0.1％三乙胺溶液(70: 30),流速1.0 mL·min-1;ELSD参数为漂移管温度95℃,载气流速2.2 mL· min-1.结果:贝母素甲、贝母素乙及异贝母素甲分别在34.33 ～ 343.3,30.17 ～ 301.7,82.11 ～821.1 mg·L-1线性关系良好;贝母素甲的平均加样回收率为97.55％,RSD 1.3％,贝母素乙的平均加样回收率为97.99％,RSD 1.8％,异贝母素甲的平均加样回收率为98.42％,RSD 1.4％.结论:该法简便、准确、可靠,可作为皖贝止咳滴丸质量控制的方法.
关键词： 皖贝止咳滴丸 贝母素甲 贝母素乙 异贝母素甲 高效液相色谱-蒸发光散射检测法 -
HPLC-ELSD法测定皖贝止咳胶囊中贝母素甲和贝母素乙的含量
目的:建立皖贝止咳胶囊中贝母素甲和贝母素乙的含量测定方法.方法:采用迪玛C18柱,乙腈-0.1%三乙胺溶液(70:30)为流动相;ELSD参数:漂移管温度:93℃,载气流量:2.2 mL·min-1.结果:贝母素甲的回收率为97.35%,RSD=1.24%(n=5);贝母素乙的回收率为97.46%,RSD=1.27%(n=5).结论:本法简便、快速、重复性好,可作为制剂的定量分析方法.
关键词： 皖贝止咳胶囊 贝母素甲 贝母素乙 高效液相色谱-蒸发光散射检测器 -
薄层扫描法测定皖贝精胶囊贝母素甲的含量
皖贝精胶囊是我所研制的二类止咳祛痰新药,已申报生产,是由皖贝母[1](安徽贝母Fritillariaan huiensis)提取物制成,皖贝母为1990年批准的一类新药(中药材),其主要活性成份为异甾生物碱,经分离鉴定为贝母素甲,贝母素乙,异贝母甲素,贝母辛[1].从皖贝母中尚分得二萜成分ent-kaur-15-en-17-ol.ent-kaum-16β,17-diol和β-谷甾醇及胡罗卜甙[2],此外分得腺苷[3]也具有一定的活性.该制剂主要有效成分为总生物碱,贝母素甲是其主要成分之一,为了控制产品质量,我们选定总生物碱[4]和贝母素甲为控制指标.在参考文献的基础上[5],本文探讨了贝母素甲薄层扫描定量方法,结果令人满意.
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贝母素甲、贝母素乙对4T1乳腺癌细胞炎性微环境的干预调节作用
目的:研究贝母素甲、乙对4T1乳腺癌细胞的干预抑制及对其肿瘤炎性微环境的调节作用.方法:CCK-8检测贝母素甲、乙对4T1细胞抑制率;ELISA法检测炎性相关因子TGF-β、VEGF、MMP-9、MCP-1的分泌量;RT-PCR检测TGF-β、VEGF、MMP-9mRNA表达情况.结果:贝母素甲、乙对4T1乳腺癌细胞具有抑制作用;贝母素甲、乙可分别下调4T1细胞TGF-β,VEGF、MCP-1及MMP-9分泌量(P ＜0.05,P＜0.01);贝母素甲、乙可降低4T1细胞TGF-β、VEGF等mRNA表达(P ＜0.05,P＜0.01).结论:贝母素甲、乙对4T1乳腺癌细胞具有显著抑制作用,可通过抑制炎性相关因子的释放调节微环境.
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HPLC-ELSD测定乌贝益胃胶囊中贝母素甲和贝母素乙含量
目的 建立高效液相色谱-蒸发光散射检测器法(HPLC-ELSD)同时测定乌贝益胃胶囊中贝母素甲和贝母素乙含量的方法,并对10批样品进行考察,制定含量限度.方法 采用HPLC-ELSD,色谱柱为Eclipse XDB C18(150mm×4.6mm,5 μm),流动相为乙腈-水-二乙胺(65∶35∶0.05),柱温为30℃,流速为1.0 mL/min. ELSD参数:漂移管温度为80℃,载气流速为2.5 L/min.结果 贝母素甲和贝母素乙进样量分别在0.294 ～2.944 μg、0.424～4.240 μg范围内与各自峰面积的对数值呈线性关系,平均加样回收率分别为98.13％ (RSD=1.02％,n=6)、98.38％ (RSD =0.92％,n=6).结论 本方法准确可靠,重复性好,为乌贝益胃胶囊质量标准的制定提供了依据.
关键词： 高效液相色谱-蒸发光散射检测器 乌贝益胃胶囊 贝母素甲 贝母素乙 含量测定 -
HPLC-ELSD测定平贝母中贝母素甲的含量
平贝母是百合科植物平贝母Fritillaria ussuriensis Maxim.的干燥鳞茎,具有清热润肺、化痰止咳的功能,其含有的贝母类生物碱是贝母止咳化痰作用的主要有效成分.贝母类生物碱传统的定量方法常采用比色法、两相滴定法、非水滴定法等3种方法均有一定的局限性;采用薄层色谱法、反相离子对高效液相色谱法、柱前衍生化法、气相色谱法对贝母素甲、贝母素乙进行定量,存在前处理步骤多,排除干扰困难等不足之处.ELSD是一种质量型检测器,对样品中贝母素甲进行含量测定,分离度好,样品制备简便,重复性好,适于贝母类药材的质量控制.
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中药提取物贝母素乙对人结肠癌HCT-116细胞基因表达的影响
目的 观察中药提取物贝母素乙对人结肠癌HCT-116细胞的可能作用途径.方法 取人结肠癌HCT-116细胞接种于6孔板,每孔1ml共计2000细胞,设对照组和贝母乙素组,每组3个平行标本,贝母素乙组中每孔加入贝母素乙200 μg,终工作浓度200 μg/ml,对照组加入等体积二甲基亚砜,药物处理后72h吸出培养基,进行总RNA提取.应用基因芯片技术检测两组的差异基因表达谱,并对差异基因进行GO、KEGG富集分析和聚类分析.结果 共筛选出差异基因37个,其中显著上调基因共5个,其余为下调基因共32个(差异倍数≥2,P＜0.05).GO分析主要影响通路集中在生物学过程中的热生成调控、运动行为调控、尿嘧啶核苷代谢过程、肾上腺素能受体信号通路的调控、脂肪组织代谢的调控和G蛋白偶联受体信号通路的调控;分子功能方面的肾上腺素能受体结合活性和尿嘧啶核苷磷酸化酶活性.KEGG富集分析主要影响通路集中在药物代谢酶、嘧啶代谢、酮体合成和降解、维生素B6代谢、核糖体等方面.聚类分析结果显示,贝母素乙组相对对照组上调基因中RPL和PHLDA1两群联系较为紧密,在下调基因中UPP1与ARRDC3两群联系较为紧密.结论 贝母素乙能显著影响结肠癌HCT-116细胞中的嘧啶代谢通路,抑制其细胞增殖,促进其能量代谢.
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HPLC-ELSD法测定浙贝母中主要生物碱的含量
目的利用HPLC-ELSD测定贝母类药材中的贝母素甲和贝母素乙.方法 XTerra RP18色谱柱(150 mm×3.9 mm ID, 5 μm),流动相为乙腈-10 mmol·L -1 NH4HCO3(浓氨水调至pH 10.10)=A∶ B系统,梯度洗脱,以ELSD检测.结果贝母素甲在1.09-4.36 μg,贝母素乙在1.04-4.16 μg与峰面积的对数值呈线性关系,回收率分别为98.96%(n=4),RSD 1.01%;98.40%(n=4),RSD 2.63%.结论本方法能够很好地测定浙贝母药材中的主要生物碱贝母素甲、贝母素乙,可用于浙贝母药材的质量控制.
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痰咳舒糖浆质量标准研究
目的：制订痰咳舒糖浆的质量标准。方法采用薄层色谱法鉴别川贝母；采用紫外可见分光光度法(UV-VIS)测定贝母素乙的含量。结果薄层斑点清晰，阴性样品无干扰，贝母素乙在0.05~0.35 mg呈良好的线性关系，平均回收率为93.41%。RSD=2.23%。结论该方法准确、重复性好，可有效控制本制剂的质量。
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HPLC-MS测定癃闭康泰片中贝母素甲、贝母素乙的含量
目的建立癃闭康泰中贝母素甲、贝母素乙的高效液相色谱-质谱联用含量测定法.方法癃闭康泰片经碱化,用氯仿-甲醇(4:1)提取生物碱有效部位,提取液浓缩,残渣用甲醇溶解后,进行高效液相色谱-质谱测定.色谱柱为Agilent Zorbax ex-tend C18(2.1 mm×100 mm,5 μm);流动相为乙腈和10 mmol·L-1甲酸铵(pH 8.0),梯度洗脱(0～15 min:乙腈30%～55%;15～25min乙腈55%);流速0.2 mL·min-1;柱温30℃.质谱条件为电喷雾电离源(ESI),以选择性正离子方式检测,贝母素甲和贝母素乙的选择性检测离子分别为m/z 432.4和m/z 430.4.结果贝母素甲和贝母素乙的的线性范围均为0.01～10 mg·L-1,相关系数均大于0.999,检测限均为0.45 μg稬-1,方法回收率均大于95%,日内日间精密度(RSD)均小于5%.结论本方法专属性强,灵敏度高,线性关系良好,操作简便,适用于癃闭康泰中贝母素甲、贝母素乙的含量测定.
关键词： 高效液相色谱-质谱联用 贝母素甲 贝母素乙 癃闭康泰片 -
UPLC-Q-TOF-MS测定治咳川贝枇杷滴丸中6种有效成分的含量
目的 建立同时测定治咳川贝枇杷滴丸中6种有效成分(鸟苷、贝母素乙、桔梗皂苷D、桔梗皂苷D3、齐墩果酸和熊果酸)含量的超高压液相色谱串联四级杆飞行时间质谱联用(UPLC-Q-TOF-MS)的检测方法.方法 采用Waters Acquity BEHC18色谱柱(2.1 mm× 100 mm,1.7μm),流动相为乙腈-甲酸-水体系梯度洗脱,流速为0.4 mL· min-1,PDA检测190 ～400 nm扫描;进样量:2.0 μL.结果 6种成分在一定范围内均呈现良好线性,r均大于0.9996;精密度、重复性和稳定性良好；加样回收率在99%～ 101％之间.结论 所建立的方法简便、准确、快速、重复性好,可用于治咳川贝枇杷滴丸中鸟苷、贝母素乙、桔梗皂苷D、桔梗皂苷D3、齐墩果酸和熊果酸6个有效成分的含量测定.
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HPLC-ELSD测定浙贝母中贝母素甲、贝母素乙的含量
目的建立HPLC-ELSD测定浙贝母中贝母素甲、贝母素乙含量的方法,并对市售17批样品进行考察,制定含量限度.方法色谱柱:Agilent Hypersil BDS-C18(4.0mm×250 mm,5μm);流动相:乙腈-水-二乙胺(70:30:0.03),流速:0.8 mL·min-1;ELSD参数:漂移管温度为85℃,载气流速为2.2 L·min-1.结果贝母素甲、贝母素乙线性范围分别为47.02～1 003,46.92～1001 mg·L-1,平均回收率分别为102.7%,98.7%,RSD分别为2.1%,2.5%(n=6).通过市售17批样品中贝母素甲、贝母素乙含量的测定,制定了不同规格浙贝母的含量限度.结论此法简便,快捷,结果可靠,可用于浙贝母的质量评价,为2005年版药典中浙贝母质量标准的修订提供了依据.
关键词： 高效液相色谱-蒸发光散射检测器 浙贝母 贝母素甲 贝母素乙 -
贝母素乙对放射性肺损伤大鼠肺组织水通道蛋白的影响
目的 研究贝母素乙对肺损伤大鼠水通道蛋白AQP-1、AQP-5的影响,阐明贝母素乙治疗肺损伤的机制.方法 将大鼠采用数字法随机分为4组:正常组(蒸馏水1ml/100g体重)10只,模型组(蒸馏水1ml/100g体重)12只、地塞米松组(等容积地塞米松蒸馏水溶液)12只、贝母素乙组(等容积贝母乙素蒸馏水溶液)12只,组雌雄各半.6MV高能X线直线加速器15Gy/(3F·3W)照射,建立大鼠全肺放射性肺损伤模型.肺组织行HE染色,观察肺泡炎症程度.采用放射免疫法检测放射性肺损伤大鼠肺组织中AQP-1、AQP-5含量,荧光定量RT-PCR分析AQP-1、AQP-5 mRNA表达.结果 贝母素乙可增高放射性肺损伤大鼠肺组织AQP-1、AQP-5水平,调节AQP-1、AQP-5 mRNA表达.结论 贝母素乙具有调节AQP-1、AQP-5的作用,这可能是治疗放射性肺损伤作用机制的关键.
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HPLC-ELSD法测定清肺抑火丸中贝母素甲、贝母素乙的含量
目的 建立高效液相色谱- 蒸发光散射检测法测定清肺抑火丸中贝母素甲、贝母素乙含量的方法.方法 采用Acclaim 120-C18 色谱柱,柱温30℃;乙腈-0.03% 二乙胺溶液(65:35)为流动相,流速为1.0mL/min;蒸发光散射检测器检测,漂移管温度为85℃,载气压力30psi.结果 在选定的色谱条件下,分别以贝母素甲、贝母素乙峰面积的常用对数(Y)对浓度的常用对数(X)进行线性回归,回归方程分别为Y1=1.5548X1+2.8331(r ＝ 0.9998)、Y2=1.3907X2+3.0166(r ＝ 0.9997),线性范围分别为30.4～136.8μg/mL、5～35μg/mL;贝母素甲和贝母素乙的平均回收率分别为102.0%、102.2%,方法精密度(RSD,n=6)分别为0.83%、0.80%.结论 该法可用于清肺抑火丸中贝母素甲、贝母素乙的含量测定.
关键词： 清肺抑火丸 贝母素甲 贝母素乙 高效液相色谱-蒸发光散射检测法 含量测定 -
硫磺熏蒸对浙贝母中贝母素甲和贝母素乙在大鼠体内药动学的影响
目的 采用液相-质谱联用(LC-MS/MS)分析硫磺熏蒸(硫熏)对浙贝母中贝母素甲、贝母素乙在大鼠体内药动学的影响.方法 SD大鼠分别ig给予硫熏、鲜切浙贝母提取物(生药剂量15 g/kg),采用LC-MS/MS技术检测贝母素甲和贝母素乙的血药浓度,并用3P97软件计算药动学参数.结果 硫熏浙贝母中贝母素甲和贝母素乙的主要药动学参数:达峰浓度(Cmax)分别为(66.40±4.65)、(146.72±10.88) ng/mL,药时曲线下面积(AUC0～t)分别为(181.79±7.85)、(457.38±58.81) ng.h/mL;鲜切浙贝母中贝母素甲和贝母素乙的主要药动学参数:Gmax分别为(186.37±18.80)、(227.65±7.01) ng/mL,AUC0～t分别为(197.70±18.69)、(566.16±41.55) ng.h/mL.硫熏浙贝母组大鼠体内贝母素甲、贝母素乙的Cmax、AUC0～t明显低于鲜切浙贝母组.结论 硫熏降低浙贝母中贝母素甲、贝母素乙的血药浓度,影响浙贝母中主要生物碱贝母甲素和贝母乙素的药动学行为.
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5种生物碱胃癌多药耐药逆转剂的筛选及机制研究
目的 研究骆驼蓬碱、去氢骆驼蓬碱、贝母素甲、贝母素乙和氧化苦参碱对肿瘤细胞多药耐药性(MDR)的逆转作用及机制.方法 以胃癌亲本细胞系SGC-7901和MDR细胞系SGC-7901/VCR为细胞模型,采用MTT法检测上述5种生物碱的细胞毒活性及对MDR的逆转效果；用流式细胞仪检测MDR逆转效果好的贝母素乙对肿瘤细胞内阿霉素(ADR)蓄积的影响；Western blotting法检测P-糖蛋白(P-gp)的表达；Hoechst荧光染色和细胞免疫荧光法检测贝母素乙诱导SGC-7901/VCR细胞凋亡情况.结果 骆驼蓬碱、去氢骆驼蓬碱、贝母素甲、贝母素乙和氧化苦参碱均能不同程度地抑制SGC-7901和SGC-7901/VCR细胞的增殖,在非毒剂量下贝母素乙能够显著提高SGC-7901/VCR细胞对ADR的敏感性及细胞内ADR的浓度,降低P-gp表达.贝母素乙联合5-氟尿嘧啶(5-FU)给药可诱导SGC-7901/VCR细胞凋亡,凋亡细胞cleaved caspase-3呈高表达.结论 贝母素乙具有作为胃癌MDR逆转剂的潜力,其逆转耐药的机制可能与下调P-gp表达和诱导细胞凋亡有关.
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贝母素乙增强阿霉素对胃癌多药耐药裸鼠移植瘤的抑制作用及其机制研究
目的 研究贝母素乙逆转胃癌细胞多药耐药性(MDR),增强化疗药物对胃癌多药耐药裸鼠移植瘤的抑制作用,探讨其作用机制.方法 制备胃癌耐药SGC7901/VCR细胞株裸鼠皮下移植瘤模型,随机分组后,ip给药,每2天给药1次,共给药6次.治疗期间观察裸鼠体质量,游标卡尺测量移植瘤体积.治疗结束后处死裸鼠,称取肿瘤质量,计算抑瘤率;Western blotting检测药物治疗后移植瘤耐药相关蛋白P-糖蛋白(P-gp)、Cleaved Caspase-3表达水平.结果 治疗期间联合用药组移植瘤体积小于模型组,差异显著(P＜0.01).治疗结束后处死裸鼠,称取移植瘤的质量,联合用药组移植瘤质量和抑瘤率显著低于模型组(P＜0.05).Western blotting结果显示联合用药组P-gp表达水平较模型组降低,Cleaved Caspase-3表达升高.结论 贝母素乙可以增强胃癌耐药细胞移植瘤对阿霉素的敏感性,能够显著抑制胃癌耐药移植瘤的生长,其机制可能与降低肿瘤组织中P-gp表达和升高Cleaved Caspase-3的表达相关.
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UPLC-MS/MS方法同时测定百咳宁颗粒中6种主要有效成分
目的 建立UPLC-MS/MS方法同时测定百咳宁颗粒中6种主要有效成分(靛玉红、贝母素甲、贝母素乙、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C).方法 百咳宁颗粒经氯仿-甲醇溶剂索氏提取后进样,采用正负离子切换的多反应监测(MRM)模式同时测定百咳宁颗粒中的靛玉红,2种贝母素和3种银杏内酯类成分.色谱柱为Inertsutain C18 (75 mm×3.0mm,2 μm)柱,流动相为甲醇-乙腈-2 mmol/L乙酸铵水溶液,梯度洗脱,分析时间为6 min.结果 所测6种主要有效成分在测定浓度范围内线性关系良好,r均大于0.995 8;精密度、重复性和稳定性良好;平均加样回收率为96.5％～105.1％,RSD≤4.2％.结论 本法简单快捷、灵敏度高、专属性好,可用于百咳宁颗粒中6中主要有效成分的定量控制,除靛玉红外,其他5种成分均为处方中首次测定,百咳宁颗粒中银杏内酯类成分的量较低.
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HPLC-ELSD法测定通络散结胶囊中贝母素甲和贝母素乙的含量
目的:建立HPLC-ELSD法同时测定通络散结胶囊中贝母素甲和贝母素乙的含量.方法:采用C18柱(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱；流动相为乙腈-0.1％三乙胺(70:30)；流速1.0mL/min;柱温:30℃;ELSD检测器:漂移管温度:100℃,载气流量:1.8mL/min.结果:贝母素甲线性范围为22.7～227μg/mL,r=0.9992,平均回收率为97.92％,RSD=1.34％;贝母素乙线性范围为23.9～239μg/mL,r=0.9991,平均回收率为97.75％,RSD=1.74％.结论:本法简便、快速、重复性好,可作为通络散结胶囊的定量分析方法.
关键词： 通络散结胶囊 高效液相色谱法-蒸发光散射检测器 贝母素甲 贝母素乙 -
浙贝提取物固体分散体的制备及溶出特性研究
目的：制备浙贝提取物固体分散体，考察其中贝母素甲及贝母素乙的溶出效果，从而确定制备的佳方法和佳比例。方法：选择聚乙二醇6000（PEG6000）与聚乙烯吡咯烷酮（PVP K30）两种载体材料，分别采用熔融法和溶剂法制备浙贝提取物固体分散体；通过比较提取物、固体分散体的溶出性能，确定佳工艺。结果：使用HPLC-ELSD法测定贝母素甲及贝母素乙的溶出量，结果准确、可靠、稳定。制备成固体分散体能显著提高贝母素甲及贝母素乙的体外溶出速度；PEG6000作为载体的浙贝提取物固体分散体溶出速度快于PVP K30为载体的浙贝提取物固体分散体。结论：以PEG6000为载体，采用熔融法制备的药物/载体比例为1∶6的固体分散体能显著提高浙贝提取物中贝母素甲及贝母素乙的溶出速率。
关键词： 浙贝提取物固体分散体 贝母素甲 贝母素乙 溶出特性
