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浅析不同来源贝母类药材在中成药中的质量控制
目前,药材市场中贝母类药材有川贝母、浙贝母、平贝母等多种贝母,容易导致混用、错用.因此,作者针对2010年版药典中贝母类药材的来源、检测指标及测定方法、所含生物碱类成分及其含量等方面进行综述.结果表明:2010年版药典中所收载的贝母的来源各不相同,性味归经及功能主治各有侧重.所含成分虽均多为生物碱类成分,但川贝母和伊贝母中所含特征生物碱成分为西贝母碱,平贝母和浙贝母多以贝母素甲、贝母素乙为对照进行薄层检查及含量测定.且贝母类药材中所含生物碱的量也各不相同.结论:控制中成药中贝母类药材的质量时应依据不同来源贝母类药材各自的特征性成分、含量高低相应的制定薄层鉴别、含量测定等质量标准,使制剂的质量标准更加准确且具有针对性.
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HPLC同时测定皖贝止咳滴丸中3种有效成分的含量
目的:建立HPLC同时测定皖贝止咳滴丸中贝母素甲、贝母素乙及异贝母素甲含量的方法.方法:采用CAPCELL PAK C18色谱柱,柱温35℃,流动相乙腈-0.1％三乙胺溶液(70: 30),流速1.0 mL·min-1;ELSD参数为漂移管温度95℃,载气流速2.2 mL· min-1.结果:贝母素甲、贝母素乙及异贝母素甲分别在34.33 ～ 343.3,30.17 ～ 301.7,82.11 ～821.1 mg·L-1线性关系良好;贝母素甲的平均加样回收率为97.55％,RSD 1.3％,贝母素乙的平均加样回收率为97.99％,RSD 1.8％,异贝母素甲的平均加样回收率为98.42％,RSD 1.4％.结论:该法简便、准确、可靠,可作为皖贝止咳滴丸质量控制的方法.
关键词： 皖贝止咳滴丸 贝母素甲 贝母素乙 异贝母素甲 高效液相色谱-蒸发光散射检测法 -
HPLC-ELSD法测定皖贝止咳胶囊中贝母素甲和贝母素乙的含量
目的:建立皖贝止咳胶囊中贝母素甲和贝母素乙的含量测定方法.方法:采用迪玛C18柱,乙腈-0.1%三乙胺溶液(70:30)为流动相;ELSD参数:漂移管温度:93℃,载气流量:2.2 mL·min-1.结果:贝母素甲的回收率为97.35%,RSD=1.24%(n=5);贝母素乙的回收率为97.46%,RSD=1.27%(n=5).结论:本法简便、快速、重复性好,可作为制剂的定量分析方法.
关键词： 皖贝止咳胶囊 贝母素甲 贝母素乙 高效液相色谱-蒸发光散射检测器 -
薄层扫描法测定皖贝精胶囊贝母素甲的含量
皖贝精胶囊是我所研制的二类止咳祛痰新药,已申报生产,是由皖贝母[1](安徽贝母Fritillariaan huiensis)提取物制成,皖贝母为1990年批准的一类新药(中药材),其主要活性成份为异甾生物碱,经分离鉴定为贝母素甲,贝母素乙,异贝母甲素,贝母辛[1].从皖贝母中尚分得二萜成分ent-kaur-15-en-17-ol.ent-kaum-16β,17-diol和β-谷甾醇及胡罗卜甙[2],此外分得腺苷[3]也具有一定的活性.该制剂主要有效成分为总生物碱,贝母素甲是其主要成分之一,为了控制产品质量,我们选定总生物碱[4]和贝母素甲为控制指标.在参考文献的基础上[5],本文探讨了贝母素甲薄层扫描定量方法,结果令人满意.
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贝母素甲、贝母素乙对4T1乳腺癌细胞炎性微环境的干预调节作用
目的:研究贝母素甲、乙对4T1乳腺癌细胞的干预抑制及对其肿瘤炎性微环境的调节作用.方法:CCK-8检测贝母素甲、乙对4T1细胞抑制率;ELISA法检测炎性相关因子TGF-β、VEGF、MMP-9、MCP-1的分泌量;RT-PCR检测TGF-β、VEGF、MMP-9mRNA表达情况.结果:贝母素甲、乙对4T1乳腺癌细胞具有抑制作用;贝母素甲、乙可分别下调4T1细胞TGF-β,VEGF、MCP-1及MMP-9分泌量(P ＜0.05,P＜0.01);贝母素甲、乙可降低4T1细胞TGF-β、VEGF等mRNA表达(P ＜0.05,P＜0.01).结论:贝母素甲、乙对4T1乳腺癌细胞具有显著抑制作用,可通过抑制炎性相关因子的释放调节微环境.
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HPLC-ELSD测定乌贝益胃胶囊中贝母素甲和贝母素乙含量
目的 建立高效液相色谱-蒸发光散射检测器法(HPLC-ELSD)同时测定乌贝益胃胶囊中贝母素甲和贝母素乙含量的方法,并对10批样品进行考察,制定含量限度.方法 采用HPLC-ELSD,色谱柱为Eclipse XDB C18(150mm×4.6mm,5 μm),流动相为乙腈-水-二乙胺(65∶35∶0.05),柱温为30℃,流速为1.0 mL/min. ELSD参数:漂移管温度为80℃,载气流速为2.5 L/min.结果 贝母素甲和贝母素乙进样量分别在0.294 ～2.944 μg、0.424～4.240 μg范围内与各自峰面积的对数值呈线性关系,平均加样回收率分别为98.13％ (RSD=1.02％,n=6)、98.38％ (RSD =0.92％,n=6).结论 本方法准确可靠,重复性好,为乌贝益胃胶囊质量标准的制定提供了依据.
关键词： 高效液相色谱-蒸发光散射检测器 乌贝益胃胶囊 贝母素甲 贝母素乙 含量测定 -
HPLC-ELSD测定平贝母中贝母素甲的含量
平贝母是百合科植物平贝母Fritillaria ussuriensis Maxim.的干燥鳞茎,具有清热润肺、化痰止咳的功能,其含有的贝母类生物碱是贝母止咳化痰作用的主要有效成分.贝母类生物碱传统的定量方法常采用比色法、两相滴定法、非水滴定法等3种方法均有一定的局限性;采用薄层色谱法、反相离子对高效液相色谱法、柱前衍生化法、气相色谱法对贝母素甲、贝母素乙进行定量,存在前处理步骤多,排除干扰困难等不足之处.ELSD是一种质量型检测器,对样品中贝母素甲进行含量测定,分离度好,样品制备简便,重复性好,适于贝母类药材的质量控制.
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贝母素甲对急性肺损伤小鼠TNF-α、IL-4、IL-10及PGE2时空表达的影响
目的:本研究探讨贝母素甲(PM)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肺损伤过程中TNF-α、IL-4、IL-10及PGE2时间和空间表达的影响.方法:选取60只SPF级小鼠,体重25~30g,随机分成正常组、模型组、阳性对照组(Dex组)、贝母素甲(PM)低、中、高剂量组,腹腔注射戊巴比妥(40mg/kg)麻醉小鼠,模型组、Dex组及PM组小鼠给予气管内注射4mg/kg LPS诱导建立急性肺损伤模型.以LPS注入前1h、12h、24h、36h和注入后12h、24h、36h作为时间点,分别给予五组动物生理盐水、10mg/kg醋酸地塞米松、0.1mg/kg PM溶液、1mg/kg PM溶液、10mg/kg PM溶液,正常组给予同等体积生理盐水.实验结束后解剖肺脏,观察肺脏形态学改变,分别用Real-Time PCR和酶免疫吸附实验(ELISA)测定肿瘤坏死因子(TNF-α)、IL-4、IL-10的mRNA水平和蛋白含量及血液PGE2的水平.结果:与正常组和阳性对照组比较,LPS注射导致肺部出现明显的水肿和炎症细胞浸润等现象,TNF-α、PGE2含量分别增加了145.1%(P<0.05)、64.5%(P<0.05);与模型组比较,PM处理后LPS对肺泡细胞的破坏明显减轻,TNF-α、PGE2含量分别降低了80.4%(P<0.05)、35.6%(P<0.05),但IL-4和IL-10蛋白水平分别增加了2.9倍(P<0.01)和2.1倍(P<0.01).结论:PM处理后使肺组织中TNF-α、PGE2含量明显降低,LPS对肺泡细胞的破坏显著减轻,对急性肺损伤小鼠肺组织具有保护作用.
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贝母素甲对急性肺损伤小鼠COX-2、PGE2以及NO时间表达的影响
目的:探讨贝母素甲对急性肺损伤小鼠COX-2、PGE2以及NO时间表达的影响.方法:80只昆明种小鼠体重(20±5)g,被随机分成正常组,模型组,阳性对照组(Dex组),贝母素甲(PM)低、中、高剂量组,腹腔注射戊巴比妥(40mg/kg)麻醉小鼠,模型组、Dex组及PM组小鼠给予气管内注射4 mg/kg LPS诱导,建立急性肺损伤模型.注入LPS前1h、12h、24h、36h和注入后12h、24h、36h,后5组动物分别给予生理盐水、10mg/kg盐酸地塞米松、0.1mg/kg PM溶液、1mg/kgPM溶液、10mg/kg PM溶液,正常组给予同等体积生理盐水.实验结束后分别用Real-time PCR和酶免疫吸附实验(ELISA)测定肺脏COX-2的mRNA水平和蛋白含量,用酶免疫吸附实验(ELISA)测定血液PGE2以及NO水平.结果:与正常组和Dex组比较,LPS注射后导致肺部明显的水肿和炎症细胞浸润等现象,显著增加了COX-2、PGE2以及NO的表达,提示LPS处理后能启动一系列信号转导机制,激活多种炎症细胞和效应细胞,释放大量炎症介质或细胞因子.与模型组比较,PM处理后LPS对肺泡细胞的破坏明显减轻,COX-2、PGE2以及NO含量显著降低,提示PM对ALI小鼠的肺脏具有保护作用.结论:PM处理后可以抑制COX-2表达和明显降低PGE2以及NO含量,从而对急性肺损伤起到保护作用.
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贝母素甲对急性肺损伤小鼠保护作用的实验研究
目的：观察贝母素甲对小鼠TNF-αmRNA及SP-A表达的影响，探讨贝母素甲(PM)对脂多糖(LPS)诱导小鼠急性肺损伤过程的保护作用。方法：将80只体重（20±5）g昆明种小鼠随机分成正常组、模型组、阳性对照组(Dex组)、PM组，腹腔注射戊巴比妥（40mg/kg）麻醉小鼠，模型组、Dex组及PM组小鼠给予气管内注射4mg/kg LPS诱导建立急性肺损伤模型；注入LPS前1h、12h、24h和36h和注入后12h，24h和36h，此三组动物分别给予生理盐水、10mg/kg盐酸地塞米松、1mg/kg PM溶液,正常组给予同等体积生理盐水。实验结束后解剖肺脏，观察肺脏形态学改变，分别用Real-time PCR、Western Blot方法和酶免疫吸附实验（ELISA）测定肿瘤坏死因子（TNF-α）、SP-A。结果：LPS能明显引起小鼠肺部的炎症反应，PM处理后拮抗了LPS对小鼠肺组织的破坏作用，抑制促炎因子TNF-α的表达，促进SP-A合成及释放。结论：PM对急性肺损伤小鼠肺组织具有保护作用，其机制可能与抑制肺组织中TNF-αmRNA的表达，促进SP-A合成及释放有关。
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扶正平消胶囊的质量标准研究
目的 建立中药复方制剂扶正平消胶囊的定性定量方法,为完善其质量标准提供科学依据.方法 采用TLC法对扶正平消胶囊中的主要成分龙胆苦苷、贝母素甲、黄芪甲苷、狼毒进行定性鉴别;采用HPLC法对扶正平消胶囊中的血竭素进行定量分析,色谱柱为Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18(250 mm×4.6 mm,5.0 μm),柱温:40℃;流动相为乙腈-0.05 mol·L-1磷酸二氢钠水溶液(60∶40),流速:1.0 ml `min-1,检测波长:440 nm.结果 TLC鉴别中龙胆苦苷、贝母素甲、黄芪甲苷及狼毒的斑点清晰,阴性样品无干扰;血竭素在0.7761～49.67 μg `ml-1范围内线性关系良好(r =0.9999),低定量限为0.7761 μg·ml-1,重复性、稳定性试验结果的RSD均＜3％,加样回收率的平均值为103.5％,RSD＜ 1.5％.结论 本研究建立的方法进一步提升了扶正平消胶囊原有的质量标准,可实现对扶正平消胶囊的质量控制.
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HPLC-ELSD法测定浙贝母中主要生物碱的含量
目的利用HPLC-ELSD测定贝母类药材中的贝母素甲和贝母素乙.方法 XTerra RP18色谱柱(150 mm×3.9 mm ID, 5 μm),流动相为乙腈-10 mmol·L -1 NH4HCO3(浓氨水调至pH 10.10)=A∶ B系统,梯度洗脱,以ELSD检测.结果贝母素甲在1.09-4.36 μg,贝母素乙在1.04-4.16 μg与峰面积的对数值呈线性关系,回收率分别为98.96%(n=4),RSD 1.01%;98.40%(n=4),RSD 2.63%.结论本方法能够很好地测定浙贝母药材中的主要生物碱贝母素甲、贝母素乙,可用于浙贝母药材的质量控制.
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HPLC-MS测定癃闭康泰片中贝母素甲、贝母素乙的含量
目的建立癃闭康泰中贝母素甲、贝母素乙的高效液相色谱-质谱联用含量测定法.方法癃闭康泰片经碱化,用氯仿-甲醇(4:1)提取生物碱有效部位,提取液浓缩,残渣用甲醇溶解后,进行高效液相色谱-质谱测定.色谱柱为Agilent Zorbax ex-tend C18(2.1 mm×100 mm,5 μm);流动相为乙腈和10 mmol·L-1甲酸铵(pH 8.0),梯度洗脱(0～15 min:乙腈30%～55%;15～25min乙腈55%);流速0.2 mL·min-1;柱温30℃.质谱条件为电喷雾电离源(ESI),以选择性正离子方式检测,贝母素甲和贝母素乙的选择性检测离子分别为m/z 432.4和m/z 430.4.结果贝母素甲和贝母素乙的的线性范围均为0.01～10 mg·L-1,相关系数均大于0.999,检测限均为0.45 μg稬-1,方法回收率均大于95%,日内日间精密度(RSD)均小于5%.结论本方法专属性强,灵敏度高,线性关系良好,操作简便,适用于癃闭康泰中贝母素甲、贝母素乙的含量测定.
关键词： 高效液相色谱-质谱联用 贝母素甲 贝母素乙 癃闭康泰片 -
HPLC-ELSD测定浙贝母中贝母素甲、贝母素乙的含量
目的建立HPLC-ELSD测定浙贝母中贝母素甲、贝母素乙含量的方法,并对市售17批样品进行考察,制定含量限度.方法色谱柱:Agilent Hypersil BDS-C18(4.0mm×250 mm,5μm);流动相:乙腈-水-二乙胺(70:30:0.03),流速:0.8 mL·min-1;ELSD参数:漂移管温度为85℃,载气流速为2.2 L·min-1.结果贝母素甲、贝母素乙线性范围分别为47.02～1 003,46.92～1001 mg·L-1,平均回收率分别为102.7%,98.7%,RSD分别为2.1%,2.5%(n=6).通过市售17批样品中贝母素甲、贝母素乙含量的测定,制定了不同规格浙贝母的含量限度.结论此法简便,快捷,结果可靠,可用于浙贝母的质量评价,为2005年版药典中浙贝母质量标准的修订提供了依据.
关键词： 高效液相色谱-蒸发光散射检测器 浙贝母 贝母素甲 贝母素乙 -
酸性染料比色法测定川贝母中贝母素甲的含量
建立川贝母中贝母素甲含量测定的方法.利用贝母素甲在酸性条件下与溴甲酚绿定量结合,在411nm波长处有大吸收.贝母素甲在14.78μg·ml-1～133.02μg·ml-1范围内线性关系良好,平均回收率为99.2%,RSD为1.79%.该方法快速、准确,可用于川贝母中贝母素甲的含量测定.
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细胞氧化-还原状态影响贝母素甲对人白血病细胞K562细胞增殖的抑制
目的 探讨贝母素甲对人白血病细胞K562细胞增殖的抑制效应,以及细胞氧化-还原状态失衡对此作用的影响.方法 在体外培养K562细胞.运用四唑盐(MTT)比色法分析不同浓度贝母素甲(50、100、200、400、800 μmol/L)处理24 h对K562细胞增殖的影响,并用Bliss法计算药物对细胞的半数抑制浓度(IC50).采用分光光度法分别分析药物处理对K562细胞内活性氧(ROS)与谷胱甘肽(GSH)含量的影响.结果 贝母素甲能剂量依赖性的抑制K562细胞的增殖,IC50为238 μmol/L.贝母素甲能诱导K562细胞产生ROS,下调其细胞内GSH含量,破坏细胞的氧化-还原平衡状态.活性氧清除剂N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)与GSH的预处理可以抑制贝母素甲的上述效应.结论 贝母素甲可抑制K562细胞增殖,细胞氧化-还原失衡可能在这一过程中起重要作用.
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HPLC-ELSD法测定清肺抑火丸中贝母素甲、贝母素乙的含量
目的 建立高效液相色谱- 蒸发光散射检测法测定清肺抑火丸中贝母素甲、贝母素乙含量的方法.方法 采用Acclaim 120-C18 色谱柱,柱温30℃;乙腈-0.03% 二乙胺溶液(65:35)为流动相,流速为1.0mL/min;蒸发光散射检测器检测,漂移管温度为85℃,载气压力30psi.结果 在选定的色谱条件下,分别以贝母素甲、贝母素乙峰面积的常用对数(Y)对浓度的常用对数(X)进行线性回归,回归方程分别为Y1=1.5548X1+2.8331(r ＝ 0.9998)、Y2=1.3907X2+3.0166(r ＝ 0.9997),线性范围分别为30.4～136.8μg/mL、5～35μg/mL;贝母素甲和贝母素乙的平均回收率分别为102.0%、102.2%,方法精密度(RSD,n=6)分别为0.83%、0.80%.结论 该法可用于清肺抑火丸中贝母素甲、贝母素乙的含量测定.
关键词： 清肺抑火丸 贝母素甲 贝母素乙 高效液相色谱-蒸发光散射检测法 含量测定 -
基于HPLC-Q-TOF-MS/MS技术的银黄清肺胶囊体外物质基础研究
目的 采用高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱技术(HPLC-Q-TOF-MS/MS)对银黄清肺胶囊的化学成分进行检测和分析.方法 采用Inertsil ODS-2 C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)反相HPLC梯度洗脱法分离各主要成分,电喷雾电离源经正离子模式对色谱流出物进行检测,四级杆飞行时间串联质谱法对各主要色谱峰进行归属;采用对照品、检索文献及各成分的图谱数据分析的方法分析化学成分.结果 依据质谱裂解规律及文献检索,在正离子模式下,从银黄清肺胶囊样品中共鉴定出54个化合物.结论 本实验建立了一种基于HPLC-Q-TOF-MS/MS技术对复方银黄清肺胶囊中化学成分进行鉴别的有效方法,为其质量控制及物质基础研究提供了技术支持.
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硫磺熏蒸对浙贝母中贝母素甲和贝母素乙在大鼠体内药动学的影响
目的 采用液相-质谱联用(LC-MS/MS)分析硫磺熏蒸(硫熏)对浙贝母中贝母素甲、贝母素乙在大鼠体内药动学的影响.方法 SD大鼠分别ig给予硫熏、鲜切浙贝母提取物(生药剂量15 g/kg),采用LC-MS/MS技术检测贝母素甲和贝母素乙的血药浓度,并用3P97软件计算药动学参数.结果 硫熏浙贝母中贝母素甲和贝母素乙的主要药动学参数:达峰浓度(Cmax)分别为(66.40±4.65)、(146.72±10.88) ng/mL,药时曲线下面积(AUC0～t)分别为(181.79±7.85)、(457.38±58.81) ng.h/mL;鲜切浙贝母中贝母素甲和贝母素乙的主要药动学参数:Gmax分别为(186.37±18.80)、(227.65±7.01) ng/mL,AUC0～t分别为(197.70±18.69)、(566.16±41.55) ng.h/mL.硫熏浙贝母组大鼠体内贝母素甲、贝母素乙的Cmax、AUC0～t明显低于鲜切浙贝母组.结论 硫熏降低浙贝母中贝母素甲、贝母素乙的血药浓度,影响浙贝母中主要生物碱贝母甲素和贝母乙素的药动学行为.
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5种生物碱胃癌多药耐药逆转剂的筛选及机制研究
目的 研究骆驼蓬碱、去氢骆驼蓬碱、贝母素甲、贝母素乙和氧化苦参碱对肿瘤细胞多药耐药性(MDR)的逆转作用及机制.方法 以胃癌亲本细胞系SGC-7901和MDR细胞系SGC-7901/VCR为细胞模型,采用MTT法检测上述5种生物碱的细胞毒活性及对MDR的逆转效果；用流式细胞仪检测MDR逆转效果好的贝母素乙对肿瘤细胞内阿霉素(ADR)蓄积的影响；Western blotting法检测P-糖蛋白(P-gp)的表达；Hoechst荧光染色和细胞免疫荧光法检测贝母素乙诱导SGC-7901/VCR细胞凋亡情况.结果 骆驼蓬碱、去氢骆驼蓬碱、贝母素甲、贝母素乙和氧化苦参碱均能不同程度地抑制SGC-7901和SGC-7901/VCR细胞的增殖,在非毒剂量下贝母素乙能够显著提高SGC-7901/VCR细胞对ADR的敏感性及细胞内ADR的浓度,降低P-gp表达.贝母素乙联合5-氟尿嘧啶(5-FU)给药可诱导SGC-7901/VCR细胞凋亡,凋亡细胞cleaved caspase-3呈高表达.结论 贝母素乙具有作为胃癌MDR逆转剂的潜力,其逆转耐药的机制可能与下调P-gp表达和诱导细胞凋亡有关.
