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桔梗不同配伍对乳腺癌高转移潜能细胞4T1增殖及侵袭的影响
目的:应用MTT比色法及Transwell试验检测桔梗配伍不同中药对乳腺癌高转移潜能细胞4T1增殖及侵袭能力的影响.方法:给予SD大鼠中药煎剂灌胃,制备含药血清.应用MTT比色法检测桔梗不同配伍含药血清对4T1细胞增殖的影响;应用Transwell实验检测桔梗不同配伍含药血清对4T1细胞侵袭能力的影响.结果:桔梗及桔梗配伍不同中药组合药血清干预24 h后,对4T1细胞的增殖均有一定的抑制作用.各组合药血清对乳腺癌高转移潜能细胞4T1的增殖抑制率分别为桔梗组30.75％、桔梗加麦冬组34.44％、桔梗加蛇床子组44.71％、桔梗加莪术组49.84％.Transwell实验结果显示,桔梗及桔梗配伍不同中药各组均能降低透过小室的4T1细胞数,对于乳腺癌高转移潜能细胞4T1的侵袭能力有显著的抑制作用,同模型组比较差异有统计学意义(P＜0.01).同桔梗单用组比较,桔梗配伍不同中药组的抑制作用较强,其中桔梗配伍麦冬组及桔梗配伍蛇床子组效果显著,差异有统计学意义(P＜0.01),桔梗配伍莪术组在抑制作用方面虽然由于桔梗单用组,但差异无统计学意义(P＞0.05).结论:桔梗及桔梗配伍不同治则中药对乳腺癌高转移潜能细胞4T1的增殖及侵袭有不同程度的抑制作用.
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贝母素甲、贝母素乙对4T1乳腺癌细胞炎性微环境的干预调节作用
目的:研究贝母素甲、乙对4T1乳腺癌细胞的干预抑制及对其肿瘤炎性微环境的调节作用.方法:CCK-8检测贝母素甲、乙对4T1细胞抑制率;ELISA法检测炎性相关因子TGF-β、VEGF、MMP-9、MCP-1的分泌量;RT-PCR检测TGF-β、VEGF、MMP-9mRNA表达情况.结果:贝母素甲、乙对4T1乳腺癌细胞具有抑制作用;贝母素甲、乙可分别下调4T1细胞TGF-β,VEGF、MCP-1及MMP-9分泌量(P ＜0.05,P＜0.01);贝母素甲、乙可降低4T1细胞TGF-β、VEGF等mRNA表达(P ＜0.05,P＜0.01).结论:贝母素甲、乙对4T1乳腺癌细胞具有显著抑制作用,可通过抑制炎性相关因子的释放调节微环境.
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回药·灵根枸杞正宝对小鼠乳腺癌抑制的体内实验研究
目的:探讨灵根枸杞正宝水醇提取物(EdLGWA)对小鼠乳腺癌模型体内抗肿瘤的作用及其初步机制.方法:复制BALB/c小鼠乳腺癌模型后随即分为正常组、模型组、他莫西芬组、灵根枸杞正宝药低、中和高剂量组,观察乳腺癌模型肿瘤生长抑制率、脏器指数、白细胞数、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MAD)活性,肿瘤坏死因子(TNF-α)浓度,肿瘤组织病理学检查.结果:EdLGWA组的平均肿瘤生长抑制率(48.99％)明显低于他莫西芬组(61.23％)(P＜0.05);与模型组比较EdLGWA低、中和高剂量组降低小鼠的脾指数和胸腺指数(P＜0.05,P＜0.01);EdMLGWA低、中、高剂量组的WBC数明显高于正常组(P＜0.01)而低于模型组(P＜0.05);EdLGWA低、中、高剂量组GSH-Px活性高于模型组(P＜0.05),EdLGWA低、中剂量组SOD活性高于模型组(P＜0.05),EdLGWA低剂量组MDA活性较模型组降低(P＜0.05),EdLGWA低和高剂量组TNF-α浓度较模型组降低(P＜0.05);病理切片显示促进肿瘤细胞分化.结论:EdLGWA对4T1细胞接种复制BALB/c小鼠乳腺癌模型有防治作用,其机制与免疫系统有关和清除氧化应激产生的氧自由基.
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鼠源乳腺癌多药耐药细胞株的建立及耐药机制的初步研究
目的 构建鼠源性乳腺癌5-氟尿嘧啶(5-Fu)耐药细胞株,为研究乳腺癌耐药与体内免疫微环境的关系提供细胞模型.方法 通过体外以浓度递增的方法诱导小鼠乳腺癌4T1细胞对5-Fu产生耐药,MTS法确定其耐药性,平板克隆检测其增殖活性,实时定量和半定量PCR检测其中5-Fu代谢相关酶TS、MTHFR、TK、OPRT、DPD及药泵蛋白MDR1、MRP1的表达,通过流式细胞术检测其周期及CD44+CD24-干细胞亚群的比例.结果 耐药细胞4T1/5-Fu与4T1细胞相比,4T1/5-Fu细胞对5-Fu、吉西他滨和顺铂耐药的耐药指数(RI)明显升高;5-Fu合成代谢相关酶TK、OPRT表达明显降低(P＜0.05),代谢抑制性相关酶TS、MTHFR明显升高(P＜0.05),药泵蛋白MDR1、MRP1表达明显升高(P＜0.05);流式细胞术结果显示,CD44表达明显升高,肿瘤干细胞群增多.结论 成功构建小鼠乳腺癌多药耐药细胞株,耐药发生可能与5-Fu代谢酶类、药泵蛋白表达以及干细胞比例改变相关.
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原儿茶酸对小鼠乳腺癌细胞增殖和转移能力的影响
目的 研究原儿茶酸(protocatechuic acid,PCA)对小鼠乳腺癌细胞(4T1)增殖和转移的影响.方法 体外培养4T1细胞.实验分组:溶剂对照组(DMSO)和PCA组(浓度为1、10、100、250、500、1000 nmol/L).MTT法检测PCA对细胞增殖的影响；划痕实验和Transwell小室法观察PCA对细胞迁移和侵袭能力的影响；蛋白印迹法和荧光定量PCR法分析PCA对基质金属蛋白酶-2(MMP-2)蛋白和mRNA表达的影响.结果 1～1000 nmol/L PCA对4T1细胞增殖无影响；500、1000 nmol/L PCA能够抑制4T1细胞的迁移和侵袭,与对照组相比,差异均具有统计学意义(P＜0.05)；PCA对4T1细胞MMP-2蛋白和mRNA表达均无影响.结论 PCA能够抑制小鼠乳腺癌细胞的迁移和侵袭,其作用机制可能与MMP-2无关.
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小鼠乳腺癌细胞4T1对不同品系小鼠乳腺癌模型的影响
目的:将小鼠乳腺癌细胞4T1接种到两种不同品系的小鼠脂肪垫,观察植瘤小鼠的生物学状态、成瘤大小、转移情况以及生存周期等指标,为建立不同品系小鼠的乳腺癌模型提供参考.方法:将小鼠乳腺癌细胞4T1胰酶消化去除上清,用PBS洗两遍,后用生理盐水调整细胞数量为1×106个,分别接种到裸鼠和BABL/c小鼠的脂肪垫.比较各组老鼠的成瘤率、成瘤时间以及生存期等实验指标.结果:原位注射1×106个4T1细胞时两组均能成瘤,但是裸鼠的成瘤率高于BABUc小鼠;裸鼠的成瘤大小明显大于BABL/c小鼠;裸鼠的生存期明显短于BABL/c小鼠;裸鼠出现肺转移结节明显多于BABL/c小鼠.结论:不同免疫能力的小鼠对接种相同数量的细胞数可能会产生不同的实验结果,在选择构建小鼠乳腺癌模型的时候一定要综合考虑所选用品系的小鼠是否会对实验结果带来影响.
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乳移平含药血清对乳腺癌4T1细胞增殖和侵袭影响的实验研究
目的 研究乳移平含药血清对小鼠乳腺癌4T1细胞增殖与侵袭的影响,并探讨其作用机制.方法 ①制备不同浓度的乳移平含药血清(10％、20％、30％、40％),并以10％、20％、30％、40％空白血清作对照,采用噻唑蓝(MTT)方法测定含药血清对4T1细胞存活率的影响,筛选佳作用浓度和佳作用时间.②设空白对照组、TGF-β1对照组、TGF-β1 10％乳移平含药血清组、TGF-β120％乳移平含药血清组;除空白对照组外,其他组细胞都用2 mg/L的TGF-β1预处理3h,再分别选择空白血清或含药血清作用48 h.采用Transwell侵袭实验检测含药血清对TGF-β1预处理的4T1细胞侵袭率的影响;Western blotting及Real-time PCR检测乳移平含药血清对经TGF-β1预处理的4T1细胞Smad4和Smad7表达的影响.结果 ①乳移平含药血清显著抑制4T1细胞的增殖活性;选择10％和20％作用浓度,48 h作用时间用于后续实验.②乳移平含药血清显著抑制TGF-β1诱导的4T1高侵袭能力,并且存在浓度依赖性;Western blotting和Real-time PCR结果显示,乳移平含药血清明显逆转了TGF-β1诱导的Smad4蛋白及mRNA的高表达,但对TGF-β1诱导的Smad7蛋白及mRNA表达量上调没有影响.结论 乳移平含药血清能够抑制4T1的增殖和侵袭能力,其作用机制可能与调控TGF-β/Smads信号通路相关因子的表达有关.
关键词： 乳移平 含药血清 4T1细胞 TGF-β/Smads信号通路 -
表皮生长因子受体通路底物8疫苗对乳腺癌细胞的抑制效应及其可能机制
目的:探索表皮生长因子受体通路底物8(epidermal growth factor receptor substrate 8,EPS8)疫苗对乳腺癌细胞的抑制效应及其可能的机制.方法:Western blotting检测EPS8蛋白在小鼠乳腺癌4T1细胞株中的表达.通过基因重组、表达和纯化等技术制备特异性的小鼠源性EPS8,以EPS8蛋白为靶点制备抗肿瘤疫苗并免疫BALB/c小鼠,间接ELISA测定免疫前后不同时间小鼠血清内抗EPS8抗体效价;流式细胞术检测免疫前后的脾T淋巴细胞亚群比例.建立乳腺癌4T1细胞荷瘤小鼠模型并接种EPS8疫苗,接种佐剂作为对照,比较2组荷瘤小鼠的生存期、肿瘤体积、肿瘤重量,计算EPS8疫苗抑瘤率;流式细胞术检测荷瘤小鼠脾T淋巴细胞亚群比例,LDH法检测其细胞毒性T细胞(CTL)杀伤率.结果:EPS8蛋白在乳腺癌4T1细胞株中高表达.成功构建的EPS8蛋白疫苗免疫小鼠后产生抗EPS8抗体,且随着免疫次数的增加,小鼠体内抗EPS8抗体滴度呈上升趋势.乳腺癌4T1细胞接种于经EPS8疫苗或佐剂免疫后的小鼠后,与佐剂对照组相比,EPS8疫苗组小鼠生存期显著升高[中位生存时间:44(38～50) vs 37 (34～40)d;t=2.477,P=0.043],肿瘤质量显著降低[(2.21±0.35)vs(3.31±0.88)g;t=3.574,P=0.009],EPS8疫苗的抑瘤率为33.23％.EPS8疫苗组小鼠脾CD4+T比例和CD4 +/CD8+比值均显著高于佐剂对照组(P＜0.001),EPS8疫苗组CD4+ CD25+ Treg/CD4+T细胞的比值显著低于佐剂对照组(P＜0.001).效靶比为20:1时,EPS8疫苗组CTL对靶细胞的杀伤活性即显著高于佐剂对照组[(19.05±4.41)％ vs (13.36±3.10)％;t=2.263,P=0.040].结论:EPS8疫苗不仅具有诱导小鼠产生体液免疫应答的功能,还能够降低荷瘤小鼠体内Treg细胞比例,激活机体内T细胞免疫功能;EPS8疫苗可抑制肿瘤的生长、有效延长荷瘤小鼠的生存期.
关键词： 肿瘤疫苗 表皮生长因子受体通路底物8 乳腺癌 4T1细胞 -
TLR4信号通过对miR-21的表达调控影响乳腺癌4T1细胞的凋亡和增殖
目的:探讨TLR4信号对乳腺癌4T1细胞株中miR-21表达的影响及调控机制,研究miR-21对乳腺癌细胞凋亡和增殖的影响.方法:体外培养乳腺癌细胞株4T1,以TLR4配体LPS刺激6、12、18、24 h,实时荧光定量PCR检测4T1细胞中miR-21的表达变化.Western blotting检测TLR4信号活化后4T1细胞中NF-κBp65的表达和磷酸化情况;应用NF-κB抑制剂PDTC预处理30 min,实时荧光定量PCR检测4T1细胞中miR-21的变化.转染miR-21抑制剂和阴性对照后,Annexin-V/PI双标法检测4T1细胞凋亡情况,MTT法检测4T1细胞增殖情况.结果:LPS刺激致TLR4信号活化能够时间依赖性地上调miR-21的表达(18 h时:2.07 ±0.33 vs1;t=5.61,P=0.03),TLR4信号能够时间依赖性地上调NF-κB的活化,NF-κB抑制剂PDTC能明显抑制TLR4信号诱导的4T1细胞的miR-21上调(0.70±0.10 vs 2.14 ±0.32;t=-7.357,P=0.002).与阴性对照组相比,miR-21抑制剂组4T1细胞的凋亡率明显增高[(24.2±2.4)％ vs (14.8±5.1)％;t=2.891,P=0.044],4T1细胞的增殖能力明显降低(0.42 ±0.02 vs0.55 ±0.01;t=-8.528,P=0.001).结论:TLR4信号通路的活化能够上调乳腺癌4T1细胞中miR-21的表达,其机制与NF-κB的活化有关;靶向抑制miR-21能有效促进4T1细胞的凋亡、抑制4T1细胞增殖.
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miRNA-126真核表达载体的构建及其对乳腺癌细胞增殖和迁移的抑制作用
目的:构建miRNA-126的重组真核表达载体,研究其对小鼠乳腺癌4T1细胞增殖和迁移的影响.方法:设计合成miRNA-126的正义和反义寡核苷酸,构建真核表达载体pcDNA6.2-miR-126,体外瞬时转染至4T1细胞,荧光显微镜下观测转染效率.Real-time PCR检测4T1细胞中miRNA-126的表达,MTT法和克隆形成实验检测4T1细胞的增殖和克隆形成能力,划痕法观察4T1细胞的体外迁移.结果:成功构建pcDNA6.2-miR-126真核表达载体,其可在4T1细胞中有效表达miR-126.与转染空质粒组(pcDNA6.2-Ctrl)相比,瞬时转染72 h后,pcDNA6.2-miR-126转染组4T1细胞的体外增殖能力受到明显抑制[(0.30±0.03) vs (0.51 ±0.04),P＜0.05]；瞬时转染48 h后,pcDNA6.2-miR-126组4T1细胞迁移能力也受到明显抑制[(8.17 ±2.30) vs (28.33 ±2.16)个,P＜0.05].结论:miRNA-126过表达可抑制乳腺癌4T1细胞的增殖及迁移.
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二甲双胍联合compound C对小鼠4T1乳腺癌细胞增殖和细胞周期蛋白D1表达的影响
目的 探讨二甲双胍及单磷酸腺苷活化蛋白激酶抑制剂(compound C)对小鼠乳腺癌4T1细胞增殖及细胞周期蛋白D1(cyclin D1)表达的影响.方法 选取小鼠乳腺癌4T1细胞体外培养,分别以完全培养基为空白组,4T1细胞为对照组,在细胞培养中分别加入浓度为2.5、5、10、20、40 mmol/L的二甲双胍为实验组1～5,以10 mmol/L的二甲双胍联合20 μmol/Lcompound C的为实验组6,20μmol/L compound C的为实验组7.检测各组细胞株增殖情况及细胞内cyclin D1的表达.结果 二甲双胍作用24、48 h时,实验组1与对照组存活率无显著差异(P＞0.05),实验组2～5细胞存活率显著低于对照组(P＜0.05);72 h时,实验组1～5存活率均显著低于对照组(P＜0.05);实验组3、4、5在24、48、72 h时,各组cyclinD1的相对表达量均显著低于对照组(P＜0.05);各组48 h时cyclin D1的相对表达量显著低于24 h时(P＜0.05);72 h时cyclin D1的相对表达量显著低于各组48 h时(P＜0.05);实验组3 cyclin D1的相对表达量显著低于对照组(P＜0.05),实验组6、7在各时间点与对照组比较无显著差异(P＞0.05).结论 二甲双胍能抑制小鼠乳腺癌4T1细胞的增殖,而compound C对其有拮抗作用;二甲双胍对小鼠乳腺癌4T1细胞cyclin D1蛋白表达有下调作用.
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桃儿七对小鼠乳腺癌肿瘤的作用
目的 探讨藏药桃儿七对小鼠乳腺癌肿瘤模型的防治作用和初步机制.方法 实验以4T1细胞接种配合免疫抑制复制BALB/c小鼠乳腺癌肿瘤为模型,细胞接种后根据小鼠体质量随机分为正常组、模型组,他莫昔芬组(4.1 mg/kg),桃儿七高、中、低剂量组(1.2、0.6、0.3 g/kg)等6组,分别灌胃给药,连续观察25d,检测肿瘤瘤体质量,脏器指数、白细胞(WBC)计数及组织形态学的变化.结果 桃儿七能明显减少乳腺癌的瘤体质量,降低肿瘤、胸腺和脾脏指数,减少WBC计数,组织切片显示促进肿瘤细胞分化.结论 藏药桃儿七对乳腺癌有明显防治作用,机制可能与免疫抑制有关.
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PEG可脱除材料修饰miRNA纳米粒的制备以及体内外性质的考察
制备PEG可脱除材料修饰miRNA纳米粒,考察其细胞摄取以及体内分布情况.采用酰胺键缩合的方法合成可被β-环糊精包合的金刚烷修饰的PEG材料,通过静电作用与miR-34a复合制得纳米粒,加入与β-环糊精亲和力更高的布洛芬后可置换脱除纳米粒的PEG壳,测定该PEG可脱除纳米粒的粒径和Zeta电位;考察其在4T1细胞上的摄取能力以及在荷有4T1细胞的BALB/c小鼠体内的分布情况.结果显示,可被β-环糊精包合的金刚烷修饰的PEG材料合成成功;通过静电作用与miR-34a复合后制得的PEG可脱除纳米粒,粒径为107.7 nm,Zeta电位为15.8 mV;相比于PEG未脱除的纳米粒,被4T1细胞摄取的能力与在小鼠体内肿瘤部位的浓度都有显著提高,该体系在肿瘤治疗领域的应用具有很大的潜力.
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多烯紫杉醇纳米粒的制备、表征及其抗肿瘤作用研究
目的 制备多烯紫杉醇(docetaxel,DTX)纳米粒,并进行体内外抗肿瘤研究.方法 采用反溶剂沉淀联合高压均质法制备DTX-G2纳米粒;采用动态光散射法、扫描电镜考察粒径和形态,并对其体外释放、膜毒性、体外抗肿瘤活性进行研究;建立4T1荷瘤小鼠模型,以紫杉醇注射液为对照组,10 mg·kg-1 iv给药,考察体内抗肿瘤作用.结果 制备的DTX-G2纳米粒粒径为(356.8±6.709)nm,PDI值为(0.147±0.02),Zeta电位为(-14.4±0.07)mV,载药量为(62.3±1.9)％.扫描电镜观察纳米粒为片状.DTX-G2纳米粒体外缓慢释放,在192 h累积释放率达到80.4％;无溶血现象,可采用静脉注射给药;MTT结果显示DTX-G2纳米粒对4T1细胞的毒性强于DTX溶液(IC50,2.374 μg·mL-1 vs 5.664 μg·mL-1,P＜0.05);4T1细胞摄取结果显示DTX-G2纳米粒的摄取量显著高于DTX溶液(20.46 vs 11.01,P＜0.05);体内研究中DTX-G2纳米粒对4T1荷瘤小鼠的的抑瘤率显著高于紫杉醇注射液组(75.7％ vs 52.4％,P＜0.05).结论 制备的DTX-G2纳米粒载药量高、稳定性好,显著提高了DTX的抗肿瘤效果,有望作为一种新型的药物输送系统应用到DTX的临床治疗中.
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远华蟾毒精对小鼠乳腺癌细胞侵袭的抑制作用及机制
目的 探讨远华蟾毒精对小鼠乳腺癌细胞侵袭的抑制作用及其机制.方法 将培养好的小鼠乳腺癌细胞4T1随机分为A、B、C、D组.A组常规培养;B、C、D组于缺氧条件下(37℃、5％ CO、95％N2)进行培养,同时C、D组分别加入0.1、0.5 μmol/L远华蟾毒精进行培养.培养0、6、12、24 h采用划痕实验检测细胞迁移能力(迁移距离),用Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力(穿膜细胞数),用Western blotting法检测细胞缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)及磷酸化的磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)蛋白表达.结果 不同时点细胞迁移距离D组＜C组＜B组＜A组,穿膜细胞数D组＜C组＜B组＜A组,HIF-1α、MMP-9、p-PI3K、p-Akt蛋白相对表达量D组＜C组＜B组＜A组,以上指标两组间比较差异有统计学意义(P均＜0.05).结论 远华蟾毒精可能通过PI3K/AKT通路降低小鼠乳腺癌细胞HIF-1α、MMP-9的表达,从而抑制细胞侵袭.
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叶酸脂质体对乳腺癌4T1细胞的体内靶向性研究
目的 探讨叶酸脂质体对乳腺癌4T1细胞的体内靶向性,为开展叶酸介导的靶向性抗肿瘤药物的研究奠定基础.方法 采用薄膜分散法结合冷冻超声法制备叶酸脂质体,原子力显微镜(AFM)确定叶酸脂质体的粒径大小和表征叶酸脂质体的表面形态结构.采用鼠源4T1细胞建立小鼠原位乳腺癌模型,原位皮下分别注射包封钙黄绿素的叶酸脂质体和脂质体,用荧光显微镜定性观察和荧光定量法测定叶酸脂质体与脂质体对肿瘤细胞的富集量. 结果叶酸脂质体富集于原发性和转移性乳腺癌细胞的数量明显高于脂质体(P＜0.05).结论 通过细胞表面叶酸受体的介导作用,叶酸脂质体能明显富集于表达叶酸受体的乳腺癌细胞上,即具有肿瘤靶向性;本研究为开展叶酸介导的靶向性抗肿瘤药物的研究提供了依据.
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4T1小鼠乳腺癌细胞在化疗药、中药单体及生物治疗研究中的应用
目的：为研究者更加深入优化4T1小鼠乳腺癌细胞模型并服务于肿瘤新药及基础机制研究提供参考。方法：以“4T1细胞模型”“乳腺癌”“4T1 cell line”“Mammary cancer”为关键词，组合检索2003年1月－2015年6月在PubMed、Springer Link、中国知网等数据库中的相关文献，就该细胞模型在化疗药、中药单体和生物治疗方面的应用研究作一综述。结果：共查阅到相关文献99篇，其中有效文献28篇。4T1细胞恶性程度高、转移性高且免疫原性低，生长与转移特性与人类晚期乳腺癌十分相近。以4T1作为细胞模型已广泛应用于化疗药、中药单体和生物治疗等的研究中。结论：4T1细胞是人类Ⅳ期乳腺癌的理想细胞模型，可用于对乳腺癌的发生机制、治疗药物的作用机制及毒性等相关内容进行研究。
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穿膜肽TAT修饰的自噬诱导肽Beclin1抗肿瘤的初步研究
目的 研究自噬诱导肽Beclin 1及其经穿膜肽TAT修饰后所得TAT-Beclin 1对乳腺癌的体外自噬诱导作用及体内外疗效.方法 采用透射电子显微镜、eGFP-LC3细胞转染技术和蛋白免疫印迹法综合对比评价Beclin 1和TAT-Beclin 1对4T1细胞自噬流的影响,通过体外细胞毒性和体内抑瘤实验评价其抗肿瘤疗效.结果 TAT-Beclin 1能显著提高Beclin 1在4T1细胞上的自噬诱导能力;TAT-Beclin 1在体内具有一定的抗4T1肿瘤能力.结论 TAT-Beclin 1较Beclin 1能更有效地诱导自噬并发挥治疗乳腺癌的效果.
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远华蟾毒精对体外乳腺癌4T1细胞上皮间质转化的影响
目的 观察远华蟾毒精对乳腺癌细胞4T1迁移、侵袭及上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响,并研究其相关机制.方法 将鼠乳腺癌细胞系4T1细胞与不同浓度远华蟾毒精(0、0.05、0.1、0.5、1、1.25和1.5μg/ml)分别培养24 h后,MTT试验检测远华蟾毒精对4T1增殖活性的影响;将实验分为对照组(0μg/ml)和实验组(0.05、0.5μg/ml),细胞划痕实验和Transwell实验检测对照组(0μg/ml)和实验组(0.05、0.5μg/ml)对细胞迁移、侵袭能力的影响;免疫荧光检测对照组(0μg/ml)和实验组(0.5μg/ml)上皮间质转化相关蛋白E-钙粘蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、纤维链接蛋百(Fibronectin)相关蛋白的变化;蛋白质印迹法检测对照组(0μg/ml)和实验组(0.05、0.5μg/ml)上皮间质转化相关蛋白E-cadherin、Vimentin、Fibronectin、转录因子Snail以及PI3k/Akt/mTOR信号通路相关蛋白p-Akt、p-mTOR表达的变化.结果 MTT试验结果显示,低浓度远华蟾毒精(0、0.05、0.1、0.5和lμg/ml)对4T1增殖无抑制作用,高浓度远华蟾毒精(1.25和1.5μg/ml)对4T1增殖有抑制作用;细胞划痕实验结果显示,对照组与实验组细胞迁移率差异均有统计学意义(P＜0.05);Transwell迁移实验结果显示,对照组与实验组穿至下室的细胞数差异均有统计学意义(P＜0.05);Transwell侵袭实验结果显示,对照组与实验组穿至下室的细胞数差异均有统计学意义(P＜0.05);免疫荧光结果显示,实验组与对照组相比,E-cadherin表达增强,Vimentin和Fibronectin表达减弱(P＜0.05);蛋白质印迹法结果显示,E-cadherin表达上调,Vimentin和Fibronectin表达下调(P＜0.05);转录因子Snail表达下调(P＜ 0.05);PI3k/Akt/mTOR信号通路相关蛋白p-Akt、p-mTOR表达下调(P＜0.05).结论 远华蟾毒精通过Akt/mTOR/Snail信号通路抑制乳腺癌的迁移、侵袭及上皮-间质转化,为远华蟾毒精的临床应用提供了理论依据.
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和厚朴酚脂质体的制备及其体内外抗乳腺癌作用研究
目的 制备和厚朴酚脂质体(HK-Lipsomes),探讨其对小鼠乳腺癌细胞(4T1细胞)的体内外生长抑制作用.方法 将蛋黄卵磷脂、胆固醇、mPEG2000-DSPE2000、和厚朴酚按照质量比3∶1∶1∶1,以注入法制备成和厚朴酚脂质体.通过Zetasizernano ZS测定和厚朴酚脂质体的粒径,透射电镜观察和厚朴酚脂质体的形态.用噻唑蓝(MTT)比色法评价和厚朴酚脂质体对4T1细胞的细胞毒性.建立小鼠4T1乳腺癌肿瘤模型,以紫杉醇注射液为阳性对照,考察腹腔给药后和厚朴酚脂质体对肿瘤的抑制作用.结果 制备得到的和厚朴酚脂质体的平均粒径为(113.8±0.2) nm,多分散指数(0.209±0.005),电位为(-30.7±2.4)mV,透射电镜观察和厚朴酚脂质体为球型.和厚朴酚溶液和脂质体对4T1细胞的IC50值分别为(43.74±2.38)μg/mL和(12.52±2.24) μg/mL.和厚朴酚脂质体高(60 mg/kg)、中(40 mg/kg)、低(20 mg/kg)剂量组的抑瘤率分别为85.19％、60.95％和37.83％,呈剂量相关性.结论 实验使用较为简便的制备方法成功制备粒径较小、包封率高的和厚朴酚脂质体.荷瘤小鼠体内实验显示抑瘤效果良好.
