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疼痛的分子生物学研究新进展
疼痛做为一种慢性疾病威胁着全球数百万患者,而目前的治疗方法效果欠佳且不良反应较多.目前已证实胶质细胞的激活参与突触前/后神经元细胞间的信号传导,并促进细胞因子、化学趋化因子、前炎性因子和肿瘤坏死因子的释放和激酶通路的信号传导,终导致神经元超兴奋性,临床上则表现为痛觉过敏或痛觉异常.因此对疼痛发病机制尤其是分子生物学机制的认识将为我们寻找新的疼痛靶向治疗方法提供希望.
关键词： 疼痛 钠通道 小胶质细胞 细胞外信号调节MAP激酶类 -
非小细胞肺癌中窖蛋白1和pERK1/2表达与预后相关性研究
目的 探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织窖蛋白1与pERK1/2的表达及其与预后的关系.方法 应用免疫组织化学(sP法)检测160例NSCLC及20例正常肺组织标本中窖蛋白1与pERK1/2的表达.结果 窖蛋白1在NSCLC和正常肺组织阳性率分别为65.6%(105/160)和100%(20120),P=0.002.中-高分化组和低分化组阳性率分别为56.8%(46/81)和75.7%(53/70),P=0.015;Ⅰ-Ⅱ期阳性率为58.2%(53/91),Ⅲ-Ⅳ期阳性率75.4%(52/69),P=0.024;有淋巴结转移组阳性率为77.8%(56/72),无淋巴结转移组阳性率为55.7%(49/88),P=0.003.窖蛋白1阳性患者1、3、5年生存率(71.4%、37.1%、17.1%)低于阴性患者(89.1%、69.1%、43.6%),P=0.000.pERK1/2在NSCLC和正常肺组织阳性率分别为61.3%和0,P=0.000;中-高分化组和低分化组阳性率分别为53.1%(43/81)和71.4%(50/70),P=0.021;Ⅰ-Ⅱ期阳性率为49.5%(45/91),Ⅲ-Ⅳ期阳性率76.8%(53/69),P=0.000;有淋巴结转移组阳性率为80.6%(58/72),无淋巴结转移组阳性率为45.5%(40/88),P=0.000.pEBK1/2阳性患者1、3、5年生存率(74.5%、42.9%、19.4%)低于阴性者(82.3%、56.5%、37.1%),P=0.002.窖蛋白1与pERK1/2负相关,P=0.000.结论 窖蛋白1在NSCLC中低表达,pEBK1/2在NSCLC中高表达.窖蛋白1蛋白阳性表达和pEBK1/2蛋白高表达与NSCLC的发生及侵袭、转移相关.窖蛋白1和pERK1/2可作为NSCLC一个预后预测的指标.
关键词： 癌 非小细胞肺 窖蛋白1 细胞外信号调节MAP激酶类 -
类表皮生长因子域7通过 ERK 信号通路促进内皮细胞迁移及血管生成
目的：探讨类表皮生长因子域7（EGFL7）对内皮细胞迁移和血管生成的影响。方法以人微血管内皮细胞为研究对象，构建EGFL7过表达载体，转染入细胞。应用即时定量PCR法检测EGFL7 mRNA表达水平及Western blot检测EGFL7蛋白表达水平。分别采用划痕实验法、Matrigel法观察EGFL7对内皮细胞迁移及血管生成的影响。 Western blot检测内皮细胞转染EGFL7过表达载体和空载体0、10、30和60 min后，p－AKT、AKT、p－ERK和ERK蛋白表达情况。结果 EGFL7过表达组可以显著促进内皮细胞的迁移、血管生成；EGFL7可以激活ERK信号通路，但对AKT信号通路几乎无影响；抑制 ERK 信号通路后， EGFL7对内皮细胞迁移和血管生成的影响均显著下降。结论EGFL7通过ERK信号通路影响内皮细胞迁移和血管生成。
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人胃癌组织中SSTR2、SSTR5亚型与p-ERK的表达及其相关性
目的：检测生长抑素受体（SSTR）亚型SSTR2、SSTR5和p-ERK在人胃癌及正常胃组织中的 mRNA 和蛋白表达差异，从而探讨三者之间的相关性。方法应用免疫组化方法检测23例胃癌组织和20例正常胃组织中SSTR2、SSTR5和p-ERK的蛋白表达差异，应用real time PCR技术检测三者的mRNA表达差异。结果在蛋白水平，胃癌与胃正常组织 SSTR2的表达差异无显著性（P＞0.05），胃癌 SSTR5的表达高于胃正常组织（P＜0.05），胃癌p-ERK的表达高于胃正常组织（P＜0.05）；在mRNA水平，胃癌与胃正常组织SSTR2的表达差异无显著性（P＞0.05），胃癌SSTR5的表达高于胃正常组织（P＜0.05），胃癌ERK的表达高于胃正常组织（P＜0.05）；胃癌中SSTR2与ERK表达无相关性（P＞0.05），SSTR5与ERK表达呈正相关（P＜0.05）。结论人胃癌组织中，高表达SSTR5与p-ERK，低表达SSTR2、SSTR5与ERK在胃癌的发生发展中起重要作用，且二者之间可能通过某种机制相互关联。
关键词： 受体 生长抑素 细胞外信号调节MAP激酶类 胃肿瘤 -
ERK1/2磷酸化异常在慢性肾衰竭继发性甲状旁腺功能亢进发病机制中的作用
目的 探讨ERK1/2磷酸化异常在慢性肾衰竭继发性甲状旁腺功能亢进(SHPT)发病机制中的作用.方法 选取在我院肾内科住院行甲状旁腺全切术的SHPT患者50例为SHPT组,尸体甲状旁腺供体8例为对照组,检测血磷、血钙、碱性磷酸酶、甲状旁腺激素(PTH)及成纤维细胞生长因子-23 (FGF-23)水平,免疫组化测定甲状旁腺组织中ERK1/2、p-ERK1/2、Egr-1的表达.结果 (1)SHPT组患者血FGF-23与PTH (r=0.438,P=0.001)、血磷(r=0.421,P=0.002)、碱性磷酸酶(r=0.452,P=0.001)均呈正相关; (2) SHPT组患者术后3 d FGF-23较术前相比明显降低(t=8.150,P=0.000); (3)与对照组相比,SHPT组ERK1/2的表达无统计学差异(F=0.101,P=0.091),p-ERK1/2及Egr-1的表达显著低于对照组(F=9.798,P=0.001; F=27.568,P=0.000),腺瘤性增生组p-ERK1/2及Egr-1的表达显著低于弥漫性增生组(t=2.812,P=0.011; t=2.316,P=0.036);(4) SHPT组患者血PTH与甲状旁腺细胞中ERK1/2(r=-0.656,P=0.000)、p-ERK1/2(r=-0.696,P=0.000)、Egr-1(r=-0.439,P=0.001)均呈负相关.结论 SHPT患者甲状旁腺细胞中ERK1/2磷酸化的异常,可能参与了甲状旁腺细胞增生及高PTH的分泌的过程,ERK1/2信号转导通路异常在SHPT发病机制中可能发挥一定的作用.
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益气养阴活血方对肾小球系膜细胞增殖及ERK通路的影响
目的 观察益气养阴活血方含药血清对高糖条件培养的大鼠肾小球系膜细胞增殖及胞外信号调节激酶(ERK)通路的影响.方法 制备益气养阴活血方和福辛普利含药血清.将大鼠肾小球系膜细胞分为正常对照组、高糖培养组、高糖培养+福辛普利含药血清组和高糖培养+三个不同浓度益气养阴活血方含药血清组.培养6 h、12 h、24 h、48 h、72 h后用Western-blot法对系膜细胞中磷酸化ERK1/2(pERK1/2)的表达进行半定量分析,用4-甲偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖.结果 与正常对照组相比,高糖组早期(24 h、48 h)能显著促进系膜细胞增殖,福辛普利和高浓度中药含药血清组均可抑制高糖引起的系膜细胞增殖(P<0.05),两组间无统计学差异(P>0.05).高糖刺激6 h后系膜细胞中pERK1/2蛋白的表达即明显增高,24 h达到高峰,后逐渐减弱,福辛普利和不同浓度中药含药血清干预后,pERK1/2蛋白水平显著下降(P<0.05),中药组和西药组间无统计学差异(P>0.05).结论 益气养阴活血方能抑制肾小球系膜细胞增殖和ERK通路的磷酸化,这可能是其临床肾脏保护作用机制所在.
关键词： 糖尿病肾病 肾小球系膜细胞 细胞外信号调节MAP激酶类 细胞增殖 益气养阴活血 -
缺氧诱导因子-1α和磷酸化细胞外信号调节激酶在胃癌中的表达和意义
目的 研究胃癌组织中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)的表达特点和意义.方法 常规石蜡包埋行HIF-1α和p-ERK免疫组织化学染色.结果 HIF-1α和p-ERK在Ⅲ/Ⅳ期、低分化、癌细胞浸润浆膜层和淋巴结转移的胃癌组织中的阳性表达明显高于Ⅰ/Ⅱ期、高分化、癌细胞未浸润至浆膜层和淋巴结未转移的胃癌组织,组间比较差异均有显著统计学意义(P<0.01);HIF-1α和p-ERK在胃癌中表达密切相关(r=0.467,P<0.05).结论 HIF-1α和p-ERK表达与胃癌发生发展生物学行为和预后可能有关,可作为重要的生物学标记物.
关键词： 胃肿瘤 缺氧诱导因子1 α亚基 细胞外信号调节MAP激酶类 免疫组织化学 -
卵巢癌细胞中 ERK1／2的表达及其与细胞凋亡的关系
目的研究细胞外信号调节激酶ERK1/2在卵巢癌细胞SKOV3中的表达及其与细胞相关凋亡蛋白的关系。方法用MTT检测17β-E2对细胞的增殖情况，用MEK1/2通路抑制剂U0126在不同浓度、不同时间处理细胞后，RT-PCR检测细胞ERK1 mRNA、ERK2 mRNA、caspase-3 mRNA的表达。结果浓度为10-6 mol/L 17β-E2作用1 h可显著促进细胞增殖[（5.7±0.23）％]，与对照组[（3.5±0.45）％]相比，P＝0.000。 ERK1/2在卵巢癌中高表达，随着U0126处理细胞浓度的增加及时间的延长， ERK1的表达逐渐降低，与对照组相比，P值分别为0.176、0.009、0.002、0.000；ERK2的表达逐渐降低，与对照组相比，P值分别为0.010、0.000、0.000、0.000；caspase-3的表达逐渐增加，与对照组相比， P值分别为1.000、0.290、0.090、0.003。结论 ERK1/2与卵巢癌的发生发展有关，抑制ERK1/2的表达可抑制细胞增殖，增加细胞凋亡。
关键词： 卵巢肿瘤 细胞外信号调节MAP激酶类 细胞凋亡 -
MAPK/ERK信号通路调节K562细胞中mdr1基因的诱导性表达
目的 观察多柔比星(doxorubicin,DOX)诱导K562细胞mdr1基因表达过程中丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路的作用,探讨mdr1基因的转录调控机制.方法 多柔比星初始浓度为0.01 μg/ml,诱导K562细胞24 h后撤药继续培养至细胞状态恢复,加入多柔比星继续诱导24 h,浓度增加为0.02μg/ml.依上述方法 多柔比星浓度逐渐增加,直至0.05μg/ml.收集DOX浓度为0.01、0.03和0.05μg/ml时的细胞.RT-PCR检测mdr1基因表达,流式细胞仪检测mdr1基因编码的P糖蛋白(P-gP)的表达,Western blot 检测ERK活化情况.MAPK的抑制剂PD98059预处理K562细胞1 h后与多柔比星共同作用,逆转录(RT)-PCR和流式细胞仪分别检测mdr1基因和P-gP的表达情况.结果 经多柔比星作用后K562细胞中ERK磷酸化增强,同时mdr1基因转录上调,及其蛋白产物P-gP的表达也增加,当多柔比星浓度为0.05μg/ml时两者的表达均增加了5倍之多.而用PD98059预处理细胞后能明显抑制多柔比星诱导mdr1基因转录和蛋白表达,多柔比星浓度为0.03μg/ml时PD98059对mdr1基因表达的抑制率为(74.1±0.11)%,多柔比星浓度为0.05 μg/ml时抑制率为(70.2±0.14)%.结论 多柔比星能够诱导K562细胞mdr1基因表达,同时激活MAPK/ERK信号通路,阻断ERK的活化能抑制mdr1基因的诱导性表达.
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急性髓系白血病CD44v6的表达和ERK磷酸化水平的关系
目的 探讨CD44v6和p-ERK1/2在AML中的表达及临床意义.方法 应用流式细胞仪检测22名健康对照者及152例AML患者骨髓原始细胞上CD44v6及p-ERK1/2的表达.对其中129例AML患者进行了跟踪随访,分析CD+44v6和CD-44v6对AML患者的复发率以及生存时间是否存在影响.结果 22名健康对照者中,各有1例(4.5%)CD44v6和p-ERK1/2阳性.152例AML患者中,55例(36.2%)CD44v6阳性,97例(64.5%)p-ERK1/2阳性.AML患者组骨髓原始细胞p-ERK1/2的MFI为14(7～58),高于健康对照组的8(6～10),差异有统计学意义(U=4.2,P＜0.01).CD+44v6 AML患者p-ERK1/2的MFI为28(15～61),高于CD-44v6 AML患者的18(6～37),差异有统计学意义(U=6.7,P＜0.01).CD44v6的MFI与p-ERK1/2的MFI呈显著性正相关(ra=0.7,P＜0.01).对129例AML患者进行了4～65个月的随访,其中CD-44v6患者的复发率为32.1%(26/81),低于CD+44v6患者的复发率81.3%(39/48),差异有统计学意义(x2=29.1,P＜0.01).生存分析表明,CD+44v6AML患者平均生存时间为(28.5±1.8)个月,CD-44v6AML患者平均生存时间为(51.2±2.0)个月,差异有统计学意义(x2=48.2,P＜0.01).结论 CD44v6阳性的AML患者生存时间明显缩短、预后差.CD44v6可能通过上调p-ERK1/2水平促进白血病细胞增殖.
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氯沙坦对华法林诱导的大鼠血管钙化的作用研究
目的：观察氯沙坦对华法林诱导的大鼠血管钙化模型的影响，并探讨其可能的作用机制。方法28只5周龄雄性SD大鼠按随机数字表法分为4组：对照组（ C）、模型组（ M）、模型＋低剂量氯沙坦组（ M＋L）、模型＋高剂量氯沙坦组（ M＋H）（每组7只）。造模成功后取各组大鼠主动脉进行HE染色和茜素红染色，观察血管壁形态学变化和钙盐沉积情况。实时荧光定量PCR检测缝隙连接蛋白（Cx43）mRNA表达，Western blot检测丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）、Cx43和基质 Gla 蛋白（ MGP）表达情况。结果华法林能够诱导大鼠血管钙化模型。与对照组比较，模型组Cx43 mRNA和蛋白表达显著上调（3.98±0.65比1.06±0.31，P＜0.01；1.91±0.45比1.03±0.07，P＝0.029）， MAPK家族中细胞外信号调节激酶（ERK）活性显著增加（1.40±0.19比1.04±0.04，P＝0.032）， MGP表达显著下降（0.19±0.07比1.00±0.02，P＜0.01）。与模型组比较，两种剂量氯沙坦干预组Cx43 mRNA和蛋白表达均显著下调（2.28±0.47比3.98±0.65，P＝0.021；1.07±0.24和0.64±0.24比1.91±0.45，P＝0.047和0.013），ERK活性显著降低（0.76±0.04和0.69±0.09比1.40±0.19，均为P＜0.01），MGP表达显著增加（0.45±0.08和0.83±0.10比0.19±0.07，P＝0.013和P＜0.01）。结论氯沙坦可以抑制华法林诱导的大鼠血管钙化，可能与下调Cx43表达及ERK活性，增加MGP表达有关。
关键词： 氯沙坦 血管钙化 缝隙连接蛋白43 细胞外信号调节MAP激酶类 基质Gla蛋白 -
蛋白激酶Cα-胞外调节蛋白激酶1/2与人气道平滑肌细胞中周期蛋白D1及P21cip1 表达的关系
目的 探究蛋白激酶C(PKC)α-胞外调节蛋白激酶(ERK)1/2级联对支气管哮喘(简称哮喘)患者血清被动致敏的人气道平滑肌细胞(HASMC)周期蛋白D1(cyclinD1)、周期蛋白依赖性激酶(CDK)抑制剂P21 cipl的调节作用及细胞增殖的影响.方法 用含10%哮喘患者血清的DMEM培养基被动致敏HASMC后,按随机数字表法分为对照组、12-肉豆蔻酰-13-乙酸佛波酯(PMA)处理组、PMA+PKCα错配寡核苷酸组、PMA+PKCα反义寡核苷酸组以及PMA+U0126组,每组4个样本.用Western blot方法检测各组细胞磷酸化PKCα(p-PKCα)、ERK1/2、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)、cyclinD1和P21 cipl的蛋白表达水平,用流式细胞术和四甲基偶氮唑盐(MT)法检测HASMC增殖.结果 PMA处理组p-PKCα水平、ERK1/2和p-ERK1/2蛋白水平高于对照组,cyclinD1、P21 cipl表达明显强于对照组(相对于各对照组的A值分别为2.10±0.29、1.67±0.19、2.20±0.27、1.99±0.22和3.11±0.29,均P＜0.05),HASMC的增殖[S期细胞比例为(30.3±2.4)%,A490值为0.80±0.06]高于对照组[S期细胞比例为(13.9±2.6)%,A490值为0.41±0.04],均P＜0.05;PMA+PKCα反义寡核苷酸组中p-PKCα水平低于PMA处理组,ERK1/2和p-ERK1/2表达明显弱于PMA处理组,cyclinD1和P21 cipl 表达也明显低于PMA处理组(相对于各对照组的A值分别为1.23±0.19、1.34±0.18、1.52±0.20、1.45±0.18和1.49±0.18,均P＜0.05),HASMC的增殖显著下降[S期细胞比例为(21.2±2.8)%,A490值为0.51±0.04;q值分别为6.07,12.63;均P＜0.05];同样与PMA处理组相比,PMA+U0126组中p-PKCα水平无明显改变(A值为1.99±0.18,q=0.94,P＞0.05),但ERK1/2、P-ERK1/2的表达,cyclinD1和P21 cipl的表达明显低于PMA处理组A值分别为0.95±0.21、1.15±0.19、1.37±0.15和1.96±0.21,均P＜0.05),HASMC的增殖显著下降[S期细胞比例为(22.0±3.2)%,A 490值为0.49±0.03;q值分别为5.51、13.45,均P＜0.05].结论 ERK1/2是PKCα的下游信号分子,PKCα-ERK1/2级联参与了PMA所诱导的哮喘患者血清被动致敏的人气道平滑细胞cyclinD1、P21 cipl的表达上调及细胞增殖.
关键词： 蛋白激酶Cot 细胞外信号调节MAP激酶类 细胞周期蛋白D1 肌细胞 平滑肌 -
蛋白激酶C-胞外信号调节激酶1/2信号通路在尼古丁诱导的血管内皮细胞表达纤维溶解酶原激活物抑制物-1中的作用
目的 探讨蛋白激酶C(PKC)-胞外信号调节激酶(ERK)1/2信号通路在尼古丁诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)表达纤维溶解酶原激活物抑制物-1(PAI-1)中的作用.方法 体外培养HUVECs,采用不同实验条件尼古丁进行干预,ELISA法测定细胞上清液中PAI-1的浓度,观察尼古丁作用的佳浓度和时间.进一步分别用PKC的抑制剂星型胞菌素staurosporine (STS)和ERK的抑制剂PD98059干预HUVECs,观察PKC或ERK被阻断后对尼古丁诱导的HUVECs 表达PAI-1的影响,ELISA测定各组细胞上清液中PAI-1蛋白的表达水平,RT-PCR检测各组细胞PAI-1 mRNA的表达.结果 100 μmol/L尼古丁组PAI-1蛋白水平[(22.6 ± 1.1)μg/L]明显高于对照组[(14.2± 2.8)μg/L,q=5.64,P＜0.05];以100 μmol/L 尼古丁分别与HUVECs孵育0、4、6、8、12及24 h,各组PAI-1蛋白表达呈时间依赖性升高,并在12 h达到高峰(F=32.063,P＜0.05);尼古丁组PAI-1 mRNA及蛋白含量[(1.32±0.20),(21.08±0.83)μg/L]明显高于对照组[(0.73±0.10),(13.39± 0.93)μg/L,q=8.43、11.97,均P＜0.05];尼古丁+STS组PAI-1 mRNA及蛋白含量[(1.07±0.10),(16.19±2.15)μg/L]较尼古丁组降低(q=5.61、7.61,均P＜0.05),但仍高于对照组(q=7.84、4.36,均P＜0.05);尼古丁+ PD98059组PAI-1 mRNA及蛋白表达[(1.12±0.11),(17.52±1.72)μg/L]低于尼古丁组(q=4.68、5.54,均P＜0.05),仍高于对照组(q=8.77、6.43,均P＜0.05).结论 PKC-ERK1/2信号通路在尼古丁诱导的血管内皮细胞PAI-1表达上调中发挥一定作用.
关键词： 尼古丁 蛋白激酶C 细胞外信号调节MAP激酶类 人脐静脉内皮细胞 -
Rho激酶抑制剂对急性脑梗死患者血浆尾加压素Ⅱ的影响及疗效分析
目的 观察Rho激酶抑制剂法舒地尔对急性脑梗死患者血浆尾加压素Ⅱ的影响,评估盐酸法舒地尔治疗急性脑梗死的临床疗效.方法 选取2014年10月～2016年4月在上海交通大学附属第一人民医院松江分院神经内科收治的急性脑梗死患者120例,随机分为法舒地尔组60例,对照组60例.另选择我院同期健康体检人员60例作为健康体检组.采用竞争性酶联免疫吸附法测定血浆尾加压素Ⅱ水平,比较法舒地尔组与对照组治疗前和治疗14 d美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分.结果 法舒地尔组治疗后NIHSS评分较治疗前明显降低,差异有统计学意义(P＜0.01).法舒地尔组和对照组治疗前血浆尾加压素Ⅱ水平明显高于健康体检组(P＜0.01);对照组治疗后血浆尾加压素Ⅱ水平较健康体检组明显升高[(0.20±0.06)μg/L vs (0.14±0.04)μg/L,P＜0.01].法舒地尔组和对照组治疗后血浆尾加压素Ⅱ水平较治疗前明显降低[(0.15±0.03)μg/L vs (0.25±0.04)tμg/L,(0.20±0.06)μtg/L vs (0.25±0.05)μg/L,P＜0.01].结论 Rho激酶抑制剂盐酸法舒地尔可能通过抑制Rho激酶的活性影响急性脑梗死患者血浆尾加压素Ⅱ表达,并可改善急性脑梗死患者神经功能缺损.
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三磷酸腺苷后处理对兔心肌缺血再灌注损伤保护作用的研究
目的 观察ATP后处理对再灌注损伤挽救激酶信号通路中的蛋白激酶B(Akt)及细胞外信号调节激酶(ERK1/2)表达的影响,探讨ATP后处理的心血管保护效应及可能机制.方法 选择48只健康新西兰白兔,随机分为缺血再灌注组(再灌注组)、ATP后处理组(后处理组)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂Wortmannin+ ATP后处理组(Wortmannin+ ATP组)、ERK1/2抑制剂PD98059+ ATP后处理组(PD98059+ ATP组),每组12只.建立兔急性心肌缺血再灌注模型.实验终点检测各组心肌梗死面积、细胞凋亡指数,Western blot法检测心肌p-Akt,p-ERK1/2蛋白表达.结果 后处理组心肌梗死面积、细胞凋亡指数明显低于再灌注组(P＜0.01).Western blot检测显示,后处理组p-Akt、p-ERK1/2表达水平明显高于再灌注组(P＜0.05).结论 ATP后处理可以减轻兔缺血再灌注心肌的梗死面积,降低细胞凋亡指数,同时上调p-Akt和p-ERK1/2的表达,提示PI3K/Akt及ERK1/2信号通路参与了ATP后处理对兔缺血再灌注心肌的保护作用.
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锌离子螯合剂对脂多糖诱导的小胶质细胞中细胞因子表达的影响
目的 研究锌离子螯合剂四吡啶甲基乙二胺(TPEN)对脂多糖(LPS)诱导的小胶质细胞中细胞因子表达的影响及机制.方法 体外培养小鼠小胶质瘤细胞系小胶质细胞后分为对照组.LPS组(100 ng/ml LPS,30 min或4h)、TPEN+ LPS组(25 μmol/L TPEN,1 h+LPS,30 min或4 h)、细胞外信号调节激酶(ERK)抑制剂PD98059+LPS组(PD98059+ LPS组,25 μmol/L PD98059,30 min+LPS,4h),采用实时定量PCR法分析细胞因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6、TNF-α mRNA的表达,Western blot法检测pERK1/2蛋白的表达.结果 与对照组比较,LPS组pERK1/2蛋白表达和IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA表达明显升高(P＜0.05,P＜0.01);与LPS组比较,TPEN+LPS组pERK1/2蛋白表达和IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA表达明显降低(P＜0.05,P＜0.01),而PD98059 +LPS组IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA表达明显降低(P＜0.01).结论 TPEN可能通过减少pERK1/2表达来抑制LPS诱导的细胞因子的大量释放.
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细胞外信号调节激酶通路介导的自噬对七氟烷后处理大鼠心肌缺血再灌注的保护机制
目的 研究七氟烷后处理(SP)对大鼠心肌缺血再灌注(I/R)损伤的保护作用,探讨细胞外信号调节激酶(ERK1/2)转导通路介导的自噬在其中的机制作用.方法 成年雄性SD大鼠90只,建立急性大鼠心肌I/R损伤模型.随机分为6组:假手术组(Sham组)、I/R组、SP组、七氟烷正常对照组(Control组)、ERK1/2抑制剂PD98059组(PD组)、PD98059溶剂DMSO组(DMSO组),各15只.后5组缺血30 min,再灌注4h.再灌注4h末提取心脏,用TTC法测定心肌梗死范围,用Western blot法检测Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ及P62蛋白表达水平.结果 与I/R组比较,SP组心肌梗死范围减小[(35.7±10.1)％ vs (56.4±12.3)％,P＜0.05],LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1和P62蛋白表达下调(P＜0.05);与SP组比较,PD组心肌梗死范围增加[(50.7±8.3)] vs (35.7±10.1)％,P＜0.05],LC3 Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1和P62蛋白表达上调(P＜0.05).结论 SP减轻了大鼠心肌I/R损伤,其机制可能是通过激活ERK1/2信号转导通路,抑制再灌注期间自噬体清除的破坏,进而抑制再灌注期间细胞死亡.
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家兔慢性冬眠心肌血管紧张素和细胞外信号调节激酶的变化及药物干预的影响
目的 观察家兔慢性冬眠心肌(CHM)中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)1型受体(AT1R)、2型受体(AT2R)、细胞外信号调节激酶1/2(ERK 1/2)的变化及药物对其的影响.方法 64只家兔建立CHM模型后随机分为假手术组、对照组和卡托普利1、2组、美托洛尔1、2组和缬沙坦1、2组,每组8只.免疫印迹和免疫组织化学法检测AT1R、AT2R、ERK 1/2表达的变化;TUNEL法测定心肌细胞凋亡;羟脯氨酸法测定间质胶原含量.结果 CHM较正常心肌AT1R水平下降、AT2R水平上升,各药物组AT1R、AT2R较对照组下降(P<0.05);各组ERK 1/2无明显变化(P>0.05);对照组双磷酸化细胞外信号调节激酶的含量较假手术组升高,各药物组较假手术组降低(P<0.05);3种药物均可抑制CHM间质纤维化、减少凋亡细胞.且药物大小剂量组间有显著性差异(P<0.05).结论 AT1R、AT2R、ERK 1/2可能参与CHM的发生发展过程;卡托普利、缬沙坦和美托洛尔可能通过AngⅡ受体、ERK 1/2途径发挥保护CHM的作用.
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厄贝沙坦对大鼠心肌缺血再灌注细胞凋亡与细胞外信号调节激酶通路的影响
目的 观察厄贝沙坦对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响,并探讨其与细胞外信号调节激酶(ERK)通路的关系.方法 健康雄性SD大鼠72只,随机分为假手术组、缺血再灌注组、缺血预处理组、厄贝沙坦组、厄贝沙坦+PD-98059组(PD组).厄贝沙坦灌胃1周后制作大鼠心肌缺血再灌注模型,PD-98059于缺血前15 min尾静脉注射.实验结束后用TTC染色测定心肌梗死面积；免疫组织化学法检测心肌组织Bcl-2、Bax表达；Western blot 法测定磷酸化ERK的活性；TUNEL检测凋亡细胞指数.结果 与假手术组比较,缺血再灌注组、缺血预处理组、厄贝沙坦组、PD组心肌细胞凋亡指数、磷酸化ERK活性及Bcl-2、Bax表达明显增加(P＜0.01)；与缺血再灌注组比较,缺血预处理组、厄贝沙坦组心肌梗死面积、心肌细胞凋亡指数和Bax表达明显降低,磷酸化ERK活性及Bcl-2表达明显增加(P＜0.01)；与厄贝沙坦组比较,缺血再灌注组、PD组心肌梗死面积、心肌细胞凋亡指数和Bax表达明显增加,磷酸化ERK活性及Bcl-2表达明显降低,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 厄贝沙坦能够激活ERK通路,进一步调控Bcl-2、Bax蛋白的表达,抑制再灌注心肌细胞的凋亡.
关键词： 心肌缺血 再灌注损伤 抗高血压药 细胞凋亡 细胞外信号调节MAP激酶类 -
胰岛素样生长因子在急性颅脑创伤后作用机制的实验研究进展
颅脑创伤(traumatic brain injury,TBI)已成为严重威胁人类健康的疾病之一.我国的TBI发病率为(100～200)/10万人,其中重型TBI患者占18％～20％,其死亡率占30％～50％.至今我国TBI所致的死亡率仍处于居高不下的态势,伤残人数也在不断增加,这对人类的健康和生命安全构成巨大威胁,对社会劳动力和人口质量造成相当严重的影响.TBI可由直接或间接暴力所致,脑组织创伤又可分为原发性创伤和继发性创伤[1].继发性损伤包括:谷氨酸毒性、线粒体损伤、氧自由基损伤、内质网应激、细胞因子释放引起的炎症、内分泌障碍、脑缺血/缺氧、脑水肿、颅内压升高、钙超载、细胞骨架蛋白水解及突触生理功能的改变等,终导致神经元死亡[2-6].
