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胚胎干细胞增殖分化相关基因
胚胎于细胞是从早期胚胎内细胞团中分离得到的,可以长久维持对称性自我更新的未分化状态,也可以分化成机体几乎所有类型的细胞.多种基因参与了胚胎干细胞增殖分化的调节.现对胚胎干细胞增殖分化相关基因进行综述.
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生殖细胞核因子在精原干细胞体外培养分化中的表达
目的 将分离纯化的小鼠精原干细胞(SSCs)体外培养并诱导分化,检测生殖细胞核因子(GCNF)在小鼠SSCs诱导分化前后的表达.方法 用干细胞因子(SCF)诱导小鼠SSCs向精母细胞分化,通过间接免疫荧光染色和RT-PCR,检测GCNF在小鼠SSCs诱导分化前后的表达.结果 小鼠SSCs向精母细胞诱导分化前后,在倒置相差显微镜下进行形态学观察,细胞形态未发生明显变化,仍然呈圆形或椭圆形,核较大;间接免疫荧光及RT-PCR结果均显示,原代培养的小鼠SSCs呈现GCNF阴性,但是向精母细胞诱导分化2d后,GCNF开始表达.结论 GCNF在体外培养小鼠SSCs向精母细胞分化的早期有表达,提示GCNF可能参与了SSCs的早期分化.
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生殖细胞核因子及Oct-4在P19细胞系诱导分化中的表达
目的 体外培养未成熟畸胎瘤细胞(P19细胞)并诱导分化,检测生殖细胞核因子(GCNF)及Oct-4在P19细胞诱导分化前后的表达.方法 用全反式维甲酸(ATRA)诱导P19细胞分化,通过间接免疫荧光染色和RT-PCR方法检测GCNF及Oct-4在P19细胞诱导分化前后的表达.结果 Oct-4在P19细胞诱导前呈强阳性表达,诱导2d后表达下降；而GCNF在P19细胞诱导前呈阴性表达,诱导2d后呈阳性表达.结论 GCNF参与了恶性生殖细胞肿瘤的体外分化.GCNF可能是通过下调Oct-4基因的表达参与了恶性生殖细胞肿瘤的分化.
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宫颈癌HeLa细胞株GCNF和Oct-4诱导分化表达
目的:检测生殖细胞核因子(germ cell nuclear factor,GCNF)及Oct-4在宫颈癌HeLa细胞诱导分化前后的表达.方法:用全反式维甲酸(all-trans-retinoicacid,ATRA)诱导HeLa细胞分化,HE染色观察诱导前后细胞的形态变化;通过免疫组化和半定量的RT-PCR方法,检测GCNF及Oct-4在HeLa细胞诱导分化前后的表达.应用SPSS 13.0软件进行统计学处理.结果:随着诱导时间的延长HeLa细胞体积变小,圆形细胞逐渐增多,细胞核开始固缩;GCNF在诱导前后的HeLa细胞中均有表达,随着诱导时间延长其表达逐渐增强但3d后表达强度开始下降,F=14.67,P＜0.001.3d组和1d组、2d组和5d组比较差异无统计学意义;但与对照组比较,差异有统计学意义,P＜0.05;Oct-4在诱导前后的细胞中均不表达.结论:GCNF参与了肿瘤细胞的体外分化;在体外培养的宫颈癌细胞株中,GCNF基因可能关闭了Oct-4的激素反应元件.
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生殖细胞核因子在不同成长期大鼠附睾中的表达
目的探讨生殖细胞核因子(GCNF)在大鼠附睾中的时空表达与分布.方法应用免疫组化和蛋白质免疫印迹技术,检测GCNF蛋白在出生后7、14、28、45、60、90天龄和18月龄大鼠附睾内的表达、定位和发育变化,并通过凝胶成像及图像分析系统对实验结果进行统计学分析.结果GCNF表达于出生后14天龄至18月龄大鼠附睾上皮的细胞核内,其表达呈明显的年龄相关性和附睾区段以及细胞特异性.14天龄附睾上皮内出现散在的阳性细胞核,28天龄时阳性细胞数和阳性强度明显增强,45天龄时达到高峰.成年后阳性细胞数维持不变而阳性染色强度开始逐渐减弱,18月龄时减弱非常明显.附睾管上皮内的各种细胞如主细胞、基细胞、顶细胞、狭窄细胞和亮细胞等均呈GCNF阳性染色,从附睾起始段到尾段均有阳性染色,其中以近端头部强;远端尾部主细胞核阳性减弱非常明显甚至呈阴性,而亮细胞核则阳性较强.14 d后各年龄组附睾抽提物中均可见55 000处有GCNF特异性条带,其年龄变化与免疫组化结果一致.结论GCNF在大鼠附睾上皮内的表达与附睾上皮分化和发育过程明显相关,且其分布表现出明显的附睾区段和细胞特异性.
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生殖细胞核因子GCNF在宫颈癌中的表达
目的:探讨生殖细胞核因子(GCNF)在宫颈癌中的表达及其在宫颈癌发生发展的作用.方法:运用免疫组织化学Envision法和RT-PCR技术检测GCNF蛋白和mRNA在正常宫颈组织、上皮内瘤变组织及宫颈鳞癌组织中的表达.结果:GCNF蛋白在正常宫颈组织、上皮内瘤变组织(CIN Ⅰ、CINⅡ、CINⅢ)和宫颈鳞癌组织中的表达率分别为90.0％ (18/20)、78.3％ (18/23)、45.0％ (9/20)、33.3％ (9/27)和3.4％ (4/29),差异有统计学意义(P＜0.05).RT-PCR结果显示GCNF mRNA的表达与GCNF蛋白相一致,即宫颈鳞癌组织与正常宫颈组织相比GCNF mRNA的表达显著降低(P＜0.05).结论:初步认为GCNF蛋白和mRNA表达的下调或缺失可能是宫颈癌发生的一个早期信号,以期为宫颈癌的靶向治疗提供研究方向.
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Oct-4及生殖细胞核因子在精原干细胞体外分化前后的表达
目的:检测Oct-4和生殖细胞核因子(GCNF)在小鼠精原干细胞(SSCs)诱导分化前后的表达.方法:体外分离培养小鼠SSCs,用于细胞因子(SCF)诱导其向精母细胞方向分化,通过间接免疫荧光显色和RT-PCR,检测Oct-4和GCNF在小鼠SSCs诱导分化前后的表达.结果:Oct-4在小鼠SSCs诱导前有表达,诱导2d后表达下降；而GCNF在小鼠SSCs诱导前呈阴性表达,向精母细胞诱导2d后呈阳性表达.结论:GCNF可能通过抑制Oct-4的表达促使SSCs分化.
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过表达GCNF诱导骨髓间充质干细胞凋亡的相关研究
目的 研究过表达生殖细胞核因子(GCNF)诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)凋亡的可能机制.方法 通过过表达GCNF腺病毒上调BMSCs中GCNF表达水平,利用间接免疫荧光化学技术确定其亚细胞定位,MTT检测细胞活力的影响,DAPI染色检测细胞凋亡,Caspase3/8/9检测细胞凋亡蛋白活性.结果 BMSCs细胞中GCNF过表达后,GCNF蛋白亚细胞定位于细胞核,细胞活力降低,凋亡通路被激活.结论 腺病毒GCNF过表达能降低大鼠BMSCs细胞活力,增加其凋亡水平.
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核受体GCNF对H9C2心肌细胞的影响及作用机制
目的:研究人孤儿核受体生殖细胞核因子(hGCNF)对H9C2心肌细胞的影响并初探其机制.方法:通过感染Ad-hGCNF腺病毒使H9C2中的GCNF基因表达上调,利用间接免疫荧光化学技术确定其亚细胞定位,通过MTT法研究GCNF表达对细胞活力的影响,DAPI染色检测细胞凋亡水平,实时定量PCR及Western blot技术检测受体结合蛋白激酶2(RIPK2)和受体结合蛋白激酶3(RIPK3)的表达水平.结果:Ad-hGCNF腺病毒感染后,H9C2心肌细胞GCNF表达上调,亚细胞定位位于细胞核,细胞活力降低,凋亡水平显著增加,RIPK2和RIPK3表达水平均升高.结论:感染Ad-hGCNF腺病毒表达载体降低H9C2细胞活力,增加其凋亡水平,机制与RIPK2和RIPK3的表达上调有关.
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生殖细胞核因子在骨髓间充质干细胞增殖分化中的表达
目的:研究生殖细胞核因子在骨髓间充质干细胞增殖与分化中的表达.方法:取4～6周BALB/c小鼠,采用全骨髓贴壁筛选法体外培养小鼠BMSCs.取第3代小鼠BMSCs,定向诱导BMSCs向成骨细胞分化,通过检测碱性磷酸酶鉴定诱导后的细胞.采用RT-PCR及间接免疫荧光染色,从mRNA和蛋白水平检测GCNF在小鼠BMSCs诱导分化前后的表达.结果:RT-PCR与间接免疫荧光染色结果同时显示,第3代的小鼠BMSCs和向成骨方向诱导10d后的BMSCs均有GCNF表达.结论:GCNF在BMSCs增殖分化中有表达.
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生殖细胞核因子的研究进展
生殖细胞核因子(GCNF)是核受体超家族成员之一,由于其配体未知,因而又称孤儿核受体.GCNF主要功能是抑制基因表达,它可以促进Oct-4基因的甲基化,使Oct-4发生基因沉默.GCNF基因高度表达在发育中的神经系统、胎盘、发育中的生殖细胞.GCNF基因表达具有的时空特性,提示GCNF在胚胎发生以及配子形成过程中发挥着重要作用.
