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乌头、白及配伍存在基于CYP3A1/2的相互作用
目的:阐明基于药物代谢酶的乌头、白及配伍产生相互作用的机制.研究二者合用对主要药物代谢酶CYP1A2、CYP2E1、CYP3A1/2在酶活性、mRNA水平和蛋白质水平的影响.方法:采用高效液相色谱法测定CYP1A2、CYP2E1活性;采用紫外-可见分光光度法测定CYP3A1/2活性;分别采用RT-PCR和WesternBlot方法评价药物对CYP1A2、CYP2E1、CYP3A1、CYP3A2 mRNA及蛋白水平的影响.结果:乌头、白及合用后CYP3A1/2的酶活性明显下降;Western Blot检测显示CYP1A2、CYP3A1、CYP3A2的蛋白质表达水平下降;RT-PCR检测显示CYP1A2、CYP3A1、CYP3A2的mRNA水平均上升.结论:乌头、白及合用后抑制CYP3A1/2的酶活性,乌头、白及配伍存在基于CYP3A1/2的药物相互作用.
关键词： 细胞色素P450 酶活性 蛋白质免疫印迹 反转录聚合酶链式反应 -
督脉电针与神经干细胞移植联合应用促进大鼠受损伤脊髓组织产生神经生长活性物质
目的 探讨督脉电针与神经干细胞移植联合应用能否促进受损伤脊髓组织产生神经生长活性物质.方法 成年大鼠分为正常组、对照组、神经干细胞移植组(NSCs组)、督脉电针组(电针组)和督脉电针+神经干细胞移植组(电针NSCs组).除正常组外均实施T10段脊髓全横断手术,其中电针组和电针NSCs组于术后5d进行电针治疗.分别于术后14 d和28 d取材,进行受损伤脊髓组织环一磷酸腺苷(cAMP)含量的放射免疫检测;用Westenblotting检测神经营养素-3(NT-3)、神经营养因子受体(Trk)以及生长相关蛋白-43(GAP-43)的水平.结果 1.在术后14 d,NSCs组、电针组和电针NSCs组的脊髓损伤区cAMP含量较正常组有增加.但除电针组外,脊髓损伤区的上段或下段组织cAMP含量低于正常组.在术后28 d,电针NSCs组脊髓损伤区上段、下段组织cAMP含量仍保持较高水平.NSCs组和电针NSCs组的脊髓损伤区cAMP含量较正常组有所增加.2.NT-3、Trk及GAP-43的表达以电针组和电针NSCs组较为明显,对照组和NSCs组的3种蛋白表达均低于电针组和电针NSCs组.结论 督脉电针能促进受损伤的脊髓组织产生cAMP;督脉电针与NSCs移植联合应用能保持受损伤的脊髓组织较高水平的cAMP,而且NT-3、Trk及GAP-43的含量也有增高的趋势.
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核因子-кBp65蛋白在大鼠创伤性骨关节炎中的表达
目的:观察实验性创伤性骨关节炎大鼠软骨和滑膜组织中NF-кBp65的表达.方法:雄性SD大鼠24只,随机分为对照组(n=12)和造模组(n=12),造模组采用切断膝关节内侧副韧带口部分切除内侧半月板建立大鼠创伤性骨关节炎模型.两周后处死大鼠,采用蛋白质免疫印迹法Western Blot)和免疫组织化学染色法检测大鼠关节软骨和滑膜内的NF-xBp65表达.结果:与对照组相比,造模组关节软骨和滑膜中的NF-кBp65表达显著增高.结论:NF-кBp65可能在创伤性关节炎的发生过程中发挥作用.
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生殖细胞核因子在不同成长期大鼠附睾中的表达
目的探讨生殖细胞核因子(GCNF)在大鼠附睾中的时空表达与分布.方法应用免疫组化和蛋白质免疫印迹技术,检测GCNF蛋白在出生后7、14、28、45、60、90天龄和18月龄大鼠附睾内的表达、定位和发育变化,并通过凝胶成像及图像分析系统对实验结果进行统计学分析.结果GCNF表达于出生后14天龄至18月龄大鼠附睾上皮的细胞核内,其表达呈明显的年龄相关性和附睾区段以及细胞特异性.14天龄附睾上皮内出现散在的阳性细胞核,28天龄时阳性细胞数和阳性强度明显增强,45天龄时达到高峰.成年后阳性细胞数维持不变而阳性染色强度开始逐渐减弱,18月龄时减弱非常明显.附睾管上皮内的各种细胞如主细胞、基细胞、顶细胞、狭窄细胞和亮细胞等均呈GCNF阳性染色,从附睾起始段到尾段均有阳性染色,其中以近端头部强;远端尾部主细胞核阳性减弱非常明显甚至呈阴性,而亮细胞核则阳性较强.14 d后各年龄组附睾抽提物中均可见55 000处有GCNF特异性条带,其年龄变化与免疫组化结果一致.结论GCNF在大鼠附睾上皮内的表达与附睾上皮分化和发育过程明显相关,且其分布表现出明显的附睾区段和细胞特异性.
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TM4SF1在乳腺癌组织中的表达及其临床意义
目的:探讨四次跨膜蛋白1(TM4SF1)在乳腺癌组织中的表达情况,阐明其临床意义并初步探索其相关分子生物学机制.方法:收集190例人乳腺癌组织、110例癌旁组织和110例正常乳腺组织.免疫组织化学法检测乳腺癌组织、癌旁组织和正常乳腺组织中TM4SF1的表达,Western blotting法检测乳腺癌组织、癌旁组织和正常乳腺组织中TM4SF1的表达水平,RT-PCR法检测乳腺癌组织、 癌旁组织和正常乳腺组织中TM4SF1 mRNA的表达水平,检测不同临床病理特征乳腺癌患者乳腺癌组织中TM4SF1阳性表达率.结果:乳腺癌组织中TM4SF1阳性表达率高于癌旁组织和正常乳腺组织(P<0.05),癌旁组织与正常乳腺组织中TM4SF1的阳性表达率比较差异无统计学意义(P=0.531);TM4SF1表达与患者年龄无明显关联,与肿块大小、分化程度、淋巴结转移和肿瘤分期有密切关联(P<0.05);基底样型乳腺癌组织中TM4SF1阳性表达率高于其他3种病理类型(P<0.05).Western blotting法检测,乳腺癌组织中TM4SF1表达水平高于癌旁组织和正常乳腺组织(P<0.05),癌旁组织与正常乳腺组织中TM4SF1表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05).RT-PCR检测,乳腺癌组织中TM4SF1 mRNA表达水平高于癌旁组织和正常乳腺组织(P<0.01);癌旁组织与正常乳腺组织中TM4SF1 mRNA的表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05).结论:TM4SF1在乳腺癌组织中呈高表达,TM4SF1可能通过多种机制影响乳腺癌的发生发展及远处转移,提示TM4SF1可能成为乳腺癌治疗潜在的靶点.
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体外培养人牙周牙髓相关细胞中釉原蛋白的表达
目的:观察釉原蛋白(amelogenin,Am)基因在体外培养的人牙龈上皮细胞及口腔外胚间充质来源细胞(人牙龈成纤维细胞、人牙周膜成纤维细胞和人牙髓细胞)中的表达.方法:采用反转录多聚酶链式反应(RT-PCR)技术,检测培养细胞中釉原蛋白mRNA的表达.采用蛋白质免疫印迹技术检测培养细胞中釉原蛋白的表达.结果:培养的人牙周膜成纤维细胞、牙髓细胞、牙龈成纤维细胞和牙龈上皮细胞中均未检测到釉原蛋白及其mRNA的表达.结论:体外培养的人牙周膜成纤维细胞、牙髓细胞、牙龈成纤维细胞和牙龈上皮细胞不表达釉原蛋白基因.
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MMP-28在复发性阿弗他溃疡、口腔扁平苔藓、口腔白斑中的表达和意义的研究
目的 探讨MMP-28在复发性阿弗他溃疡、口腔扁平苔藓、口腔白斑中的表达和意义.方法 分别采用免疫组化和Westem-blot方法 检测MMP-28在14例复发性阿弗他溃疡、16例口腔扁平苔藓、15例口腔白斑病中的表达,并与12例正常口腔黏膜进行比较.结果 口腔扁平苔藓、口腔白斑组织中MMP-28的表达高于正常口腔黏膜和复发性阿弗他溃疡组织,白斑组织中表达高于扁平苔藓组织.结论 MMP-28在口腔扁平苔藓、白斑患者中有表达,且在白斑患者中高表达,提示其可能参与了癌变的发病过程.
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大鼠抗肠道病毒71型衣壳蛋白VP1特异性中和单克隆抗体的研制与应用
目的 研制大鼠抗肠道病毒71型(EV71)衣壳蛋白VP1特异性中和单克隆抗体(单抗),并用Western印迹、ELISA和免疫荧光检测(IFA)等方法验证其特异性 方法 采用单克隆杂交瘤技术人工合成包含EV71 VP1中和抗原决定簇位点SP70的多肽偶联载体蛋白KLH,腹腔内注射免疫大鼠数次后,取有预期免疫应答的脾细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,用间接ELISA法筛选和有限稀释法亚克隆获得稳定的阳性单克隆杂交瘤细胞株并鉴定其IgG亚型.选取其中1株单克隆杂交瘤细胞系BC6,体外培养后注射于SCID裸鼠腹腔制备腹水以产生大量抗体,用Protein A层析柱亲合纯化后获得纯化抗体.细胞培养微量中和试验测定该单抗中和EV71的滴度,并将其用于多种方法检测EV71特异性抗原.结果 共获得8株稳定的单克隆杂交瘤细胞系,分别有6株属于IgG1亚型,2株为IgG2a亚型.通过制备腹水大量产生抗EV71大鼠单抗BC6并纯化,其对EV71的中和滴度为1∶32.BC6用于Western免疫印迹可特异检测大肠埃希菌表达的EV71 VP1重组蛋白和EV71样品中的VP1,用于ELISA可灵敏特异地定性或定量检测EV71抗原含量,用于IFA可特异识别被感染Vero细胞内的EV71颗粒,而对柯萨奇病毒A16型无交叉反应.结论 成功制备获得了大鼠抗EV71 VP1的特异性中和单抗,可应用于Western免疫印迹、ELISA、IFA等方法,成为灵敏特异地检测EV71 VP1或全病毒颗粒的有效工具.
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丁香酸和柠檬苦素对小鼠肝脏CYP450酶的影响
目的 研究丁香酸和柠檬苦素对小鼠肝脏细胞色素P450主要亚型mRNA及蛋白表达水平的影响.方法 C57BL/6小鼠随机分为空白对照组、丁香酸组、柠檬苦素组和苯巴比妥组,连续灌胃给药2周,末次给药后处死,提取小鼠肝脏总RNA及肝微粒体,荧光定量聚合酶链式反应(PCR)技术和蛋白质免疫印迹(Western blot)测定CYP450酶主要亚型mRNA和蛋白表达水平.结果 在mRNA水平上,丁香酸对Cyp1a2、Cyp2c37、Cyp2d9 mRNA表达没有明显作用,柠檬苦素对Cyp1a2 mRNA的表达有显著诱导作用;在蛋白水平上,丁香酸对CYP1A1、CYP1A2、CYP3A、CYP2D和CYP2E1蛋白的表达有明显的诱导作用,柠檬苦素对CYP1A1、CYP1A2、CYP2A、CYP2D和CYP2E1有显著的诱导,对CYP2B和CYP2C蛋白表达产生抑制作用.结论 丁香酸和柠檬苦素对细胞色素P450主要亚型均具有不同程度的诱导和抑制作用.
关键词： 丁香酸 柠檬苦素 细胞色素P450 荧光定量聚合酶链式反应 蛋白质免疫印迹 -
MMP-28在口腔扁平苔藓中的表达及意义
目的 探讨基质金属蛋白酶-28(MMP-28)在口腔扁平苔藓(OLP)形成中的机制.方法 分别采用免疫组化和Western Blot法检测MMP-28蛋白在37例不同类型OLP中的表达,并与11份正常口腔黏膜标本进行比较.结果 OLP患者中MMP-28表达明显高于正常口腔黏膜组织,且糜烂型表达明显高于其他类型;OLP患者中MMP-28表达与性别、年龄及病损面积无明显相关.结论 MMP-28表达与OLP分型密切相关,随病变程度加重逐渐升高;检测MMP-28蛋白表达有助于预测OLP的恶性行为;抑制MMP-28有望成为OLP治疗的新途径.
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白蔹配伍乌头对大鼠肝脏CYP450的调节作用
目的 研究乌头、白蔹配伍对主要药物代谢酶CYP1A2、CYP2E1、CYP3A1/2在酶活性、mRNA水平和蛋白质水平的影响.方法 采用高效液相色谱法测定CYP1A2、CYP2E1活性;采用紫外-可见分光光度法测定CYP3A1/2活性;分别采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western Blot方法评价药物对CYP1A2、CYP2E1、CYP3A1、CYP3A2mRNA及蛋白水平的影响.结果 乌头、白蔹配伍后CYP1A2、CYP2E1、CYP3A1/2的酶活性均有下降;Western Blot检测显示CYP1A2、CYP3A1的蛋白质表达水平上升;CYP2E1、CYP3A2的蛋白质表达水平下降.RT-PCR检测显示CYP1A2、CYP2E1、CYP3A1、CYP3A2的mRNA水平均上升.结论 乌头、白蔹配伍后抑制CYP1A2、CYP2E1、CYP3A1/2的酶活性,CYP2E1酶活性下降可能主要通过影响基因转录进而影响其蛋白水平来实现;CYP1A2、CYP3A1/2酶活性下降则与基因和蛋白水平不相关.
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贝母、乌头合用对大鼠肝脏CYP450的调控作用
目的:研究乌头、贝母合用对主要药物代谢酶和蛋白质水平的影响,阐明中药产生相互作用的机制.方法:采用高效液相色谱法测定CYP1A2、CYP2E1活性;采用紫外-可见分光光度法测定CYP3A1/2活性;分别采用RT-PCR和Western Blot方法评价药物对CYP1A2、CYP2E1、CYP3A1、CYP3A2 mRNA及蛋白水平的影响.结果:乌头、贝母合用后CYP1A2、CYP2E1的酶活性均有下降;Western Blot检测显示CYP1A2、CYP2E1、CYP3A2的蛋白质表达水平下降;CYP3A1的蛋白质表达水平上升.RT-PCR检测显示CYP1A2、CYP2E1的mRNA水平下降;CYP3A1、CYP3A2的mRNA水平上升.结论:乌头、贝母合用后抑制CYP1A2、CYP2E1的酶活性,酶活性下降可能主要通过影响基因转录进而影响其蛋白水平来实现.
关键词： 细胞色素P450 酶活性 蛋白质免疫印迹 反转录聚合酶链式反应 -
RYBP在急性白血病中的表达
目的:观察RYBP(Ringl and YY1-binding protein)在急性白血病中的表达情况,初步探索其在急性白血病中的临床意义.方法:应用蛋白质免疫印迹(western blot)技术分别检测急性单核细胞白血病细胞株SHI-1、急性早幼粒白血病细胞株HL-60、慢性粒细胞白血病细胞株K562、51例初治急性白血病(AL)患者、23例急性白血病完全缓解(ALCR)患者和21例对照(非恶性血液病)患者骨髓单个核细胞申RYBP的表达情况.结果:SHI-1、HL-60及K562细胞株RYBP表达均为强阳性;21例阴性对照中RYBP表达均为阴性.AL组RYBP表达阳性率为73%,ALCR组阳性率为13%,AL组RYBP表达阳性率及表达量比ALCR组及对照组明显增高(P<0.05).结论:RYBP在急性白血病细胞中表达水平异常增高,提示RYBP可能与急性白血病密切相关.
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Yes相关蛋白在前列腺癌中的表达及意义
目的:探讨Yes相关蛋白(Yes-associated protein,YAP)在前列腺癌(prostate cancer,PCa)组织、癌旁(pericarcinoma,PC)组织和良性前列腺增生(benign prostatic hyperplasia,BPH)组织中的表达差异及其意义.方法:采用免疫组化技术检测32例PCa,15例PC和15例BPH中YAP的表达情况;采用Westemblot技术检测15例PCa和相应PC中YAP的表达水平.结果:32例PCa中YAP阳性表达25例,阳性率为78.13％;15例PC中YAP阳性表达4例,阳性率为26.67％; 15例BPH中未发现YAP阳性表达.组间差异有统计学意义(P=0.000);YAP的表达与PCa的临床分期、Gleason评分有关(分别为P=0.019;P=0.012).临床分期越高,Gleason评分越高,YAP的阳性率越高.Western blot显示15例PCa中YAP表达(0.723±0.084)均高于相应PC(0.455±0.161),差异具有统计学意义(P=0.06).结论:YAP在PCa中的表达明显高于非肿瘤组织,表现出明显的肿瘤特异性,有望成为PCa临床诊断和治疗的一个新指标.
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EGF与bFGF单独及联合应用对原代培养的兔角膜缘干细胞克隆形成率的影响
目的了解单独及联合应用表皮生长因子(epidermal growth factor, EGF)和碱性成纤维细胞生长因子(b-fibroblast growth factor, bFGF)对原代培养的兔角膜缘干细胞体外增殖的促进作用.方法进行兔角膜缘干细胞原代培养,用克隆形成率和蛋白质免疫印迹方法检测单独及联合应用不同质量浓度EGF与bFGF对干细胞增殖力的影响.结果角膜缘干细胞在本培养条件下能够正常生长.单独应用时,质量浓度为10 ng/ml的EGF和20 ng/ml的bFGF对干细胞的促增殖作用强(P<0.01),10 ng/ml的EGF与20 ng/ml的bFGF联合应用可达到佳的促干细胞增殖作用.蛋白质免疫印迹检测也得到了相符的结果.结论体外单独及联合应用EGF与bFGF对原代培养的兔角膜缘干细胞的增殖能力有明显的促进作用,为提供大量的角膜缘干细胞以治疗眼表疾病提供了实验基础.
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KLF4在宫颈癌中的表达及临床意义
目的:探讨转录因子KLF4在宫颈癌中的表达及临床意义.方法:采用免疫组化SP法检测80例宫颈癌、30例宫颈原位癌、30例正常宫颈组织中KLF4蛋白的表达情况并分析其与宫颈癌临床病理因素之间的关系;蛋白质免疫印迹法检测30例新鲜宫颈癌组织及配对宫颈癌旁组织的蛋白表达水平.结果:免疫组化结果显示KLF4在宫颈癌、宫颈原位癌及正常宫颈组织中的阳性表达率分别为11.25％、56.67％和86.67％,在宫颈癌中的阳性表达较其它各组明显下降(P＜0.05).KLF4在宫颈癌组织中的表达与患者年龄、肿瘤分化程度、组织学分型无关(P＞0.05),随着临床分期的进展,KLF4阳性表达率呈下降趋势(P＜0.05);蛋白质免疫印迹检测结果提示KLF4在宫颈癌中的表达水平低于癌旁组织,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:KLF4在宫颈癌中的表达水平与其进展呈负相关,在宫颈癌发生发展的过程中发挥抑癌基因作用,有望成为预测宫颈癌发生发展、靶向治疗及判断患者预后的新的参考指标.
