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胃肠舒对胃肠平滑肌细胞内皮型一氧化氮合酶mRNA表达的影响
目的:探讨胃肠舒促胃肠动力作用机制.方法:原代培养胃肠平滑肌细胞,分胃肠舒大、中、小剂量组,西沙必利组和正常对照组,各组用相应受试药物干扰胃肠平滑肌细胞24h.提取细胞总RNA,应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法,半定量分析eNOS mRNA表达水平.结果:胃肠舒大、中剂量组与正常对照组比较,胃肠平滑肌细胞,eNOS mRNA表达水平显著降低(P<0.01,P<0.05).结论:胃肠舒促胃肠动力的作用机制可能是通过抑制胃肠平滑肌细胞eNOS mRNA表达而抑制细胞内NO生成,进而抑制相关酶的活化,拮抗cGMP生成,使胞内Ca<'2+>增多,Ca<'2+>信号系统引发一系列生理功能而促进胃肠平滑肌收缩.
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平喘宁对寒性哮喘大鼠肺组织ERK2 mRNA及c-fos mRNA表达的影响
目的:研究平喘宁对寒性哮喘大鼠气道重塑及其肺组织中ERK2mRNA及c-fos mRNA表达水平的影响.方法:雄性SD大鼠70只,随机分为正常组、模型组、地塞米松组、桂龙咳喘宁组以及平喘宁高、中、低剂量组,每组为10只.以卵蛋白致敏及寒冷刺激复制大鼠哮喘模型,造模21d后,正常组、模型组每天给予等量蒸馏水灌服,地塞米松组、桂龙咳喘宁组、平喘宁高、中、低剂量组按人体与大鼠体表面积换算比折算剂量灌胃,灌胃4周后解剖大鼠并取出肺组织.采用HE染色法观察肺组织的病理形态学改变;采用逆转录-聚合酶链式反应以半定量测定ERK2 mRNA、c-fosmRNA的表达丰度.结果:模型组发生明显肺组织炎症反应和气道重塑现象,地塞米松组、桂龙咳喘宁组、平喘宁组较模型组有不同程度的好转;模型组ERK2mRNA、c-fos mRNA表达水平比正常组显著升高(P＜0.01,P＜0.05);经平喘宁小、中、大剂量治疗后,ERK2mRNA、c-fosmRNA表达水平减低(P＜0.05,P＜0.01).结论:平喘宁明显减轻哮喘大鼠气道炎症反应,抑制哮喘大鼠肺组织中ERK2mRNA、c-fosmRNA的表达,延缓气道重塑而治疗哮喘.
关键词： 哮喘 平喘宁 ERK2 mRNA c-fos mRNA 逆转录-聚合酶链式反应 -
逆转录-聚合酶链式反应检测果树RNA病毒
为调查主要果树携带苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)、苹果茎沟病毒(ASGV)、苹果茎痘病毒(ASPV)和李属坏死环斑病毒(PNRSV)的情况,以指示植物为试材,优化了四种病毒的逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测体系.使用该优化体系检测了苹果树、樱桃树、桃树中携带上述四种病毒的情况.结果:建立了特异性强、灵敏度高、成本低的RT-PCR检测体系;同时又证明主要果树被这几种病毒单独感染和复合感染的程度均较高.
关键词： 逆转录-聚合酶链式反应 优化 主要果树病毒 检测 -
DNA结合抑制因子2在大鼠脑室管膜前下区神经干细胞发育中的表达
目的 讨DNA结合抑制因子2(Id2)在大鼠脑室管膜前下区(SVZa)神经干细胞(NSCs)发育分化中的作用.方法 运用RT-PCR、Western blotting、免疫组织化学技术,观察Id2在不同发育阶段SVZa-喙侧迁移流(RMS)-嗅脑(OB)流通道中的时空表达模式. 结果从空间上看,Id2在RMS表达始终高,SVZa次之,在OB表达弱;从发育的时间来看,Id2在各区域胚胎时期表达均比刚出生时强;在OB和RMS区,成年比刚出生时表达强,老年仍有较强表达;在成年SVZa表达比刚出生时弱. 结论 Id2在SVZa神经干细胞的发育学表达模式提示,Id2可能有促进SVZa神经干细胞增殖和抑制其在RMS迁移区分化的作用.
关键词： DNA结合抑制因子2 室管膜前下区 神经干细胞 发育 逆转录-聚合酶链式反应 免疫印迹法 免疫组织化学 大鼠 -
逆转录-聚合酶链式反应用于麻疹实验室诊断初探
为了探索对麻疹病例更好的实验室确诊方法,采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR),对76例已确诊或疑似麻疹病例的咽拭子检测了麻疹病毒核酸,结果61例麻疹病例咽拭子中有32例检出阳性,检出率52 .5%;8例风疹病例的咽拭子无阳性检出;麻疹、风疹IgM抗体均阴性的 7例疑似病例咽拭子中,有1例检出阳性,并进一步分离到麻疹病毒.在麻疹病例中,RT-PCR阳性检出率随病例出疹天数的延长逐渐降低.检测结果提示:RT-PCR方法特异,可提早发现并诊断麻疹,进而可以作为网络实验室诊断麻疹的补充手段.
关键词： 逆转录-聚合酶链式反应 麻疹病例 IgM 抗体 -
乳腺癌腋窝淋巴结的超声诊断与人乳腺珠蛋白基因检测
目的 检测乳腺癌腋窝淋巴结(ALN)中人乳腺珠蛋白基因(hMAM)的表达,探讨超声对诊断ALN的价值及hMAM的临床应用价值.方法 以超声发现的10例乳腺癌患者的23枚ALN作为试验组,术前对其标记,术后对离体标本行常规病理及hMAM mRNA的逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测.以6枚无乳腺癌病史患者的颈部或ALN作为对照组.结果 10例乳腺癌组织的hMAM均呈阳性;23枚淋巴结中病理阳性率26.09%(6/23),hMAM表达阳性率78.26%(18/23),二者差异有统计学意义(P＜0.05);6枚对照组淋巴结病理为反应性增生或正常,hMAM表达均阴性.结论 超声可以实时观察ALN并预测其良恶性;hMAM的RT-PCR检测可显著提高乳腺癌ALN转移的检出率.
关键词： 乳腺肿瘤 超声检查 淋巴结 人乳腺珠蛋白 逆转录-聚合酶链式反应 -
人食管癌组织中β1-整合素mRNA的表达及其意义
目的:研究β1-整合素(β1-integrin)在人食管癌组织中的表达及其与食管癌的临床病理关系.方法:采用RT-PCR方法检测30例人食管癌组织及癌旁正常食管组织中β1-integrin的表达.结果:食管癌组织及癌旁正常食管组织中都有不同程度β1-integrin的表达,并且前者明显高于后者(1.205±0.379 vs 0.470±0.166,P=0.003);伴有淋巴结转移者食管癌组织β1-integrin表达量明显高于无转移者(1.534±0.229 vs 0.998±0.160,P=0.023).随食管癌分期增高,β1-integrin mRNA表达量也不断增高.结论:β1-integrin可能在食管癌细胞的恶性生物学行为中具有重要的作用.
关键词： 食管癌 β1-整合素 逆转录-聚合酶链式反应 -
p14ARF、ARF-BP1及c-myc mRNA在肝细胞癌中的表达及临床意义
目的:探讨肝细胞癌组织中p14ARF、ARF-BP1 及c-myc的mRNA表达及其与临床参数关系.方法:采用半定量逆转录.聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,对52例HCC组织及其中45例相应癌旁组织p14ARF、ARF-BP1及c-myc的mRNA表达丰度进行检测并分析他们之间的关系及其与临床参数的关系.结果:在52例HCC组织中p14ARF、ARF-BP1c-myc的mRNA各表达77.0%、77.0%和75.0%,与45例相应癌旁组织(11.1%、20.O%、53.3%)比较,呈高表达.p14ARF、ARF-BP1 mRNA的表达与肿瘤大小有关(t=2.169,2.087,均P＜0.05);而c-myc mRNA表达与肿瘤大小无关.p14ARF、ARF-BP1及c-myc的mRNA表达在性别、年龄、AFP、临床病理分级、浸润转移、HBV、包膜等无统计学差异.p14ARF与ARF-BP1、p14ARF与c-myc及ARF-BP1与c-myc的mRNA表达两两成正相关(r=0.565,0.436,0.584,均P＜0.01).结论:p14ARF、ARF-BP1、c-myc过度表达可能是HCC发生的早期指标;ARF-BP1过度表达可能是影响HCC发生、发展的关键,干预ARF-BP1可能是治疗HCC的新途径.
关键词： p14ARF ARF-BP1 c-myc 肝细胞癌 逆转录-聚合酶链式反应 -
高迁移率族蛋白B1在重症急性胰腺炎肠屏障损害中的作用
目的:探讨高迁移率族蛋白B1在重症急性胰腺炎(SAP)肠屏障损害中的作用及其机制.方法:采用逆行胆胰管注射50g/L牛磺胆酸钠制备SAP大鼠模型.将56只Wistar大鼠随机分为正常对照组(Control组),SAP 3h,6h,12h,24h,48h 5个亚组,二硫代氨基甲酸吡咯烷处理组(PDTC组),每组8只.PDTC组于建模后24h取材.测定血浆内毒素(LPS)、二胺氧化酶(DAO)水平,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测肠组织高迁移率族蛋白B1(HMGB1)mRNA表达,用Western blot法检测肠组织HMGB1水平.结果:与对照组比较,SAP 6h组大鼠肠组织HMGB1 mRNA表达显著增高(0.41±0.06 vs0.26±0.03,P＜0.01),12h呈现进一步升高趋势,24h达峰值(0.62±0.06),并持续至48h.PDTC干预可显著降低肠组织HMGB1 mRNA表达(0.35±0.06 vs 0.62±0.06,P＜0.01).PDTC组较SAP 24h组肠组织HMGB1 mRNA表达,血浆LPS和DAO显著下降(HMGB1 mRNA表达:0.35±0.06 vs 0.62±0.06,P＜0.01:LPS:0.433±0.120 KEU/L vs 0.852±0.232 KEU/L,P＜0.01:DAO:0.65±0.12 kU/L vs 1.36±0.22kU/L,P＜0.01).结论:SAP时,肠组织内HMGB1表达上调;PDTC可以明显抑制SAP时肠组织内HMGB1表达.
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肾癌G250抗原基因真核表达载体的构建和序列测定
目的构建肾癌G250抗原基因编码区序列的真核表达载体并进行序列测定.方法从肾癌组织中提取总RNA,采用RT-PCR技术扩增肾癌G250抗原的基因编码区序列,将PCR片段定向克隆至真核表达载体pcDNA3.0,并进行序列测定. 结果肾癌组织RT-PCR扩增后,均产生特异性条带,位置在1000 bp和1600 bp之间,与预定相符.pcDNA3.0-G250分别用HindⅢ、Xho I双酶切后产生2条带,均与预定位置相符;抗原基因编码区序列与Genbank登录号BC014950文献报道的序列同源性为100%,目的基因与载体正确连接.结论成功克隆了肾癌G250抗原的基因编码区序列,并构建了其真核表达载体pcDNA3.0-G250,为核素标记的G250单克隆抗体在诊断和治疗的应用及G250基因修饰的树突状细胞疫苗的肾癌生物治疗提供了依据.
关键词： 肾肿瘤 癌 G250/MN/CAIX抗原 逆转录-聚合酶链式反应 克隆 序列分析 -
IGF-Ⅱ在足月妊娠胎盘中的表达及与胎儿出生体重关系的探讨
目的 研究胰岛素样生长因子-Ⅱ(insulin-like growth factor-Ⅱ,IGF-Ⅱ)在足月胎盘中的表达及与胎儿出生体重的相关性.方法 采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术对足月分娩的巨大儿与正常体重新生儿胎盘组织中IGF-ⅡmRNA的表达水平进行检测并对比其差异性.结果 ① IGF-Ⅱ在巨大儿组及对照组中均有表达,巨大儿组中IGF-ⅡmRNA表达水平为(1.19±0.31),表达率为93.8%,对照组中表达水平(1.15±0.28),表达率为88.9%,两组间表达水平及表达率差异均无显著统计学意义(P＞0.05);②胎盘组织中IGF-ⅡmRNA的表达丰度与新生儿出生体重无明显相关性(r=-0.216,P=0.213).结论 IGF-ⅡmRNA在足月妊娠胎盘组织中有表达,其表达量与新生儿出生体重无明显相关性,IGF-Ⅱ可能不是妊娠晚期胎盘中影响胎儿生长的主要因子.
关键词： 胰岛素样生长因子-Ⅱ 巨大儿 逆转录-聚合酶链式反应 -
半定量RT-PCR检测钙调磷酸酶抑制剂对IL-2,IL-4,IFN-γmRNA表达的影响
目的 利用半定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,测定细胞因子白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-4(IL-4)、干扰素-γ(IFN-γ)mRNA表达水平,研究其在肾移植患者术后,钙调磷酸酶抑制荆治疗的疗效评价中的应用.方法 取肾移植后患者外周血分离淋巴细胞,提取总RNA,进行RT-PCR反应,通过光密度扫描进行半定量分析;结合治疗药物监测结果分析.结果 他克莫司(FK506)组3种细胞因子表达显著低于环孢素(CsA)组,且离散程度小.血药浓度谷值(p0)与细胞因子表达相关性不强.CsA组3种细胞因子之间的相关性比FK506组好.尿蛋白阳性的患者较阴性患者血清肌酐(Cr)显著升高,且IL-4表达显著升高.结论 钙调磷酸酶抑制剂的个体敏感性差异很大.IL-2,IL4,IFN-γ mRNA的表达可以作为血药浓度的重要补充,为个体化给药提供依据.
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小鼠脑脊髓炎病毒 RT-PCR 方法的建立及初步应用
目的：建立小鼠脑脊髓炎病毒RT-PCR方法并对方法进行初步应用。方法根据NCBI 发表的TMEV GD VII株（ GI：62039）基因组序列设计特异引物，建立RT-PCR方法，验证方法的敏感性和特异性；脑腔接种方式感染9只BALB／c小鼠，感染后第6天采集动物的脑、心、肝、脾、肺、肾、盲肠内容物和血清等样本，用建立的方法进行检测；同时检测100份小鼠盲肠内容物样本，对方法进行初步应用。结果以GD VII RNA为模板，建立的RT-PCR方法能够扩增出约371bp的单一目的条带，敏感性验证显示能够检测到的低GD VII cDNA量为0.69pg／μL；以脑心肌炎病毒、淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒、日本乙型脑炎病毒、小鼠诺如病毒及正常小鼠脑组织为对照进行方法特异性验证，均未出现目的条带。脑腔接种感染小鼠，所有小鼠在接种第3天均产生不同程度的精神萎靡后肢麻痹等症状，其中2只小鼠于第5天死亡；采集心、肝、脾、肺、肾、脑、盲肠内容物及血清等样本进行检测，所有小鼠的脑组织均检测到GD VII RNA，而其他组织均未检测到；对100份小鼠盲肠内容物进行检测，结果均为阴性。结论建立的TMEV GDVII株RT-PCR方法能够高效的检测小鼠组织中的病毒感染，可作为实验动物国家标准的有力补充。
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逆转录-聚合酶链式反应检测大肠癌患者淋巴结微转移
目的探讨大肠癌患者淋巴结的微转移及其临床意义.方法采用苏木素-伊红(HE)病理切片染色和细胞角蛋白20(CK20)的RT-PCR 法检测了经病理证实的39例大肠癌患者的260枚淋巴结的肿瘤转移情况.10 枚正常淋巴结为阴性对照,HT29结肠癌细胞和5例大肠癌标本为阳性对照.结果 10枚正常淋巴结CK20表达阴性,HT29细胞和大肠癌标本CK20表达阳性.HE 染色查见转移的1 6例患者的29枚淋巴结CK20 mRNA全部阳性,而在组织学未见转移的淋巴结中,有5例患者的28枚呈CK20阳性表达,即存在癌转移,显示两种方法的检测结果差异显著(11.1%和21.9 %,P<0.01).按照HE染色结果,Dukes' A、B、 C和D期的病例数分别为3、20、12和4 例,在20例Dukes' B期患者中,5例有CK20表达阳性的淋巴结.结论 CK20的RT-PCR检测是发现肿瘤淋巴结微转移的敏感、特异和简便的方法.大肠癌患者淋巴结CK20 mRNA 的检测可用于大肠癌的准确分期和围手术期辅助治疗方案的选择,但需进一步研究加以证实.
关键词： 结直肠肿瘤 肿瘤转移 淋巴结 角蛋白 逆转录-聚合酶链式反应 -
电磁脉冲对海马N-甲基-D-天冬氨酸受体mRNA表达的影响
目的 探讨电磁脉冲(electromagnetic pulse, EMP)对海马N-甲基-D-天冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartate receptor,NMDA-R)mRNA表达水平的影响,揭示EMP照射导致学习记忆障碍的神经生物学机制.方法 EMP照射条件为6×104 V/m,脉冲上升时间20 ns,脉宽30 μs,频率2.5脉冲/min,作用2 min.二级雄性Wistar大鼠40只,随机分为EMP组(n=35)和对照组(n=5),EMP组大鼠接受EMP照射后分别于0 h,6 h,12 h,24 h,3 d,7 d,14 d断头取脑,每个时间点取5只,采用逆转录-聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)检测海马组织中NMDA-R1在mRNA水平的表达情况.结果 EMP照射后1 h即可见NMDA-R1 mRNA 表达水平的升高,6 h显著(1.64±0.35),与对照组(0.20±0.05)相比(P<0.01),12～24 h有所回降,3～7 d 又明显升高 (1.66±0.36, 1.64±0.31, P<0.01).EMP 照射后 14 d, NMDA-R1 mRNA 的表达仍维持在高于对照组水平 (P<0.05). 结论 EMP照射后, 机体可能通过某种途径激活了NMDA-R1 mRNA的转录和翻译,合成新的受体分子以适应学习记忆功能的需要.
关键词： 电磁脉冲 N-甲基-D-天冬氨酸受体 逆转录-聚合酶链式反应 -
气道平滑肌细胞Ryanodine受体亚型mRNA的表达及其在哮喘中的变化
目的:测定正常大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)中Ryanodine受体(Ryanodine receptor RyR)各亚型mRNA的表达以及在哮喘中的变化.方法:采用胶原酶消化法培养大鼠ASMCs,RT-PCR测定受体各亚型mRNA的表达.卵蛋白致敏并激发大鼠制备慢性哮喘模型,RT-PCR测定各受体mRNA表达水平的变化.结果:大鼠ASMCs中可见RyR1、RyR2和RyR3三种RyR亚型mRNA共表达,扩增片段测序结果与GenBank中登录的大鼠RyR1-3序列完全一致.制备的慢性哮喘模型中,病理切片显示平滑肌层及黏膜层明显增厚,RyR1的表达较对照组有明显的上调P＜0.05.结论:大鼠气道平滑肌细胞中RyR三种亚型共表达,提示存在着复杂的细胞内钙调节机制;并且RyR1在慢性哮喘的发生过程中可能起了一定的作用.
关键词： ryanodine 受体 气道平滑肌细胞 逆转录-聚合酶链式反应 大鼠 -
促凋亡基因PDCD5在新疆哈萨克族与汉族食管癌中的表达及临床意义
目的:探讨新疆哈萨克族与汉族食管鳞癌组织中PDCD5 mRNA的表达及其临床意义.方法:以PDCD5mRNA为靶基因运用RT-PCR法检测40例食管鳞癌患者中PDCD5mRNA的表达(哈萨克族18例、汉族22例).结果:40例食管鳞癌患者癌组织、癌旁组织、正常组织中PDCD5mRNA表达阳性率为80.0%、80.0%、87.5%,差异均无统计学意义(P>0.05).半定量光密度计数后PDCD5 mRNA表达量在食管鳞癌患者癌组织、癌旁组织、正常组织中分别为0.764 4±0.144 4、0.934 1±0.163 1和1.870 3±0.476 7,其表达在癌组织与正常组织中差异有统计学意义(P<0.05).PDCD5 mRNA的表达与分化程度有无淋巴结转移均无相关性.结论:PDCD5 mRNA的表达在不同民族之间无显著性差异.PDCD5 mRNA的表达与食管癌的发生、发展、远处转移和细胞分化程度均无密切相关性,可以通过增加例数对其关联性进行深入研究;PDCD5 mRNA在食管癌患者癌组织中的表达量低于正常组织,本研究可能对食管癌的治疗提供理论依据.
关键词： 食管癌 程序化细胞死亡分子5 逆转录-聚合酶链式反应 民族 -
替罗非班早期干预对非ST抬高型急性冠脉综合征患者MMP-9与sCD40L表达的影响
目的 观察替罗非班早期干预治疗对非ST抬高型急性冠脉综合征患者基质金属蛋白酶-9(MMP-9)与可溶性CD40配体(sCD40L)的影响.方法 120例非ST抬高型急性冠脉综合征患者(发病<48 h)随机分为常规治疗组和替罗非班组,收集血液检查结果,抽血分离单核细胞,逆转录-聚合酶链式反应法检测患者MMP-9和sCD40L水平的变化.结果 替罗非班可下调MMP-9、CD40和CD40L mRNA的表达,有时间依赖性,应用12 h、24 h、36 h后,替罗非班组与常规治疗组相比,MMP-9和sCD40L水平分别下降50%、73%和82%;sCD40L的表达降低32%、69%和88%.结论 替罗非班能抑制sCD40L以及MMP-9的表达,替罗非班对MMP-9的抑制作用与CD40/CD40L信号通路相关.
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大肠癌门静脉微转移预后分析
目的 探讨门静脉血中微转移对大肠癌病人术后1、2、3年存活率的影响.方法 对南昌大学附属第一医院2002年5月至2003年9月间接受手术治疗46例大肠癌病人,采用RT-PCR(逆转录-聚合酶链式反应)方法检测门静脉血中CK20mRNA的表达,所有病人随访3年以上.结果 46例大肠癌病人CK20mRNA的阳性率为54.3%(25/46),术后1、2、3年存活率分别为86.5%、70.2%、63.1%;CK20mRNA阳性病人术后1、2、3年存活率分别为74.5%、46.5%、41.9%;阴性病人术后1、2、3年存活率分别为95.2%、85.7%、85.7%,两组比较x2=11.69,P＜0.01,CK20mRNA阳性组存活率低于阴性组.结论 门静脉血中微转移的检测可协助评判大肠癌病人的预后,为术后监控及进一步的综合治疗提供参考价值.
关键词： 结直肠肿瘤 门静脉 微转移 逆转录-聚合酶链式反应 -
局灶性脑缺血中脑组织和血清中白细胞介素6及肿瘤坏死因子α表达的研究
目的:研究在大鼠局灶性脑缺血的动物模型中脑组织白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达变化及血清中IL-6和TNF-α的含量的变化.方法:采用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血的动物模型,在缺血后6,12,24,48 h断头取脑,并采静脉血.分别以逆转录-聚合酶链式反应和放射免疫方法检测脑组织中IL-6和TNF-αmRNA的变化及血清中IL-6和TNF-α的含量变化.结果:缺血脑组织中IL-6的mRNA的表达水平升高,6 h达到高峰,48 h恢复到基础水平.血清中IL-6的含量在脑缺血后同样升高,12 h达到高峰.而脑组织TNF-αmRNA的表达在12 h达到高峰,血清中的TNF-α水平48 h内仍继续升高.结论:局灶性脑缺血可以诱发血清和脑组织中IL-6和TNF-α的高表达.
关键词： 脑缺血 白细胞介素6 逆转录-聚合酶链式反应 肿瘤坏死因子α
