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hMAM 水平与乳腺癌早期诊断和癌微转移的相关性及临床意义研究
目的：探讨血清人乳腺珠蛋白（hMAM）水平与乳腺癌早期诊断和癌微转移的相关性及其临床意义。方法采用酶联免疫吸附试验（ELISA）分别检测64例乳腺癌患者、32例其他癌患者（直肠癌、胃癌、卵巢癌、前列腺癌患者各8例）、34例良性乳腺相关疾病肿瘤患者和36例体检正常的女性（正常对照组）的血清人乳腺珠蛋白水平并做比较。将64例乳腺癌患者分别按临床 TNM 分期、雌激素受体（ER）表达程度、腋窝淋巴结的转移程度及绝经与否分组并做比较。通过受试者的工作特征曲线（即 ROC 曲线）确定乳腺癌患者的 hMAM 的 Cut - off 值。结果血清 hMAM 的ROC 曲线面积为0.855，即乳腺癌诊断结果的可信度为85.5%；血清 hMAM 的 Cut - off 值为8.54 ng/ ml，其特异性和敏感度分别为83.2%和75.9%。在血清 hMAM 水平和阳性率的比较中，乳腺癌组明显高于其他三组（ P ﹤0.05），且其他三组间差异无显著性（ P ﹥0.05）。Ⅲ和Ⅳ期乳腺癌患者的血清 hMAM 阳性率（62.50%、75.00%）明显高于Ⅰ和Ⅱ期患者（31.25%、37.50%，P ﹤0.05），但 hMAM 水平无显著性差异（ P ﹥0.05）。存在腋窝淋巴结转移的乳腺癌患者的血清 hMAM 的阳性率（90.91%）明显高于无转移的患者（25.00%）（ P ﹤0.05），但 hMAM 水平无显著性差异（ P ﹥0.05）。乳腺癌患者的血清中是否存在 ER 以及是否绝经对 hMAM 及阳性率均无显著性差异（ P ﹥0.05）。结论乳腺癌临床TNM 分期及腋窝淋巴结转移程度与 hMAM 的表达存在相关性；在乳腺癌高危人群的血清检验中，hMAM 的检测有助于提高乳腺癌早期诊断的临床意义，在诊断乳腺癌早期微转移与治疗中具有关键性作用。
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乳腺癌腋窝淋巴结的超声诊断与人乳腺珠蛋白基因检测
目的 检测乳腺癌腋窝淋巴结(ALN)中人乳腺珠蛋白基因(hMAM)的表达,探讨超声对诊断ALN的价值及hMAM的临床应用价值.方法 以超声发现的10例乳腺癌患者的23枚ALN作为试验组,术前对其标记,术后对离体标本行常规病理及hMAM mRNA的逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测.以6枚无乳腺癌病史患者的颈部或ALN作为对照组.结果 10例乳腺癌组织的hMAM均呈阳性;23枚淋巴结中病理阳性率26.09%(6/23),hMAM表达阳性率78.26%(18/23),二者差异有统计学意义(P＜0.05);6枚对照组淋巴结病理为反应性增生或正常,hMAM表达均阴性.结论 超声可以实时观察ALN并预测其良恶性;hMAM的RT-PCR检测可显著提高乳腺癌ALN转移的检出率.
关键词： 乳腺肿瘤 超声检查 淋巴结 人乳腺珠蛋白 逆转录-聚合酶链式反应 -
新辅助化疗对乳腺癌患者血清hMAM水平影响的观察
目的:研究新辅助化疗(NAC)对乳腺癌患者血清hMAM水平的影响.方法:应用酶联免疫吸附法(ELISA)测定164例乳腺癌患者NAC前后及手术后血清hMAM水平.结果:在化疗有效(CR、PR)组中,NAC后hMAM水平分别为20.59(6.27)和28.32(13.03) ng/mL,NAC前分别为39.87(12.91)和35.56(20.25) ng/mL,两者差异有统计学意义,P＜0.01；而化疗无效组(SD+ PD) NAC前后血清hMAM水平差异无统计学意义.hMAM的下降水平与肿瘤大径有关,T1组为11.73(21.57) ng/mL,T2组为18.55(21.88) ng/mL,T3组为26.99(21.12) ng/mL,3组差异有统计学意义,P=0.005.hMAM的下降水平还与临床化疗效果有关,CR组为43.35(15.95) ng/mL,PR组为22.15(16.21) ng/mL,SD+PD组为0.53(17.18) ng/mL,3组差异有统计学意义,P=0.000.hMAM的下降水平与临床分期、组织学分级、淋巴结状态、年龄、月经状态、分子分型、病理学类型以及ER、PR、HER-2、p53和Ki-67表达等无关.结论:血清hMAM水平变化与下降水平可作为NAC常规疗效判断标准的补充,有望成为判断乳腺癌患者病情发展和预后的新指标.
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hMAM mRNA的定量检测对乳腺癌外周血微转移的诊断价值
目的:建立SYBR Green Ⅰ实时定量逆转录PCR(Real-Time Quntitative RT-PCR,Q-RT-PCR)技术定量检测人乳腺珠蛋白(human mammaglobin,hMAM) mRNA的技术,并应用于检测外周血hMAM mRNA,探讨其诊断乳腺癌患者外周血微转移的可行性及意义.方法:应用自行建立的SYBR Green Ⅰ Q-RT-PCR检测技术,检测61例乳腺癌、33例乳腺良性肿瘤患者以及11例健康志愿者外周血hMAM mRNA的表达量,分析其表达水平与乳腺癌临床病理特征及ER、PR及HER-2表达的关系.结果:61例乳腺癌患者外周血中10例检出hMAM mRNA表达,其癌组织HER-2阳性者占8例,HER-2阴性组未见hMAM mRNA阳性表达.HER-2阳、阴性组间外周血hMAM mRNA表达,差异具有统计学意义,P=0.028;与其他临床、病理特征无相关性,P0.05.HER-2阳性患者外周血中hMAM mRNA表达量范围1.98×102～6.21×103,中位数4.0×102,在临床、病理特征间差异无统计学意义,P0.05.乳腺良性肿瘤及健康志愿者外周血hMAM mRNA均阴性.结论:SYBR Green Ⅰ Q-RT-PCR技术可定量检出乳腺癌患者外周血hMAM mRNA;乳腺癌患者外周血hMAM mRNA表达与其乳腺癌组织HER-2表达相关.定量检测hMAM mRNA可作为乳腺癌外周血微转移的重要方法.
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抗原修复在陈旧石蜡切片乳腺珠蛋白免疫组化检测中的应用
目的：探索一种简便有效的抗原修复方法，用于陈旧切片的人乳腺珠蛋白（human mammaglobin，hMAM）免疫组化检测。方法将乳腺癌患者陈旧乳腺组织石蜡切片脱蜡至水，按常规免疫组化步骤进行检测。其中，实验组直接将切片浸入pH 3．5的柠檬酸盐缓冲液中室温修复10～15 min；同时以微波和高压加热修复法处理相应患者石蜡切片作为对照，后以SP检测系统检测抗原修复及与抗体反应的效果。结果实验组与高压组和微波组比较，修复效果较好，且无组织脱片与折损现象。结论建立了一种利用陈旧组织切片检测乳腺珠蛋白的简便、有效的抗原修复方法，并能很好地防止脱片现象发生。
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乳腺癌新辅助化疗患者外周血乳腺珠蛋白测定的临床意义
目的 探讨外周血人乳腺珠蛋白(hMAM) mRNA的变化在评估新辅助化疗疗效中的价值.方法 应用巢式-逆转录-聚合酶链反(Nested-RT-PCR)技术检测62例接受新辅助化疗的乳腺癌患者化疗前、后外周血hMAM mRNA的表达.新辅助化疗前表达阳性者(31例)于化疗后分为缓解组和不缓解组.结果 新辅助化疗前阳性率为50％(31/62).新辅助化疗后阳性率为24.19％(15/62).缓解组与非缓解组间hMAM mRNA表达的转阴率为53.6％和33.3％,有显著性差异(P＜0.05).结论 外周血hMAM mRNA表达可能成为判断新辅助化疗是否有效的实验室指标.
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人乳腺珠蛋白临床应用研究进展
人乳腺珠蛋白(hMAM)是一种分泌型球蛋白,在乳腺癌组织中高表达,具有乳腺组织特异性.hMAM是一种良好的乳腺肿瘤标志物,具有重要的临床应用价值,对乳腺癌早期诊断与鉴别诊断具显著意义,并为乳腺癌的免疫治疗、基因治疗提供广阔的应用前景.
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乳腺癌相关分子人乳腺珠蛋白基因的克隆及原核表达
[目的]克隆乳腺癌相关分子人乳腺珠蛋白(human mammaglobin,hMAM)基因并诱导其表达,为后期研制乳腺癌早期诊断试剂盒奠定基础,从而为早期发现乳腺癌提供科学的监测方法.[方法]从乳腺癌组织提取总RNA,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增hMAM基因编码序列,将扩增产物克隆至PGEM-T载体中,DNA测序,用限制性内切酶切下目的基因,与相同酶切的表达载体pQE40连接、筛选、鉴定,构建pQE40-hMAM融合表达质粒,以硫代半乳糖苷(IPTG)诱导在大肠杆菌M15中表达,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表达结果.[结果]琼脂糖凝胶电泳显示聚合酶链反应(PCR)扩增产物的分子量大小与预期相符.对重组质粒分析表明,插入片段的序列与文献报道hMAM基因编码序列一致.在IPTG的诱导下,M15重组菌高效表达出一个相对分子质量约为34 kD的产物.[结论]重组表达质粒pQE40-hMAM表达成功.
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不同抗原修复方法在陈旧性石蜡切片乳腺珠蛋白免疫组化中的比较
目的 探讨不同抗原修复方法在陈旧性石蜡切片乳腺珠蛋白免疫组化中的效果.方法 选取2010年1月至2012年4月本实验室保存的陈旧组织石蜡切片样品76例,所有样品组织均取自乳腺癌患者,各取连续3张切片分别归入试验组、高压组和微波组.微波组和高压组按照常规加热修复法处理相应患者石蜡切片,试验组在pH为3.5±0.1的柠檬酸盐缓冲液中室温修复15 min.比较三组切片的抗原修复效果.结果 三组切片经过不同的处理方法修复后,肿瘤细胞染色结果显示,试验组染色强度及高阳性比例分布优于高压组和微波组,差异具有统计学意义(x2 =11.122、14.468、12.859、13.267,P＜0.05).综合阳性标记分数显示,试验组阳性分数多为++、+++,与高压组、微波组分布比较差异有统计学意义(x2=13.713、10.331,P＜0.01).试验组阳性率明显高于后两组,差异具有统计学意义(x2=6.199、4.475,P＜0.05).试验组经修复后的脱片率(x2=22.800、27.059,P＜0.01)及折损率(x2 =64.083、40.827,P＜0.01)均明显低于高压组、微波组.结论 常温下pH为3.5±0.1柠檬酸盐缓冲液进行抗原修复,能减少组织脱片及折损的发生率,提高切片修复效果.
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hMAM联合MMP-9和C-erbB2mRNA表达检测在乳腺癌外周血微转移诊断中的应用
目的:探讨生物标记物人乳腺珠蛋白(hMAM)联合基质金属蛋白酶9(MMP-9)和人表皮生长因子受体2 (C-erbB2) mRNA在乳腺癌外周血微转移患者中阳性表达情况,阐明其用于诊断乳腺癌外周血微转移的临床应用价值.方法:选择74例乳腺癌患者、21例乳腺纤维腺瘤患者和10名健康人作为研究对象,所有患者均行手术治疗,采集外周血,运用实时荧光定量PCR检测外周血hMAM、MMP-9和C-erbB2 mRAN表达水平,比较hMAM、MMP-9和C-erbB2联合检测阳性表达率,并分析不同临床病理特征患者之间hMAM、MMP-9和C-erbB2联合检测的差异.结果:MMP-9、C-erbB2 mRNA阳性表达率在有无淋巴结转移患者间比较差异有统计学意义(x2 =6.450,P＜0.05;x2=5.636,P＜0.05),hMAM mRNA阳性表达率在HER-2阳性与阴性患者间比较差异有统计学意义(x2=5.804,P＜0.05).乳腺癌患者hMAM及联合MMP-9和C-erbB2mRNA阳性表达率分别为37.84％ (28/74)、59.46％ (44/74)和48.65％ (36/74),三者联合阳性表达率为64.86％ (48/74),均高于健康对照组(x2=5.676,P＜0.05;x2=3.102,P＞0.05;x2=5.339,P＜0.05;x2 =2.310,P＞0.05)、乳腺纤维腺瘤组(x2=8.438,P＜0.01;x2=4.491,P＜0.05;x 2=7.982,P＜0.01;x2=4.844,P＜0.05)和非乳腺癌组(对照组+乳腺纤维腺瘤组)(x2=13.093,P＜0.01;x2=6.471,P＜0.05;x2=11.837,P＜0.01;x2=6.103,P＜0.05).与Ⅰ+Ⅱ期比较,Ⅲ+Ⅳ期乳腺患者hMAM mRNA单独及联合阳性表达率均增加,其中hMAM mRNA单独及联合C-erbB2 mRNA阳性表达率比较差异有统计学意义(x2 =5.157,P＜0.05;x2=4.912,P＜0.05).结论:hMAM诊断乳腺癌微转移的阳性率较低,联合MMP-9和C-erbB2 mRNA检测可以提高诊断阳性率,对于早期乳腺癌微转移诊断具有一定临床应用价值.
关键词： 乳腺肿瘤 微转移 人乳腺珠蛋白 基质金属蛋白酶9 人表皮生长因子受体2 -
乳腺癌患者血清中hMAM和CD147水平检测及其临床意义
目的:探讨乳腺癌患者血清中人乳腺珠蛋白(hMAM)和基质金属蛋白酶诱惑因子(CD147)水平及阳性表达率,阐明其在乳腺癌诊断中的临床意义.方法:选择122例乳腺癌患者(乳腺癌组)、21例乳腺纤维腺瘤患者(乳腺纤维腺瘤组)和16名健康对照者(健康对照组)作为研究对象.收集各组研究对象的血清,采用ELISA法检测各组研究对象血清中hMAM和CD147水平及阳性表达率,分析不同临床病理特征患者血清hMAM和CD147水平及阳性表达率.采用受试者工作特征(ROC)曲线确定乳腺癌患者血清中hMAM和CD147的cut-off值,确定其诊断乳腺癌的敏感度和特异度.结果:乳腺癌组患者血清中hMAM和CD147水平均高于健康对照组和乳腺纤维腺瘤组(P<0.05).乳腺癌组患者血清中hMAM和CD147阳性表达率均高于健康对照组和乳腺纤维腺瘤组(P<0.01);乳腺癌组患者血清中hMAM联合CD147的阳性表达率高于健康对照组和乳腺纤维腺瘤组(P<0.01).是否有淋巴结转移乳腺癌患者血清中hMAM和CD147阳性表达率比较差异有统计学意义(χ2=10.375,P<0.01;χ2=15.556,P<0.01).不同TNM分期、雌激素受体(ER)和人表皮生长因子受体2(Her-2)乳腺癌患者血清中CD147阳性表达率比较差异有统计学意义(χ2=8157,P<0.05;χ2=6.035,P<0.05;χ2=5.385,P<0.05).随着TNM分期增加,乳腺癌患者血清中hMAM和CD147阳性表达率均呈递增趋势.hMAM的ROC曲线下面积(AUC)为0.809,95％CI:0.703～0.916;CD147的AUC为0.721,95％CI:0.582～0.861.hMAM的cut-off值为6.51μg·L-1,诊断乳腺癌的敏感度和特异度分别为61.1％和87.5％;CD147的cut-off值为144.92 ng·L-1,诊断乳腺癌的敏感度和特异度分别为73.6％和68.7％;二者联合检测时AUC为0.880,95％CI:0.798～0.962,诊断乳腺癌敏感度和特异度分别为80.6％和81.2％.结论:血清中hMAM水平诊断乳腺癌具有较高的敏感度和特异度,hMAM与CD147联合检测可以提高诊断阳性率.
关键词： 乳腺肿瘤 人乳腺珠蛋白 基质金属蛋白酶诱惑因子 敏感度 特异度 -
乳腺癌相关的乳腺珠蛋白基因的克隆、表达及纯化
目的 克隆人乳腺珠蛋白(hMAM)基因,原核表达重组蛋白并纯化,为建立一种新的乳腺癌诊断方法奠定基础.方法 从人乳腺癌组织中提取总RNA,经RT-PCR合成cDNA,设计特异性的引物,用PCR的方法扩增出目的片段,构建PET-32A-hMAM和PGEX-4T1 -hMAM表达载体,在BL21菌中表达hMAM重组蛋白,纯化,并进行SDS-PAGE及Western blotting鉴定.结果 经RT-PCR、PCR扩增后得到一条207 bp的DNA片段,构建载体后DNA测序,结果与预期序列一致.表达和纯化的融合蛋白相对分子质量大约为28 000,与预期结果一致.结论 成功克隆hMAM基因,并获得高纯度的hMAM重组蛋白,为进一步开发hMAM诊断试剂打下基础.
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乳腺珠蛋白基因在大肠杆菌中的诱导表达及纯化研究
目的克隆乳腺珠蛋白(human mammaglobin,hMAM)编码全长cDNA,原核表达并纯化蛋白产物,为后期研制乳腺癌早期诊断试剂盒奠定基础,从而为早期发现乳腺癌提供科学的监测方法.方法自乳腺癌组织提取总RNA,通过RT-PCR克隆hMAMcDNA,构建pQE40-hMAM表达质粒,在大肠杆菌M15中表达,利用镍-亚硝胺乙酸组氨酸(Ni-NTA-His)亲和层析法对重组蛋白进行纯化.结果表达的融合蛋白以不溶性包涵体形式存在,纯化后得到纯度为97%的目的蛋白.结论成功地纯化出hMAM重组蛋白.
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血清乳腺珠蛋白与乳腺癌的相关性及临床意义探讨
目的：探讨血清人乳腺珠蛋白（hMAM）水平与乳腺癌早期诊断和癌微转移的相关性及其临床意义。方法应用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测68例乳腺癌患者、40例其他癌症患者（前列腺癌、胃癌、卵巢癌、直肠癌各10例）、35例良性乳腺疾病患者以及40名体检正常女性（正常对照组）血清hMAM水平并做比较。将68例乳腺癌患者按临床TNM分期、是否存在雌激素受体（ER）表达、是否有腋窝淋巴结转移以及是否绝经分别分组并做比较。通过受试者工作特征（ROC）曲线确定乳腺癌血清hMAM的Cut-off值。结果血清hMAM的ROC曲线下面积为0．825，即诊断乳腺癌的可信度为82．5％[95％可信区间（CI）：72．6％～92．4％]；当hMAM的Cut-off值为8．43 ng/mL时，敏感性和特异性分别为76．5％、82．9％。乳腺癌组血清hMAM水平及阳性率明显高于良性乳腺疾病组、其他癌症组和正常对照组（P＜0．05），而良性乳腺疾病组、其他癌症组和正常对照组之间差异均无统计学意义（P＞0．05）。Ⅲ和Ⅳ期乳腺癌患者的血清hMAM阳性率（55％、75％）明显高于Ⅰ和Ⅱ期患者（25％、40％，P＜0．05），但hMAM水平无差异（P＞0．05）。有腋窝淋巴结转移的乳腺癌患者血清hMAM阳性率（88％）明显高于无转移的患者（30％，P＜0．05），但hMAM水平无差异（P＞0．05）。不管乳腺癌患者血清中是否存在ER、原癌基因C-erb-2表达及是否绝经，其hMAM水平及阳性率均无差异（P＞0．05）。结论 hMAM的表达与乳腺癌临床分期和是否有腋窝淋巴结转移相关；检测乳腺癌高危人群血清hMAM水平有助于提高乳腺癌的早期诊断和癌微转移的早期发现。
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乳腺癌循环肿瘤细胞分离鉴定试剂盒的建立
目的 探讨乳腺癌循环肿瘤细胞(CTC)分离鉴定试剂盒中上皮细胞黏附分子(EpCAM)免疫脂质磁球及人乳腺珠蛋白(hMAM)单克隆抗体在乳腺癌CTC分离鉴定中的应用价值.方法 将乳腺癌MCF-7细胞混于健康志愿者的新鲜血样中,采用免疫磁球分离技术分析EpCAM免疫脂质磁球对乳腺癌细胞的分离效果.在强生CellTracks(R) AutoPrep(R) CTC检测仪(简称强生CellsearchTM系统)上进行EpCAM免疫脂质磁球和强生磁球对MCF-7细胞捕获效率的模拟实验及乳腺癌患者血液的临床检测.结果 荧光显微镜的观察结果显示EpCAM免疫脂质磁球的细胞捕获能力明显强于无抗体修饰的纳米磁球.激光共聚焦显微镜的观察结果显示EpCAM抗体修饰可显著增强磁球捕获MCF-7细胞的效率和特异性.模拟实验结果显示EpCAM免疫脂质磁球对10、20、40、80、150、200个MCF-7细胞的捕获结果与强生磁球接近;对乳腺癌患者血液中的CTC捕获效率与强生磁球相当,部分病例要明显优于强生磁球.结论 构建的基于EpCAM免疫脂质磁球和hMAM单克隆抗体的CTC分离鉴定试剂盒对乳腺癌患者血液中的CTC具有较高的捕获效率,这将为实现乳腺癌早期诊断、术前、术后分析及治疗效果检测提供了有力的支撑.
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人参皂苷Rg3通过人乳腺珠蛋白A促进乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡及其可能的机制
目的:研究人参皂苷Rg3通过促进乳腺癌MDA-MB-231细胞人乳腺珠蛋白A(mammaglobin-A,MGBA)的表达从而抑制细胞增殖的作用机制.方法:MTT法和流式细胞术检测5、10、15 μg/ml Rg3对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响,Westernblotting检测对乳腺癌细胞内MGBA表达的影响;Rg3和siRNA-MGBA单独或联合处理MDA-MB-231细胞,MTT法和流式细胞术检测其对细胞增殖和凋亡的影响,Western blotting检测其对细胞MGBA表达的影响,敏感硫电极法检测其对乳腺癌MDA-MB-231细胞H2S分泌的影响.结果:作用细胞48 h后,与对照组相比,5、10、15 μg/ml Rg3组MDA-MB-231细胞增殖抑制率明显增高[(18.78±0.82)％、(33.25±1.17)％、(35.11±0.94)％vs(9.72±0.91)％,均P＜0.05],Rg3可促进MDA-MB-231细胞的凋亡(P＜0.05),也明显增强MDA-MB-231细胞内MGBA蛋白的表达(P＜0.05).与对照组相比,Rg3组MDA-MB-231细胞增殖抑制率明显升高[(30.12±1.01)％ vs(10.66 ±0.59)％,P＜0.05],Rg3+ siRNA-MGBA组和siRNA-MGBA组MDA-MB-231细胞增殖抑制率明显降低[(6.61±0.63)％、(7.02±0.46)％ vs (10.66±0.59)％,均P＜0.05];Rg3组MGBA和胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-lyase,CSE)的表达和H2S的分泌明显增强,而Rg3+ siRNA-MGBA组、siRNA-MGBA组明显抑制(均P ＜0.05).结论:Rg3可以明显抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖,并促进凋亡,其作用机制可能是通过增强MGBA蛋白的表达并激活H2S/CSE系统得以实现的.
关键词： 人参皂苷Rg3 人乳腺珠蛋白 乳腺癌 MDA-MB-231细胞 -
CK19联合hMAM检测乳腺癌循环肿瘤细胞的临床价值
目的:探讨细胞角蛋白19 (cytokeratin 19,CK19)和人乳腺珠蛋白(human mammaglobin,hMAM)在检测乳腺癌外周血循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)中的临床价值.方法:应用实时荧光定量PCR法联合2种生物标志物CK19和hMAM检测乳腺癌循环肿瘤细胞的阳性率,并分析它们与患者临床病理特征的相关性.结果:乳腺癌患者CK19、hMAM及二者联合检测的阳性率分别为45.5％ (20/44)、38.6％ (17/44)和56.8％ (25/44).CK19联合hMAM检测的阳性率与患者的淋巴结转移状态相关(P=0.031).治疗前乳腺癌患者CK19、hMAM及二者联合检测的阳性率均显著高于健康对照组(P=0.000 3、P=0.000 1和P=0.000 1);两个化疗周期后,联合检测结果由阳性转为阴性的患者在TNM Ⅲ期和Ⅳ期中分别为5例和4例,转阴率差异有统计学意义(P=0.025 3和P=0.045 5);但在TNM Ⅰ和Ⅱ期患者中,CK19、hMAM或二者联合检测的阳性患者经化疗后其数量均下降,且联合检测的阳性患者数量仍高于单一检测的阳性患者数量,但差异均无统计学意义(P＞0.05).结论:CK19联合hMAM可作为诊断乳腺癌患者循环肿瘤细胞的生物标志物,对于指导乳腺癌患者的早期微转移、治疗和预后判断具有重要意义.
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人乳腺珠蛋白基因亚型的原核表达及纯化
目的:克隆人乳珠蛋白(hMAM)编码全长cDNA,原核表达并纯化蛋白产物,为后期研制乳腺癌早期诊断试剂盒奠定基础.方法:自乳腺癌组织及乳腺癌细胞株MD-MB453提取总RNA,通过RT-PCR克隆hMAMcD-NA,构建pQE40-hMAM表达质粒,在大肠杆菌M15中表达,利用镍-亚硝胺乙酸组氨酸(Ni-NTA-His)亲和层析法对重组蛋白进行纯化.结果:乳腺癌组织和乳腺癌细胞株中发现两种hMAM cDNA亚型,即hMAM和hMAM(Isoform),长度分别为279和270bp,两者相差9个连续碱基,其翻译产物相差3个连续氨基酸残基;表达的融合蛋白以不溶性包涵体形式存在,纯化后得到纯度为97%的目的蛋白.结论:获得hMAM cDNA并发现一个新的hMAM突变体;融合蛋白的表达及纯化成功.
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乳腺癌患者外周血hMAM及SBEM检测及其临床意义
目的 研究乳腺癌患者外周血人乳腺珠蛋白(hMAM)及乳腺上皮粘蛋白(SBEM)的表达及临床意义.方法 应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测58例乳腺癌患者外周血hMAM mRNA及SBEM mRNA的表达,并用健康志愿者及乳腺良性肿瘤患者各10例作为对照.结果 hMAM及SBEM在58例乳腺癌患者外周血的阳性表达率分别为34.5%、25.9%,乳腺良性肿瘤和正常对照均无阳性表达,两者的阳性表达与患者的临床分期显著相关(P＜0.05),两者联合检测的总阳性率为41.4%(24/58),与单一标志物相比缺乏统计学意义.结论 hMAM及SBEM特异性表达于乳腺癌外周血,可作为检测乳腺癌外周血肿瘤细胞标志物,并有可能在乳腺癌微转移诊断和预后判断中具有重要意义.
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人乳腺珠蛋白检测在乳腺癌诊断中的临床应用进展
乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤之一,早期发现、早期诊断乳腺癌是提高患者生活质量、延长患者生存期的关键.在当前所有的医学手段中,对于无症状的肿瘤患者,肿瘤标志物常常是早期发现肿瘤的方法之一.
