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OCT4异构体在人胚胎干细胞和间充质干细胞中的表达
目的 比较OCT4异构体(OCT4A、OCT4 B、OCT4 B1)及其调控因子在人胚胎干细胞(hESC)和人间充质干细胞(hMSC)中的表达.方法 利用RT-PCR、免疫荧光染色、流式细胞分析及体内/外分化实验,鉴定hESC及hMSC的生物学特性;应用real-time PCR、Western blot和流式细胞分析比较OCT4异构体及其转录因子NANOG,SOX2和mRNA结合蛋白LIN28在hESC及hMSC中的表达水平.结果 OCT4异构体mRNA在hESC和hMSC中均有表达,在hESC中的表达显著高于在hMSC中,并以OCT4A的差别为显著(P＜0.01);在蛋白水平,hESC表达OCT4A和OCT4B-256aa,hMSC不表达OCT4异构体蛋白.hESC高表达OCT4的调控因子NANOG、SOX2和LIN28;hMSC低表达SOX2,不表达NANOG和LIN28.结论 NANOG、SOX2和LIN28调控OCT4的表达,OCT4异构体在hESC和hMSC中的表达差异提示其可能是不同发育阶段于细胞自我更新和分化潜能等方面差别的主要因素之一.
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胚胎干细胞增殖分化相关基因
胚胎于细胞是从早期胚胎内细胞团中分离得到的,可以长久维持对称性自我更新的未分化状态,也可以分化成机体几乎所有类型的细胞.多种基因参与了胚胎干细胞增殖分化的调节.现对胚胎干细胞增殖分化相关基因进行综述.
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iPS细胞的生成——转录因子的决定性作用
胚胎干细胞(Embryonic Stem cells,ESCs)具有分化全能性和自我更新能力,其全能性的维持取决于多种转录因子、表观修饰因子等组成的错综复杂的网络,在这其中Oct4、Sox2、Nanog被认为是核心调控因子.
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干细胞关键转录因子Oct4在人膀胱癌组织的表达及其对5637细胞生物学特性调节
目的 研究干细胞关键转录因子Oct4在人膀胱癌组织中的表达及对5 637细胞生物学的影响,为临床治疗提供依据.方法 选取2015年1月至2016年1月74例膀胱癌组织、32例癌旁组织以及24例正常膀胱癌组织病理标本.采用免疫组化法检测标本中的Oct4表达;体外培养膀胱肿瘤细胞,采用MTT法检测siRNA敲除Oct4后对与细胞增殖作用的影响;采用细胞划痕及Transwell试验测定细胞迁移、侵袭能力的影响;分析干细胞关键转录因子Oct4在人膀胱癌组织中的表达及对5 637细胞生物学的影响.结果 人膀胱癌组织中12例Oct4蛋白检测阴性,62例Oct4蛋白检测阳性,阳性率为83.78％,显著高于膀胱癌组织的21.87％(P ＜0.05);正常组织中Oct4蛋白阳性率为16.67％,三种不同细胞组织Oct4蛋白阳性率比较差异具有统计学意义(P＜0.05).膀胱癌组织Oct4蛋白表达在不同临床分期中无统计学意义(P＞0.05);膀胱癌组织Oct4蛋白表达在不同病理分级、淋巴结转移中差异具有统计学意义(P＜0.05);病理分级越高、淋巴结转移,Oct4蛋白表达越高;免疫组化结果显示:膀胱癌组织中Oct4蛋白表达阳性率为83.78％,膀胱癌旁组织Oct4蛋白表达阳性率为21.87％;正常组织Oct4蛋白表达阳性率为16.67％.三种不同的细胞进行划痕试验2h后进行观察:结果显示:Oct4-siRNA转染后细胞迁移显著减弱,而其他细胞大量迁入划痕区域.结论 Oct4的表达与人膀脱癌的分级、淋巴结转移关系密切,但是不同临床分期差异不具有统计学意义:Oct4高表达在膀胱癌的发生、发生中发挥重要作用,能抑制膀胱癌细胞系Oct4基因表达,抑制肿瘤细胞增殖,细胞细胞凋亡,具有较高的临床应用价值.
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OCT4在食管鳞癌组织中的表达及其临床意义
目的 研究OCT4 (octamer-binding transcription factor 4)在食管鳞癌发生、发展、浸润和转移中的作用以及它们表达的相关性.方法 采用免疫组化检测60例食管鳞癌病人的食管正常黏膜组织、癌旁组织(23例为瘤旁不典型增生)及鳞癌组织中OCT4蛋白的表达情况.结果 (1)正常食管黏膜组织OCT4蛋白阳性表达率为5％(3/60),不典型增生组织OCT4蛋白阳性表达率为8.7％(2/23),食管癌组织中OCT4蛋白阳性表达率为31.7％(19/60).癌组织OCT4蛋白阳性表达率分别与相应的瘤旁不典型增生组织和正常食管黏膜上皮组织相比,差异有显著统计学意义(P＜0.05).(2) 60例食管鳞癌中,肿瘤没有侵及外膜,即T1、T2的食管鳞癌组织中OCT4蛋白的阳性表达率为14.3％ (3/21),肿瘤侵及外膜及以外区域,即.T3、T4的食管鳞癌组织中OCT4蛋白的阳性表达率41.0％(16/39),二者比较有显著统计学差异性(P＜0.05).无淋巴结转移的食管鳞癌组织中OCT4蛋白的阳性表达率为16.1％(5/31),有淋巴结转移的食管鳞癌组织中OCT4蛋白的阳性表达率为48.3％(14/29),二者比较有显著统计学差异(P＜0.05).TNM分期中早期,即Ⅰ+Ⅱ期食管鳞癌组织中OCT4蛋白的阳性表达率为16.7％(6/36),晚期,即Ⅲ+Ⅳ期食管鳞癌组织中OCT4蛋白的阳性表达率为54.2％(13/24),二者比较有显著统计学差异(P＜0.05).结论 OCT4在正常食管黏膜组织、瘤旁不典型增生组织及食管癌组织中分别为极低表达、低表达、高表达.OCT4的表达与食管鳞癌浸润深度、淋巴结转移和分期均明显正相关,OCT4可能成为食管鳞癌的病情预测和诊断的生物学标志.
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5-AzaC对表皮干细胞Oct4基因的诱导作用研究
目的:探讨并建立表皮干细胞Oct4基因的非转基因诱导方法.方法:分离培养人表皮干细胞,在培养至3～5 d出现克隆性生长时加入工作浓度为10 μmol/L的5-AzaC,24 h后再诱导1次.采用RT-PCR方法,检测经5-AzaC刺激48 h后的表皮干细胞Oct4基因转录水平.结果:PCR产物经1%琼脂糖凝胶电泳后,出现247 bp(Oct4)和219 bp(β-actin)目的片段明亮的特异性条带.结论:5-AzaC能有效激发出表皮干细胞Oct4基因的转录.
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RNA干扰Oct4的表达对肝癌细胞生物学行为的影响
目的 探讨干细胞相关基因Oct4与Wnt/β-catenin在人肝癌组织及肝癌细胞系中的相互作用.方法 PCR法检测Oct4、Wnt/β-catenin及其他相关基因在肝癌组织、癌旁组织及正常肝组织的表达差异.使用SiRNA-Oct4沉默人肝癌HepG2细胞Oct4的表达,实时荧光定量PCR法检测Wnt/β-catenin基因表达.检测RNAi后细胞迁移以及克隆形成能力.结果 肝癌患者的上述组织中,Oct4和β-catenin在癌内表达高,癌旁次之,正常肝低.使用SiRNA-Oct4沉默人肝癌HepG2细胞Oct4后,Oct4表达明显下调,β-catenin、Wnt10b表现为与Oct4表达呈正相关,TCF3表达与Oct4呈负相关.RNAi后HepG2细胞的迁移能力、克隆形成能力均下降.结论 Oct4在肝癌组织内高表达而在正常肝细胞中的表达极低.RNAi后HepG2细胞的迁移能力、克隆形成能力均下降可能与Wnt/β-catenin通路功能减弱有关.
关键词： 癌 肝细胞 RNA干扰 OCT4 Wnt/β-catenin通路 -
宫颈癌组织Nanog和Oct4的表达及临床意义
目的:探讨宫颈癌组织胚胎特异性基因Nanog和Oct4的表达及临床意义.方法:采用免疫组织化学检测30例宫颈鳞状细胞癌、20例CINⅢ和10例正常官颈组织中Nanog和Oct4的表达,并结合患者的临床病理资料进行统计学分析评估两者的相关性.结果:宫颈癌组织Nanog和Oct4的阳性表达率均为93.3％(28/30),CINⅢ和正常宫颈组织相比,差异均有统计学意义,P＜0.001.宫颈癌组织Nanog和Oct4的高表达与肿瘤的分化程度密切相关,P＜0.05.宫颈癌组Nanog和Oct4表达呈正相关,rs=0.531 7,P=0.002 5.结论:宫颈癌组织中Nanog和Oct4均有高表达,Nanog和Oct4的联合检测可作为肿瘤的一个敏感性、特异性的标志和治疗靶点.
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食管鳞癌组织Oct4表达临床意义的探讨
目的:探讨八聚体结合蛋白4(Oct4)在食管鳞癌组织中的表达及其与食管癌患者预后的关系.方法:免疫组织化学SP法检测58例食管鳞癌及21例癌旁正常黏膜组织中Oct4蛋白的表达,分析其与各临床病理指标的关系;并结合Oct4表达情况及患者短为期8年的随访资料,Kaplan-Meier法和Log-Rank检验分析Oct4与食管癌患者生存的关系;Cox回归模型评估Oct4及各病理指标与患者预后的关系.结果:食管鳞癌组织中Oct4阳性表达率为60.3％(35/58),显著高于正常组织中的19.0％(4/21),x2=10.519,P=0.001; Oct 4的表达与患者年龄(x2=0.023,P=0.879)、性别(x2 =0.043,P=0.836)、淋巴结转移(x2=0.551,P=0.458)、外膜浸润(x2=0.364,P=0.546)及UICC分期(x2=1.038,P=0.308)均无相关性,但与组织学分级明显相关,x2 =6.061,P=0.014.死亡患者的Oct4表达程度也明显高于生存患者,x2 =7.958,P=0.005;且Oct4阳性表达患者的生存时间明显短于阴性表达的患者,x2=7.703,P=0.006.Oct4表达水平与食管癌患者预后明显相关,RR=2.243,P=0.001.结论:Oct4在食管鳞癌组织中的表达水平与组织学分级及患者生存期相关,Oct4是影响食管癌患者预后的独立因素.
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胃癌组织中Oct4表达及其临床病理意义的探讨
目的:探讨Oct4蛋白在不同分化胃癌组织中的表达及其临床意义.方法:应用免疫组化SP法分别检测25例不同分化的胃癌组织及10例正常胃组织中Oct4的表达.结果:免疫组化检测显示,Oct4在低分化胃癌组织中的表达率为68.8%(11/16),而在高中分化胃癌组织及正常胃组织中未见表达,P=0.000 97.Oct4蛋白表达与胃癌患者的年龄、肿瘤大小、漫润深度、淋巴结转移和TNM分期等临床病理参数不相关,P＞0.05.结论:肿瘤干细胞标志Oct4表达于胃癌组织中,并且与胃癌的分化密切相关.
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胃癌组织Oct4和Wnt1a及β-Catenin表达与临床病理因素相关性分析
目的:探讨八聚体结合蛋白4 (octamer binding transcription factor 4,Oct4)与Wnt/β-Catenin信号转导通路相关基因在胃癌组织中的表达,及其与患者临床病理及预后的关系.方法:SP免疫组织化学染色法检测河北北方学院附属第一医院病理科2006 01 01-2007-12-31切除76例胃癌及21例正常胃黏膜组织中Oct4、Wnt1a及β-Catenin的表达变化；分析Oct4、Wnt1a和β-Catenin与胃癌患者临床病理指标的关系；应用Cox单因素及多因素回归分析其在胃癌组织中的表达与胃癌患者预后的关系.结果:1)Oct4和Wnt1a在胃癌组织中多为阳性表达,阳性率分别为69.7％(53/76)和78.9％(60/76)；在正常胃黏膜中多为阴性或弱阳性表达,阳性率分别为14.3％(3/21)和19.0％(4/21)；2种标志在不同胃黏膜组织中的表达差异均有统计学意义,P＜0.001；β-Catenin在正常胃黏膜组织中主要为膜表达,在胃癌中则多为膜表达缺失或异位表达(胞质或胞核表达).β-Catenin膜表达缺失率在正常胃黏膜与胃癌之间差异有统计学意义,P＜0.001.2)Wnt1a和Oct4的表达均与TNM分期相关,TNM分期越高2个标志的表达越强,P＜0.05；Oct4的表达还与分化程度、Borrmann分型及淋巴结转移相关,P值均＜0.05；β-Catenin的异常表达与TNM分期相关,P=0.018.3) β-Catenin的膜表达缺失率分别与Wnt1a、Oct4的表达呈正相关,r值分别为0.475和0.362,P值分别为＜0.001和0.001.4)Cox单因素及多因素分析结果显示,Oct4的表达是影响患者肿瘤死亡的独立预后因素,P=0.006;而Wnt1a的表达及β-Catenin的异常表达与胃癌患者肿瘤死亡无相关性.结论:Oct4与Wnt/β-Catenin信号转导通路与胃癌的发生发展及预后相关,可作为较为理想的肿瘤标志辅助判断患者预后并指导临床治疗.
关键词： 胃肿瘤 OCT4 Wnt/β-catenin 信号通路 预后 -
人肺腺癌干细胞的表型及其与肺腺癌患者预后的关系
目的 检测肺腺癌组织中肿瘤干细胞的表型,并分析其与肺腺癌患者预后的相关性.方法 采用免疫荧光法检测57例肺腺癌组织肿瘤干细胞的3个表型标志,即表面活性蛋白C(SP-C)、细支气管非纤毛柱状细胞标志蛋白(CCSP)和OCT4.采用Cox多因素分析,评估检测结果与临床病理指标及患者生存之间的关系.结果 57例肺腺癌组织均表达SP-C,其中52例可观察到CCSP~+细胞,具有肺细支气管肺泡干细胞(BASC)的表型特征.52例SP-C~+ CCSP~+组织中,40例同时表达OCT4,进入OCT4~+BASC组;12例不表达OCT4,进入OCT4~-BASC组.统计分析的结果显示,肺腺癌干细胞的表型与肺腺癌的分化相关,OCT4~+ BASC表型多见于高中分化肿瘤,而OCT4~-BASC表型以低分化肿瘤为主.Cox多因素分析的结果显示,肺腺癌患者的生存与肿瘤的TNM分期及OCT4~+BASC表型相关.结论 肺腺癌干细胞具有BASC的表型特征(SP-C~+ CCSP~+),此类肿瘤干细胞表达自我更新基因OCT4时,恶性程度高,患者的预后差.
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Oct4调节成体干细胞多能性的研究进展
成体干细胞是存在于人和哺乳动物特定组织中的具有自我更新和一定分化潜能的未成熟细胞,参与成体组织的更新和创伤修复.牙髓干细胞是牙髓损伤修复的潜能所在,如何调控其生物学行为以促进牙髓修复再生是当前的研究热点.Oct4 在干细胞发育的基因调控网络中居核心地位,近年研究显示Oct4 具有维持成体干细胞多能性的功能.本文通过阐述Oct4 的结构和功能,揭示其在成体干细胞中的调节作用,为研究Oct4 对牙髓干细胞的调节作用提供理论基础.
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二甲双胍对ALDH+胃癌干细胞的抑制作用及其机制
目的 探讨二甲双胍(Met)对乙醛脱氢酶(ALDH)阳性胃癌干细胞的抑制作用及其可能机制.方法 选择人胃癌细胞系MKN45作为亲本细胞,采用流式细胞仪分选出ALDH+和ALDH-细胞,进行白我更新能力、分化能力、裸鼠移植瘤实验,鉴定其是否为胃癌干细胞及是否具备肿瘤干细胞特性.实验设置lmmol/L Met组、5mmol/LMet组和MKN45细胞组,分别作用48h后,检测各组ALDH+细胞的比例;RT-PCR实验检测各组Oct4、Sox2、AKT基因表达量的变化.结果 细胞鉴定实验结果显示,ALDH+细胞的自我更新能力、分化能力、致瘤能力均高于ALDH细胞,表明ALDH+细胞具有肿瘤干细胞特性.实验结果显示,MKN45细胞组、1mmol/L Met组、5mmol/L Met组ALDH+细胞比例分别为36.5％±5.4％、15.6％±1.9％和7.6％±1.6％,三组差异有统计学意义(P＜o.01).RT-PCR结果显示,Met处理后Sox2和AKT基因的表达量均下降,且随Met浓度升高下降更为明显;Oct4基因在1mmol/L Met组的表达量高于MKN45细胞组,5mmol/L Met组的表达量低于MKN45细胞组.结论 Met能抑制ALDH+胃癌干细胞生长,抑制AKT基因的表达,可作为临床治疗胃癌的靶点药物.
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小鼠胚胎干细胞自我更新的机制
小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cells, ES细胞)来源于早期胚胎囊胚期的内细胞团(inner cell mass, ICM),它具有向小鼠胚胎3个胚层细胞分化的能力,它的另一个特点就是维持未分化的状态即自我更新的能力.小鼠ES细胞自我更新依赖于白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor, LIF)、血清或骨形成蛋白(bone morphogenetic proteins, BMPs)等等.除了外源性的信号通路外,内源性的转录因子对于维持小鼠ES细胞自我更新也十分重要.
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Oct4、Sox2、c-Myc、Klf4基因慢病毒载体的构建
目的 构建Oct4、Sox2、c-Myc、Klf4基因慢病毒表达载体,为诱导性多能干细胞研究奠定基础.方法 将Oct4、Sox2、c-Myc、Klf4基因利用Infusion技术重组构建慢病毒载体穿梭质粒pGC-FU-Oct4、pGC-FU-Sox2、pGC-FU-c-Myc、pGC-FU-Klf4,经PCR和测序后与与结构质粒pHelper1.0和包膜质粒pHeiper2.0在脂质体Lipofeetamine2000介导下共转染293T细胞包装生产慢病毒,浓缩纯化后检测滴度.结果 PCR扩增和测序结果证实成功构建Oct4、Sox2、c-Myc、Klf4的慢病毒载体并包装慢病毒,检测Oct4基因重组慢病毒、Sox2基因重组慢病毒、c-Myc基因重组慢病毒的滴度均为1×109TU/mL,Klf4基因重组慢病毒的滴度为1.9×109 TU/mL.结论 成功建立重组慢病毒载体的三质拉包装细胞系统.
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Sox2和Oct4在人脑胶质瘤组织中的表达及意义
目的：探讨Sox2和Oct4在不同病理级人脑胶质瘤组织中的表达及意义。方法采用免疫组织化学技术及组织芯片检测Sox2和Oct4在45例人脑胶质瘤组织和5例正常人脑组织中的表达。结果 Sox2在正常人脑组织中的表达率为(2.61±1.33)%,结果为阴性,在人脑胶质瘤组织中WHOⅠ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级的阳性表达率分别为(3.95±3.40)%、(18.22±5.16)%、(20.74±5.14)%、(60.15±7.82)%,Sox2在正常人脑组织中和人脑胶质瘤组织中的表达比较,差异有统计学意义(F=87.9,P<0.01),Ⅰ、Ⅱ级与Ⅲ、Ⅳ级比较,差异有统计学意义(P<0.01)；Oct4在正常人脑组织中完全不表达,在人脑胶质瘤组织中WHOⅠ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级的阳性表达率分别为(1.25±3.82)%、(37.20±9.12)%、(51.39±9.72)%、(63.15±9.05)%,Oct4在正常人脑组织中和人脑胶质瘤组织中的表达比较,差异有统计学意义(F=67.7,P<0.01),Ⅰ、Ⅱ级与Ⅲ、Ⅳ级比较,差异有统计学意义(P<0.01)；Sox2和Oct4的表达强度均随病理级别增高而升高,而在正常人脑组织中均未见表达；在人脑胶质瘤组织中Sox2和Oct4的表达呈正相关(r=0.619,P<0.01)；不同性别、年龄的人脑胶质瘤组织中Sox2、Oct4的阳性表达率差异均无统计学意义(P跃0.05)。结论Sox2和Oct4在人脑胶质瘤组织中的表达与肿瘤的恶性程度呈正相关,提示Sox2和Oct4可能在人脑胶质瘤的发生、发展中起重要作用,其在人脑胶质瘤组织中的高表达可能是人脑胶质瘤恶性程度高、呈侵袭性生长的原因之一。
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诱导性多能干细胞相关基因Oct4、Sox2、Nanog的研究进展
诱导性多能干细胞(iPSCs)是将转录因子转入已分化的体细胞中,使其重编程而得到的类似胚胎干细胞(ESCs)的一种细胞类型.iPSCs细胞在形态、基因和蛋白表达、表观遗传修饰状态、细胞倍增能力、类胚体和畸形瘤生成能力、分化能力等方面都与ESCs相似.iPSCs细胞假说一经提出,使得相关基因(如Oct4、Sox2、Nanog等)再次成为基础研究和基因治疗的重要选择.
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c-kit/SCF、VEGF和Oct4在精原细胞瘤中的表达及其意义
c-kit/SCF、血管内皮生长因子、Oct4是新近研究精原细胞瘤的诊断过程中几个热点基因,c-kit是一个癌基因,发生异常极易导致正常睾丸发生恶变向精原细胞瘤发展.Oct4是新型的精原细胞瘤的特异性基因,在精原细胞瘤中的表达率接近100%.血管内皮生长因子是广谱癌基因,在大多数肿瘤中都有表达,且与肿瘤的预后和转移密切相关.这3个基因非常具有代表性,就这些基因与精原细胞瘤的关系及它们在精原细胞瘤中的诊断作用进行综述.
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诱导性多能干细胞相关基因OCT4过表达对Hep2细胞增殖及迁移的影响
目的 应用基因转染技术将诱导性多能干细胞(iPS)相关基因OCT4过表达于喉癌Hep2细胞,观察其对Hep2细胞增殖力和侵袭迁移力的影响.方法 构建重组质粒真核表达载体pcDNA3.1-OCT4,将重组表达质粒用脂质体LipofactaminTM2000转染人喉癌Hep2细胞,通过G418筛选,RT-PCR及Western-blot印迹法鉴定,进而筛选出稳定表达pcDNA3.1-OCT4的Hep2细胞系;MTT实验检测细胞的活力,Transwell法检测细胞的侵袭和迁移.实验分为三组,Hep2-pcDNA3.1-OCT4组、Hep2-pcDNA3.1组及Hep2空白对照组.结果 成功将OCT4基因转染入Hep2细胞中,Hep2-pcDNA3.1-OCT4组可检测到目的基因在核酸、蛋白水平的高表达.转染后的细胞增殖、迁移加快,但细胞形态基本无变化.结论 iPS相关基因OCT4的转染能加快肿瘤细胞的生长和迁移,使Hep2细胞具有干细胞属性.
