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拟胚体贴壁时间对小鼠胚胎干细胞心肌分化的影响
目的 观察拟胚体(EB)贴壁时间对小鼠胚胎干细胞(ESC)心肌分化的影响并研究其机制.方法 用悬滴培养法促进ESCs形成EBs.EBs在不同的分化天数贴壁,观察搏动EBs百分比,RT-PCR检测Nkx2.5,GATA4和β-MHC mRNA表达,Western blot检测Src家族酪氨酸激酶磷酸化水平.结果 分化第3,4天贴壁组搏动EB百分比及Nkx2.5,GATA4,β-MHC表达水平显著低于分化第5,6和7天贴壁组(P ＜0.05);EB贴壁能够使Src激酶磷酸化水平升高,Src激酶阻断PP2能够抑制贴壁诱发的Src激酶磷酸化水平升高(P＜0.05);对于分化第4天贴壁组,在分化第4～6天使用PP2能够增加搏动EBs百分比及β-MHC表达水平(P＜0.05).结论 EB贴壁时间是影响ESC心肌分化的一个重要因素.在分化第4天或者之前贴壁可以显著抑制心肌分化,其机制可能是EB贴壁激活了Src激酶.
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达沙替尼抑制前列腺癌细胞雄激素受体磷酸化机制研究
目的 探讨酪氨酸激酶抑制剂达沙替尼抑制前列腺癌细胞雄激素受体(AR)磷酸化的机制.方法 以HEK-293T及COS7细胞株为研究对象,野生型AR(WT-AR)载体及其突变载体AR Y267F、AR Y534F分别与Ack1或Src载体共转染细胞,Western blot方法检测AR磷酸化位点.以LNCaP细胞株为研究对象,在无雄激素条件下,用表皮生长因子(EGF)或内皮样生长因子家族成员heregulin处理后,Western blot法检测AR磷酸化状态,再加入达沙替尼或用siRNA转染法沉默Ack1或Src基因后,Western blot法观察AR磷酸化变化;反转录-实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测不同处理的LNCaP细胞前列腺特异抗原(PSA.)以及人激肽释放酶2(hK2) mRNA的表达.结果 转染载体后,HEK-293T细胞中Ack1激酶介导AR Tyr267特异位点磷酸化,COS7细胞中Src介导AR Tyr534特异位点磷酸化.heregulin处理LNCaP细胞后,AR Tyr267位点磷酸化;加入达沙替尼后,该位点磷酸化被抑制;Ack1被沉默后,heregulin诱导的AR Tyr267位点磷酸化亦被抑制.EGF处理LNCaP细胞后,AR Tyr534位点磷酸化;加入达沙替尼后,该位点磷酸化被抑制;Src被沉默后,EGF诱导的AR Tyr534位点磷酸化亦被抑制.EGF或heregulin可上调LNCaP细胞内源性AR靶基因PSA和hK2 mRNA水平(P＜0.05),给予达沙替尼后,抑制了heregulin诱导的PSA和hK2 mRNA水平(P＜0.05),但EGF所诱导的PSAmRNA及hK2 mRNA的表达水平无明显变化(P＞0.05).结论 达沙替尼抑制AR Tyr267、AR Tyr534位点磷酸化,其通过抑制heregulin诱导的前列腺癌细胞AR Tyr267特异位点磷酸化及前列腺癌标志物PSA及hK2 mRNA的表达而发挥抗前列腺癌效应.
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α粒子辐射对ROS介导src激酶活性和自噬的影响
目的 通过检测人胚肾上皮细胞HEK293受不同剂量α粒子照射后,src激酶活性和细胞自噬系统的变化,探讨调控细胞自噬对高剂量辐射诱导细胞死亡的影响.方法 将人胚肾上皮细胞HEK293分为3组:0 cGy(对照)组、241Am α粒子照射低剂量(10 cGy)组和高剂量(300 cGy)组.应用免疫印迹实验检测细胞内源性蛋白LC3Ⅰ/Ⅱ和src激酶的变化;分子探针检测细胞内活性氧(ROS)水平;用ROS淬灭剂DMSO预处理照射细胞,并用免疫印迹法检测照射后src激酶的变化;使用自噬诱导剂雷帕霉素预处理照射细胞,以PI染色流式细胞术测定细胞死亡率.结果 与0 cGy相比,10 cGy α射线照射后LC3 Ⅰ/Ⅱ比例降低(=4.07,P＜0.05),胞质内具有绿色荧光点状GFP-LC3的细胞比例升高(t=12.29,P＜0.05),自噬被诱导;而300 cGy照射后,LC3Ⅰ/Ⅱ比例升高(t=2.93,P＜0.05),胞质内GFP-LC3形态无明显变化,自噬被抑制.与0 cGy相比,10和300 cGy照射后4h均能提升细胞内ROS水平(t=17.93、22.88,P＜0.05),且300 cGy比10 cGy照射诱发的ROS更多(t=15.76、22.66、14.22,P＜0.05).与0 cGy相比,10 cGy照射使src激酶419位酪氨酸磷酸化水平升高(t=5.66,P＜0.05),而300 cGy照射则降低其磷酸化水平(=4.67,P＜0.05).DMSO能够部分逆转高低剂量照射对src激酶活性的影响.辐照前以自噬诱导剂雷帕霉素处理细胞则能降低300 cGy照射诱发的细胞死亡率(t=12.14,P＜0.05).结论 高低剂量α粒子分别抑制和激活src激酶以及细胞自噬,ROS参与介导辐照对src激酶活性及自噬系统的影响.对自噬系统的干预能够降低细胞的辐射敏感性.
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小胶质细胞上非受体型酪氨酸激酶Src通过磷酸酶张力蛋白同源物基因蛋白调节神经炎症的机制
目的 研究小胶质细胞上非受体型酪氨酸激酶Src通过第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物基因(PTEN)编码的PTEN蛋白调节细菌脂多糖(LPS)诱导神经炎症反应的分子机制.方法 采用LPS诱导小胶质细胞系BV2,Western blot法检测蛋白激酶B(Akt)磷酸化水平评价PTEN活性,酶联免疫吸附法测定肿瘤坏死因子-α含量评价神经炎症反应;加入PTEN抑制剂以及Src的小干扰RNA后,观察神经炎症反应的变化,研究Src调控神经炎症机制.结果 LPS诱导BV2细胞激活后,Akt磷酸化水平显著升高(P ＜0.001),肿瘤坏死因子-α释放量显著增多(P＜0.001),即引起明显的神经炎症反应.而抑制PTEN蛋白活性后,LPS诱导的Akt磷酸化水平进一步升高(P＜0.05),炎症因子释放量进一步增多(P＜0.001);干扰Src基因后,Src蛋白表达量明显下降(P ＜0.001),同时LPS诱导的炎症因子释放量与未干扰Src组相比明显减少,炎症反应减轻(P ＜0.001);PTEN和Akt磷酸化水平也明显下降(P ＜0.001).结论 在小胶质细胞上Src激酶可能通过调节PTEN蛋白活性调控神经炎症反应.
关键词： Src激酶 神经炎症 小胶质细胞 磷酸酶张力蛋白同源物基因 -
下丘脑弓状核Src激酶在大鼠炎症痛形成中的作用
目的:探讨下丘脑弓状核Src激酶在大鼠炎性痛形成中的作用.方法:雄性SD大鼠60只,体质量200～ 250 g,9周龄,采用随机数字法,将其分为4组:假手术组(S组,n=23)、炎症性痛组(IP组,n=23)、Src激酶抑制剂结构类似物PP3对照组(PP3组,n=7)和Src激酶抑制剂PP2组(PP2组,n=7).采用大鼠左侧后肢足垫皮内注入完全弗氏佐剂(CFA)0.1 mL的方法制备炎性痛模型.PP3、PP2组于造模后第3天弓状核内分别注射PP3、PP2(5nmol,0.5 μL).分别于CFA注射前1天(T1)、注射后第2天(T2)、第3天(T3)、第3天脊髓给药后30 min(T4)和第5天(T5)时测定机械缩足反应阈(MWT)和热缩足潜伏期(TWL).S组和IP组于T1-3、T5时处死大鼠,取下丘脑弓状核组织,采用Western blot法检测Src及磷酸化Src (pSrc)的表达水平.结果:与S组比较,IP组、PP3组和PP2组T2-5时MWT降低,TWL缩短(P＜0.05),IP组各时点pSrc表达上调(P＜0.05),Src表达差异无统计学意义(P＞0.05);与IP组比较,PP2组T4时MWT升高,TWL延长(P＜0.05),PP3组各时点MWT和TWL差异无统计学意义(P＞0.05).结论:下丘脑弓状核Src激酶的活化参与了大鼠炎性痛的形成.
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IgE高亲和力受体与哮喘的研究进展
儿童哮喘是Ⅰ型变态反应性疾病,IgE在其发病过程中具有极其重要的作用.IgE与其高亲和力受体(FcεR Ⅰ)结合,可以引起肥大细胞的脱颗粒、白三烯的合成和细胞因子的分泌,进而引起气道慢性炎症和气道平滑肌痉挛.目前的研究认为Src激酶家族对FeeR Ⅰ信号传导途径有重要作用.该文综述了关于FcεR Ⅰ的表达调节、信号传导、FcεR Ⅰ与哮喘发病之间的关系及如何应用FcεR εⅠ进行哮喘诊断和治疗.
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PP2对人胆管癌细胞株QBC939侵袭能力的影响
目的:探讨Src激酶特异性抑制剂PP2对人胆管癌QBC939细胞侵袭能力的影响和机制.方法:通过Western Blotting技术检测PP2对人胆管癌QBC939细胞中Src激酶活化的影响;用Transwell小室法观察PP2对QBC939细胞的影响;用RT-PCR和Western Blotting技术检测PP2对QBC939细胞侵袭能力相关分子的作用.结果:实验组p-Src蛋白表达水平明显低于对照组,差异具有统计学意义(P＜0.05);实验组QBC939细胞体外侵袭能力较对照组显著降低,差异具有统计学意义(P＜0.05);与对照组相比,实验组E-cadherin表达显著增强,CD44表达明显减弱,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:PP2通过抑制Src激酶活化,增强E-cadherin表达、减弱CD44表达,抑制人胆管癌QBC939细胞侵袭能力.
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PP2对大鼠面神经缺血损伤的保护作用
目的:探讨PP2(4-amino-5-(4-chlorophenyl)-7-(t-butyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidine)在大鼠面神经缺血损伤模型中的保护作用,为进一步探索面神经缺血损伤的治疗方法提供实验依据.方法:实验选取40只雄性SD大鼠,分为四组:假手术组,损伤组,DMSO溶剂对照组和PP2干预组.手术组沿耳廓外上缘行弧形切口,分离暴露出岩动脉,双极电凝灼断.假手术组暴露出岩动脉但不予灼断.PP2干预组和DMSO溶剂对照组于术前30 min分别脑室注射15 μg(总体积10 μL)PP2或相同体积DMSO.于3d后观察各组大鼠的行为学变化,同时运用免疫共沉淀和免疫印迹的技术分析其中分子机制.结果:(1)PP2干预组的大鼠相对于手术组和DMSO溶剂对照组,瞬目反射和触须动度明显好转(2)大鼠面神经缺血损伤时,损伤组相对于假手术组,NMDAR-PSD95-Src的结合明显增加(P＜0.05)(3)PP2干预组NR2A-PSD95-Src的结合相对于手术组和DMSO溶剂对照组明显降低(P＜0.05).结论:大鼠面神经缺血损伤时,存在NMDAR-PSD95-Sre形成的信号通路,PP2可以有效的抑制NMDAR-PSD95-Src信号通路的形成,从而起到面神经保护作用.
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Src激酶和p38激酶在乙酰肝素酶促进人胃癌细胞迁移和侵袭中的作用及相互关系
目的 探讨Src激酶和p38激酶在乙酰肝素酶促进人胃癌细胞迁移和侵袭中的作用及相互关系.方法 实验设正常对照组(细胞未作其他处理)、人乙酰肝素酶重组蛋白处理组(5、10 μg/ml)以及提前3 h加入Src激酶特异性抑制剂pp2(5 μmol/L)或p38激酶特异性抑制剂SB 203580(1 μmol/L)再加入人乙酰肝素酶重组蛋白(10 μg/ml)作用24 h组.利用划痕损伤实验和Transwell小室基质侵袭实验分别检测各处理组对人胃癌MGC-803细胞迁移和侵袭能力的影响;Western blot法检测各处理组对人胃癌MGC-803细胞、高表达乙酰肝素酶的人胃癌SGC-7901细胞和乙酰肝素酶表达被下调的SGC-7901-Heparanasel(-)细胞中Src激酶、p38激酶、磷酸化Src激酶(p-Src)和磷酸化p38激酶(p-p38)蛋白表达的影响.结果 与正常对照组比较,5和10 μg/ml人乙酰肝素酶重组蛋白均能明显增强人胃癌MGC-803细胞迁移和侵袭能力(P<0.05);与未加抑制剂的人乙酰肝素酶重组蛋白比较,抑制剂pp2和SB 203580均能削弱人乙酰肝素酶重组蛋白增强的人胃癌MGC-803细胞的迁移和基质侵袭能力(P<0.05).10 μg/ml人乙酰肝素酶重组蛋白促进人胃癌MGC-803细胞Src激酶和p38激酶的磷酸化,而SGC-7901-Heparanasel(-)细胞中磷酸化的Src激酶和p38激酶表达水平较SGC-7901细胞明显下调(P<0.01);抑制剂pp2和SB 203580对人胃癌SGC-7901细胞中乙酰肝素酶蛋白表达无明显影响;在人胃癌SGC-7901细胞和MGC-803细胞中,Src激酶的抑制剂pp2抑制磷酸化p38蛋白的表达,而p38激酶的抑制剂SB 203580对磷酸化Src蛋白表达无明显影响.结论 乙酰肝素酶可能通过促进Src激酶磷酸化或p38激酶的磷酸化或先促进Src激酶磷酸化再促进p38激酶的磷酸化,从而促进人胃癌细胞迁移和侵袭能力.乙酰肝素酶-Src激酶磷酸化-p38激酶磷酸化可能是人胃癌细胞内存在的与细胞迁移和侵袭有关的信号转导通路.
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脓毒症血管内皮细胞膜联蛋白A2与钙黏蛋白相互作用研究进展
血管内皮屏障损伤、微循环血管通透性增加是引起脓毒症循环异常的关键病理生理环节,膜联蛋白A2(ANXA2)与血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)的相互作用在这一过程中扮演了重要角色.Src激酶参与的下游信号转导通路和脓毒症时血管内皮细胞(VEC)损伤密切相关.Src激酶为非受体酪氨酸激酶家族成员,可与ANXA2相互作用.Src介导的酪氨酸磷酸化过程可能是ANXA2调节VE-cadherin的机制,而这一机制可能会加剧脓毒症微循环血管屏障的损伤.本文对脓毒症VEC ANXA2与VE-cadherin相互作用的研究进展作一综述.
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Annexin A2及相关性疾病
Annexin A2作为钙离子依赖的磷脂结合蛋白,是annexins家族的一个重要成员,可以与多种蛋白和非蛋白物质发生相互作用,在细胞增生、细胞分化、血管新生、胎儿免疫耐受、离子通道活化、细胞与细胞相互作用以及质膜的桥连方面等都起着非常重要的作用,在一些肿瘤与非肿瘤性疾病中也有越来越多有关其表达和/或分布异常的报道.该文主要介绍其结构、生理功能以及与部分疾病的相关性研究,以便对其初步认识,并为进一步研究提供可参考的背景.
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人胃癌细胞乙酰肝素酶对Src激酶活化的影响
目的 探讨人胃癌细胞乙酰肝素酶与Src激酶的关系.方法 利用Western blot检测Src激酶抑制剂pp2的活性、pp2对人胃癌SGC-7901细胞中乙酰肝素酶表达的影响以及乙酰肝素酶表达被沉默的人胃癌SGC-7901细胞中磷酸化Src(p-Src)激酶蛋白的表达.结果 pp2对乙酰肝素酶蛋白表达无影响,在乙酰肝素酶被沉默的人胃癌SGC-7901细胞中p-Src蛋白表达降低.结论 人胃癌细胞乙酰肝素酶可能调节Src激酶的磷酸化,乙酰肝素酶-Src可能是参与人胃癌侵袭、迁移和诱导血管生成的一条信号通路.
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抑制酪氨酸激酶Src对血管紧张素Ⅱ诱导足细胞损伤的保护作用
目的:通过调控足细胞Src激酶的表达,观察足细胞表型的改变;并探讨Src激酶在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的足细胞损伤中的作用.方法:体外培养条件永生化小鼠足细胞(MPCs),并分组如下:A:正常对照组;B:Src激酶干扰RNA (siRNA)组;C:PP2(Src激酶抑制剂)组;D:AngⅡ组;E:AngⅡ+Src激酶siRNA组;F:AngⅡ+ PP2组.采用免疫印迹法检测Src激酶及其磷酸化水平;Annexin V-FITC/PI双染及Hoechst染色法检测细胞凋亡;荧光显微镜观察FITC-鬼笔环肽染色的细胞骨架;划痕实验进行细胞运动性分析.结果:①免疫印迹法示:应用Src激酶siRNA或PP2干预MPCs后,Src激酶表达较A组下降(P＜0.05);AngⅡ处理后,MPCs内Src激酶生成与A组相比明显增多(P＜0.05);Src激酶siRNA或PP2干预MPCs可减少AngⅡ上调的Src激酶表达(P＜0.05).②AngⅡ诱导MPCs内Src激酶及其磷酸化形式表达的升高,在一定范围内呈时间及浓度依赖性.③Annexin V-FITC/PI双染法及Hoechst染色法两种方法显示:A组、B组与C组MPCs凋亡无明显差异(P＞0.05);AngⅡ干预后,MPCs凋亡较A组增加(P＜0.05);Src激酶siRNA或PP2可减轻AngⅡ诱导的MPCs凋亡(P＜0.05).④荧光显微镜观察FITC-鬼笔环肽染色的细胞骨架:A组、B组与C组MPCs的F-actin呈微丝样结构,聚集成束,沿细胞长轴分布,形成应力纤维;D组F-actin发生重组,微丝样结构消失,排列紊乱,F-actin沿胞体外周分布,形成F-actin环;E组及F组较D组骨架重组有所减轻.⑤B组及C组与A组相比,MPCs运动性降低(P＜0.05);D组MPCs运动性较A组增加(P＜0.05);E组及F组较D组MPCs运动性降低(P＜0.05).结论:AngⅡ刺激MPCs胞内Src激酶和p-Src (Tyr 416)激酶表达增加,并在一定范围内呈时间及浓度依赖性.AngⅡ诱导MPCs凋亡增加、骨架改变、运动性增强;该过程与AngⅡ引起Src激酶和p-Src (Tyr 416)激酶生成增加有关.降低细胞内Src激酶浓度,可减轻AngⅡ诱导的MPCs损伤.降低对照组MPCs胞内Src激酶浓度,MPCs运动性降低,但未观察到细胞凋亡、细胞骨架改变.
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Src激酶特异性抑制剂PP2对人胆管癌QBC939细胞侵袭能力的影响和机制研究
目的 探讨Src激酶特异性抑制剂PP2对人胆管癌QBC939细胞侵袭能力的影响和机制.方法通过Western Blot技术检测PP2对人胆管癌QBC939细胞中Src激酶活化的影响;用Transwell小室法观察PP2对QBC939细胞的影响;用RT-PCR和Western Blot技术检测PP2对QBC939细胞侵袭能力相关分子的作用.结果PP2组中p-Src蛋白的表达水平明显低于对照组;PP2组QBC939细胞的体外侵袭能力较对照组显著降低;与对照组相比,PP2组E-cadherin的表达显著增强,CD44的表达则明显减弱.结论PP2能通过抑制Src激酶的活化,增强QBC939细胞侵袭抑制分子E-cadherin、减弱促侵袭分子CD44的表达,进而抑制人胆管癌QBC939细胞的侵袭能力.
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雌马酚对PC12细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及其机制
目的 探讨雌马酚对PC12细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及机制.方法 以PC12细胞为研究对象,构建体外神经元缺氧/复氧损伤模型,用雌马酚进行干预.MTT法检测细胞活力,比色法测定细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性和丙二醛(MDA)含量,免疫细胞化学法检测活性氧(ROS)含量,Western blotting检测缺氧/复氧损伤的PC12细胞内NADPH氧化酶2(gp91 phox)和磷酸化Src(p-Src)激酶的表达.结果 雌马酚可有效减轻缺氧/复氧引起的PC12细胞损伤,降低缺氧/复氧损伤细胞培养上清液中LDH的活性和MDA的含量,明显抑制ROS的生成及gp91phox和p-Src的表达.结论 雌马酚通过抑制p-Src激酶和gp91phox表达,减少ROS生成,从而对PC12细胞缺氧/复氧损伤产生保护作用.
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Src激酶抑制剂PP2对星形胶质细胞缺氧/复氧损伤的保护作用
目的：探讨Src激酶抑制剂PP2对大鼠星形胶质细胞缺氧/复氧损伤的保护作用。方法实验分为正常对照组，缺氧/复氧组（H/R；缺氧8 h/复氧24 h），PP2+缺氧/复氧组（PP2+H/R；缺氧前给予10μmol/L PP2作用24 h）。MTT法检测各组星形胶质细胞存活率，流式细胞术测定各组星形胶质细胞凋亡率，Western blotting法检测各组星形胶质细胞中Src激酶、Bax及Bcl-2的蛋白表达。结果 MTT检测结果显示H/R损伤后细胞存活率降低，而在使用PP2预处理后细胞存活率增加（P<0.01）；流式细胞术实验结果显示H/R损伤后细胞凋亡增加，而在使用PP2预处理后细胞凋亡显著减少（P<0.01）；Western blotting法检测结果显示H/R损伤后Src激酶表达增加，用PP2预处理后Src激酶表达降低。H/R损伤后凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2的比值增加，在用PP2预处理后Bax/Bcl-2的比值显著降低（P<0.01）。结论 PP2可对星形胶质细胞H/R损伤起保护作用，其机制可能与抑制Src激酶的蛋白表达和激活抗凋亡机制有关。
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磷酸化caspase-8在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义
目的：探索Src对caspase-8的磷酸化作用对非小细胞肺癌患者的临床意义。方法应用免疫组化方法检测Src及caspase-8在非小细胞肺癌组织及对照肺组织中的表达，应用Western blot检测非小细胞肺癌组织和对照肺组织的磷酸化caspase-8（p-Y380-casp8）的表达，Kaplan-Meire法分析p-Y380-casp8阳性组和阴性组的无疾病生存情况。结果 Caspase-8与Src在非小细胞肺癌组织和对照肺组织中阳性表达率无显著性差异（P>0.05），免疫组化caspase-8（+）Src（+）的非小细胞肺癌组织中磷酸化caspase-8均阳性表达，磷酸化caspase-8在非小细胞肺癌组织中的阳性率显著高于对照肺组织（52.4%vs 7.1%，P<0.05），磷酸化caspase-8阳性表达非小细胞肺癌患者组术后2年无疾病生存率显著低于磷酸化caspase-8阴性组（32.0%vs 60.3%，P<0.05）。结论磷酸化caspase-8可以成为非小细胞肺癌患者不佳预后的标志分子，为临床非小细胞肺癌患者预后评估提供了全新理论基础。
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酪氨酸激酶Src在白色念珠菌感染中的机制研究
目的：探讨酪氨酸激酶Src在白色念珠菌感染中的作用及其机制。方法：通过Alarmarblue法检测不同浓度Src抑制剂PP2作用巨噬细胞不同时间点对细胞增殖的影响，通过荧光定量法检测巨噬细胞对FITC标记的白色念珠菌感染吞噬作用的影响，采用ELISA法检测PP2对巨噬细胞感染白色念珠菌产生细胞因子TNF-α和IL-10的影响。结果：0～33．3μmol/L的PP2作用细胞2 h后对细胞生长无明显影响。11．1、33．3μmol/L的PP2作用细胞24 h后细胞增殖率分别为78％、9％，48 h后增殖率分别为54％、13％。11．1μmol/L的PP2仅在作用巨噬细胞48 h后，抑制巨噬细胞对白色念珠菌的吞噬，此作用可能与抑制增殖相关，然而，PP2能显著抑制白色念珠菌对巨噬细胞的免疫应答，表现为显著抑制细胞因子TNF-α和IL-10的产生，有效浓度为11．1～33．3μmol/L（P＜0．01）。结论：酪氨酸激酶Src在巨噬细胞识别白色念珠菌感染中起着重要作用，尤其在细胞因子免疫应答中作用更加显著。
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Src激酶在骨肉瘤U2OS细胞失巢凋亡中的作用
目的 探讨Src激酶在骨肉瘤U2OS细胞失巢凋亡中的作用.方法 采用超低黏附板构建骨肉瘤U2OS细胞失巢凋亡抵抗模型,Western blot检测骨肉瘤U2OS细胞和失巢凋亡抵抗细胞中Src激酶蛋白的水平.加入Src激酶抑制剂,Western blot检测U2OS细胞中Src激酶蛋白的水平变化,并利用TUNEL染色和流式细胞双染技术检测细胞凋亡率.结果 成功构建骨肉瘤失巢凋亡抵抗模型细胞(U2OSar),在骨肉瘤失巢凋亡过程中,p-Src的蛋白水平逐渐升高;与骨肉瘤U2OS细胞相比,U2OSar细胞中,p-Src/Src蛋白灰度比值0.23上升至0.91(P＜0.05);加入Src激酶抑制剂PP2后,骨肉瘤U2OS细胞的p-Src的蛋白水平明显降低,凋亡率从46.66％下降至28.32％ (P＜0.05).结论 Src激酶参与调控骨肉瘤失巢凋亡,抑制肿瘤细胞凋亡,促进其失巢凋亡抵抗.
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联合应用达沙替尼可增强吉非替尼对HCC827肺癌细胞的杀伤作用
目的 探讨达沙替尼(dasatinb)增强吉非替尼(gefitinib)对HCC827肺癌细胞杀伤作用的分子机制.方法 单独(0、100、500、1000) nmol/L gefitinib及联合使用dasatinb(1000 nmol/L)处理HCC827细胞及gefitinib耐药株HCC827GR细胞,采用MTT法检测HCC827细胞、HCC827GR细胞增殖活力,采用分光光度法检测caspase 3活性,Western blot法检测各组细胞中Src、表皮生长因子受体(EGFR)蛋白磷酸化水平.结果 HCC827GR细胞中Src磷酸化水平显著增高,dasatinb显著抑制Src磷酸化水平,抑制细胞增殖并促进caspase 3表达,两种药物联合应用杀伤效果显著高于单纯gefitinib处理组.结论 Dasatinb与gefitinib联合应用可增强对Src家族表达的抑制,增强gefitinib对HCC827肺癌细胞的杀伤作用.
