首页 > 文献资料
-
热化疗对人胆管癌细胞增殖和凋亡的影响
目的探讨表阿霉素(EADM)热化疗对人胆管癌细胞(QBC939)的增殖和凋亡的作用.方法以体外培养的人胆管癌细胞株为研究对象,采用水浴加热法进行体外细胞毒实验(MTT)、透射电镜观察及流式细胞仪检测,观察热疗、化疗、热化疗对人胆管癌细胞的生长抑制和凋亡的影响.结果42℃以上单纯热疗对QBC939细胞有明显杀伤作用(P＜0.01),42℃以上热化疗对QBC939细胞有明显的协同或相加作用(P＜0.01).透射电镜和流式细胞术均观察到热疗、化疗、热化疗诱导细胞凋亡的作用(P＜0.01);热化疗有协同作用(P＜0.01).结论热疗、化疗、热化疗均抑制QBC939细胞增殖;热疗、化疗、热化疗诱导细胞凋亡为其抗癌机制之一;热疗提高化疗药物的细胞毒作用.
-
野生型XPD转染对胆管癌QBC939细胞生物学行为的影响
目的:探讨野生型XPD基因对人胆管癌QBC939细胞的生物学影响.方法:用碱裂解法提取空载质粒pEGFP-N2和重组质粒pEGFP-N2-XPD,提取出的质粒以KPNⅠ、BGIⅡ和SPHⅠ酶切鉴定.实验分4组,重组质粒pEGFP-N2-XPD组、空载质粒pEGFP-N2组、脂质体组,并用具有相同遗传背景和代数的QBC939细胞作为空白对照.用脂质体转染法瞬时转染四组细胞.荧光显微镜下观察转染后绿色荧光蛋白报告基因表达情况.提取各组细胞总RNA,合成cDNA,用聚合酶链反应(PCR)检测4组细胞中XPD、p53、cyclin D1、c-myc表达情况.并用四甲基偶氮唑盐(MTT)和流式细胞仪检测细胞增殖及其细胞周期的变化.结果:pEGFP-N2-XPD细胞与pEGFP-N2、脂质体组和空白对照组相比,XPD mRNA表达量明显增加(0.778±0.018 vs 0.561±0.039,0.544±0.035,0.542±0.034,均P<0.01).pEGFP-N2-XPD细胞中p53 mRNA相对表达量与pEGFP-N2、脂质体组和空白对照组比较具有统计学意义(0.421±0.019 vs 0.256±0.014,0.267±0.015,0.274±0.018,均P<0.01).pEGFP-N2-XPD细胞与其他组相比,cyclin D1 mRNA相对表达量明显降低(0.339±0.041 vs 0.560±0.039,0.558±0.050,0.560±0.041,均P<0.01).pEGFP-N2-XPD细胞与其他组相比,c-myc mRNA相对表达量明显降低(0.355±0.045 vs 0.570±0.075,0.560±0.041,0.537±0.050,均P<0.01).流式细胞仪检测pEGFP-N2-XPD组细胞周期G1期为81.65%,S期为11.83%,其他组G1期分别为65.54%、56.61%、63.26%;S期分别为24.10%、29.52%、27.28%,结果具有统计学意义(P<0.05).MTT检测示pEGFP-N2-XPD细胞生长率为0.249±0.02,与其他组相比,细胞增殖力明显减弱(P<0.01).结论:野生型XPD基因可以抑制胆管癌细胞的生长,XPD基因可抑制c-myc、cyclin D1基因的表达,增加p53基因表达.
-
原花青素对人胆管癌细胞QBC939抑制的体内外研究
目的 研究原花青素(Pc)体内外对人胆囊癌细胞的抑铡作用.方法 常规培养细胞,24h后随机分为阳性对照组、空白对照组和PC组.MTT法检测PC对人胆囊癌细胞增殖的抑制作用；流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期；建立QBC939细胞裸鼠异种移植瘤模型.将荷瘤裸鼠随机分为5组:阴性对照组、5-Fu阳性对照组及PC3个剂量组,每日腹腔注射给药,每隔3d测肿瘤大小；12 d后,处死裸鼠,剥瘤称重并计算抑瘤率.结果 PC3个剂量组显著抑制QBC939细胞增殖,且呈时间和剂量依赖性；将细胞周期阻滞在S期,并诱导QBC939细胞凋亡；PC可抑制QBC939细胞裸鼠异种移植瘤的生长.结论 PC体内外均可抑制SHG-44细胞生长,并诱导肿瘤细胞凋亡.
-
华蟾素对人胆管癌细胞QBC939抑制作用研究
目的 观察华蟾素体内外对人胆囊癌QBC939细胞的抑制作用.方法 常规培养细胞,24 h后随机分为空白对照组和华蟾素组6个剂量组,分别于3个时相采用MTT法检测华蟾素对人胆囊癌细胞增殖的抑制作用;建立QBC939细胞裸鼠异种移植瘤模型,随机分为阴性对照组、5-Fu阳性对照组及华蟾素3个剂量组,每日腹腔注射给药,观察荷瘤裸鼠的一般活动状况及进食量;12 d后处死裸鼠,剥瘤称重并计算抑瘤率;取血,ELISA法检测血清中细胞因子IL-6、TNF-α和sVCAM-1含量.结果 华蟾素6个剂量组对QBC939细胞的增殖均具有抑制作用,与对照组比较差异有统计学意义,并且随着剂量的增加和时间的延长,抑制率也增加;华蟾素腹腔注射给药可改善荷瘤裸鼠的一般活动状况,增加进食量;抑制荷瘤裸鼠移植瘤的生长,与对照组比较差异有统计学意义;提高血清TNF-α水平,降低IL-6和sVCAM-1水平,差异均有统计学意义.结论 华蟾素体内外均可抑制胆囊癌QBC939细胞的生长,其体内抑瘤作用机制可能与上调裸鼠血清TNF-α细胞因子水平,下调IL-6和sVCAM-1水平有关.
-
PP2对人胆管癌细胞株QBC939侵袭能力的影响
目的:探讨Src激酶特异性抑制剂PP2对人胆管癌QBC939细胞侵袭能力的影响和机制.方法:通过Western Blotting技术检测PP2对人胆管癌QBC939细胞中Src激酶活化的影响;用Transwell小室法观察PP2对QBC939细胞的影响;用RT-PCR和Western Blotting技术检测PP2对QBC939细胞侵袭能力相关分子的作用.结果:实验组p-Src蛋白表达水平明显低于对照组,差异具有统计学意义(P＜0.05);实验组QBC939细胞体外侵袭能力较对照组显著降低,差异具有统计学意义(P＜0.05);与对照组相比,实验组E-cadherin表达显著增强,CD44表达明显减弱,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:PP2通过抑制Src激酶活化,增强E-cadherin表达、减弱CD44表达,抑制人胆管癌QBC939细胞侵袭能力.
-
HCV C 蛋白调控肝门部胆管癌细胞中NF-κB活性的研究
目的探讨HCV C蛋白在肝门部胆管癌细胞中对核转录因子κB(NF-κB)调控作用.方法利用稳定表达HCV C蛋白的QBC939细胞株(QBC939 HCV C+),通过NF-κB报道基因分析法、凝胶迁移率分析(EMSA)检测HCV C蛋白增强肝门部胆管癌细胞NF-κB的DNA结合活性和反式激活活性.RT-PCR、Western blot检测HCV C蛋白对核转录因子κB抑制蛋白α(IκBα)mRNA及p50、p65、IκBα蛋白表达及IκBα蛋白磷酸化的影响.结果①EMSA结果显示QBC939HCV C+细胞系中NF-κB相对信号密度明显比QBC939细胞高.②将pNF-κB-lun表达质粒转染稳定表达HCV C蛋白胆管癌细胞系中,通过单光子检测仪检测荧光素酶活性,结果显示QBC939HCV C+细胞中活化NF-κB为12.8倍,而QBC939细胞中NF-κB为2.6倍.③RT-PCR显示IκBα mRNA在QBC939 HCV C+细胞和QBC939细胞中的表达无明显差异;Western blot结果显示稳定表达HCV C蛋白的QBC939 HCV C+细胞株的胞核中的p50、p65蛋白高水平表达,而未转染HCV C蛋白的QBC939细胞仅检测出极低水平的p50、p65蛋白.在QBC939HCV C+细胞胞浆中IκBα蛋白低水平表达,QBC939细胞高水平表达,但IκBα蛋白磷酸化水平则相反.结论HCV C蛋白通过增加IκBα降解激活的NF-κB在肝门部胆管癌的发生中起重要作用.
-
MMP-2、TIMP-2与人胆管癌QBC939裸鼠移植瘤生长相关性的研究
目的探讨人胆管癌QBC939裸鼠移植瘤内基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、金属蛋白酶组织抑制剂-2(TIMP-2)的表达与肿瘤发生、发展的关系.方法建立人胆管癌裸鼠移植瘤模型,并随机分成对照组、干预组(羟基喜树碱,2.5 g·kg-1)和实验组(羟基喜树碱,10 g·kg-1),观察裸鼠移植瘤体生长情况及瘤体病理组织学.结果所有移植瘤标本病理组织学检查符合胆管中分化腺癌;与对照组比,实验组可明显提高移植瘤内TIMP-2的含量,降低MMP-2/TIMP-2的比值;移植瘤体积与前者呈负相关,与MMP-2/TIMP-2呈正相关.结论实验组可降低移植瘤MMP-2/TIMP-2比值,抑制移植瘤的生长,对人胆管癌裸鼠移植瘤细胞外基质的降解可能具有抑制作用.
-
羟基喜树碱对人胆管癌QBC939裸鼠移植瘤MMP-2、TIMP-2的影响
目的探讨羟基喜树碱对人胆管癌QBC939裸鼠移植瘤的基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、金属蛋白酶组织抑制剂-2(TIMP-2)的影响,分析MMP-2及TIMP-2与肿瘤发生、发展的关系.方法建立人胆管癌QBC939细胞株裸鼠皮下移植瘤模型,将24只裸鼠随机分成对照组、干预组和实验组,分析移植瘤体生长情况,免疫组化法结合图像分析系统半定量检测瘤体内MMP-2、TIMP-2及MMP-2/TIMP-2的比值.结果与对照组比,实验组可使移植瘤体的MMP-2、TIMP-2含量增高,后者差异有统计学意义(P＜0.01);实验组可降低MMP-2/TIMP-2的比值和抑制移植瘤生长,差异有统计学意义(P＜0.01).结论实验组可降低移植瘤MMPV2/TIMP-2比值,对人胆管癌裸鼠移植瘤细胞外基质的降解可能具有抑制作用,进而抑制移植瘤的生长.
-
阿伐他汀诱导人胆管癌QBC939细胞凋亡的研究
目的 观察阿伐他汀(ATV)对人胆管癌QBC939细胞增殖及凋亡的影响.方法 应用细胞培养技术培养QBC939细胞,经不同浓度的阿伐他汀处理后,以MTT法检测QBC939细胞的存活率,通过光镜、倒置显微镜及琼脂糖凝胶电泳检测胆管癌细胞凋亡的形态学特征、生化学特征.结果 在阿伐他汀的作用下,QBC939细胞的生长、增殖变的相对缓慢,凋亡的细胞出现膜小泡、凋亡小体等特征性改变;DNA电泳呈现典型的梯状条带.结论 阿伐他汀可抑制胆管癌细胞的生长、增殖,并可诱导细胞发生凋亡,且其作用呈剂量效应关系.
-
吉西他滨联合CIK细胞对胆管癌QBC939细胞的杀伤作用
目的:观察吉西他滨联合CIK细胞对胆管癌QBC939细胞的杀伤效应.方法:用健康人外周血单核细胞(PBMC)在体外用多种细胞因子诱导成CIK细胞,于培养14d收获CIK细胞作为效应细胞,流式细胞术分析其表型特征.将不同效靶比的CIK细胞和不同浓度梯度的吉西他滨单独或联合作用于体外培养的人胆管癌QBC939细胞,于培养24 h及48 h后用CCK8法测定CIK细胞、吉西他滨及两者联合对胆管癌细胞的生长抑制率,用蛋白印迹法观察细胞凋亡相关蛋白Bax的表达.结果:CIK细胞体外培养14d时,CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3+HLA-DR+、CD3+CD56+、CD4+CD25+等双阳性细胞所占比例分别为10.89％、60.27％、71.82％、9.03％和4.01％;CIK及吉西他滨对人胆管癌QBC939细胞的抑制率随着效靶比和药物浓度的提高及作用时间的延长而提高(P＜0.05).而两者联合对人胆管癌QBC939细胞的杀伤作用明显高于单一因素.蛋白水平检测提示CIK细胞和吉西他滨均可使人胆管癌QBC939细胞的凋亡相关蛋白Bax表达上调,两者联合更为显著.结论:CIK细胞可通过诱导人胆管癌QBC939细胞凋亡发挥较强的杀伤作用.联合CIK治疗可明显增强吉西他滨对人胆管癌QBC939细胞的杀伤效应.
-
Zebularine对胆管癌细胞增殖、凋亡的影响及其机制
目的 观察新型DNA甲基转移酶抑制剂Zebularine对胆管癌细胞系QBC939细胞增殖、凋亡的影响,并分析其可能的机制.方法 体外培养的QBC939细胞,经不同浓度Zebularine(0、50、100、200 μmol/L)分别处理24、48、72 h,采用MTT法检测其对细胞增殖的影响;Zebularine处理QBC939细胞48 h后,流式细胞仪检测其对细胞凋亡的影响;分光光度法检测药物处理后细胞Casepase-9相对活性;Western blotting法检测药物对细胞Bax、Bcl-2、PTEN、Akt、p-Akt蛋白表达的影响.结果 Zebularine能有效抑制QBC939细胞增殖,且呈剂量和时间依赖性(P＜0.05);Zebularine处理QBC939细胞48 h后,细胞凋亡率从16.7％增加到37.5％;促凋亡蛋白Bax表达量上调,而抗凋亡蛋白Bcl-2表达量下调(P＜0.05);Casepase-9相对活性显著增加(P＜0.05);此外,Zebularine可上调PTEN表达,并抑制Akt磷酸化(P＜0.05).结论 Zebularine可通过抑制QBC939细胞增殖并促进其凋亡,其作用机制可能参与上调PTEN表达并抑制Akt磷酸化激活,继而上调Bax,下调Bcl-2,并增加Caspase-9活性相关.
关键词： zebularine QBC939细胞 凋亡 PTEN AKT -
阿托伐他汀对人胆管癌QBC939细胞系侵袭的影响
目的 探讨阿托伐他汀(ATV)对人胆管癌QBC939细胞系侵袭的影响及其可能作用机制.方法 应用细胞培养技术培养人胆管癌QBC939细胞,经不同浓度的ATV处理后,以Matrigel侵袭实验和半定量RT-PCR检测ATV对QBC939细胞内RhoCmRNA表达的影响情况.结果 Matrigel侵袭实验显示,经10 μmol/L、25 μmol/L、50 μmol/L干预48 h后的QBC939细胞,随着浓度的增加,其体外侵袭能力明显减弱(P＜0.01);半定量RT-PCR测定显示,ATV作用48 h后,QBC939细胞中RhoC的表达改变并不明显.结论 ATV可减弱人胆管癌QBC939细胞体外侵袭能力.
-
反义RhoC基因对胆管癌QBC939细胞株基质金属蛋白酶-9的抑制作用
目的 探讨反义RhoC基因对胆管癌QBC939细胞株的金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响.方法 通过质粒转染的方法向QBC939细胞中转染反义RhoC cDNA真核表达载体pcDNA 3.1Hyp(+)质粒,RT-PCR和Western-Blot检测MMP-9在QBC939细胞、转染空载体的QBC939细胞(QBC939-V)、转染反义RhoC的QBC939细胞(QBC939-AS)的mRNA和蛋白相对表达量.结果 对照组细胞QBC939中MMP-9 mRNA和蛋白的平均光密度值分别为(0.265±0.059)和(0.242±0.063),QBC939-V细胞中MMP-9 mRNA和蛋白的平均光密度值分别为(0.257±0.039)和(0.303±0.031),而反义RhoC cDNA质粒转染组细胞中MMP-9 mRNA和蛋白的平均光密度值分别为(0.125±0.062)和(0.095±0.043);对照组中MMP-9 mRNA和蛋白的平均光密度值均高于反义RhoC转染组,统计学分析表明在QBC939-AS组和对照组之间,MMP-9的平均光密度值差异有统计学意义(P<0.05).结论 反义RhoC基因在QBC939细胞株中可以抑制MMP-9表达.
-
Src激酶特异性抑制剂PP2对人胆管癌QBC939细胞侵袭能力的影响和机制研究
目的 探讨Src激酶特异性抑制剂PP2对人胆管癌QBC939细胞侵袭能力的影响和机制.方法通过Western Blot技术检测PP2对人胆管癌QBC939细胞中Src激酶活化的影响;用Transwell小室法观察PP2对QBC939细胞的影响;用RT-PCR和Western Blot技术检测PP2对QBC939细胞侵袭能力相关分子的作用.结果PP2组中p-Src蛋白的表达水平明显低于对照组;PP2组QBC939细胞的体外侵袭能力较对照组显著降低;与对照组相比,PP2组E-cadherin的表达显著增强,CD44的表达则明显减弱.结论PP2能通过抑制Src激酶的活化,增强QBC939细胞侵袭抑制分子E-cadherin、减弱促侵袭分子CD44的表达,进而抑制人胆管癌QBC939细胞的侵袭能力.
-
冬凌草甲素对胆管癌QBC939细胞增殖、凋亡及端粒酶活性的影响
目的 探讨冬凌草甲素对胆管癌细胞系QBC939细胞增殖、凋亡及端粒酶活性的影响.方法 采用不同浓度冬凌草甲素(0、10、20、40、80、100μmol/L)处理QBC939细胞24、48、72 h,MTT法测定QBC939细胞活力并计算增殖抑制率;不同浓度冬凌草甲素(0、20、40、80 μmol/L)处理QBC939细胞48 h后,分别采用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率,Western Blot法检测QBC939细胞B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达,端粒酶重复序列扩增法检测QBC939细胞的端粒酶活性.结果 QBC939细胞增殖抑制率随冬凌草甲素的药物浓度升高、作用时间延长而升高;与0μmol/L冬凌草甲素组相比,其他浓度冬凌草甲素组的S期细胞比例降低;0、20、40、80 μmol/L冬凌草甲素组QBC939细胞的凋亡率分别为0.5％、14.8％、25.8％及37.7％;Western Blot结果显示随着药物浓度的升高,QBC939细胞的Bax表达量逐渐升高,Bcl-2表达量逐渐降低;其他浓度冬凌草甲素组QBC939的端粒酶活性均低于0μmoL/L冬凌草甲素组,且QBC939细胞的端粒酶活性随冬凌草甲素浓度的升高而降低(P＜0.05).结论 冬凌草甲素可抑制QBC939细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与抑制Bel-2表达以降低端粒酶活性有关.
-
羟基喜树碱对人胆管癌QBC939裸鼠移植瘤PS2、COX-2的影响
目的 探讨羟基喜树碱对人胆管癌QBC939裸鼠移植瘤的乳癌相关肽(PS2)、环氧合酶-2(COX-2)的影响,分析PS2、COX-2与肿瘤发生、发展的关系.方法 建立人胆管癌QBC939细胞株裸鼠皮下移植瘤模型,将30只裸鼠随机分成对照组、羟基喜树碱低剂量组和羟基喜树碱高剂量组,观察移植瘤体生长情况,RT-PCR法检测瘤体内PS2、COX-2mRNA表达.结果 与对照组比,羟基喜树碱低、高剂量组都可使移植瘤体的PS2 mRNA表达增高;COX-2 mRNA表达降低,且瘤体生长减慢,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01).结论 羟基喜树碱可降低移植瘤COX-2mRNA表达,增高移植瘤体的PS2 mRNA表达,并使人胆管癌裸鼠移植瘤生长减慢.
-
老鹳草提取物对人结肠癌QBC939裸鼠移植瘤β-catenin和c-myc表达的影响
为研究老鹳草提取物对人结肠癌QBC939裸鼠移植瘤组织中β-catenin和c-myc表达的影响,探讨老鹳草提取物对肿瘤发生、发展的作用,本研究成功建立了人结肠癌QBC939细胞株裸鼠皮下移植瘤模型,并将60只裸鼠随机分成空白对照组、老鹳草提取物组和羟基喜树碱组,每组20只,观察各组移植瘤体生长情况,免疫荧光法检测移植瘤组织中β-catenin和c-myc的表达.结果显示,与空白对照组相比,老鹳草提取物组和羟基喜树碱组移植瘤的体积明显缩小(P<0.01),移植瘤组织中β-catenin和c-myc表达亦明显降低(P<0.01);老鹳草提取物组移植瘤体积缩小及移植瘤组织中β-catenin和c-myc表达降低更明显(P<0.01).结果表明,老鹳草提取物可降低移植瘤组织中β-catenin和c-myc表达,对人结肠癌裸鼠移植瘤细胞具有抑制作用,且效果优于羟基喜树碱.
