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纳洛酮与甲基泼尼松龙联用对急性肺损伤大鼠肺组织核转录因子-κB表达的影响
目的探讨联合应用甲基泼尼松龙和纳洛酮对内毒素(LPS)所致急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织核转录因子κB(NF-κB)表达的作用.方法建立大鼠LPS吸入性ALI模型(LPS 3 mg/kg气管内注射).85只大鼠随机分为5组:生理盐水对照组,LPS损伤组,甲基泼尼松龙组(LPS+甲基泼尼松龙),纳洛酮组(LPS+纳洛酮),联合用药组(LPS+甲基泼尼松龙+纳洛酮).采用放射免疫法检测大鼠血清白细胞介素-8(IL-8)水平,并应用免疫组化法观察肺组织NF-κB p65蛋白表达的变化.结果经气道吸入LPS可致大鼠发生ALI.ALI大鼠肺组织NF-κB p65蛋白表达明显升高(P<0.05或P<0.01),IL-8水平亦明显增高(P<0.05或P<0.01),单用甲基泼尼松龙或纳洛酮组肺组织NF-κB p65蛋白表达率及IL8水平均较LPS损伤组明显降低,以联合用药组更为明显(P<0.05或P<0.01).结论联合应用甲基泼尼松龙和纳洛酮可降低LPS吸入性ALI大鼠血清IL-8升高,并显著抑制肺组织NF-κB p65蛋白表达.
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胃癌及癌前病变中核因子-kappa B和端粒酶逆转录酶的表达与意义
目的:探讨胃癌及癌前病变中核因子-kappa B(NF-κB)和端粒酶逆转录酶(hTERT)的表达及相互关系.方法:以41例原发性胃癌和38例相应非癌组织及10例正常对照为研究对象,采用免疫组化和原位杂交法检测NF-κB亚单位p65蛋白、h TERT蛋白和hTERT mRNA.结果:①正常胃粘膜、肠型化生、异型增生、胃癌中,p65的阳性率分别为0、34.18%、53.33%、60.98%;hTERT mRNA为10.00%、39.13%、66 .67%、85.37%;hTERT蛋白为0、30.43%、60.00%、78.05%.三者在异型增生、胃癌中与正常组相比差异分别有显著性,而且肠化与胃癌组比较也分别具有显著性(P＜0.05).②胃癌中,p65和hTERT蛋白的表达在低、未分化、进展期、有淋巴结转移和浸润至浆膜层的肿瘤中显著增高(P＜0.01～0.05).而hTERT mRNA的表达仅与肿瘤分期相关.③肠化、异型增生和胃癌三组中,p65和hTERT mRNA,及hTERT蛋白和mRNA间分别具有中到强正相关(r s=0.609～0.752,P＜0.01).结论:NF-κB p65蛋白和hTERT的过表达是胃癌发生中的早期事件,其表达水平随着胃癌恶性程度的增加而增加;p65在转录水平上激活hTERT可能是胃癌发生发展的重要阶段.
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HCV C 蛋白调控肝门部胆管癌细胞中NF-κB活性的研究
目的探讨HCV C蛋白在肝门部胆管癌细胞中对核转录因子κB(NF-κB)调控作用.方法利用稳定表达HCV C蛋白的QBC939细胞株(QBC939 HCV C+),通过NF-κB报道基因分析法、凝胶迁移率分析(EMSA)检测HCV C蛋白增强肝门部胆管癌细胞NF-κB的DNA结合活性和反式激活活性.RT-PCR、Western blot检测HCV C蛋白对核转录因子κB抑制蛋白α(IκBα)mRNA及p50、p65、IκBα蛋白表达及IκBα蛋白磷酸化的影响.结果①EMSA结果显示QBC939HCV C+细胞系中NF-κB相对信号密度明显比QBC939细胞高.②将pNF-κB-lun表达质粒转染稳定表达HCV C蛋白胆管癌细胞系中,通过单光子检测仪检测荧光素酶活性,结果显示QBC939HCV C+细胞中活化NF-κB为12.8倍,而QBC939细胞中NF-κB为2.6倍.③RT-PCR显示IκBα mRNA在QBC939 HCV C+细胞和QBC939细胞中的表达无明显差异;Western blot结果显示稳定表达HCV C蛋白的QBC939 HCV C+细胞株的胞核中的p50、p65蛋白高水平表达,而未转染HCV C蛋白的QBC939细胞仅检测出极低水平的p50、p65蛋白.在QBC939HCV C+细胞胞浆中IκBα蛋白低水平表达,QBC939细胞高水平表达,但IκBα蛋白磷酸化水平则相反.结论HCV C蛋白通过增加IκBα降解激活的NF-κB在肝门部胆管癌的发生中起重要作用.
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黄癸素对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖抑制作用及对NF-κβ、P65、P53蛋白表达的影响
目的 探讨黄癸素(α-羟基-δ-癸酰乙基磺酸小檗碱)对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖抑制作用及对核转录因子(NF)-κβ、P65、P53蛋白表达的影响.方法 体外培养人乳腺癌MDA-MB-231细胞,分别加入不同终浓度黄癸素(0.4 mg/L、0.8 mg/L、1.6 mg/L、3.2 mg/L、6.4 mg/L)处理作为实验组,未用黄癸素处理的细胞作为对照组.采用噻唑蓝(MTT)比色法、4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色法、碘化丙啶(PI)单染流式细胞术、AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞术、Western bolt法,分别检测黄癸素对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖抑制作用、细胞凋亡形态、细胞周期各时相细胞比例、细胞凋亡水平和NF-κβ、P65、P53蛋白表达水平的影响.结果 经黄癸素处理后,5个浓度实验组MDA-MB-231细胞增殖抑制率随黄癸素浓度的增加而递增(P＜0.01),呈药物剂量依赖性;不同浓度实验组培养48 h的细胞增殖抑制率明显高于培养24 h(P均＜0.01);培养24 h的半抑制浓度(IC50)=3.03 mg/L,培养48 h的IC50=2.00 mg/L.1.6 mg/L和3.2 mg/L两个实验组作用48 h后,随黄癸素浓度的增加(0→1.6 mg/L→3.2 mg/L),MDA-MB-231细胞G0/G1期百分数递增(P＜0.01),G2/M期百分数基本不变(P＞0.05),S期细胞百分数则递减(P＜0.01);细胞凋亡率递增(P＜0.01);NF-κβ表达水平递减,P53、P65蛋白表达水平递升;均呈剂量依赖性.结论 黄癸素具有明显抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的作用,且呈药物-剂量依赖性,其可能通过下调NF-κβ,上调P65、P53蛋白表达诱导细胞凋亡.
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丙泊酚对体外内毒素激活人中性粒细胞NF-κB亚单位p65蛋白的影响
目的 观察丙泊酚对内毒素(LPS)激活后人体中性粒细胞(PMN) NF-κB p65的表达及对PMN凋亡的影响.方法 采集20例健康志愿者外周静脉血,分离PMN后分为五组:C组,加入生理盐水作为对照;LPS组,加入LPS100ng/L);PI组,LPS+丙泊酚2μg/ml;P2组,LPS+丙泊酚4μg/ml;P3组,LPS+丙泊酚8μg/ml.孵育2.5h后,提取RNA;用RT-PCR法检测p65mRNA,Western blot检测p65蛋白含量,流式细胞术检测PMN凋亡.结果 LPS 100ng/L可以显著激活PMN,使p65表达大量增加.实验剂量的丙泊酚均可不同程度抑制LPS激活后PMN p65的表达(P＜0.05);2-8μg/ml浓度的丙泊酚可剂量依赖性增加LPS导致的PMN凋亡(P＜0.05或P＜0.01).结论 丙泊酚2-8μg/ml可抑制PMN p65的激活,促进LPS激活后的PMN凋亡.
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原儿茶酸对金黄色葡萄球菌性肺炎模型小鼠的保护作用及相关机制研究
目的 研究原儿茶酸(PA)对金黄色葡萄球菌(SA)性肺炎模型小鼠的保护作用,并探讨其相关机制.方法 动物实验:36只C57BL/6雌鼠随机分为对照组、SA模型组和原儿茶酸预处理组,每组12只,构建SA肺炎模型小鼠.细胞实验:RAW264.7细胞分组方法同前,构建体外巨噬细胞RAW264.7感染模型.二者均于模型构建前1h行PA预处理.采用HE检测各组小鼠肺组织病理变化,Western Blot检测RAW264.7细胞P38丝裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)和磷酸化(p)-P38MAPK、胞外信号调节激酶(ERK MAPK)和p-ERK MAPK、c-Jun氨基末端激酶(JNK MAPK)和p-JNK MAPK、核转录因子-κB P65(P65)和p-P65蛋白表达情况,采用实时荧光定量PCR法(RT-qPCR)和酶联免疫吸附法(ELISA)测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-6(IL-6)表达水平.结果 动物实验:与模型组比较,PA预处理可减轻SA肺炎,减轻肺组织病理改变,显著降低肺组织和肺泡灌洗液TNF-α和IL-6表达水平(P均<0.05).细胞实验:与模型组比较,PA预处理可显著降低细胞上清液和细胞TNF-α和IL-6表达水平(P均<0.05),并且抑制P65蛋白的活化,但对其它MAPK相关蛋白表达无影响.结论 原儿茶酸对SA肺炎模型小鼠具有保护作用,作用机制可能与抑制P65炎症信号通路的活化、降低TNF-α、IL-6表达有关.
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核转录因子-κB及抑制蛋白IκBα在黄斑前膜中的表达及临床意义
目的 研究核转录因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)P65亚基及抑制蛋白IκBα在黄斑前膜中的表达及临床意义.方法 用免疫荧光组织染色化学方法结合RT-PCR方法分别从蛋白水平及mRNA水平采研究20例原发性黄斑前膜、49例继发性黄斑前膜患者中NF-κB P65亚基及抑制蛋白IκBα的表达情况,用电镜观察其病理特征.15例正常黄斑区视网膜组织作为阴性对照.结果 正常黄斑区视网膜组织中的NF-κB P65和IκBα的免疫荧光组织化学染色方法及RT-PCR方法检测结果均为弱表达.NF-κB P65和IκBα在黄斑前膜组织中的表达明显高于正常黄斑区视网膜组织,差异有显著性(P＜0.01);继发性黄斑前膜组织中的NF-κB P65和IκBα的表达高于原发性黄斑前膜,差异有显著性(P＜0.05).结论 NF-κB P65和IκBα高表达与黄斑前膜的发生关系密切,参与了黄斑前膜的发生发展和NF-κB的激活,可能调控其他的一些蛋白质,共同作用导致黄斑前膜的发生,因此NF-κB可能是治疗黄斑前膜的新靶点.
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人巨细胞病毒pp65蛋白的研究进展
人巨细胞病毒(HCMV)pp65抗原血症的监测用于HCMV活动性感染的诊断已成为国际公认的相对"金标准".此外,利用pp65蛋白能刺激、诱导病毒特异性CD8+T细胞活化与增殖特性,用于检测宿主对HCMV的特异性细胞免疫功能,已为疾病的治疗和预防开创新思路和新方法.本文就HCMVpp65蛋白的特性以及在HCMV感染的诊断、治疗和预防上的应用进行综述.
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贲门腺癌组织中RKIP表达变化及其与血清NF-κBp65蛋白、T淋巴细胞亚群的关系
目的：观察Raf激酶抑制蛋白（ RKIP）在贲门腺癌组织中的表达变化，进一步探讨贲门腺癌的发生、发展机制。方法收集160例贲门腺癌患者（腺癌组）的腺癌组织及其癌旁组织，应用免疫组织化学SP法检测RKIP表达；采用ELISA法和流术细胞术分别检测腺癌组和50例查体健康者（对照组）的血清NF-κB p65蛋白、T淋巴细胞亚群水平。采用Spearman秩和相关分析法分析指标间的关系。结果贲门腺癌及癌旁组织中RKIP表达阳性率分别为38．7％、52．5％（P＜0．05），在有、无淋巴结转移者中的表达阳性率分别为24．4％、53．1％（P＜0．05，t＝4．34）；腺癌组血清总NF-κB p65蛋白水平高于对照组（P＜0．05），但RKIP表达阳性与阴性者水平无显著差异（P＞0．05），有淋巴结转移者高于无淋巴结转移者（P＜0．05）；腺癌组细胞免疫功能低于对照组，尤以RKIP表达阴性者为著（ P＜0．05）。结论 RKIP在贲门腺癌组织中表达降低并与肿瘤发生、发展、浸润转移有关，可能机制为抑制NF-κB活性及细胞免疫功能，使肿瘤细胞逃避机体的免疫监视。
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平阳霉素诱导舌癌Tca8113细胞凋亡过程中p65信号转导通路的变化
目的观察平阳霉素诱导舌癌Tca8113细胞凋亡过程中p65信号转导通路的动态变化.方法在平阳霉素诱导Tca8113细胞凋亡过程中,流式细胞术检测细胞凋亡,免疫组化、Western blot检测p65蛋白.结果平阳霉素能诱导Tca8113细胞凋亡,在凋亡发生时,p65蛋白由非活化状态转变为活化状态,从胞浆中穿过核膜进入细胞核,并调控靶基因表达.调控结束后,p65蛋白由胞核回到胞浆,并成为非活化状态.结论平阳霉素诱导Tca8113细胞凋亡过程中,p65信号转导通路被激活.
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急性溃疡性结肠炎小鼠结肠组织中SHP2的表达及其作用探讨
目的 观察急性溃疡性结肠炎(UC)小鼠结肠组织中含C-Src同源序列的蛋白质酪氨酸磷酸酶2(SHP2)的表达,探讨SHP2在UC病程中的作用.方法 将30只小鼠随机分成正常组、模型组、SHP2组各10只.模型组和SHP2组饮用4％ DSS制作急性UC模型,正常组饮用高压过的饮用水.造模第1天,正常组、模型组、SHP2组分别注射腺病毒稀释液、腺病毒空载体、腺病毒SHP2突变载体.每天记录小鼠体质量、腹泻及便血情况,使用疾病活动指数(DAI)评分量表评价肠道临床炎症严重程度.饲养至20 d处死小鼠,取结肠组织,采用HE染色观察组织形态学变化,进行组织学评分,采用阿尔新蓝染色法检测杯状细胞数量.收集小鼠心脏血,ELISA法检测血清炎性因子COX-2、IL-6、TNF-α水平.取结肠组织,Western blotting法检测结肠组织中SHP2、p-P65、p-STAT3表达水平,免疫组化染色法检测Ki67表达水平.结果 与正常组比较,模型组DAI评分、结肠组织病理学评分均升高,杯状细胞数量减少,血清COX-2、IL-6、TNF-α水平及结肠组织中p-P65、p-STAT3、Ki67表达水平均升高(P均＜0.05或＜O.O1);与模型组比较,SHP2组DAI评分、结肠组织病理学评分均降低,杯状细胞数量增加,血清COX-2、IL-6、TNF-α水平及结肠组织中p-P65、p-STAT3、Ki67表达水平均降低(P＜0.05或＜0.01).结论 急性UC小鼠结肠组织中SHP2表达升高;SHP2可能是通过介导NF-κB/STAT3信号通路的激活,调节炎性因子COX-2、IL-6、TNF-α释放,导致黏膜损伤,促进UC的发生.
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RNA干扰抑制多形性胶质母细胞瘤核因子-κB的表达作用及其机制
目的 探讨RNA干扰(RNAi)抑制多形性胶质母细胞瘤核因子-κB(NF-κB)的表达作用及其机制.方法 构建慢病毒p65特异性靶序列及其表达载体,并将其包装至293T细胞,之后转染A172细胞,小鼠随机分为空白组、模型组、低和高RNAi组及阴性对照组.在小鼠皮下造模14 d后低和高RNAi组小鼠经尾静脉分别注射RNAi慢病毒载体颗粒50、100μl(1×105 TU/μl)、阴性对照组注射空白载体病毒颗粒100 μl(1×105 TU/μl).结果 慢病毒转染A172细胞后可以显著抑制其增殖(P=0.000),与对照组比较,高剂量组存活率为60％.NF-κBp65特异性靶序列定向干扰A172细胞,3个RNAi组中p65蛋白的表达水平显著下降(P=0.000).动物实验结果显示,除空白组外,其余所有组小鼠体重自植瘤9d后体重开始出现下降,高低剂量慢病毒干扰组小鼠体重在第18天体重出现回升,其中体重回升高剂量干扰效果略优于低剂量干扰组.模型组小鼠肿瘤体积显著高于两个RNAi组(P=0.000),阴性慢病毒对照组小鼠肿瘤体积无显著缩小.模型组和阴性对照组肿瘤组织中p65处于高表达水平,RNA高低剂量干扰组p65表达水平显著下降(P=0.000).炎性因子白细胞介素(IL)-1β和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在模型组中处于高表达水平,使用p65干扰RNA后能够有效抑制IL-1β和TNF-α的表达(P=0.000).结论 特异性干扰NF-κB p65蛋白表达后能够有效改善小鼠皮下种植胶质瘤A172带来的荷瘤压力和降低小鼠机体炎性反应.
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活血祛痰法对糖尿病肾病大鼠核因子活化B细胞κ轻链增强子NF-κB信号通路的影响
目的 观察活血祛痰法对糖尿病肾病大鼠核转录因子-κB(NF-κB)信号传导通路的影响,探讨其对DN防治作用及机制.方法 建立糖尿病肾病(DN)大鼠模型,随机分为正常组、模型组、中药组,观察各组大鼠24h饮水量、24h尿蛋白量、血肌酐、空腹血糖水平等指标;病理切片过碘酸雪夫(PAS)染色观察肾脏的病理改变;采用一步法定量PCR检测肾组织NF-κB基因的表达;免疫印迹法(Western blot)检测P65蛋白质含量.结果 治疗后,模型组尿蛋白量较正常组呈上身趋势,中药组治疗后,24h尿蛋白量、血肌酐明显低于模型组(P＜0.01);模型组NF-κB基因在肾脏中表达量明显高于正常组,治疗后,中药组NF-κB基因在肾脏中表达水平较模型组明显下调(P＜0.01);相对于模型组P65蛋白表达上调,中药组治疗后P65蛋白表达量下降,接近正常组.结论 活血祛痰法可用于治疗早期糖尿病肾病,机制可能与其能抑制DN大鼠肾脏中NF-κB信号传导通路的激活有关.
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34βE12、P63、CK5/6、α-SMA在前列腺基底细胞中的表达及意义
目的：探讨高分子量细胞角蛋白34βE12、肌上皮标记物p63、细胞角蛋白CK5/6、平滑肌肌动蛋白α-SMA在前列腺基底细胞中的表达及意义。方法采用免疫组织化学SP法检测，观察34βE12、p63、CK5/6、α-SMA在前列腺增生(PH)、低级别上皮内瘤变(LGPIN)、高级别上皮内瘤变(HGPIN)、前列腺癌(Pca)中的表达。结果30例PH组标本34βE12、p63、CK5/6大多阳性表达，10例LGPIN组多(++)表达，15例HGPIN组多(+)表达， Pca组大多阴性表达。Pca组与PH组、LGPIN组、HGPIN组比较差异有统计学意义(P<0.05)。α-SMA基底细胞少量表达，Pca组与PH组、LGPIN组、HGPIN组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论前列腺基底细胞表达34βE12、p65、CK5/6，p65优于34βE12，α-SMA多阴性表达。在前列腺标本中联合检测34βE12、p65、CK5/6有助于对前列腺癌及其他不同病变的鉴别诊断。
