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隔药饼灸对动脉粥样硬化兔主动脉内皮细胞NF-κB及ICAM-1mRNA表达的影响
目的:观察隔药饼灸对动脉粥样硬化(AS)兔主动脉内皮细胞核因子-κB(NF-κB)及细胞间黏附分子-1 (ICAM-1)表达的影响,探讨隔药饼灸干预AS形成的作用机制.方法:将50只新西兰大耳白兔随机分为5组:空白组、模型组、直接灸组、隔药饼灸组、西药组,每组10只,除空白组外,其余4组通过高脂饲料喂养及免疫损伤法建立兔AS模型.分别用RT-PCR技术、荧光定量PCR技术检测兔主动脉内皮细胞NF-κB mRNA、ICAM-1 mRNA表达.结果:与空白组相比,模型组主动脉内皮细胞NF-κB mRNA、ICAM-1 mRNA表达差异具有统计学意义(P＜0.01)；与西药组相比,隔药饼灸组NF-κB mRNA、ICAM-1 mRNA表达差异无统计学意义；直接灸组NF-κBmRNA、ICAM-1 mRNA表达差异有统计学意义(P＜0.05).结论:隔药饼灸和直接灸抗AS与其降低AS兔主动脉内皮细胞NF-κBmRNA、ICAM-1 mRNA表达有关,隔药饼灸作用优于直接灸.
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桂芍知母汤及加味对佐剂性关节炎大鼠炎性因子及COX-2信号通路表达的影响
目的:探讨桂芍知母汤及加味对佐剂性关节炎(AA)大鼠炎性因子及环氧合酶-2(COX-2)通路表达的影响,并分析作用机制.方法:大鼠随机分为正常组、模型组、布洛芬组、桂芍知母汤组、桂芍知母加活血组(A)、桂芍知母加藤类组(B).弗氏完全佐剂造模7d后给药3周,观察大鼠关节炎指数(AI)、足肿胀度(ER),ELISA法检测足跖软组织干扰素-γ(INF-γ)、白介素-4(IL-4)水平,免疫组化观察细胞核因子κB(NF-κB)、COX-2和血管内皮生长因子(VEGF)的表达.结果:桂芍知母汤及加味均能显著降低INF-γ,升高IL-4水平,显著减少关节滑膜NF-加p65、COX-2、VEGF的蛋白表达(P＜0.01).结论:桂芍知母汤及活血、藤类加味方对AA大鼠足跖软组织及踝关节的肿胀和炎性有较好的缓解作用,其作用机制与调整炎性因子平衡,抑制COX-2通路蛋白表达有关.
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针刺百会、人中穴对急性脑缺血大鼠模型NF-κB/IκB-α的影响
目的:探讨针刺对急性脑缺血大鼠海马细胞核因子-κB(NF-κB)、核因子κB抑制因子-α(IκB-α)表达的影响.方法:3月龄SD雌性大鼠100只,随机均分为正常组、假手术组、穴位组、非穴位组、模型组.实验结束后取脑组织,TTC染色测定梗死面积,放免法检测缺血脑组织白介素-6(IL-6)和白介素-1β(IL-1 β)含量,免疫组织化学法检测海马NF-κB、IκB-oα的表达.结果:与正常组比较,模型组大鼠脑梗死范围明显,脑缺血组织中IL-6和IL-13显著升高,海马CA3区NF-κB蛋白表达增加,IκB-α蛋白表达降低(P＜0.01);与模型组相比,穴位组大鼠梗死区域变小,脑缺血组织中IL-6和IL-1 β含量降低,海马CA3区NF-κB蛋白表达降低,IκB-α蛋白表达增加(P＜ 0.05),但假手术组与模型组比较差异无统计学意义.结论:针刺可以显著增强NF-κB蛋白表达,抑制IκB-α的蛋白表达,从而减轻其诱导的各种炎性细胞因子的表达,从而发挥抗脑缺血损伤作用.
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细胞核因子-κB在睾丸生精细胞凋亡过程中的活化作用
细胞凋亡在精子发生过程中限制睾丸生精细胞总数起着重要的作用,它的调控异常与男性不育密切相关.越来越多的证据显示细胞核因子-κB (nuclear factor kappa B ,NF-κB)对睾丸生精细胞凋亡起着调控作用,这促使我们研究人类正常睾丸组织NF-κB的活性及在离体状态下睾丸组织过度凋亡过程中的作用.用电泳迁移率变更分析(EMSA)测定,发现低水平NF-?B组成性DNA结合活性,且通过对NF-κB的亚单位RelA和p50的免疫染色发现,NF-κB 定位于Sertoli 细胞核内.在体外诱导的睾丸凋亡过程中,Sertoli细胞(睾丸支持细胞)核NF-κB水平和整个生精小管NF-κB DNA结合活性的增加先于检测到发生凋亡的生精细胞.抗炎药物sulfasalazine可有效抑制应激诱导的NF-κB DNA结合力和NF-κB介导的IBa基因表达.更为重要的是,sulfasalazine抑制NF-?B的同时抑制生精细胞凋亡.因此,有可能通过药物抑制NF-κB,治疗短暂应激条件下引起的生精细胞的过度凋亡.
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罗格列酮对高糖诱导大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞分泌单核细胞趋化蛋白1的影响及其机制
观察不同葡萄糖浓度培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞分泌单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的变化,以及罗格列酮(RGZ)对其分泌的影响.用不同浓度的葡萄糖和RGZ单独或联合孵育大鼠胸主动脉平滑肌细胞,用ELISA方法 检测培养基中MCP-1的水平,Western Blot方法 检测各组所收集细胞胞浆中NF-κBp65和IκBα的表达. 结果高葡萄糖浓度培养(11.2,22.4mmol/L)的大鼠胸主动脉平滑肌细胞分泌的MCP-1[分别为(340.87±43.92)pg/ml和(664.87±23.07) pg/ml]明显高于对照组[(132.20±5.81)pg/ml],RGZ抑制了高葡萄糖孵育下大鼠胸主动脉平滑肌细胞MCP-1蛋白表达水平并呈浓度依赖性,RGZ拮抗剂GW9662(10 μmol/L)预处理可部分拮抗其作用.MCP-1水平的变化与细胞浆NF-κB、IκB的表达变化相伴随. 结论 高糖可以诱导大鼠胸主动脉平滑肌细胞分泌MCP-1,并呈现浓度依赖性；RGZ可抑制高糖诱导的大鼠胸主动脉平滑肌细胞分泌MCP-1水平,上述作用在一定浓度范围内呈现剂量依赖性.高糖诱导平滑肌细胞分泌MCP-1很可能是通过NF-κB通路来调控的.
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拮抗Toll样受体4的表达对内毒素血症小鼠肾脏损伤的保护作用
目的 观察拮抗Toll样受体4(TLR4)的表达对内毒素血症小鼠肾脏损伤的保护作用以及对细胞核因子-κB(NF-κB)p65的影响.方法 采用内毒素(LPS)诱导的小鼠急性肾功能衰竭模型,并应用TLR4单克隆抗体进行干预,观察TLR4单克隆抗体对内毒素血症小鼠的肾脏组织学、血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)、胱抑素C、白细胞介素(IL)-1β、IL-6水平以及肾组织中TLR4及NF-κB水平的影响.结果 与模型组比较,TLR4单克隆抗体能够明显改善内毒素血症小鼠肾脏组织病理学损害;降低血清中Cr、BUN、胱抑素C、IL-1β和IL-6水平(t=7.20、7.86、9.99、8.79、3.92,P均<0.05),并且降低肾组织中TLR4及NF-κB p65水平(t=20.94、11.21,P均<0.05).结论 TLR4单克隆抗体能够保护内毒素血症小鼠肾脏组织损伤,其作用机制可能与调节TLR4/NF-κB信号转导通路有关.
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白血病细胞核因子-κB活化与化疗药物诱导凋亡的关系
目的研究化疗药物诱导P388白血病细胞核因子-κB (NF-κB)活化与凋亡的关系,以及长春新碱(VCR)对它们的影响.方法采用电泳迁移率变动分析(EMSA)检测细胞NF-κB活化水平;采用TdT介导的dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)和DNA电泳方法检测细胞凋亡.结果化疗药物诱导P388白血病细胞NF-κB活化与化疗药物诱导细胞凋亡有明显关系,0.1 μmol/L VCR不仅能显著抑制100 μmol/L阿糖胞苷(Ara-C)或100 μmol/L鬼臼乙叉甙(Vp-16)诱导的P388细胞 NF-κB活化(抑制率分别为52%和63%),而且增强它们诱导P388细胞凋亡的作用(凋亡增加率分别为89%和123%).P388细胞在接触化疗药物前, NF-κB亦有一定程度的活化.结论化疗药物诱导P388白血病细胞凋亡的同时,可活化NF-κB;VCR可通过抑制NF-κB活化,增强化疗药物诱导白血病细胞凋亡的作用.
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丙泊酚与七氟烷对重度烧伤患者围手术期应激反应的影响研究
目的: 探讨丙泊酚与七氟烷两种麻醉药物对重度烧伤患者围手术期应激反应的影响.方法: 选择本院2012年3月-2014年3月住院择期重度烧伤手术患者40例,采用随机数字表法分为Sev组和Pro组,每组20例.Sev组持续吸入2%~3%七氟烷(以呼气末七氟烷浓度为准);Pro组持续静脉靶控输注丙泊酚,设定效应室浓度3~4μg/mL(Marsh模型).观察并记录患者手术和麻醉时间、手术开始后24 h内输液及输血量、体温、镇痛效果等一般情况,于患者手术开始前(T0)、手术开始后3 h(T1)、6 h(T2)、12 h(T3)、24 h(T4)各个时点分别记录心电图(ECG)、心率(HR)、呼吸(RR)、麻醉全程监测血氧饱和度(SpO2)、中心静脉压(CVP)、有创平均动脉测压(IMBP)、各参数值,同时采集静脉血标本,测血浆TNF-α、IL-6及NF-κB含量.结果: 与T0时点比较,两组TNF-α、IL-6及NF-κB含量均有不同程度的升高,其中Pro组患者T1、T2、T3和T4的TNF-α、IL-6及NF-κB含量均增加,差异均有统计学意义(P<0.05);与Pro组比较,Sev组在T0时TNF-α、IL-6及NF-κB含量比较,差异无统计学意义(P>0.05),在T1、T2、T3和T4降低,差异均有统计学意义(P<0.05).结论: 七氟烷对手术患者血清TNF-a、IL-6及NF-κB的抑制作用强于丙泊酚,可能更有利于控制围手术期间的应激反应,降低全身炎症反应综合征的发生.
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胃癌组织中COX-2、NF-κB及VEGF的表达及与血管生成的关系
目的 观察胃癌组织中环氧合酶-2(COX-2)、细胞核因子-κB(NF-κB)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达情况及与胃癌患者临床病理特征和胃癌组织中肿瘤血管新生的关系.方法 采用免疫组织化学法检测69例胃癌患者癌组织及其中40患者癌旁组织中COX-2、NF-κB、VEGF表达情况,分析各指标与患者临床病理特征的关系;另以抗CD34抗体标记组织标本中的微血管内皮细胞,计算并比较COX-2、NF-κB、 VEGF不同表达情况的胃癌患者微血管密度(MVD).结果 COX-2及VEGF主要表达于细胞质及细胞膜中,而NF-κB主要表达于细胞核及细胞质中,且胃癌组织中COX-2、 NF-κB、VEGF阳性着色更为明显;不同性别、年龄、肿瘤大小的胃癌患者胃癌组织中COX-2、NF-κB、VEGF阳性表达率比较差异均无统计学意义(P均>0.05);淋巴结转移者COX-2、NF-κB阳性表达率显著高于淋巴结未转移者(P均<0.05),而VEGF阳性表达率差异无统计学意义(P>0.05);胃癌组织中COX-2、 NF-κB、VEGF阳性表达者MVD均显著高于阴性表达者(P均<0.05),且三者均阳性表达者MVD显著高于三者中任意一个阴性表达者(P<0.05).结论 胃癌组织中COX-2、NF-κB、VEGF阳性表达率显著高于癌旁组织,三者均可明显促进胃癌组织中肿瘤血管新生.
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慢性氟中毒大鼠肾脏跨膜转运蛋白多糖-4和细胞核因子-κB改变
目的 观察慢性氟中毒大鼠肾脏中跨膜转运蛋白多糖(Syndecan)-4和细胞核因子(NF)-κB的表达变化,探讨氟中毒肾损害的发病机制.方法 60只SD大鼠按体质量和性别随机分为3组:对照组,小、大剂量染氟组,自由饮用含氟化钠(NaF)＜ 0.5、10.0、50.0 mg/L的自来水,实验期为6个月.采用蛋白印迹方法和实时荧光定量PCR方法检测肾脏Syndecan-4和NF-κB的蛋白和mRNA表达.结果 与对照组大鼠肾脏中Syndecan-4蛋白表达水平和NF-κB蛋白表达水平[(100.0±8.1)％、(100.0±10.7)％]相比,小、大剂量染氟组大鼠肾脏的Syndecan-4蛋白表达水平[(198.5±5.6)％、(209.2±13.0)％]和NF-κB蛋白表达水平[(284.4±11.1)％、(343.2±2.9)％]均明显升高(P均＜0.05)；小、大剂量染氟组大鼠肾脏中Syndecan-4 mRNA表达(0.431±0.058、0.453±0.065)均高于对照组(0.128±0.026,P均＜0.05).结论 慢性氟中毒大鼠肾脏Syndecan-4的表达上调增加肾内NF-κB表达,从而引发肾脏损伤,该过程可能参与慢性氟中毒肾损伤的发生.
关键词： 氟化物中毒 跨膜转运蛋白多糖-4 细胞核因子-κB 大鼠 肾 -
HCV C 蛋白调控肝门部胆管癌细胞中NF-κB活性的研究
目的探讨HCV C蛋白在肝门部胆管癌细胞中对核转录因子κB(NF-κB)调控作用.方法利用稳定表达HCV C蛋白的QBC939细胞株(QBC939 HCV C+),通过NF-κB报道基因分析法、凝胶迁移率分析(EMSA)检测HCV C蛋白增强肝门部胆管癌细胞NF-κB的DNA结合活性和反式激活活性.RT-PCR、Western blot检测HCV C蛋白对核转录因子κB抑制蛋白α(IκBα)mRNA及p50、p65、IκBα蛋白表达及IκBα蛋白磷酸化的影响.结果①EMSA结果显示QBC939HCV C+细胞系中NF-κB相对信号密度明显比QBC939细胞高.②将pNF-κB-lun表达质粒转染稳定表达HCV C蛋白胆管癌细胞系中,通过单光子检测仪检测荧光素酶活性,结果显示QBC939HCV C+细胞中活化NF-κB为12.8倍,而QBC939细胞中NF-κB为2.6倍.③RT-PCR显示IκBα mRNA在QBC939 HCV C+细胞和QBC939细胞中的表达无明显差异;Western blot结果显示稳定表达HCV C蛋白的QBC939 HCV C+细胞株的胞核中的p50、p65蛋白高水平表达,而未转染HCV C蛋白的QBC939细胞仅检测出极低水平的p50、p65蛋白.在QBC939HCV C+细胞胞浆中IκBα蛋白低水平表达,QBC939细胞高水平表达,但IκBα蛋白磷酸化水平则相反.结论HCV C蛋白通过增加IκBα降解激活的NF-κB在肝门部胆管癌的发生中起重要作用.
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鼻咽癌组织中MIF、c-Fos、NF-κB和MMP9的表达及意义
目的研究巨噬细胞移动抑制因子(macrophage igration nhibitory actor,MIF)、核蛋白c-Fos、核因子κB F-κB)以及金属基质蛋白酶9(MMP9)在鼻咽癌组织中的表达水平及相互关系,探讨MIF在鼻咽癌细胞早期侵袭转移过程中的作用及相关机制.方法收集1999～2003年期间45例确诊未治的鼻咽原发癌活检组织标本,采用免疫组化法检测鼻咽癌组织中MIF、c-Fos、NF-κB 65亚单位以及MMP9的表达,并分析与患者的病理及临床资料的关系.结果在45例鼻咽原发癌组织中,MIF、c-Fos、NF-κB 65和MMP9的阳性表达率分别为77.8%(35/45)、51.1% 3/45)、62.2％(28/45)和71.1％(32/45).其中,癌细胞MIF和MMP9的表达水平均与淋巴结转移有关,伴有淋巴结转移的癌组织中两者表达水平均高于无淋巴结转移的癌组织(P值均＜0.05).MIF阳性组的癌细胞c-Fos和MMP9的表达也均显著高于MIF阴性病例.且MIF、c-Fos和MMP9的表达互为正相关.但癌细胞NF-κB 65的表达与患者性别、年龄、病理组织学分型、有无淋巴结转移以及临床分期均未显示相关性,且与其它3种蛋白的表达亦无相关性.结论 MIF在鼻咽癌细胞的早期淋巴结转移过程中可能具有重要的促进作用,其机制可能是非NF-κB依赖性的,而与增强癌细胞c-Fos表达、活化AP-1转录因子间接地调控癌细胞MMP9表达上调有关.
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小鼠脑出血后自噬相关蛋白表达及NF-κB信号通路对其调节作用的研究
目的 研究小鼠脑出血(ICH)后自噬是否被激活及NF-κB信号通路对ICH诱发的自噬相关蛋白表达的影响.方法 正常昆明小鼠纹状体注射胶原酶Ⅳ建立脑出血模型,或于脑出血模型建立前5 min,侧脑室给药SN50(0.1μg/μl)或生理盐水1 μl,随机分为脑出血组、SN50处理组和生理盐水处理组,同时设立空白对照组.每组分别于脑出血1 h,6 h,24 h,48 h,7 d后(5只/时间点)断头取脑,脑出血各组取出血区及周边脑组织进行免疫印记实验检测Beclin-1、Bcl-2、LC3蛋白表达水平或激活情况,SN50处理组和生理盐水处理组各时间点取出血区及周边脑组织进行免疫印记实验检测LC3蛋白激活情况.结果 小鼠脑出血后出血区及出血周边脑组织Beclin-1蛋白表达上调、Bcl-2蛋白表达下调,以6-48 h时为显著(P＜0.05);Beclin-1/Bcl-2比值随时间变化逐渐增高,以6～48 h时为显著(P＜0.05);LC3被激活,随时间变化蛋白表达逐渐增加,48 h时达高峰,至7 d时仍较空白对照组有显著差异(P＜0.05).脑出血后,SN50处理组LC3蛋白激活高于生理盐水处理组,以6～48 h时为显著(P＜0.05).结论 脑出血后自噬被激活,这种激活的机制之一涉及到Beclin-1/Bcl-2比值的增加;NF-κB特异性抑制剂 SN50 促进了脑出血后自噬相关蛋白的上调表达.
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NF-κB、VEGF在胃不典型增生、胃癌中的表达及其意义
目的探讨细胞核因子-κB(NF-κB)、血管内皮生长因子(VEGF)在胃不典型增生及胃癌中的表达、相互关系及在胃癌发生中的作用.方法采用免疫组化PowerVision两步法对84例胃癌和54例胃不典型增生组织中NF-κB、VEGF的表达进行检测,并对其与临床病理因素之间的关系进行分析.结果NF-κB、VEGF在84例胃癌组织中阳性表达率分别为59.52%、61.90%,在33例胃轻度不典型增生组织中阳性表达率分别为24.24%、33.33%,NF-κB、VEGF在胃癌与轻度不典型增生组之间存在统计学差异(P＜0.05).NF-κB表达与肿瘤的大小相关,VEGF表达与肿瘤大小、淋巴结转移、肿瘤浸润深度相关(P＜0.05).NF-κB与VEGF之间存在相关关系(P＜0.05).结论在胃癌中NF-κB可以通过上调VEGF的表达影响肿瘤血管的形成,进而促进肿瘤的生长、浸润、转移.
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human NF-κB miRNA干扰载体的构建
目的:设计并构建针对胰腺癌基因治疗中关键的靶基因人细胞核因子κB( human NF- κB)的miRNA干扰载体.方法:根据靶基因设计并合成miRNA oligo(引物设计软件),将oligo退火成双链,然后用载体构建试剂盒进行重组克隆,将双链的miRNA oligo插入到miRNA表达载体中,构建miRNA质粒,转化入感受态细胞DH5α,从转化平板分别挑取克隆,用载体通用引物进行菌落PCR筛选,筛选得到的阳性克隆进行测序,以验证重组克隆中插入片段序列是否与设计的oligo序列一致.结果:经过比对,重组克隆中插入片段序列与设计的oligo序列完全一致.结论:成功构建了针对靶基因human NF-κB的miRNA干扰载体,为进一步研究奠定了基础.
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噻托溴铵对乙酰胆碱诱导的支气管上皮细胞NF-κB活化和IL-8表达的影响
目的 观察噻托溴铵对乙酰胆碱诱导的支气管上皮细胞(16HBE)分泌IL-8及核转录因子NF-NF-κB活化的影响.方法 使用不同浓度Ach、噻托溴铵和乙酰胆碱+噻托溴铵等分别处理生长良好的支气管上皮细胞(16HBE),用ELISA法检测细胞及其上清液中IL-8的表达变化,用Western Blot法检测细胞核内NF-κB蛋白含量变化.结果 与对照组相比,乙酰胆碱能刺激16HBE分泌IL-8且呈剂量依赖,并在10 uM浓度时达到刺激高峰(P＜0.001).这种刺激作用与乙酰胆碱诱导16HBE的NF-κB活化有关(P＜0.05).噻托溴铵预处理可抑制乙酰胆碱诱导的NF-κB活性(P＜0.05)及IL-8分泌(P＜0.05).结论 噻托溴铵通过阻断NF-κB的活化,下调乙酰胆碱诱导16HBE细胞分泌IL-8水平,可能是其治疗COPD的抗炎作用机制之一.
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双歧杆菌对大鼠溃疡性结肠炎黏膜MMP-2、NF-κB激活的影响
目的:观察双歧杆菌(Bf)活制剂对大鼠溃疡性结肠炎(UC)发生、发展的影响,并检测其对细胞核因子(NF- κB)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达影响,探讨双歧杆菌的发病机制.方法:将40只SPF级SD雄性大鼠随机分为4组: 空白对照组、模型组、柳氮磺胺吡啶(SASP)组、双歧杆菌(Bf)组.用2,4,6-三硝基苯磺酸(2,4,6-TNBS)和10%乙醇混溶(1:1,V/V)灌肠建立大鼠UC模型;双歧杆菌(Bf)给大鼠灌服双歧杆菌活菌制剂;柳氮磺胺吡啶组则给大鼠灌服柳氮磺胺吡啶(SASP),空白对照组及模型组则正常饲养,不予任何处理,共4周.4周后处死全部大鼠,观察大鼠一般情况的变化(毛色、精神、活动、食欲、睡眠、体力、大便情况),应用免疫组化SP法检测应用Bf 前后NF-κB、MMP-2变化.结果:与空白对照组相比,应用双歧杆菌制剂后, UC的症状、组织损害均较模型组明显减轻.同时MMP-2 表达较模型组降低(SASP: 3.200±0.761; Bf: 4.270±1.600,P＜0.05), NF-κB的表达也降低(SASP: 3.520±1.029;Bf: 3.400±1.037,P＜0.05),但较正常对照组仍有明显增加;MMP-2的表达与NF-κB的表达呈显著的正相关(r=0.765, P＜0.05).同时,SASP 组与Bf组无显著差别(P＜0.05).结论:生态制剂Bf对UC有治疗作用,可能是通过抑制NF- κB的核结合活性,进而降低MMP-2的表达完成的,其作用与SASP作用相当,可作为临床上治疗药物之一.
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岩白菜素对脂多糖诱导RAW264.7细胞IL-6、TNF-α及NF-κB表达的影响
目的:研究岩白菜素预处理对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导RAW264.7细胞IL-6、TNF-α及NF-κB表达的影响.方法:将RAW264.7细胞随机分为空白对照组、DMSO组(DMSO浓度≤0.1％)、模型组(加入终浓度为10 μg/mL的LPS)及岩白菜素低、中、高剂量组(0.5、5、50 μmol/L),各组处理完毕后,ELISA检测不同处理组对LPS诱导RAW264.7细胞分泌白细胞介素-6(IL-6)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,Western blot方法检测岩白菜素对LPS诱导细胞核因子-κB(NF-κB)p65蛋白表达.结果:LPS能够明显诱导小鼠RAW264.7细胞IL-6、TNF-α产生,岩白菜素3个浓度均能抑制LPS诱导的IL-6、TNF-α产生,呈现剂量依赖性；小鼠RAW264.7细胞株产生的NF-κB p65表达可以被LPS诱导显著增加,岩白菜素3个浓度均能抑制LPS诱导产生的NF-κB p65表达.结论:岩白菜素预处理通过抑制NF-κB活化,进而减少炎性细胞因子IL-6、TNF-α的生成发挥抗炎作用.
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缺血再灌注心肌促红细胞素生成素受体的表达及其调控机制探讨
目的 研究缺血再灌注损伤心肌促红细胞素生成素受体(erythropoietin receptor,EPOR)的表达及其调控机制.方法 实验大鼠按电脑数字随机法分为假手术组、模型组、吡咯烷二硫氨基甲酸(pyrrolidine thiocarbamate,PDTC)组.冠状动脉结扎和再松开复制动物模型,计算心律失常评分和心肌梗死面积,免疫组化法检测心肌组织EPOR、细胞核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)的表达.结果 模型组心律失常评分和心肌梗死面积都比假手术组明显加重,造模成功;而PDTC组比模型组则明显减轻.与假手术组比较,模型组EPOR、NF-κB(IOD值)的表达增强(12.46±1.99 vs.9.39±2.42,P<0.05;42.32±3.50 vs.6.62±1.78,P<0.05);PDTC预处理后NF-κB(IOD值)的表达比模型组减少,差异有统计学意义(33.30±2.60vs.2.32±3.50,P<0.05),而EPOR(IOD值)的表达进一步增强,差异有统计学意义(23.16+3.94 vs.12.46±1.99,P<0.05).结论 心肌缺血再灌注损伤时EPOR表达升高,抑制NF-κB介导的炎症反应可促进EPOR表达上调.
关键词： 心肌缺血再灌注 促红细胞素生成素受体 细胞核因子-κB -
调控NF-κB信号通路对大鼠脑星形胶质细胞继发性死亡的影响
目的 观察干预细胞核因子-κB(NF-κB)信号通路对星形胶质细胞(AST)自噬、凋亡和坏死的影响. 方法 取纯化AST分成3组:(1)空白组:加入2μL PBS液1h后,再加入2μLPBS液;(2)激活组:加入2μL PBS液1h后,再加入2μL NF-κB激活剂PMA(终浓度1μmol/L);(3)抑制组:先加入2 μL NF-κB阻断剂PDTC(终浓度20 μmol/L)预处理lh,再加入2μL PMA(终浓度1μmol/L).各组细胞分别处理1、6、12、24、48 h,应用免疫细胞化学荧光法测定NF-κB蛋白的表达,应用AnnexinV/PI染色法检测凋亡和坏死,应用Western blotting检测自噬蛋白Beclin 1表达情况. 结果 (1)随着作用时间增加,NF-κB蛋白表达量也逐渐增高,24 h时空白组、激活组及抑制组表达量分别为0.27±0.46、3.13±0.35、2.00±0.53,差异有统计学意义(P＜0.05).(2)各组细胞凋亡及坏死程度也随着作用时间增加而相应增高.激活组AST凋亡程度总体高于空白组与抑制组,12、24、48 h时间点3组细胞两两比较差异均有统计学意义(P＜0.05).激活组AST坏死程度总体高于空白组与抑制组,24 h、48 h时间点3组细胞两两比较差异均有统计学意义(P＜0.05).(3)激活组Beclin 1蛋白各时间点均较抑制组及空白组明显增加,6h时空白组、激活组及抑制组Beclin 1蛋白表达量分别为0.17±0.01、0.59±0.03、0.51 ±0.03,两两比较差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 PMA诱发的NF-κB活化能够引起AST不同程度的凋亡、坏死及自噬进程,早期以凋亡和自噬为主,晚期以坏死为主,而PDTC能够在一定程度上抑制NF-κB通路所诱导的这些死亡进程.
