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NF-κB对肝癌细胞自噬形成的影响
目的 研究抑制核转录因子(NF-κB)对肝癌细胞HepG2自噬的作用及影响.方法 常规培养HepG2细胞后分为两组:SN50处理组及空白对照组,然后采用MTT比色法检测细胞生长增殖、Western blot检测细胞内微管相关蛋白LC3-Ⅱ水平以及MDC染色后,采用荧光显微镜对自噬进行定性观察.结果 经SN50处理24、48、72 h后,细胞增殖抑制率分别为(20.45±3.70)%、(31.94±4.20)%和(36.44±4.60)%(P ＜ 0.05),自噬相关蛋白LC3-Ⅱ水平的表达上调,同时荧光染色也提示肝癌细胞自噬活性增强.结论 阻断NF-κB可以在一定时间内显著抑制HepG2细胞的增殖,其机制可能是增强了细胞的自噬作用.
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SN50对裸鼠人胃癌移植瘤生长的影响
目的 探讨核转录因子(NF)-KB65的阻断剂SN50对裸鼠人胃癌移植瘤生长的影响.方法 建立裸鼠胃癌移植瘤模型后将20只裸鼠随机分成对照组(n＝5)和SN50实验组(n＝15),用生理盐水处理对照组、SN50处理实验组,于第5 d、10 d、15 d分别取5只裸鼠测量肿瘤体积,计算抑瘤率.采用免疫组织化学染色观察凋亡指标Bcl-2、Bax和p53表达的变化.结果 使用SN50处理肿瘤后5 d、10 d、15 d肿瘤生长抑制率逐渐增高;与对照组相比,凋亡指标Bcl-2的表达下调,p53和Bax的表达上调(均P＜0.05).结论 NF-KBp65的阻断剂SN50可能通过下调Bcl-2的表达和上调p53、Bax的表达导致细胞凋亡,从而终抑制移植瘤的生长.
关键词： SN50 核转录因子-KBp65 裸鼠 移植瘤 胃癌 -
小鼠脑出血后自噬相关蛋白表达及NF-κB信号通路对其调节作用的研究
目的 研究小鼠脑出血(ICH)后自噬是否被激活及NF-κB信号通路对ICH诱发的自噬相关蛋白表达的影响.方法 正常昆明小鼠纹状体注射胶原酶Ⅳ建立脑出血模型,或于脑出血模型建立前5 min,侧脑室给药SN50(0.1μg/μl)或生理盐水1 μl,随机分为脑出血组、SN50处理组和生理盐水处理组,同时设立空白对照组.每组分别于脑出血1 h,6 h,24 h,48 h,7 d后(5只/时间点)断头取脑,脑出血各组取出血区及周边脑组织进行免疫印记实验检测Beclin-1、Bcl-2、LC3蛋白表达水平或激活情况,SN50处理组和生理盐水处理组各时间点取出血区及周边脑组织进行免疫印记实验检测LC3蛋白激活情况.结果 小鼠脑出血后出血区及出血周边脑组织Beclin-1蛋白表达上调、Bcl-2蛋白表达下调,以6-48 h时为显著(P＜0.05);Beclin-1/Bcl-2比值随时间变化逐渐增高,以6～48 h时为显著(P＜0.05);LC3被激活,随时间变化蛋白表达逐渐增加,48 h时达高峰,至7 d时仍较空白对照组有显著差异(P＜0.05).脑出血后,SN50处理组LC3蛋白激活高于生理盐水处理组,以6～48 h时为显著(P＜0.05).结论 脑出血后自噬被激活,这种激活的机制之一涉及到Beclin-1/Bcl-2比值的增加;NF-κB特异性抑制剂 SN50 促进了脑出血后自噬相关蛋白的上调表达.
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SN50对缺血再灌注损伤中 TNF-α影响的实验研究
目的：研究核转录因子-κB（ nuclear factor-kappaB，NF-κB）抑制剂SN50对氧糖剥夺条件下培养的SD大鼠巨噬细胞炎性因子肿瘤坏死因子-α（ tumor necrosis factor-α，TNF-α）表达的影响。方法用MTT法检测SN50对细胞增殖活性的影响，以ELISA法检测氧糖剥夺条件下SN50对TNF-α表达影响。结果经SN50处理的氧糖剥夺条件下的巨噬细胞成活率较未经处理的明显上升（P＜0．05或P＜0．01），TNF-α表达的上调幅度亦明显变小（P＜0．05或P＜0．01）。结论 SN50主要是通过抑制NF-κB 核的移位干扰了TNF-α的基因转录而导致其合成的蛋白量降低。
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SN50联合5-氟尿嘧啶通过调节NF-κB信号通路抑制人胃癌裸鼠移植瘤生长的研究
目的 探讨NF-κB通路抑制剂SN50联合5-氟尿嘧啶(5-FU)对人胃癌裸鼠移植瘤生长的影响及机制.方法 建立荧光素酶标记的人胃癌细胞株SGC7901,常规传代培养,采用对数生长期细胞建立人胃癌裸鼠皮下移植瘤模型.14d后随机分为4组:对照组、5-FU干预组、SN50干预组、5-FU+ SN50干预组.每组8只动物,共给药4周.观察并记录各组裸鼠皮下移植瘤的生长情况,游标卡尺测量瘤体长短径,于停药次日处死裸鼠,称取瘤重,计算肿瘤体积、肿瘤生长抑制率、绘制肿瘤生长曲线.通过体内可见光成像技术分别于第1、7、14、21、28天对裸鼠进行活体成像,记录移植瘤光子数,绘制皮下移植瘤光子数曲线图.免疫组化方法检测移植瘤中NF-κBp65表达情况.结果 与其他三组相比,5-FU+ SN50干预组肿瘤体积、抑瘤率及光子数差异均有统计学意义(P＜0.05);与对照组及SN50干预组比较,5-FU干预组肿瘤体积和光子数明显减少(P＜0.05),抑瘤率明显增加(P ＜0.05);SN50干预组与对照组相比,肿瘤体积、抑瘤率及光子数差异无统计学意义(P＞0.05).NF-κBp65阳性率依次为对照组47.4％、5-FU组57.1％、SN50组11.8％、5-FU +SN50组25.0％.结论 5-FU单药及5-FU +SN50均能抑制裸鼠胃癌皮下移植瘤的生长,而联合应用效果更明显;SN50可通过抑制NF-κB信号转导通路的活化,显著增强5-FU对裸鼠胃癌皮下移植瘤的抑制作用.
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SN50对大鼠视网膜缺血再灌注损伤的保护作用
目的 探讨核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)活性抑制剂SN50对大鼠视网膜缺血再灌注损伤(retinal ischemical reperfusion injury,RIRI)的保护作用.方法 27只成年雄性SD大鼠随机分为正常对照组、RIRI组、RIRI+ SN50组,每组9只,建立RIRI动物模型,RIRI后6h、24 h、72 h HE染色观察大鼠视网膜病理变化,免疫组织化学检测NF-κB的表达,实时定量PCR检测TNF-α的表达.结果 RIRI组RIRI 6 h后视网膜出现组织轻度水肿,少量细胞变性,随着时间的延长,视网膜的损伤逐渐加重;RIRI+ SN50组视网膜的损伤明显减轻.RIRI后6h视网膜上可见NF-κB阳性表达,经过SN50注射处理后,NF-κB的阳性表达在RIRI后24 h明显减弱;经过SN50注射处理后,与RIRI组比较,24 h后视网膜的TNF-α表达差异有统计学意义(P＜0.05).结论 SN50对RIRI具有保护作用.
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SN50对脂多糖作用下小鼠Ana-1细胞TNF α(表达的抑制作用的研究
目的 研究核因子κ B(NF-κ B)抑制荆SN50对脂多糖(LPS)作用下小鼠巨噬细胞(Ana-1)炎性因子TNFα mRNA和蛋白表达的影响及其对NF-κB p65亚基核移位的抑制作用.方法 用MTT法检测SN50对细胞增殖活性的影响,行RT-PCR和ELISA法检测巨噬细胞经LPS作用和SN50处理后TNFαm-RNA和蛋白表达变化,用Western-Blot检测NF-κB p65亚基核移位情况.结果 在LPS作用下炎性因子TNFα强烈升高,并呈现时间依赖性,SN50干预后可明显抑制NF-κB p65亚基核移位和TNFα表达,其中以早期使用SN50效果佳.结论 SN50可以通过抑制NF-κB p65亚基核移位来降低LPS作用下巨噬细胞的TNFα的产生.
