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人巨细胞病毒PP65_(322～561)片段的原核表达及功能鉴定
目的 构建人巨细胞病毒(HCMV)PP65_(322～561)蛋白片段的原核表达载体PQE30-PP65,并表达蛋白.方法 PCR扩增HCMV PP65第976～1686位核苷酸片段;构建重组表达质粒PQE30-PP65转化M15并表达蛋白;PCR、SDS-PAGE及Weatern blot鉴定重组载体及表达产物;ELISA检测目的蛋白的抗原性.结果构建了PQE30-PP65表达载体,在M15菌株中成功表达PP65_(322～561)蛋白,蛋白浓度达到2.2g/t.并与pp65单克隆抗体及HCMV LgG阳性血清反应良好.结论 成功构建PQE30-PP65表达载体,表达的目的蛋白具有良好的抗原性.
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人巨细胞病毒立即早期蛋白功能的研究进展
人巨细胞病毒基因表达分为立即早期、早期和晚期三个时相.立即早期基因的表达在病毒基因和宿主细胞基因的表达和调控方面有重要作用,并能够影响宿主细胞周期进程.本文对立即早期蛋白调节病毒复制以及影响细胞周期进程方面的功能作一综述.
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婴儿巨细胞病毒肝炎临床分型治疗研究
人巨细胞病毒(HCMV)是引起婴儿病毒性肝炎的主要病原之一,按临床表现分为无症状型,无黄疸型,急性黄疸型和急性淤胆型.目前对婴儿巨细胞病毒肝炎的治疗缺乏统一方案,我们依据临床分型不同,观察急性黄疸型和急性淤胆型的治疗疗效及远期随访结果.
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慢性牙周炎龈下HCMV和EBV感染及其混合感染率与 牙周病变程度的关系
目的 探讨慢性牙周炎龈下巨细胞病毒(HCMV)与EB病毒(EBV)感染、混合感染率对牙周病变程度的影响.方法 采集200例患者,共900份龈下标本,采用套式PCR检测方法对该900份标本的HCMV以及EBV感染进行分析;并对感染情况与牙周病变程度的联系进行评价.结果 慢性牙周炎阳性检出率高,其次为牙龈炎与健康者,差异有统计学意义(P<0.05);牙龈指数与HCMV感染基本无关,牙周附着丧失与牙周袋深度与其感染有关;对于EBV感染,牙龈指数、牙周附着丧失、牙周袋深度均与感染无显著关系.对混合感染情况进行比较,除牙龈指数与混合感染无明显关系,其余均与混合感染有关.结论 慢性牙周炎龈下HCMV和EBV感染及其混合感染率与牙周病变程度具有较大联系.
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HCMV在新生儿黄疸检测中的临床意义
目的:分析HCMV在新生儿黄疸检测中的临床意义,以为临床诊断提供参考.方法:选取1 427例新生儿外周血样与其母亲的乳汁进行配对检测HCMV-DNA,并对检测结果进行分析.结果:1 427例新生儿血液标本中阳性157(11.0％)例,1 427例新生儿母亲乳汁样本中阳性849(59.5％)例,对比差异有统计学意义(P ＜0.05);565例黄疸患儿中阳性145(25.7％)例,862例非黄疸患儿中阳性12(1.4％)例,对比差异有统计学意义(P＜0.05).结论:新生儿黄疸与HCMV感染具有关联性,应进行必要的检测以进行合理诊治.
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自然流产者TORCH感染现状及HCMV致流产机制的探讨
目的:探讨自然流产者TORCH感染现状与HCMV致流产机制.方法:随机选取2012年1月至2015年1月在我院自然流产产妇120例及正常妊娠孕妇120例,用MEIA监测孕妇血清TORCH-IgM抗体阳性,比较两组阳性率,并分析总结自然流产者TORCH感染现状,用胶体金免疫层析法监测观察组HCMV-IgM抗体阳性,以及对照组妊娠组织中IL-2、IL10与TNF-α,探讨HCMV致使流产的机制.结果:观察组孕妇弓形体、单纯疱疹病毒、风疹病毒与巨细胞病毒阳性检出率,明显高于对照组,差异明显(P＜0.05);观察组HCMV阳性者妊娠组织中IL10与TNF-α明显高于对照组,差异明显(P＞0.05),而IL-2表达水平明显低于对照组,差异明显(P＜0.05),具有统计学意义.结论:自然流产的原因之一为TORCH感染,而主要的病原体为HCMV,且可能较大程度抑制免疫功能,进而导致流产.
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巨细胞病毒感染婴儿Th1/Th2细胞分化及转录因子T-bet/GATA-3的表达
人巨细胞病毒(human cytomegalovius,HCMV)感染在我国相当普遍.T-bet和GATA-3是分别特异性地表达于 Thl和 Th2细胞并诱导其定向分化的两种特异性转录因子~([1]).
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人巨细胞病毒检测的方法及其结果分析
人巨细胞病毒(Human cytomegalo virus,HCMV)是疱疹病毒科中基因组大的一种,在全世界不同种族人群尤其在亚洲和非洲人群中血清抗体阳性率可达90%～100%.HCMV引起AIDS 、器官移植、肿瘤放疗和化疗、恶病质等患者广泛感染,表现为视网膜炎、肺炎、脑炎等, 还能引起肝炎、卵巢炎、宫颈癌、前列腺癌等,30%～60%的人体肿瘤中可查到HCMVDNA及抗原 [1,2].近有资料提示,HCMV在人类动脉粥样硬化和动脉狭窄中起一定作用,糖尿病、系统性红斑狼疮、肾病综合征、类风湿关节炎等也与其有关[3].HCMV感染具有以上特点,因此需要在血液中迅速、定量地检测到HCMV复制,进行及时、有效的抗病毒治疗.用于HCMV检测的方法归纳起来如下:
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儿童巨细胞病毒性疾病诊断和防治的建议
人巨细胞病毒( human cytomegalovirus,HCMV),正式命名为人疱疹病毒5型(human herpes virus 5,HHV-5),其感染在我国极其广泛,一般人群HCMV抗体阳性率为86％～96％,孕妇95％左右,婴幼儿期为60％～80％,原发感染多发生于婴幼儿时期.HCMV具有潜伏-活化的生物学特性,一旦感染,将持续终身.虽然HCMV是弱致病因子,对免疫功能正常个体并不具有明显致病性,绝大多数表现为无症状性感染;但是,HCMV是引起病理性和生理性免疫低下人群,包括发育性免疫缺陷的胎儿和新生儿发生疾病的常见病原,亦是导致艾滋病和器官、骨髓移植患者严重疾病和增加病死率的重要病因之一.二十余年来,我国儿科对儿童HCMV疾病进行了大量研究,取得丰富经验[ 1].中华医学会儿科学分会感染消化学组于1995年拟定《小儿巨细胞病毒感染诊断标准》(试行稿),1999年修订为《巨细胞病毒感染诊断方案》[2],为指导临床医生正确认识HCMV感染、深入其临床研究和开展防治工作做出积极贡献.现就儿童HCMV相关性疾病的诊断与防治提出如下建议.
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艾滋病人(AIDS)合并肺炎感染人巨细胞病毒与CD4细胞的关系
目的 探讨艾滋病人CD4细胞T淋巴细胞的数量与其感染人巨细胞病毒HOMV之间的关系.方法 回顾性对照分析一年来25例艾滋病合并肺炎患者与53M单纯肺炎患者的CD4T淋巴细胞和人巨细胞病毒(hcmv)的检测结果.结果 艾滋病合并肺炎CD4T淋巴细胞检测结果为(43±53)个/ul,hcmv含量为(8.04±0.411);而单纯性肺炎患者CD4T淋巴细胞检测结果为(643±53)个/ul,hcmv含量为(3.28±2.05).两者两两比较具有统计学意义(P≤0.01).结论 艾滋病合并肺炎患者CD4 T淋巴细胞含量与hcmv含量呈负相关关系.
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巨细胞病毒感染婴儿母亲携带病毒检测的意义
目的 探讨巨细胞病毒感染婴儿中人巨细胞病毒母乳感染率及意义.方法 应用荧光定量PCR 法检测124 例确诊巨细胞病毒感染患儿母亲的母乳和全血中HCMV-DNA 含量,并同时测定母亲血浆中HCMV-IgM.结果 FQ-PCR 检测HCMV DNA 乳汁的阳性率为69.4%,全血的阳性率为23.4%;HCMV-IgM 阳性率27.4%.母乳HCMV-DNA 的阳性率明显高于全血HCMV-DNA 及特异性抗体IgM 的阳性率(P ＜ 0.05).结论 感染巨细胞病毒患儿的母乳中带毒率高,母乳感染HCMV 可能是婴儿获得性巨细胞感染的主要途径.
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新生儿、婴幼儿巨细胞病毒感染前瞻性临床研究
人巨细胞病毒感染(HCMV)在世界范围内无处不有,分布广泛,人群对其普遍易感,已成为当前国内外医学界关注的重点.
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加拿大妇产科学会妊娠期巨细胞病毒感染临床实践指南(2010)介绍
人巨细胞病毒(humah cytomegalovirus,HCMV)属于疱疹病毒科,是宫内感染常见的病毒之一,也是造成新生儿感觉神经性听力丧失和智力障碍的常见原因.
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荧光定量PCR快速检测小儿巨细胞病毒感染标本的选择
目的 优化检测标本,提高小儿巨细胞病毒感染的阳性检出率,准确量化巨细胞病毒拷贝数,为临床诊断和治疗提供可靠依据.方法 荧光定量PCR检测患儿血、尿中的HCMV-DNA,比较其阳性检出率、Ct值、HCMV拷贝数.结果 523例患儿标本中,血标本488例,阳性89例(18.24%);尿标本85例,阳性36例(42.35%);其中有50例患儿同时采集血、尿进行HCMV-DNA定量检测,血标本阳性9例(18%);尿标本阳性23例(46%).血、尿标本HCMV的检出率出现明显差异.结论 采用荧光定量PCR检测小儿巨细胞病毒感染,用尿作标本明显优于血标本,可提高HCMV的阳性检出率.
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巢式PCR与ELISA筛查HCMV病原感染的比较研究
目的:评估巢氏- PCR和ELISA在巨细胞病毒(HCMV)感染筛查诊断中的价值.方法:以巢式PCR检测新生儿HCMV-DNA为标准,评估ELISA方法检测HCMV - IgG和Igm的诊断价值.结果:采用巢氏PCR方法,患病新生儿HC-MV-DNA检出率为63.900％.以巢式PCR为标准,ELISA - IgM法检测HCMV的灵敏度为3.030％,特异度为100.000％,阳性预测值为100.000％,阴性预测值为29.670％；ELISA - IgG法检测HCMV的灵敏度为36.620％,特异度为42.110％,阳性预测值为70.270％,阴性预测值为15.090％.结论:巢式PCR是筛检HCMV感染的灵敏方法,目前市场上ELISA试剂盒的灵敏度有待提高.
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生殖道HPV感染合并HCMV、HSV、UU、CT感染情况分析
目的:对比HPV感染组与HPV未感染组之间合并HCMV、HSV、UU、CT四种病原体的感染情况,探讨生殖道HPV感染合并其它病原体感染对宫颈癌的发生、发展的影响.方法:收集经检测已知为HPV分型－种亚型或合并多种亚型呈阳性的宫颈分泌物DNA提取液87例,及HPV分型亚型呈阴性的宫颈分泌物DNA提取液43例,应用PCR结合反向寡核苷酸探针杂交技术检测(RDB);应用实时荧光定量PCR扩增检测技术(FQ－PCR)对上述标本进行了测定.结果:[1]HPV阳性组(87例)和HPV阴性组(43例)合并HCMV、HSV、UU、CT病原体感染的综合检出率分别为74.71%和49.42%;[2]HPV阳性组(87例)中合并HCMV、HSV、UU、CT感染的单项检出率分别为22.99%(20例)、1.15%(1例)、57.47%(50例)、24.13%(21例),HPV阴性组(43例) 合并HCMV、HSV、UU、CT感染的单项检出率分别为9.3%(4例)、0%(0例)、41.86%(18例)、6.98%(3例);[3]HPV阳性组按亚型不同可分为高危型组和低危型组.其中高危型组(78例)中合并HC、MV、HSV、UU、CT感染分的单项检出率分别为19.23%(15例)、1.28%(1例)、52.56%(41例)、17.94%(14例),低危型组(9例)中合并HCMV、HSV、UU、CT感染的单项检出率分别为55.56%(5例)、0%(0例)、100.00%(9例)、77.78%(7例);[4]HPV阳性组中以分型为16亚型的合并感染率高;HCMV、UU、CT分别为40.00%(8/20)、28.00%(14例)、19.05%(4例);[5]在87例HPV阳性组的病例中,查到30例有宫颈上皮内瘤样变(CIN)病例资料.这30例中有23例合并HCMV、UU、CT感染,其单项检出率分别为21.08%(6例)、69.57%(16例)、30.43%(7例);有7例HPV阳性CIN病例不合并HCMV、HSV、UU、CT感染.结论:宫颈上皮细胞HPV感染与宫颈癌的发生、发展有密切关系,HPV感染者也可同时合并其他泌尿生殖道常见病原体感染.多种病原体同时感染宫颈与宫颈癌的发生、发展及预后的关系有待进一步研究.
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人巨细胞病毒耐药突变及其检测的研究进展
HCMV属于疱疹病毒科,β疱疹病毒亚科,巨细胞病毒属,人疱疹病毒5型.HCMV基因组为线性双股DNA分子,长约230 kb,由长单一序列(UL)和短单一序列(US)构成[1,2].
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肾移植术后HCMV感染与淋巴细胞亚群及肾功能的相关性
目的:肾移植患者由于术前透析及术后服用免疫抑制剂,显著增加了人巨细胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)原发感染和潜伏感染被激活的机会.观察HCMV感染情况与血T淋巴细胞亚群及肾功能的变化,以探讨其相关性及临床意义.方法:跟踪收集40例肾移植患者术前、术后血标本,应用RT-PCR技术检测HCMV,流式细胞术检测淋巴细胞亚群,结合肾功能判断是否发生急性排斥或移植肾功能恢复延迟.结果:肾移植术后HCMV感染率为52.5％,10例出现症状性感染(25％),出现阳性时间35.7± 15.3天.症状性感染组CD3+、CD4+的水平和CD4+/CD8+的比值较无活动性感染组和正常对照组均降低,CD8+水平较其他组升高,差异有显著性意义(P＜0.05).无症状性活动感染者与无活动性感染者各指标比较差异无显著性.活动性感染组急性排斥或移植肾功能恢复延迟发生8例(38.1％),无活动性感染组发生1例(5.2％),差异具有统计学意义(x2=6.15,P＜0.05).结论:肾移植术后HCMV感染能显著引起T淋巴细胞亚群变化,尤其是CD4+/CD8+.并与急性排斥或移植肾功能恢复延迟密切相关联,在其发生发展中可能起着重要的作用.三者相互联系、相互作用、互为因果,对进一步机制的研究及临床诊断治疗、预后方面有一定意义.
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HCMV IE86对ARPE-19细胞周期的影响
目的:构建真核表达质粒pEGFP-N3-IE2,瞬时转染ARPE-19细胞,探讨其时视网膜色素上皮细胞周期的影响.方法:采用PCR方法从质粒pIEP86AD169扩增出IE2片段,将其定向克隆于pEGFP-N3,构建真核表达质粒pEGFP-N3-IE2,酶切、测序鉴定,脂质体介导瞬时转染ARPE-19细胞,RT-PCR、免疫荧光法分析IE2基因在mRNA和蛋白水平的表达.流式细胞仪检测转染前后细胞周期的变化.结果:成功构建重组质粒pEGFP-N3-IE2,并在被转染细胞中检测到IE2基因的表达;瞬时转染后细胞周期表现为S期细胞比例显著增高.结论:成功构建pEGFP-N3-IE2真核表达质粒,重组质粒能在ARPE-19细胞中顺利表达IE2,IE2基因可以引起ARPE-19细胞的细胞周期S期阻滞.
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巨细胞病毒症状性感染的研究
检测85例小儿症状性巨细胞病毒感染,其中63例HCMV DNA阳性,22例HCMV-IgM抗体阳性.85例中先天感染41例,其中全身性感染25例.年龄3周～12周组25例.两组临床表现以病理性黄疸,肝损害,肝脾肿大,不明原因贫血,先天畸形等为主.先天组中,新生儿窒息15例,早产儿12例,小于胎龄儿11例.大于12周龄组19例,表现为肾脏病变、贫血、肺炎等.
