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免疫组织化学标记在鉴别结节性淋巴细胞为主型与富于淋巴细胞的经典型霍奇金淋巴瘤中的作用
霍奇金淋巴瘤(HL)分为结节性淋巴细胞为主型(NLPHL)和经典型(CHL),因两者具有不同的免疫表型与临床特点必须加以区别.其中,NLPHL与富于淋巴细胞的经典型HL(LRCHL)的鉴别较困难.B细胞特异性激活蛋白(BSAP)和BOB.1(B-cell oct-binding protein 1)是目前研究较多的两种B细胞特异性转录因子,已有学者指出在NLPHL中的L&H细胞表达这两种蛋白[1-2].目前国内对EB病毒在这两种病变中的表达情况研究较少[3],而国外学者彼此又存在争议[4].在本研究中,我们拟探讨免疫组织化学标记在鉴别这两种病变中的价值以及EB病毒感染与NLPHL发病的关系.
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特应性皮炎患者外周血CD4+T细胞亚群比例变化的研究
特应性皮炎(或异位性皮炎,atopic dermatitis,AD)是一种与遗传过敏素质有关的反复发作性、炎症性、瘙痒性皮肤病.AD病因尚未明确,患者体内存在明显的免疫功能异常以及CD4+T细胞介导的异常免疫应答在AD发生、发展中可能起主要的作用.本研究通过检测AD患者外周血CD4+T细胞亚群Th1、Th2、调节性T细胞(Tr)与Th17细胞比例,各自特异性转录因子及血清中相应细胞因子的表达水平,探讨CD4+T细胞亚群比例变化在AD发病中的意义.
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巨细胞病毒感染婴儿Th1/Th2细胞分化及转录因子T-bet/GATA-3的表达
人巨细胞病毒(human cytomegalovius,HCMV)感染在我国相当普遍.T-bet和GATA-3是分别特异性地表达于 Thl和 Th2细胞并诱导其定向分化的两种特异性转录因子~([1]).
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p53结合蛋白对细胞周期阻滞与细胞凋亡调控的研究进展
p53基因是人体内重要的肿瘤抑制基因,位于人类染色体17p13.1,含有11个外显子,编码的野生型p53蛋白由393个氨基酸残基组成,包含N-末端的转录激活结构域、生长抑制结构域、序列特异的DNA结合结构域(DNA binding domain,DBD)、核定位信号(nuclear localization signal,NLS)、四聚体化结构域和C-末端非专一DNA调节结构域.p53在监视细胞基因组损伤及维持基因组的稳定性中发挥重要作用.当紫外线、电离辐射、氧化应激及癌基因表达等刺激因素引起细胞内DNA损伤时,p53蛋白迅速聚集活化,并作为序列特异性转录因子对一系列靶基因进行调控.
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GATA-3基因反义逆转录病毒载体的构建
支气管哮喘(简称哮喘)是一种呼吸道慢性炎症性疾病.Ⅱ型辅助性T淋巴细胞(Th2)在起始和维持气道慢性炎症级联反应中具有重要作用.GATA-3为Th2淋巴细胞特异性转录因子,在Th2淋巴细胞分化及Th2类细胞因子基因转录中具有关键性作用[1].我们的实验应用反义真核表达载体构建技术,构建了GATA-3反义逆转录病毒载体,对进一步研究Th2淋巴细胞定向分化及Th2类细胞因子基因转录的分子机制和探讨哮喘治疗的新途径均具有重要意义.
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罗格列酮对支气管哮喘急性发作期患者T淋巴细胞IL-4/STAT6信号通路的影响及机制
Th1/Th2细胞比例失调和Th2细胞优势分化是支气管哮喘(简称哮喘)发病的免疫学基础.白细胞介素(IL)-4是诱导Th2细胞分化的关键细胞因子;信号传导和转录激活子6(STFAT6)是Th2细胞的特异性转录因子;IL-4的许多功能的发挥都要通过与IL-4R结合,继而由STAT6介导炎症基因转录.
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烟草烟雾暴露对小鼠肺部CD4+白细胞介素-17+T细胞表达的影响
COPD是一种进行性、不完全可逆性气流受限疾病,而吸烟是重要的危险因素[1].戒烟是目前证明能延缓COPD患者肺功能进行性下降的有效措施之一[ 2],但其作用机制不明.近年来的研究结果表明,COPD可能是一种由吸烟诱发T细胞参与的炎症反应和自身免疫性疾病[3];特异性分泌IL-17的CD4+ Th细胞(Th17细胞)、表达特异性转录因子维甲酸相关孤独受体(retinoid-related orphan nuclear receptor,RORγt)和STAT3转录因子,主要分泌IL-17、IL-21和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等炎症因子,具有强大的促炎症作用[4-5],RORγt在一定程度上可以反映Th17细胞的水平及功能活性.
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胃黏膜肠化生中CDX2及SOX2的表达及其甲基化状态
DNA的异常甲基化修饰在多种肿瘤的发生中起重要作用.尾型同源盒转录因子2(caudal type homeobox transcription factor 2,CDX2)是肠上皮特异性转录因子,仅在成人肠道中表达而在胃中不表达.与之相反,性别决定区Y框蛋白2(sex determining region Y-box 2,SOX2)仅在胃及胃以上的消化道上皮中表达.胃黏膜的肠化生(intestinal metaplasia,IM)被认为是肠型胃癌的癌前病变.本研究检测了胃黏膜不同程度IM标本中CDX2和SOX2启动子区甲基化的情况,并探讨其与基因表达的关系.
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T细胞特异性转录因子T-bet、GATA3调控子(癎)前期辅助性T淋巴细胞1型免疫漂移的研究
子(癎)前期是产科常见且严重的妊娠并发症,是导致围产儿及孕产妇死亡的重要原因[1].研究发现辅助性T淋巴细胞1和2(T helper 1/T helper 2,Th1/Th2)免疫状态向Th1漂移是子(癎)前期发病的重要免疫机制[1-4],因此研究子(癎)前期产生Th1型漂移的免疫调控机制有助于进一步了解其病理生理机制,目前国内外尚未见相关研究报道.
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川崎病患儿急性期Th1/Th2细胞功能状态的研究
川崎病(Kawasaki disease,KD)迄今病因不明,从流行病 学特征推测可能与病原体感染或毒素超抗原引起的免疫学异常有关.认为超抗原有强大的激活T细胞能力,通过T细胞介导血管炎性反应[1].但仍有着诸多争议.本研究旨在通过对KD患儿外周血淋巴细胞干扰素γ(IFN-γ)和白细胞介素4(IL-4)及各自的特异性转录因子T盒21(T-bet)和锌指转录调解因子3(GATA-3)mRNA的检测,在基因转录水平上探讨KD患儿T细胞功能状态.
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代谢综合征(4)
(接上期)(2)贝特类(苯氧酸类、纤维酸类、贝丁酸类、氯贝特类):为一过氧化酶增殖体激活体受体-α,peroxisome proliferator activated receptor-α,PPAR-α).PPAR-α为PPARs家族中一员,位于肝脏及血管内皮细胞,是一种特异性转录因子,被激活后可影响高密度脂蛋白(HDL)代谢相关的基因表达.脂肪酸及其代谢物和某些药物可作为自然配体使之激活.
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低氧诱导因子-1α信号通路相关蛋白在腹膜透析患者腹透液中的表达变化
终末期肾脏病(ERSD)患者主要的肾脏替代治疗方案之一即为腹膜透析,但长期腹膜透析易出现腹膜炎、腹膜功能及形态结构的改变及营养不良等因素,易引起超滤衰竭(ul-trafiltration failure,UFF)[1]。UFF的主要机制主要包括腹膜血管新生、腹膜纤维化以及腹膜间质/淋巴系统吸收增加[2]。血管内皮生长因子(VEGF)是目前已知的强有力的促血管形成因子,可以诱导血管新生[3]。转化生长因子(TGF)-β1是一种调节细胞增殖分化和细胞外基质(ECM)合成的多功能生长因子,是一个公认的反映腹膜纤维化的指标[4]。低氧是腹膜纤维化及血管新生发生发展过程中重要的病理生理变化,是超滤衰竭过程中的重要环节。低氧诱导因子-1(hypoxia in-ducible factor 1,HIF-1α)是一个在缺氧状态下发挥活性的特异性转录因子,参与了血管生成、细胞外基质代谢和炎症反应等过程[5]。本文拟通过研究腹透患者腹透液中HIF-1α的表达水平与VEGF、TGF-β1和腹膜转运功能的相关性,初步探讨HIF-1α对腹膜功能的影响以及可能的作用机制。
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滤泡辅助性T细胞的多发调控研究进展
1 Tfh细胞的发现
现代免疫学的一个发现是抗体( Ab )生成及反应需要胸腺来源的细胞的辅助。在一些经典实验中[1,2],将骨髓细胞或胸腺细胞分别输入辐射后失去内在免疫功能的小鼠,均不能产生抗原抗体反应,只有将骨髓及胸腺细胞同时输入时,才能产生免疫反应。其骨髓及胸腺细胞之后被分别命名为B 细胞、T细胞,这种免疫反应被称为T细胞依赖的免疫反应。 B淋巴细胞在淋巴滤泡中接受CD4+T细胞的辅助,增殖分化形成生发中心( Germinal centers, GC)。生发中心是次级淋巴组织如淋巴结、脾、扁桃体等的B细胞滤泡中产生的特殊组织[3],关键环节如体细胞高频率突变( Somatic hypermutation)、抗体类别转换( Class switching)、高亲和力B细胞的选择均发生于生发中心[4]。辅助性T细胞( Th)在生发中心直接辅助B细胞,其对生发中心的形成、促进B细胞分化为抗体生成细胞、免疫球蛋白的类别转换发挥着关键作用。初,人们一直认为 Th1、Th2细胞产生的IFN-γ、IL-4在辅助B细胞分泌抗体过程中起重要作用,例如IFN-γ调节IgG2 a的产生, IL-4调节IgE的产生[5]。之后,人们又发现了Th17在自身免疫病的发生发展中发挥着重要作用。但近年来越来越多的研究表明,滤泡辅助性T 细胞(T follicular helper ,Tfh)是辅助B细胞的主要T细胞亚群。 Tfh细胞初于2000年由Schaerli等[6]首次发现,它是一种特殊的CD4+T细胞,来源于扁桃腺组织、定位于淋巴滤泡、具有辅助B细胞活化成熟的功能。 Tfh细胞辅助B细胞发生免疫反应,主要依赖于其特异性趋化因子受体CXCR5,程序性死亡分子1(Programmed death 1,PD-1),诱导性协同刺激因子(Inducible co-stimulator,ICOS),特异性转录因子Bcl-6( B cell lymphoma 6),分泌细胞因子IL-21。 Th1细胞产生IFN-γ,对细胞内病毒和细菌感染的保护性应答发挥重要作用;Th2细胞产生IL-4和IL-13,对于屏障保护和消除细胞外寄生虫包括蠕虫至关重要;Th17细胞产生IL-17,为控制真菌和细菌感染所必需的细胞因子[7];Tfh则是生发中心形成及T细胞依赖的免疫反应的关键细胞。传统认为它们都是终末分化细胞,但目前相关研究表明Tfh与其他Th细胞亚群之间可以相互转化[8,9],其可塑性在体内被IL-21小鼠模型证明,将序列编码的绿色荧光蛋白( Green fluorescent protein,GFP)导入IL-21位点,这些小鼠的CD4+CXCR5+PD-1+Tfh细胞中表达IL-21-GFP,IL-21-GFP+Tfh细胞能分泌IFN-γ、IL-2、IL-4,而且能增殖分化为其他类型的 Th 细胞[10]。研究表明,鼠Tfh细胞是多样化的,包含分泌Th1、Th2、Th17等细胞特异性细胞因子的亚型如Tfh1、Tfh2、Tfh17、Tfh21、Tfh10[11]。 Tfh细胞对人类的健康至关重要, Tfh细胞过表达会导致自身免疫病,表达量不足又会导致免疫缺陷病。目前治疗自身免疫病的主要药物是激素或免疫抑制剂,随之而来的是严重的全身不良反应,研究Tfh细胞的分子调控机制将有助于发现治疗自身免疫病的新靶点,同时也为相关疾病的诊断及预后评估提供更多的依据。 -
转录因子T-bet和GATA-3对小儿肺炎支原体肺炎免疫调控作用的研究
T-bet和GATA-3是T辅助细胞(Th)特异性转录因子和极性分化的关键决定因素[1,2],为探讨二者在小儿肺炎支原体(MP)肺炎中的免疫调控作用,研究了24例MP肺炎患儿外周血淋巴细胞T-bet mRNA、GATA-3 mRNA和Th1类细胞因子IFN-γ,Th2类细胞因子IL-4蛋白表达水平及其相互关系.
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乳腺癌CD4+CD25high Foxp3+调节性T细胞数量和分布及Foxp3mRNA表达与肿瘤分期的相关性研究
目的 研究乳腺癌患者CD4+CD25high Foxp3+调节性T细胞(T regulatory cell,Treg)的存在数量、分布情况,及其功能基因Foxp3 mRNA的表达变化与国际抗癌联盟(UICC)乳腺癌的TNM分期的关系.方法 用四色流式细胞术以Foxp3-FITC/CD25-PE/CD4-PerCP/CD3-PC7抗体组合分析40名健康对照者及40例乳腺癌患者(临床TNM分期T1期9例、T2期10例、T3期12例、T4期9例)外周血、肿瘤组织浸润淋巴细胞(TIL)及癌旁淋巴结中CD4+CD25high Foxp3+ Treg的数量及分布情况.实时荧光定量PCR技术检测TregFoxp3mRNA表达水平.结果乳腺癌患者外周血CD4+CD25high Foxp3+ Treg占CD4 T细胞的百分比为(8.91±3.06)%,高于正常健康对照组(5.84±2.63)%,差异具有统计学意义(P<0.05).乳腺癌患者TIL、癌旁淋巴结中Treg占CD4+T淋巴细胞比例均高于外周血,差异有统计学意义(P均<0.01).乳腺癌组织TIL和癌旁淋巴结中Treg的Foxp3平均荧光强度(MFI)显著高于外周血(P<0.05).T1、T2、T3、T4期乳腺癌患者Treg比例分别为(5.81±1.89)%、(6.52±2.15)%、(9.65±3.14)%、(11.86±2.43)%.乳腺癌患者外周血单个核细胞Foxp3 mRNA表达水平明显高于健康对照组(P<0.01).相关分析显示,Treg数量与肿瘤TNM分期显著相关(r=0.7 576,P<0.01);Foxp3基因mRNA表达水平与乳腺癌TNM各分期呈显著相关性(r=0.6 129,P<0.05).结论 乳腺癌患者CD4+CD25high Foxp3+ Treg的数量升高,其增高程度与肿瘤临床分期呈显著正相关.乳腺癌患者外周血和癌组织局部Treg的数量、分布情况及特异性转录因子Foxp3mRNA的表达强度均有所不同,提示这可能是产生肿瘤免疫抑制的重要机制,CD4+CD25high Foxp3+ Treg将来可作为乳腺癌患者病情进展的重要判断指标之一.
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SAMMSON 在黑色素瘤中异常表达
长链非编码RNA基因SAMMSON会在人类黑色素瘤中特异性地表达,并在大约10%的病例中复制或扩增。此外,在正常的黑色素细胞和其他正常的组织中都没有发现SAMM-SON。 SAMMSON独特的表达谱让我们假设,该基因可能在黑色素瘤的病因学中扮演重要角色。 SAMMSON会在超过90%的人类黑色素瘤临床样本中特异性地表达。此外,研究表明, SAMMSON基因会被黑色素瘤特异性转录因子SOX10激活(摘自:Nature)。
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梅毒血清固定患者外周血调节性T细胞/Th17细胞平衡的研究
目的 探讨梅毒血清固定患者外周血调节性T细胞(Treg细胞)和Th17细胞平衡的变化.方法 梅毒血清固定患者26例,正常人对照23例,利用流式细胞仪分别检测外周血Treg细胞和Th17细胞的比例及相关特异性转录因子Foxp3和ROR-γt的定量表达情况,并进行相关性分析.结果 梅毒血清固定患者外周血CD4+T细胞中,Treg细胞比例为33.28%±11.84%,明显高于正常人对照组(22.13%±7.79%,P<0.01);Th17细胞比例(3.17%±2.32%)显著低于正常人对照组(8.87%±2.00%,P< 0.01);CD4+T细胞内转录因子Foxp3的表达量(2994.86±1099.18)高于正常人对照组(2539.72±1086.96,P<0.05),而ROR-γt的表达量(1473.12±752.20)低于正常人对照组(1778.34±388.13,P< 0.05).在所有受试者外周血CD4+T细胞中Foxp3和ROR-γt的表达呈负相关(r=-0.48,P<0.01).结论 梅毒血清固定患者外周血存在Treg/Th 17细胞平衡的异常.
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T 细胞因子4在肿瘤发生发展中作用的研究进展
随着人们在分子遗传学和细胞生物学方面对肿瘤发生研究的深入,发现调控正常细胞生长、分化、凋亡等生命活动的信号通路发生异常是肿瘤发生的必要条件。近年来 Wnt 通路逐渐受到关注,它不仅在人体胚胎器官发育中发挥重要作用[1],而且其过度激活参与人体多种肿瘤的发生。T 细胞因子4(TCF-4)是 Wnt 通路核内信号传导的主要蛋白之一,大量的基因和生化研究已经证明其所在的家族是 Wnt 信号通路下游基因的初始特异性转录因子,因而被称为 Wnt 信号通路的开关[2]。本文就 T 细胞因子4的结构功能及其剪接异构体参与人体肿瘤的发生发展进行综述。
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人甲状腺特异性转录因子-1基因的分子克隆及鉴定
目的克隆人甲状腺特异性转录因子-1基因片段,为进一步从事分子甲状腺学研究打下基础. 方法采用RT-PCR法从人甲状腺组织RNA中扩增出甲状腺特异性转录因子-1基因片段(440~803 bp);应用TA克隆技术对PCR产物进行分子克隆;EcoR I双酶解法鉴定重组体. 结果获得TTF-1 cDNA的阳性重组体(pCRTMⅡ/TTF-1),经EcoRI双酶解表明克隆成功. 结论 TTF-1基因的分子克隆可进一步研究TTF-1基因对甲状腺特异蛋白质基因表达调控作用.
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成骨细胞分化与骨骼发育的转录因子Cbfα1/Runx2
成骨细胞是参与骨形成,骨骼生长和发育的一类重要细胞,它起源于多能间充质干细胞,是间充质干细胞在体内的各种调控因素的调节下发育而成.然而,间充质干细胞具有多向分化潜能,不同刺激条件下可向成骨细胞、破骨细胞、成脂肪细胞、成软骨细胞和成肌细胞分化.Cbfα1/Runx2是新发现的一类调控间充质干细胞向成骨方向分化的特异性转录因子[1、2],因此了解Cbfa1/Runx2调控间充质干细胞的作用机理,可以加深对骨骼发育分子机制的认识.本文就当前研究领域内Cbfα1/Runx2与骨骼发育关系的研究进展综述如下.