首页 > 文献资料
-
乙型肝炎病毒X蛋白调控sFRP 1和sFRP5启动子区的甲基化修饰及其分子机制的探讨
目的 探讨乙型肝炎病毒X蛋白调控sFRP 1、sFRP5启动子区的甲基化修饰分子机制,以期指导乙型肝炎病毒感染所致疾病的临床治疗. 方法 选取标本株HBV并对其进行培养,提取DNA,纯化后分别进行甲基化特异性PCR和硫化测序PCR,对目的基因进行测序. 结果 稳定表达HBV的HepG2.2.15细胞株sFRP1、sFRP5基因的启动子区CpG岛的甲基化程度比HepG2细胞株高,经DAC处理的稳定表达HBV的HepG2.2.15细胞株的sFRP1、sFRP5启动子区CpG岛甲基化程度有部分回落且呈药物剂量依赖.乙型肝炎病毒X蛋白可对sFRP1、sFRP5基因的启动子区的甲基化起到诱导作用;DAC可逆转HBV X蛋白所诱导的sFRP1启动子区甲基化程度,且呈剂量依赖;进行sFRP1基因扩增时,HBx组的甲基化程度比GFP组高. 结论 乙型肝炎病毒x蛋白通过诱导相关的甲基化转移酶以及甲基化CpG粘附蛋白而富集于sFRP1基因和sFRP5基因的启动子区,从而促进基因CpG岛的甲基化,并且还可以诱导组蛋白的脱乙酰化,终导致sFRP1基因和sFRP5基因的表达下调或沉默.
-
胃黏膜肠化生中CDX2及SOX2的表达及其甲基化状态
DNA的异常甲基化修饰在多种肿瘤的发生中起重要作用.尾型同源盒转录因子2(caudal type homeobox transcription factor 2,CDX2)是肠上皮特异性转录因子,仅在成人肠道中表达而在胃中不表达.与之相反,性别决定区Y框蛋白2(sex determining region Y-box 2,SOX2)仅在胃及胃以上的消化道上皮中表达.胃黏膜的肠化生(intestinal metaplasia,IM)被认为是肠型胃癌的癌前病变.本研究检测了胃黏膜不同程度IM标本中CDX2和SOX2启动子区甲基化的情况,并探讨其与基因表达的关系.
-
DNA甲基化异常与皮肤肿瘤
DNA甲基化(DNA methylation)异常主要指基因组中CpG岛发生甲基化修饰,引起基因表达异常.近几年的研究表明,DNA甲基化异常与肿瘤的发生关系密切[1].其主要的致癌机制为:抑癌基因启动子区被异常甲基化导致基因表达沉默进而导致肿瘤的发生[2];细胞周期调控基因甲基化异常致使细胞调控周期紊乱使得肿瘤细胞增殖过速;肿瘤侵袭相关基因甲基化异常致使肿瘤扩散转移以及DNA损伤修复基因异常甲基化使得肿瘤的发生机率增加[3].
-
质谱检测叶酸缺乏人胚肾细胞中低组蛋白H3赖氨酸79甲基化修饰
目的:探讨叶酸(Folic acid,FA)缺乏在培养的人胚肾细胞(HEK-293)中对细胞组蛋白修饰水平的影响.方法:人胚肾细胞分两组培养,一组正常培养,一组无叶酸培养.细胞提取组蛋白后通过高效液相色谱一线性离子阱/静电场轨道阱高分辨质谱(HPLC-LTQ/Orbitrap Ms)检测组蛋白的修饰以比较叶酸缺乏对人胚肾细胞组蛋白修饰的影响.结果:用高分辨质谱方法成功检测到人胚肾细胞的五个组蛋白变体H1,H3,H4,H2a和H2b上的33个组蛋白修饰位点,其中23个修饰位点为uniprot数据库上已经报道的组蛋白修饰位点,而其余10个为未报道修饰位点.通过质谱比较正常和叶酸缺乏组人胚肾细胞修饰谱发现H3K79me1和H3K79me2在叶酸缺乏培养组中检出率较低.进一步用蛋白免疫印迹的方法也证明了在叶酸缺乏的人胚肾细胞中H3K79me1水平低于正常培养组.结论:细胞中叶酸缺乏影响组蛋白甲基化包括H3K79me2和H3K79me1修饰水平,提示细胞外营养因素叶酸水平可影响组蛋白修饰水平从而参与疾病如神经管畸形(Neural tube defect,NTD)的发生.
-
诱导子宫内膜癌细胞DNA错配修复及肿瘤增殖抑制基因启动子CpG岛去甲基化修饰的研究
目的:研究在用5-杂氮-2′脱氧胞苷(5-Aza-CdR)诱导体外培养的人子宫内膜癌细胞株HEC-1-A中,DNA错配修复基因hMLH1、hMSH2及细胞周期调控基因p16启动子CpG岛的去甲基化,及对于该细胞的增殖抑制作用.方法:体外培养人子宫内膜癌细胞株HEC-1-A;利用MTT比色法检测5-Aza-CdR对于HEC-1-A的增殖抑制的影响;利用流式细胞术(FCM)分析药物处理前后HEC-1-A的细胞周期;利用重亚硫酸盐处理及甲基化特异性PCR(MS-PCR)检测hMLH1、hMSH2及p16基因启动子CpG岛的甲基化修饰;提取药物处理前后HEC-1-A细胞的总蛋白,利用Western blotting检测hMLH1、hMSH2及p16蛋白的表达情况.结果:5-Aza-CdR对于人子宫内膜癌细胞株HEC-1-A体外增殖抑制呈明显的剂量依赖性[IC50为(0.71±0.05)μmol·L-1];FCM分析显示HEC-1-A细胞在5-Aza-CdR处理前后均呈现明显的细胞周期差异,并且药物组细胞表现为G0/G1期(P<0.05)阻滞.MS-PCR分析5-Aza-CdR显示著诱导hMLH1、hMSH2基因启动子CpG岛的去甲基化修饰.Western blotting检测发现IC50剂量的5-Aza-CdR处理HEC-1-A细胞前后,hMLH1、hMSH2及p16的表达量为(111.30±3.17)%、(76.99±1.19)%和(97.63±1.28)%明显高于空白对照组(P<0.05),提示该药物有提高上述蛋白表达的作用.结论:5-Aza-CdR可诱导人子宫内膜癌细胞株HEC-1-A中,hMLH1、hMSH2及p16启动子CpG岛的去甲基化修饰,从而有效抑制该细胞的体外增殖.
关键词： 子宫内膜癌 5-杂氮-2′-脱氧胞苷 DNA错配修复基因 甲基化修饰 增殖抑制 -
组蛋白甲基化修饰对DNA损伤的影响及其与肿瘤的关系
细胞内部因素或周围环境因素会导致DNA损伤,DNA损伤可触发两条途径来维持基因组的稳定性:(1)细胞周期阻滞,由DNA损伤修复蛋白介导DNA损伤修复；(2)严重的DNA损伤会由p53介导进入细胞凋亡途径.两者发生异常时,损伤的DNA累积而导致基因突变,严重的后果是癌变.研究发现组蛋白甲基化修饰在DNA损伤反应过程中可能发挥重要的调节作用,而组蛋白去甲基化酶的相继发现,证明了这一修饰过程的可逆性.此文主要对DNA损伤与肿瘤的关系,以及组蛋白甲基化修饰在DNA损伤反应过程中的调节作用进行综述.
-
组蛋白甲基化修饰在乳腺癌中的研究进展
乳腺癌是一种多因素、多阶段、多基因变异积累的复杂病变.表观遗传变异(epigenefic variation)在乳腺癌的发生发展中占有重要的地位,与癌基因的激活、抑癌基因的失活有关.表观遗传变异指不改变基因DNA序列,通过DNA甲基化、组蛋白修饰、染色质重塑和非编码RNA调控等方式调控基因表达,使基因功能发生可遗传的变化,终导致基因表型改变.
-
3种 DNA 甲基化定量分析方法的比较
目的：比较特定基因区域 DNA 甲基化检测方法的优缺点。方法采用焦磷酸测序、克隆测序和DNA 甲基化芯片等3种 DNA 甲基化检测方法，对7例唐氏综合征和5例正常对照样本的 PRDM8内含子7 CpG 岛中的部分序列进行甲基化检测。从准确度、重复性和精确度(分辨率)等方面来比较3种方法，探讨哪种方法更适合特定基因的 DNA 甲基化水平定量检测。结果①焦磷酸测序可在单碱基水平定量检测样本的甲基化水平，结果重复性好，准确度高，而且能发现样本中 CpG 位点甲基化水平变化的规律；②克隆测序也可在单碱基水平定量检测样本的甲基化水平，但结果重复性较差，无法发现 CpG 位点甲基化水平变化的规律；③甲基化芯片可通过所测区域的两个探针来判断样本间甲基化水平的差异，但无法在单碱基水平定量检测样本的甲基化水平；④上述3种方法检测结果之间存在一定的差异，但是样本间甲基化水平总体趋势基本一致。此外，唐氏综合征样本的甲基化水平高于正常对照样本。结论焦磷酸测序准确度高、重复性好、费用较低、操作较为简单快捷，更为适合在单碱基水平检测特定基因区域的 DNA 甲基化水平。
-
IL-22基因启动子区甲基化检测在宫颈癌中的临床意义
目的:检测IL-22基因启动子区域甲基化修饰的改变,以明确IL-22激活的可能机制及其在宫颈癌中的临床意义.方法:选取2016年1月至2017年6月惠州仲恺高新区人民医院收治的宫颈癌患者104例,选取同期我院因子宫良性病变行子宫全切手术的患者60例作为对照.IL-22基因启动子甲基化使用特异性PCR(MSP)检测,ELISA检测IL-22因子表达.结果:宫颈癌患者IL-22启动子甲基化阳性率为32.7％(34/104)显著高于对照组的15.0％(9/60) (P＜0.05),宫颈癌患者IL-22表达水平为(28.36±5.48) ng/L,显著高于对照组的(14.52±1.37) ng/L(P＜0.01).IL-22启动子甲基化阳性率和IL-22因子表达量在临床Ⅲ,Ⅲ期患者为40.4％(19/47)和(30.71±6.11) ng/L,均显著高于Ⅰ,Ⅱ期的26.3％(15/57)和(27.42±4.74) ng/L(P＜0.05);在淋巴结有转移患者为42.1％(16/38)和(31.02±6.58) ng/L,显著高于无转移的27.3％(18/66)和(27.42±4.74)ng/L(P＜0.05);在中、低分化患者为36.6％(26/71)和(30.13±6.37) ng/L,显著高于高分化的24.2％(8/33)和(24.56±4.85) ng/L(P＜0.05).结论:宫颈癌患者中IL-22基因启动子高甲基化,IL-22表达增加可能参与宫颈癌的发生、发展和转移过程.
-
β1肾上腺素能受体基因多态性及其甲基化修饰对美托洛尔降压疗效的影响
目的 研究β1肾上腺素能受体基因多态性及其甲基化修饰对美托洛尔降压疗效的影响.方法 入选300 例高血压病患者,给予相同剂量美托洛尔降压治疗,同时用聚合酶链反应限制片长多态性法检测其基因型,比较不同基因型高血压患者血压下降水平;用甲基化特异性聚合酶链反应法检测相同基因型高血压患者和正常血压者β1肾上腺素能受体基因甲基化修饰情况.结果 美托洛尔治疗后,Arg389Arg型患者舒张压较Gly389Arg型和Gly389Gly型患者明显下降(降幅8.0%±1.3%比4.0%±1.5%和3.0%±1.1%, P＜0.05);三种基因型患者收缩压下降幅度差异无显著性.所有研究对象外周血中β1肾上腺素能受体基因均存在甲基化修饰.结论 β1肾上腺素能受体的Gly389Arg基因多态性与美托洛尔降压疗效相关;外周血β1肾上腺素能受体基因甲基化修饰未发现与美托洛尔降压疗效相关.
-
表观遗传学修饰与阿尔茨海默病的关系
阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)是一种以进行性认知障碍和记忆力减退为主要特征的中枢神经退行性疾病.随着社会老龄化的加剧,AD日益威胁着人类的健康及生活质量.表观遗传学是指在DNA编码序列不变的情况下,通过影响基因转录活性调控基因转录水平进而调控基因的表达.现今,随着表观遗传学的研究方法日益成熟,该领域已逐渐成为生物医学研究的热点之一,其在癌症等方面的研究成就为AD研究提供了全新的方法和启示并引起了广泛的关注.本文主要从表观遗传学修饰与AD的密切关系方面进行阐述,试图为AD诊断方法新的临床提供一定的科学依据.
-
母源性／胎源性基因组 DNA 中的甲基化特异性鉴定及其在唐氏综合征诊断 中的 价值
目的：研究3号染色体上 RASSF1A 基因、21号染色体上的 AIRE 基因在母源性／胎源性基因组DNA 中的甲基化特异性及产前诊断价值。方法收集30例孕妇（早、中、晚孕期各10例）外周血及胎儿组织，离心分离血浆和血细胞；所有血细胞和胎儿组织基因组 DNA 样本经过甲基化修饰后进行目的基因 PCR，即同时进行3号染色体 RASSF1A、21号染色体 AIRE 基因的甲基化引物和非甲基化引物的扩增；30例血浆基因组 DNA 甲基化修饰后进行 RASSF1A、AIRE 基因的甲基化引物扩增；1例唐氏综合征胎儿和 1例正常胎儿母血浆基因组DNA 甲基化修饰后，进行 AIRE 和 RASSF1A 基因的甲基化引物扩增，电泳后的目的条带进行 Gel －pro analyzer 软件光密度值分析。结果30例胎儿组织标本和30例母血细胞标本，均提取出基因组 DNA。胎盘组织 AIRE、RASSF1A 基因甲基化引物扩增出目的条带；母血细胞 AIRE、RASSF1A 基因非甲基化引物扩增出目的条带。RASSF1A、AIRE 基因存在母源性／胎源性的甲基化差异（P ＜0．05）；此差异性不受年龄、孕产史、妊娠阶段等妊娠状态的影响（均 P ＞0．05）。在保证30例血浆标本存在基因组 DNA 的前提下，进行 AIRE、RASSF1A 基因的 MS －PCR 扩增，阳性率分别为73％、77％。通过3号染色体上 RASSF1A 基因的对比消除误差因素影响，唐氏综合征胎儿和正常胎儿母血浆游离胎儿 DNA 进行21号染色体上的 AIRE 基因浓度对比，的确存在3∶2的数量关系。结论人类3、21号染色体上存在母源性／胎源性甲基化表观遗传学差异（即母体是非甲基化的而胎儿阶段是甲基化的修饰状态），并且不受妊娠阶段、年龄和孕产史等妊娠状态的影响，是一种很好的胎儿遗传学标记；利用母源性／胎源性甲基化差异可以进行母血浆中胎儿 DNA 的鉴定，甲基化引物扩增出来的目的基因一定是胎儿基因，可以保证胎儿 DNA 的纯度和可信度；待检测标本的母血浆基因组 DNA 和正常胎儿母血浆基因组 DNA 甲基化修饰后，进行 AIRE 基因甲基化引物扩增，两者的 AIRE 基因定量对比代表着21号染色体数量之间的对比，可以作为一种无创性产前诊断唐氏综合征的确诊方法进行下一步探讨。
-
白细胞介素-17基因启动子区域甲基化与宫颈癌的关系研究
目的 检测宫颈癌白细胞介素17(interleukin-17,IL-17)基因启动子区域甲基化的变化,探讨其相关的临床意义.方法 选取2015年2月至2017年3月黄石市中医医院妇产科收治的宫颈癌患者手术切除的宫颈癌组织87例为宫颈癌组,选取同期因功血、子宫肌腺病等子宫良性病变切除的正常宫颈组织40例为对照组.IL-17基因启动子甲基化使用亚硫酸盐修饰后聚合酶链式反应检测.结果 87例宫颈癌组织标本中检测到IL-17基因启动子甲基化阳性率为17.2%,显著低于对照组的42.5%(P<0.05).IL-17基因启动子甲基化阳性率在宫颈癌患者不同年龄和组织类型之间差异无统计学意义(P>0.05).但IL-17基因启动子甲基化阳性率在FIGO临床分期Ⅲ、Ⅳ期患者为10.9 %,显著低于Ⅰ、Ⅱ期患者的24.4 %(P<0.05).IL-17基因启动子甲基化阳性率在有淋巴结转移患者为12.2 %,显著低于无淋巴结转移患者的23.7 %(P<0.05).IL-17基因启动子甲基化阳性率在中、低分化患者为12.5 %,显著低于高分化患者的25.8 %(P<0.05).结论 IL-17基因启动子在宫颈癌组织中呈现低甲基化状态,与宫颈癌的临床分期、有无淋巴结转移以及肿瘤分化程度密切相关.
