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旋毛虫氨基肽酶的表达及其血清学诊断价值的研究
目的 构建旋毛虫氨基肽酶(TsAP)基因重组质粒,表达重组TsAP蛋白,评价该蛋白的血清学诊断价值.方法 通过RT-PCR扩增TsAP基因,构建重组质粒pGEX-6p-1-TsAP,测序及酶切鉴定后转化E.coli BL21,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,表达产物经GST Sefinose Resin (BBI)亲和层析纯化后应用SDS-PAGE和Westernblot进行鉴定.应用旋毛虫重组rTsAP蛋白ELISA(rTsAP-ELISA)对旋毛虫感染小鼠血清进行检测,观察旋毛虫感染小鼠后不同时间的血清抗体阳性率,并与旋毛虫肌幼虫ES抗原ELISA (ES-ELISA)的检测结果进行比较.结果 构建的重组表达载体pGEX-6p-1-TsAP能表达TsAP蛋白.SDS-PAGE结果显示,rTsAP的分子质量单位约为80 ku,以IPTG诱导4h后表达量大.rTsAP-ELISA及ES-ELIS对旋毛虫感染小鼠血清的抗体检出率均为100%(40/40),与曼氏裂头蚴、弓形虫感染小鼠及正常小鼠血清均无交叉反应,与日本血吸虫感染小鼠血清的交叉反应率分别为93.75%(15/16)和50.00%(8/16)(P<0.05).rTsAP-ELISA与ES-ELISA对旋毛虫感染2周的小鼠血清抗体检出率分别为50.00%(11/22)和81.82(18/22),差异无统计学意义(P<0.05),至感染后6周抗体检出率均达100%.结论 重组TsAP蛋白具有良好的反应原性,但与日本血吸虫感染小鼠血清有较高的交叉反应.
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内皮系统的组织特异性
随着肿瘤和心血管疾病发病率的攀升,人们对内皮系统给予了极大的关注,逐步揭示了内皮系统所具有的许多生命所必需的调节和效应功能.不同组织的内皮系统从结构到分子表型都具有不均一性,尤其是代谢能力强和功能差异大的器官之间,比如脑、肺、肝、肾等,即使在同一组织中内皮细胞也有很大的异质性.这为我们提出的问题是,内皮细胞的组织特异性是如何表现的?内皮细胞是否仍具有可塑性?其生物学意义是什么?及其与疾病的关系等等.近,Oh等[1]以差减蛋白质组学方法研究脑、心、肺、肝、肾等多种组织的内皮细胞膜,发现了正常肺内皮细胞特异性分子氨基肽酶P及实体瘤内皮细胞特异性分子annexin A1,并应用前者作为正常肺组织的影像诊断分子鉴别诊断肺部肿瘤,而以后者为靶标成功地实施了免疫靶向放射治疗.这提醒我们对内皮系统的生物学认识必须要有全新的概念.
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氨基肽酶与类风湿关节炎
氨基肽酶(aminopeptidase N/CD13,APN/CD13)参与基质的降解、淋巴细胞趋化、血管生成、细胞增殖等多种病理改变.研究发现抑制APN的作用后,脾细胞会减少细胞因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-17(interleukin,IL-17)的产生,而TNF-α、IL-17在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者关节疼痛、僵硬,关节结构改变过程中起重要作用.在RA患者滑膜组织中,APN表达增加,推测APN上调可能参与RA关节结构改变、骨质破坏的病理改变过程.另一方面,由于APN广泛参与和RA病理改变相关的病变过程,抑制APN的作用可以抑制RA进展的各个环节,这可能为RA的治疗提供一种新的思路.
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105 二肽氨基肽酶Ⅳ活性在细胞学标本的诊断应用以鉴别甲状腺滤泡型腺瘤和腺癌
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快速脯氨酸氨基肽酶与唾液酸酶检测在细菌性阴道病诊断中的对比研究
细菌性阴道病(bacterial vaginosis,BV)是由于阴道微生态环境菌群与分泌物生化性质变化所引起的一种阴道炎症,是育龄期妇女常见的疾病之一,感染率为15%~50%[1],有近半数患者可无症状且治疗后易于复发.在妇科BV 会引起宫颈炎、慢性盆腔炎、双侧输卵管阻塞而致不孕等;在产科BV 可导致胎膜早破、羊膜腔感染、绒毛膜羊膜炎、产后子宫内膜炎、新生儿感染等,故对细菌性阴道病及早做出诊断和进行治疗非常重要.BV诊断的金标准是Amsel临床诊断标准(简称Amsel)[2].但在临床实践中操作较为繁琐,影响因素较多,且阳性标准难以统一[3].为此,我们采用美国PIP Test Card技术和BV Blue快速诊断试剂,分别检测阴道分泌物中的脯氨酸氨基肽酶(PIP)及唾液酸酶(Sialidase)的活性,并与Amsel结果进行对比分析,探讨其在BV诊断中的应用价值.
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活性肽在大鼠小肠吸收特点的实验研究
目的:研究补充活性肽对大鼠小肠上皮组织形态学、氨基肽酶活性及氮代谢的影响,探讨大鼠小肠对活性肽的吸收特点.方法:雄性SD大鼠30只,被随机分为:安慰剂对照组(Pla组)、补充大豆分离蛋白对照组(Pro组)和补充活性肽实验组(Pep组).大鼠在适应性喂养及膳食平衡1周后,进行代谢实验及指标测试.结果:(1)Pep组大鼠小肠粘膜蛋白含量比Pro组高48.60%,比Pla组高91.37%(P< 0.05).(2)Pep组大鼠小肠粘膜氨基肽酶活性明显增加,比Pla组增加了203.97%,比Pro组则增加了73.30%(P<0.05).(3)Pep组大鼠小肠粘膜厚度比Pro组高6.99%,比Pla组高25.03%(P<0.05).(4)Pep组大鼠小肠绒毛高度比Pro组高4.65%,比Pla组高22.22%(P<0.05).(5)Pep组大鼠小肠上皮隐窝深度比Pro组高12.58%,比Pla组高35.77%.(6) Pep组大鼠小肠上皮绒毛表面积比Pro组高3.30%,比Pla组高23.64%(P<0.05).(7)补充大豆分离蛋白后,Pep组大鼠氮平衡值、氮储存率和表观消化率较Pla组分别增高641.03%、591.42%和51.80%;而补充活性肽后,Pep组大鼠氮平衡值、氮储存率和表观消化率较Pla组分别增高1061.54%、982.69%和71.43%,较Pro组分别增高56.75%、56.59%和12.94%.结论:补充活性肽可增加大鼠小肠粘膜蛋白质含量、氨基肽酶的活性,改善大鼠小肠粘膜组织形态结构,增加小肠绒毛高度、表面积和小肠上皮隐窝深度,刺激小肠腺的发育,同时显著提高机体对氮的表观消化率和氮储存率,并使机体处于较高水平的正氮平衡,因此提高了小肠对氮的消化与吸收功能.
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百士欣
【通用名称】ubenimex,乌苯美司【化学名称】N-[(2S,3R)-4-苯基-2-羟基丁酰]-L-亮氨酸【药理作用】本品具有双重抗癌作用。激活人体细胞免疫功能,刺激细胞因子的生成和分泌,促进抗肿瘤效应细胞的产生和增殖。在腹膜巨噬细胞:瘤细胞=100:1的细胞密度下,用百士欣处理的巨噬细胞显示出对瘤细胞的细胞毒作用,并且巨噬细胞的活化程度取决于百士欣的浓度。在小鼠体内百士欣不但诱导细胞内、外IL-1的产生,而且显著增强脂多糖(LPS)刺激巨噬细胞合成和分泌IL-l。5mg/(kg·d)百士欣可明显促进C57BL/6小鼠生成IL-2,可拮抗环磷酰胺对小鼠生成IL-2抑制。明显提高癌症患者的IL-2水平,增强癌症患者NK细胞活力,使T细胞亚群的比例正常化。本品对肿瘤细胞膜上的氨基肽酶B和亮氨酸氨基肽酶有竞争性抑制作用,干扰肿瘤细胞的代谢,直接抑制肿瘤细胞增殖。促进肿瘤细胞凋亡。
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尿液甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶测定对高血压患者肾脏早期损害的诊断价值
我们检测和比较常规尿检阴性的高血压病患者尿液的甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶(GPDA)、微量白蛋白(mALB)、视黄醇结合蛋白(RBP),以探讨尿液GPDA在高血压患者肾脏早期损害诊断中的价值.
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乌苯美司在妇产科的研究及应用进展
对具有免疫调节功能的新抗癌药乌苯美司在妇产科的研究进展与临床应用作了系统阐述;对女性生殖器官氨基肽酶的分布、功能以及乌苯美司对其的作用和乌苯美司在乳腺癌、宫颈癌、葡萄胎与侵蚀性葡萄胎、绒癌和爱滋病的研究和临床应用作了介绍.
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牙菌斑中的蛋白水解酶及其生物学作用
蛋白水解酶在根面龋中的作用已逐渐得到证实,目前受到较多关注,本文介绍其种类、来源、性质和生物学作用等。一、蛋白水解酶的种类及来源蛋白水解酶是一大类作用于有机肽链的酶,分为外肽酶和内肽酶。常见的外肽酶是亮氨酸氨基肽酶(Leucine Amino Peptidase,LAP),有机质的N-端氨基酸是其主要作用位置,在水解Leu为N末端的肽链时速度快;甘氨酰脯氨酸二肽酶(Dipeptidyl Peptidas e IV,DPPIV)也是一种外肽酶,主要水解以X-Pro-Y为N-端的肽链,其中X常为脯氨酸,Y常为羟脯氨酸和羟赖酸。胰蛋白酶(Trypsin)是常见的内肽酶,可降解大多数的蛋白质与多肽底物,它既是组织的毒性酶,又是细菌能量转化的工具酶,可扩展细菌的营养摄取范围以适应环境需要,它专一性强,只断裂赖氨酸或精氨酸的羧基参与形成的肽腱[1]。
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亮氨酸氨基肽酶在各型肝病中的临床意义
亮氨酸氨基肽酶(LAP)是一种能水解蛋白质和多肽链的N末端氨基酸的蛋白质水解酶,可水解由亮氨酸与其他氨基酸所形成的肽链,也能水解亮氨酸与氨形成的酰胺腱(即亮氨酰胺).
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胃癌患者GPDA和RDW的临床意义探讨
胃癌是我国发病率高,常见的胃癌.甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶(GPDA),测定其活力在肝脏疾病时增高,胃癌时减低;红细胞体积分布宽度(RDW)是定量反映红细胞体积异质性的参数,胃癌是一种消耗性疾病,随着病情的发展,出现一系列消化道症状,影响消化吸收功能,造成造血原料缺乏,加上肿瘤组织引起的出血等,使相当多的胃癌患者容易出现不同程度的贫血.我们观察了62例胃癌患者、45例胃良性病变患者和58名正常人的GPDA和RDW,以了解胃癌患者血清中GPDA的变化情况和贫血特点.
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血清GPDA活性测定在胃癌诊断及治疗中的应用
甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶(Glycy-Proline DipepidylAminpeptidase,GPDA)是HOPSU等人在鼠的肝肾中发现.胃癌患者血清中GPDA活性明显降低.本次实验测定胃癌术前、术后及正常人血清GPDA活性,进行比较,探讨血清GPDA活性测定在胃癌诊断、鉴别诊断及疗效观察中的使用价值.
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血清 AFU 、LAP 和 GGT 联合检测在早期原发性肝癌诊断中的应用与评价
我国是肝炎发病大国,肝癌发病率也呈逐年上升的趋势,是临床常见的疾病。据统计,每年大约有11万人因肝癌死亡。肝癌一般起病比较隐蔽[1],早期无典型的临床症状,临床上一旦确诊一般属于中、晚期。因此,如何早期诊断肝癌具有重要的意义[2]。现阶段,临床上应用甲胎蛋白和影像学方法辅助诊断早期肝癌,但早期肝癌的诊断率仍然较低。a‐L盐藻糖苷酶(a‐L Salina glucosidase AFU )在肝癌和胆管癌中会显著升高,亮氨酸氨基肽酶(Leucine aminopeptidase LAP)在肝脏的含量较高,r‐谷氨酰转移酶(r‐glutamyl trans‐ferase GGT )在肝脏中含量中也较高[3]。本研究通过检测所有入选者的AFU、LAP和GGT 水平,旨在分析早期原发性肝癌患者AFU、LAP和 GGT 联合检测临床意义,现报告如下。
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血清GPDA同工酶改良测定对肝脏疾病的临床诊断意义
甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶(GPDA)广泛存在于肝、肾、结缔组织、唾液腺中,是参与分解胶原的二肽氨基肽酶,与癌的浸润和扩散有关[1].有报道原发性肝癌患者血清中GPDA活性异常增高,尤其是其同工酶Ⅱ的增高对原发性肝癌(PHC)诊断有特异性[2,5,6].本文通过对检测GPDA同工酶的凝胶电泳进行改良,提高GPDAⅡ的检出率来辅助诊断原发性肝癌.
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APP、MAO和ADA在肝酶学检测中的临床应用探讨
实验室反映肝功能的酶学指标在肝病的诊断治疗中一直起着非常重要的作用,有一些酶学指标在临床上已经被广泛应用,成为许多医院检验科常规检验项目.我们共收集102例肝病患者和80例正常人的血清,分别检测丙氨酸氨基肽酶(AAP),单胺氧化酶(MAO),腺苷脱氨酶(ADA),探讨3种酶活性在肝脏疾病中的改变和应用价值.
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甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶在肝胆疾病诊断中的价值
甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶(Slycylprolinedipeptidylaminopeptidase,GPDA),能特异地水解肽链末端第2位为脯氨酸所形成的肽键(对其他肽键无作用).用人工合成的X-脯氨酰对硝基苯胺作底物来检测此酶活性发现,以甘氨酰脯氨酸对硝基苯胺为底物时酶活性强,Km值小,故称此酶为甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶或甘氨酰脯氨酸对硝基苯胺酶(glycylproline-p-nitmanilidase).
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氨基肽酶的测定及临床意义
目的 测定氨基肽酶中的一种酶(亮氨酸氨基肽酶,LAP)作为临床肝胆疾病的诊断指标并探讨氨基肽酶的临床意义,以便于系统探讨此类酶的临床应用价值.方法 以亮氨酰对硝基苯胺为底物,在405 nm下进行连续监测并对健康体检者及患者标本进行测定.结果 线性范围至少为0-180 U·L-1,批内不精密度为2.9%,批间不精密度为5.6%;适用于各种自动生化分析仪.测定亮氨酰氨基肽酶的适条件:选用浓度为125 mmol·L-1的Tris-Hcl缓冲液,适pH为7.2,温度取37 ℃,得出在此实验条件下的米氏常数Km为0.15 mmol·L-1,亮氨酰对硝基苯胺浓度取6.0 mmol·L-1,取健康体检者血清157例(男81例,女76例),测得-x±s为35.7 U·L-1+8.2 U·L-1,建立了适合于临床应用及自动生化分析仪的方法和参考值.结论 本法是检测肝胆疾病的可靠、稳定、快速的方法之一,对肝胆疾病的早期诊断和治疗起一定的作用;氨基肽酶可以作为多种疾病的临床诊断和监测指标.
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足月待产妇血清胆碱酯酶、碱性磷酸酶、亮氨酸氨基肽酶正常值分析
自1997年12月,我科对我院妇产科729名足月待产妇血清进行了13项生化项目的检测,发现胆碱酯酶(CHE)碱性磷酸酶(ALP)亮氨酸氨基肽酶(LAP)的值与正常参考值显著差异,为了探讨足月待产妇血清CHE、ALP、LAP的正常值,我们为729名足月待产妇血清CHE、ALP、LAP的测得值进行了统计学分析,现将结果报道如下.
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正常妊娠妇女血清亮氨酸氨基肽酶的变化
本文作者用酶学生化分析方法测定了正常未孕妇女、中期妊娠妇女、临产妇女、宫外孕、葡萄胎、绒毛膜上皮癌患者血清中亮氨酸氨基肽酶(LAP)的含量,其结果报告如下.1 材料与方法①研究对象 a.正常临产妇女组:120例,为1998年12月~1999年9月在我院住院分娩的孕妇,平均年龄26.9±2.5岁,平均孕周39.2±1.6周.b.中期妊娠组:27例,为同期在我院住院或妇科门诊就诊的病人,平均年龄24.7±2.8岁,平均孕周28.2±1.9周.c.其他组:11例宫外孕,4例葡萄胎,5例绒毛膜上皮癌病人,为同期在我院住院病人,平均年龄31.4±3.1岁.d.对照组:184例,为同期在我院门诊就诊的妇女,平均年龄24.2±2.8岁.②标本收集及处理门诊患者于就诊时空腹抽取肘静脉血3 ml,住院病人在住院后空腹抽肘静脉血3 ml,送检LAP.③测定方法 LAP采用酶学生化分析法,其测定试剂盒为白求恩医科大学试剂公司提供,仪器为法国ALXYON-160型全自动生化分析仪.④统计学处理数